基因工程高考真题

高考生物一轮复习第三期现代生物科技专题

专题聚焦一基因工程高考真题体验

1. （ 08 全国卷Ⅰ· 4）已知某种限制性内切酶在一线性DNA分子上有3 个酶切位点，如图中箭头所指，如果该线性DNA分子在 3 个酶切位点上都被该酶切断，则会产生a、 b、c、 d 四种不同长度的DNA片段。现有多个上述线性DNA分子，若在

每个 DNA分子上至少有一个酶切位点被该酶切断，则理论上

讲，经该酶酶切后，这些线性DNA分子最多能产生长度不同

的 DNA片段种类数是

A.3

B.4

C.9

D.12

答案： C

解析 :考查了限制性内切酶切割DNA片段的有关知识。这道题目可以转化为单纯的数字计

算题。每个DNA分子上至少有 1 个酶位点被该酶切断，可以切得的种类有：a、 b、 c、 d、ab、 bc、 cd、 abc 、 bcd 九种。

2.（ 08 天津卷· 4）为获得纯和高蔓抗病番茄植株，采用了下图所示的方法：

图中两对相对性状独立遗传。据图分析，不正确的是

A、过程①的自交代数越多，纯合高蔓抗病植株的比例越高

B、过程②可以任取一植株的适宜花药作培养材料

C、过程③包括脱分化和再分化两个过程

D、图中筛选过程不改变抗病基因频率

答案： D

解析：考查生物育种的有关知识。从图中可以看出为获得纯合高蔓抗病番茄植株，一共采取

了三种育种手段：杂交育种、单倍体育种和基因工程育种。过程①是多次自交和筛选，

使得纯合高蔓抗病植株的比例提高；过程②是花药离体培养，采用任一株 F1的花药均可；③是植

物组织培养获得植株的过程，包括脱分化和再分化两个阶段。筛选纯和高蔓抗病支柱的过程实质就是定向改变基因频率的过程，即使得高蔓抗病基因的频率升高。

3.（ 08 广东卷· 8）改良缺乏某种抗病性的水稻品种，不宜采用的方法是

A．诱变育种B．单倍体育种C．基因工程育种D．杂交育种

答案： B

解析：本题考查育种的几个基本方法的特点。正确把握“缺乏某种抗病性的水稻”及其原因是解答本题的关键。可通过诱变育种或基因工程育种的方法使水稻获得抗性基因，可通过杂交育种培育抗病性水稻。单倍体育种过程，只是让单倍体原有的染色体及其上面的基因加倍，

无抗病基因并不能产生相应的变异。

4.（11年四川卷）

5.北极比目鱼中有抗冻基因，其编码的抗冻蛋白具有11 个氨基酸的重

复序列，该序列重复次数越多，抗冻能力越强，下图是获取转基因抗冻番茄植株的过程示意

图，有关叙述正确的是

A过程①获取的目的基因，可用于基因工程和比目鱼基因组测序

B多个抗冻基因编码区依次相连成能表达的新基因，不能得到抗冻性增强的抗冻蛋白，

C过程②构成的重组质粒缺乏标记基因，需要转入农杆菌才能进行筛选

D应用 DNA探针技术，可以检测转基因抗冻番茄植株中目的基因的存在及其完全表

达答案： B

解析：过程 1 获得的目的基因已不含非编码区和内含子，因此不能用于比目鱼基因组测

序，因此 A 错。导入农杆菌是为了扩增和更易导入蕃茄细胞， C 错。 DNA探针技术不能检

测基因是否完全表达，目的基因的完全表达应该检测表达产物蛋白质， D 错。

5.（2011年浙江卷）6、ada（酸脱氨酶基因）通过质粒pET28b 导入大肠杆菌并成功表达

腺苷酸脱氨酶。下列叙述错误的是

．．

A.每个大肠杆菌细胞至少含一个重组质粒

B.每个重组质粒至少含一个限制性核酸内切酶识别位点

C.每个限制性核酸内切酶识别位点至少插入一个ada

D.每个人的 ada 至少表达一个腺苷酸脱氨酶分子

答案： C

6.（2012浙江卷）6．天然的玫瑰没有蓝色花，这是由于缺少控制蓝色色素合成的基因

B，而开蓝色花的矮牵牛中存在序列已知的基因B。现用基因工程技术培育蓝玫瑰，下列操作正

确的是

A．提取矮牵牛蓝色花的mRNA，经逆转录获得互补的DNA，再扩增基因B

B

B．利用限制性核酸内切酶从开蓝色花矮牵牛的基因文库中获取基

因C．利用 DNA聚合酶将基因 B 与质粒连接后导入玫瑰细胞

D．将基因 B 直接导入大肠杆菌，然后感染并转入玫瑰细胞

【答案】 A

【命题透析】通过特定的实例考查基因工程的相关概念及操作要领。

【思路点拨】控制蓝色色素合成的基因 B 即为我们所需要的目的基因，可通过逆转录法获得基因B，再进行扩增以增加其数量；基因文库中保存的是各基因片段，提取时无须使用限制

性核酸内切酶；为使目的基因在受体细胞中稳定存在且能向下一代遗传，应先在体外使用

DNA连接酶构建基因表达载体，然后再导入大肠杆菌。

7.（ 2012 四川卷） 2. 将大肠杆菌的质粒连接上人生长激素的基因后，重新置入大肠杆菌的

细胞内，通过发酵就能大量生产人生长激素。下列叙述正确的是

A.发酵产生的生长激素属于大肠杆菌的初级代谢产物

B.大肠杆菌获得的能产生人生长激素的变异可以遗传

C.大肠杆菌质粒标记基因中腺嘌呤与尿嘧啶含量相等

D.生长激素基因在转录时需要解旋酶和DNA连接酶

【答案】 B

A 【解析】 A 初级代谢产物是微生物生长必需的，而人的生长激素不是大肠杆菌必需的，帮B

来源是基因重组。C基因为有遗传效应的DNA片段，不含有U。 D 转录时不需要形成磷酸二

酯键，不需要DNA连接酶。

8.（ 2012 全国卷新课标版） 40．现代生物科技专题（ 15 分）根据基因工程的有关知识，回答

下列问题：·

（１）限制性内切酶切割ＤＮＡ分子后产生的片段，其末端类型有和。

（２）质粒运载体用EcoRⅠ切割后产生的片段如下：

为使运载体与目的基因相连，含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外，还可用另一

种限制性内切酶切割，该酶必须具有的特点是。

（３）按其来源不同，基因工程中所使用的DNA连接酶有两类，即DNA连接酶和DNA连接酶。

（４）反转录作用的模板是，产物是。若要在体外获得大量反转

录产物，常采用技术。

（５）基因工程中除质粒外，和也可作为运载体。

（６）若用重组质粒转化大肠杆菌，一般情况下，不能直接用未处理的大肠杆菌作为受

体细胞，原因是。

【解析】本题着重考查基因工程方面的知识。限制性核酸内切酶可以将DNA分子切成两种类型的末端，平末端和黏性末端。两种不同酶切割之后便于相连，所产生的黏性末端必须相同。Ｅ coliDNA 连接酶可以连接黏性末端，Ｔ４DNA连接酶可以连接两种末端，反转录是以mRNA为

模板逆转录先合成单链 DNA，再合成双链 DNA，利用ＰＣＲ技术进行大量扩增。基因

工程中可以选用质粒，噬菌体、动植物病毒做载体。当受体细胞是细菌时，为了增大导入的成功率，常用 Ca+处理，得到感受态细胞，此时细胞壁和细胞膜的通透性增大，容易吸收重组质粒。

【答案】（１）平末端和粘性末端（２）切割产生的DNA片段末端与EcoRⅠ切割产生的相同（３）Ｔ４Ｅcoli（４）mRNA单链ＤＮＡＰＣＲ（聚合酶链式反应）（５）动植物病毒λ 噬菌体的衍生物（６）未处理的大肠杆菌吸收质粒（外

源 DNA）的能力极弱

9.（ 2012 福建卷） 32．现代生物科技专题

肺细胞中的 let-7 基因表达减弱，癌基因 RAS表达增强，会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let-7 基因导入肺癌细胞实验表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术基本流程如图１。

请回答：

（１）进行过程①时，需用酶切开载体以插入let-7基因。载体应用RNA聚合

酶识别和结合的部位，以驱动let-7基因转录，该部位称为。

（２）进行过程②时，需用酶处理贴附在培养皿壁上的细胞，以利于传代培养。

（３）研究发现，let-7基因能影响RAS的表达，其影响机理如图２。据图分析，可从

细胞提取进行分子杂交，以直接检测let-7基因是否转录。肺癌细胞增殖受到抑制，

可能是由于细胞中（ RASmRNA/RAS蛋白）含量减少引起的。

【答案】（ 10 分）

（ 1）限制性核酸内切酶（或限制）启动子

（2）胰蛋白

（3） RNA RAS 蛋白

【解析】

（1）过程①表示基因表达载体的构建，在该过程中需要用限制酶对载体进行切割以便

于目的基因的插入（限制性核酸内切酶，简称限制酶，写其他的不得分）；启动子是一段特殊的

DNA序列，是 RNA聚合酶结合和识别的位点， RNA聚合酶结合到该位点，可驱动转录过程。

（2）过程②表示动物细胞培养，培养过程中出现接触抑制后可以用胰蛋白酶处理，

使之分散成单个的细胞，之后分装到其他培养瓶里面进行传代培养。

（3）判断目的基因是否在受体细胞中转录，可用分子杂交技术来进行，从细胞中提取

mRNA和用放射性同位素或者荧光标记的目的基因单链DNA片段进行杂交。根据题中信息“肺

组织细胞中的 let-7 基因表达减弱，癌基因 RAS表达就增强，引发肺癌”导入 let7 基因后，肺癌细

胞受到抑制，说明RAS基因表达减弱，导致细胞中的RAS蛋白质含量减少进而导致癌细胞受抑制。

10.（ 2012 山东卷） 35．（ 8 分）【生物—现代生物科技专题】

毛角蛋白Ⅱ型中间丝（ KIF Ⅱ）基因与绒山羊的羊绒质量密切相关。获得转 KIF Ⅱ基因的高绒

质绒山羊的简单流程如图。

（１）过程①中最常用的运载工具是______，所需要的酶是限制酶和_________。

（２）在过程②中，用 _______处理将皮肤组织块分散成单个成纤维细胞。在培养过程中，

将成纤维细胞置于5%CO2的气体环境中，CO2的作用是 ______________ 。

（３）在过成③中，用_________处理以获取更多的卵（母）细胞。成熟卵（母）细胞在

核移植前需要进行_________处理。

（４）从重组细胞到早期胚胎过程中所用的胚胎工程技术是_________。在胚胎移植前，

通过 _______技术可获得较多胚胎。

答案：（1）质粒DNA 连接酶

（ 2）胰蛋白酶（或胶原蛋白酶）维持培养基（液）的pH

（ 3）促性腺激素（或促滤泡素，孕马血清）去核

（ 4）（早期）胚胎培养胚胎分割

解析：本题综合考查基因工程的基本工具、动物细胞工程和胚胎工程的基础知识，考查

识图、获取信息与处理信息的能力。

基因工程所用的基本工具有限制性内切酶、DNA连接酶和运载体，其中，常用的运载体是质粒，也可用噬菌体衍生物和动植物病毒。

在动物细胞工程中，若将动物组织分散成单个细胞，常用胰蛋白酶和胶原蛋白酶来处理；若进行核移植，需先对卵母细胞培养到MⅡ中期并做去核处理；动物细胞的培养需要无菌无毒条件，一定的营养条件，血浆血清和 O2、CO2气体条件，其中的气体 CO2主要用于维持培养液的 pH。

在动物胚胎工程中，常用促性腺激素处理雌性个体而使其超数排卵；常采用核移植和早

期胚胎培养技术获得重组胚胎，并进一步培育出克隆动物，常采用胚胎分割并移植技术获得更多的优良个体。

11.(2012 ·天津卷， 7) 7. （13 分）生物分子间的特异性结合的性质广泛用于生命科学研究。

以下实例为体外处理“蛋白质-DNA复合体”获得DNA片段信息的过程图。

据图回答：

（ 1）过程①酶作用的部位是键，此过程只发生在非结合区

程②酶作用的部位是键。

（ 2）①、②两过程利用了酶的特性。

（ 3）若将得到的DNA片段用于构建重组质粒，需要过程③的测序结果与

的识别序列进行对比，已确定选用何种酶。

（ 4）如果复合体中的蛋白质为RNA酶聚合，则其识别、结合DNA序列位基因的DNA，过

酶

。

（ 5）以下研究利用了生物分子间的特异性结合的有（多选）

A. 分离得到核糖体，用蛋白酶酶解后提rRNA

B.用无水乙醇处理菠菜叶片，提取叶绿体基粒膜上的光合色素

C．通过分子杂交手段，用荧光物质标记的目的基因进行染色体定位

D．将抑制成熟基因导入番茄，其mRNA与催化成熟酶基因的mRNA互补结合，终止后者翻译，延迟果实成熟。

【答案】（ 1）磷酸二酯键，肽键

（2）专一

（3）限制性 DNA内切酶

（4）启动子

（5） ACD

【解析】（ 1） DNA酶作用的部位是DNA的磷酸二酯键，蛋白酶作用的部位是肽键。

（2）①②过程利用了各种酶催化一种或一类化学反应的特性，即专一性。

（3） DNA要构建重组质粒，需要用限制性DNA内切酶切割，再与质粒重组。

（4） RNA聚合酶识别和结合在基因的启动子上，才能驱动基因转录。

（5）蛋白酶能特异性的酶解蛋白质，分子杂交手段也是利用各物质分子结合的特异性，

抑制成熟基因转录出的 mRNA与催化成熟酶基因的 mRNA碱基互补结合，也具有特异性，光和色素易溶于有机溶剂，与酒精并不是特异性的溶解，所以选ABC。

12.（2012江苏卷）32．图1表示含有目的基因 D 的 DNA片段长度（ bp 即碱基对）和部分

碱基序列，图 2 表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有a Ⅰ 4 种限制性核酸内切酶切割的碱基序列和酶切位点分别为CCC↓ GGG。请回答下列问题：Msp Ⅰ、 BamH Ⅰ、 Mbo Ⅰ、 Sm C↓ CGG、 G↓ GATCC、↓ GATC、

（1）图 1 的一条脱氧核苷酸链中相邻两个碱基之间依次由＿＿＿＿＿＿连接。

（2）若用限制酶 Sma Ⅰ完全切割图 1 中 DNA片段，产生的末端是＿＿＿＿＿末端，其产物

长度为＿＿＿＿＿。

（3）若图 1 中虚线方框内的碱基对被 T－ A 碱基对替换，那么基因 D 就突变为基因 d。从杂合子分

离出图 1 及其对应的 DNA片段，用限制酶 Sma Ⅰ完全切割，产物中共有＿＿＿＿＿种不同 DNA片段。

（4）若将图 2 中质粒和目的基因 D 通过同种限制酶处理后进行，形成重组质粒，那么应选

用的限制酶是＿＿＿＿＿。在导入重组质粒后，为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌，一般需

要用添加＿＿＿＿＿的培养基进行培养。经检测，部分含有重组质粒的大肠杆菌菌株中目的基

因 D 不能正确表达，其最可能的原因是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。

答案：（ 1）脱氧核糖、磷酸、脱氧核糖（2）平537bp、 790bp、 661bp

（3） 4（4）BamH I抗生素B同种限制酶切割形成的末端相同，部分目的基因D 与质粒反向连接

解析：（ 1）DNA单链中相邻两个碱基之间通过“脱氧核糖—磷酸—脱氧核糖”连接。[ 来源 :

中*教 * 网 z*z*s*tep]

（2）SmaI 识别的序列为 GGGCCC，切割后会产生平末端；图1所示的DNA分子中含有两个SmaI

的识别位点，第一个识别位点在左端 534bp序列向右三个碱基对的位置；第二个识别位点在右

端 658bp序列向左三个碱基对的位置，从这两个位点切割后产生的 DNA片段长度分别为

534+3， 796-3-3 ， 658+3，即得到的 DNA片段长度分别为537bp、 790bp和 661bp。

（3）在杂合子体内含有基因 D和基因 d，基因 D的序列中含有两个识别位点，经过 SmaI完全切割会产生 537bp、790bp和 661bp三种不同长度的片段，基因 d的序列中含有一个识别位点，经过切

割后会产生 1327bp和 661bp两种长度的片段，综上，杂合子中分离到该基因的 DNA片段经过切割后会产生 4种不同长度的片段。

（4）能够获取目的基因并切开质粒的限制酶有识别序列为GGATCC的BamH I 和识别序列为GATC的 Mbo I ，若使用 Mbo I 会同时破坏质粒中的抗生素 A抗性基因和抗生素B抗性基因，所以要用 BamH I来切割目的基因和质粒，切割后保留了完整的抗生素B抗性基因，便于筛选出含

有重组质粒的大肠杆菌。因为目的基因和运载体是用同种限制酶切割的，目的基因两端的末端和质粒切割后的两个末端都能进行互补，可能出现目的基因反向连接在运载体上的情况，

导致基因 D不能正确表达。

13.（ 2011 年江苏卷） 33．（8 分）请回答基因工程方面的有关问题：

(1)利用 PCR技术扩增目的基因，其原理与

细胞内 DNA复制类似（如下图所示）。图

中引物为单链 DNA片段，它是子链合成延伸

的基础。①从理论上推测，第四轮循环产物中

含有

引物 A 的 DNA片段所占的比例为。

②在第轮循环产物中开始出现两条

脱氧核苷酸链等长的DNA片段。

(2)设计引物是 PCR技术关键步骤之一。某

同学设计的两组引物（只标注了部分碱基

序列）都不合理（如下图），请分别说明理由。

①第 1组：；②第2组：。

(3) PCR 反应体系中含有热稳定DNA聚合酶，下面的表达式不能正确反映DNA聚合酶的功能，这是因为。

(4) 用限制酶EcoRV、 Mbol 单独或联合切割同一种质粒，得到的DNA片段长度如下图(1 kb

即 1000 个碱基对 ) ，请在答题卡的指定位置画出质粒上EcoRV、 Mbol 的切割位点。

答案： 33 ．（ 8 分）

(1)① 15/16②三

(2)①引物 I 和引物Ⅱ局部发生碱基互补配对而失效②引物

I ’自身折叠后会出现局部碱基互补配对而失效

(3)DNA 聚合酶只能将单个脱氧核苷酸连续结

合到双链DNA片段的引物链上

(4)见右图

14.(11 年，海南 31)[ 生物——选修 3：现代生物

科技专题 ] （ 15 分）

回答有关基因工程的问题：

（1）构建基因工程表达载体时，用不同类型的限制酶切割DNA后，可能产生粘性末端，也可能产生 _ __ 末端。若要在限制酶切割目的基因和质粒后使其直接进行连接，则

应选择能使二者产生 _____（相同，不同）粘性末端的限制酶。

（2）利用大肠杆菌生产人胰岛素时，构建的表达载体含有人胰岛素基因及其启动子等，其中启动子的作用是 ___________________________________。在用表达载体转化大肠杆菌时，常用 ____________ 处理大肠杆菌，以利于表达载体进入：为了检测

胰岛素基因是否转录出了mRNA，可用标记的胰岛素基因片段作探针与mRNA杂交，

该杂交技术称为 ___________________ 。为了检测胰岛素基因转录的mRNA是否翻译

成_____________ ，常用抗原 - 抗体杂交技术。

(3)如果要将某目的基因通过农杆菌转化法导入植物细胞，先要将目的基因插入农杆菌

Ti 质粒的 ____________中，然后用该农杆菌感染植物细胞，通过DNA重组将目的基

因插入植物细胞的______上。

答案：

（1）平相同

（2）提供 RNA聚合酶特异性识别结合位点，驱动基因转录

Ca2+DNA— RNA分子杂交胰岛素原（蛋白质）(3) T— DNA染色体

渺渺红尘，茫茫人海，没有过早，也没有太晚，遇见的自然是恰逢其时。

有人说，这世间的所有相遇，都是久别重逢。惟有父母与子女，是为了别离。

父母为自己付出的，永远是百分之百的绵绵恒爱。每当看到满头如雪，弯腰驼背，步履蹒跚的父亲母亲，总会不由自主地想起，他们曾用最纯朴、最勤劳的方式为自己撑起过一片天，现

如今却是衰老伴着他们走过一年又一年。

.想来那句：你养我于父母眼里，自己就像飘在天空的风筝，无论飞得多高多远，他们也舍不得松开牵挂的那根线。这种深厚的爱，若高山阔海，就算用一辈子的时间，恐怕也回馈不完

长大，我陪你变老，应是最好的报答。

记得一首《友情》的歌，里面那段歌词格外打动人：友情，人人都需要友情，不能孤独，踏上人生的旅程??

听完，特别想感谢那些出现在自己不同人生阶段的朋友，感谢这一路上你们给予的支持和鼓励。此生何其幸运，能成为彼此的亲密挚友。除了家人，最熟悉我的还有你??童年，一起玩耍嬉戏；少年，一起努力学习；青年，互相聆听各自的小秘密；愿中年的彼此，都能好好保重自己；愿我们老的时候还能一起喝茶、一起聊聊不太完美的却又共同参与过的

往昔。人生能有三五知己，懂得自己，足矣！

佛说，每一次相遇都是一场修行。想必爱情更是如此。

于风雨兼程的人生里，在五味杂陈的生活中，谁是谁的月下客，谁是谁的心上人，谁与谁会一见倾心，谁与谁能相伴到岁末晚景，凭的就是一份缘。

感谢即将成为自己人生中最亲爱的你，相遇是缘，相恋是爱，相守是情。