VEGF和HIF-1a在糖尿病心肌病中的表达及临床意义

・９７２・　Ｍｏｄ　Ｄｉａｇｎ　Ｔｒｅａｔ　现代诊断与治疗　２０１４　Ｍａｒ　２５（５）　毒治疗能够有效阻止乙肝患者体内乙肝病毒复制．使患者获　得充分的病毒学应答并维持其肝脏生化指标于相对正常水　平ｌ　３１．对失代偿期肝硬化患者的肝功能有显著的改善作用，同　时还能够延缓病情的进展，减少并发症的发生。因此，常规的　保肝、利尿及补充蛋白和血浆的治疗方案难以取得理想的效　果．应在常规治疗过程中加用抗病毒药物．以提高临床治疗　效果．促进腹水的消失　临床选择治疗失代偿期乙肝肝硬化合并腹水患者时应　以病毒变异率低、抑制乙肝病毒效果好的药物为宜。阿德福　韦酯是一种核苷类似物，能有效地抑制ＨＢＶ病毒复制、降低　肝组织的炎症坏死．使失代偿期乙肝肝硬化患者的病情得到　明显改善和延缓＿４１　。本研究结果表明：在常规治疗基础上加　用阿德福韦酯治疗失代偿期乙肝肝硬化合并腹水临床疗效较　好．治疗后患者的肝功能指标得到了显著改善．腹水等临床症　状得到了显著改善．治疗总有效率为９２．７％．高于葛保民＿６＿的　研究结果（８８．５％）。阿德福韦酯能够有效地抑制ＨＢＶ—ＤＮＡ的　复制，抑制ＤＮＡ聚合酶，终止ＤＮＡ合成，从而起到显著的抗　病毒效果。且耐药发生率较低。适宜长期使用。王玉兰ｍ的研究　指出：使用阿德福韦酯治疗失代偿期乙肝肝硬化合并腹水。　患者的血流动力学的改变和血浆内毒素水平的明显下降．腹　水消退率明显升高．还能够延缓和降低腹水复发及并发症的　发生。　综上所述．采用抗病毒药物阿德福韦酯治疗失代偿期乙　肝肝硬化合并腹水临床疗效可靠．值得临床进一步推广使　

用。　参考文献：　［１］ＥＡＳＬ　Ｃｌｉｎｉｃａｌ　Ｐｒａｃｔｉｃｅ　Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ：Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ　ｏｆ　ｃｈｒｏｎｉｃ　ｈｅｐ—　ａｔｉｔｉｓ　Ｂ　ＥＪ］．Ｊ　Ｈｅｐａｔｄ，２００９，５９（５０）：２２７－２４２．　［２］尹艳雅．中西医结合治疗乙肝后肝硬化腹水５４例疗效观察［Ｊ］．国　际医药卫生导报，２０１２，１８（９）：１２７０．１２７２．　［３］邱济海，金茜，杨亦德．阿德福韦酯胶囊治疗失代偿期乙型肝炎　肝硬化腹水形成５Ｏ例疗效分析［Ｊ］．中国初级卫生保健，２０１２，２６　（１）：９６—９７．　［４］容海鹰，朱雅丽，李耀威，等．阿德福韦酯联合双歧三联活菌治疗　乙肝肝硬化腹水的疗效评价［Ｊ］．中国现代医生，２０１２，５０（２３）：５３　５７．　［５］Ｃｈｏｅ　ＷＨ，Ｈｏｎｇ　ＳＰ，Ｋｉｍ　ＢＫ，ｅｔ　ａ１．Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ　ｏｆ　ｈｅｐａｔｉｔｉｓ　Ｂ　ｖｉｒｕｓ　ｍｕｔａｔｉｏｎ　ｄｕｒｉｎｇ　ｅｎｔｅｃａｖｉｒ　ｒｅｓｃｕｅ　ｔｈｅｒａｐｙ　ｉｎｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ａｎ　ｔｉｖｉ－　ｒａｌ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　ｔｏ　ｌａｍｉ　ｖｕｄｉｎｅ　ａｎｄ　ａｄｅｆｏｖｉｒ［Ｊ］．Ａｎ　ｔｉｖｉｒ　Ｔ　ｈ　ｅｒ，　２００９，１４（７）：９８５—９９３．　ｆ６］葛保民，梁永谦．阿德福韦酯治疗失代偿期乙肝肝硬化伴腹水９６　例临床分析［Ｊ］．海南医学院学报，２０１０。１６（５）：５７９—５８０．　［７］王玉兰，张国顺，张学军，等：ｌ阿德福韦酯联合腹水超滤浓缩回输　治疗乙型肝炎肝硬化顽固性腹水的ｌ临床研究［Ｊ］．现代预防医学，　２０１１。３８（３）：５７９．５８１．　

作者简介：熊飞（１９７８一），男，四Ｊ　究方向：病毒性肝炎。　收稿日期：２０１３。１２．２６　渠县人，本科，主治医师。研　

ＶＥＧＦ和ＨＩＦ一１　ａ在糖尿病心肌病中的表达及临床意义　Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＶＥＧＦ　ａｎｄ　ＨＩＦ—ｌ　ａ　ｉｎ　Ｄｉａｂｅｔｉｃ　Ｃａｒｄｉ０ｍｙｏｐａｔｈｙ　ａｎｄ　Ｉｔｓ　Ｃｌｉｎｉｃａｌ　Ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ　

陈明志（信丰县人民医院心内科，江西信丰３４１０００）　摘要：目的　明确ＶＥＧＦ和ＨＩＦ—ｌａ在糖尿病心肌病中的表达及临床意义。方法选取ＳＤ大鼠４０只，数字表法随机　将ＳＤ大鼠分为实验组及空白组各２０只。两组大鼠均正常饲养１ｗ。禁食２４ｈ，期间可自由饮水。制备质量分数为２％　链脲佐菌素溶液．制备糖尿病心肌病大鼠。实验组采用抗ＶＥＧＦ抗体、抗ＨＩＦ—ｌａ、免疫组化通用型两步法检测。结果　ＶＥＧＦ、ＨＩＦ—ｌａ在实验组中的表达均高于空白组，差异具有统计学意义（火Ｏ．０５）；ＶＥＧＦ和ＨＩＦ—ｌｃｔ在糖尿病心肌　病模型中的表达差异．有显著相关性（Ｐ＜Ｏ．０５）。结论ＨＩＦ一１／ＶＥＧＦ信号途径在糖尿病心脏肥厚中表达且发挥重要　作用。　中图分类号：Ｒ５４２．２　文献标识码：Ａ　文章编号：１００卜８１７４（２０１４）０５—０９７２—０２　

糖尿病心肌病（ＤＣ）是糖尿病患者常见且严重的并发症　之一…。ＨＩＦ．１／ＶＥＧＦ信号途径在糖尿病心脏肥厚向心衰转换　过程中发挥重要作用ｒ２］。本研究通过观察实验用大鼠糖尿病　：赣州市指导性科技计划：２０１２（２９５）号　心肌病模型．明确ＨＩＦ一１／ＶＥＧＦ信号途径在糖尿病心肌病大　鼠的表达及临床意义。报告如下。　１材料与方法　１．１材料选取ＳＤ大鼠４Ｏ只．均购自江西中医药大学动物　Ｍｏｄ　Ｄｉａｇｎ　Ｔｒｅａｔ　现代诊断与治疗　２０１４　Ｍａｒ　２５（５）　・９７３・　实验中心（合格证号：赣医动证：１３—００５）提供，雌雄各半，分　笼饲养，体￣（２２０＋５．１）ｇ。均用普通大鼠饲料喂养。饮用自来　水。实验期间饲养温度为（２５￣１．０）℃。　１．２方法　１．２．１糖尿病心肌病模型制备　数字表法随机将ＳＤ大鼠　分为实验组及空白组各２０只　两组大鼠均正常饲养１　Ｗ，禁　食２４ｈ．期间可自由饮水。制备质量分数为２％链脲佐菌素（美　国Ｓｉｇｍａ公司，批号：Ｓ－０２４￣，）溶液：用链脲佐菌素０．１ｍｏｌ／Ｌ、　ｐＨ４．２柠檬酸缓冲液新鲜配制。注射前大鼠禁食１２ｈ，实验组　大鼠以５５ｍｇ／ｋｇ比例一次性给予上述溶液左下腹腔注射，过　程中注射力量适中．避免损伤内脏及血管。观察７２ｈ后采大　鼠尾静脉血，测血糖，２ｄ／次，连续３次，标准：血糖≥１６．７　ｍｍ０Ｌ门Ｌ确定为糖尿病心肌病模型。　１．２．２　ＶＥＧＦ和ＨＩＦ—ｌｅｔ测定　实验组采用抗ＶＥＧＦ抗体、　抗ＨＩＦ—ｌａ、免疫组化通用型两步法检测试剂盒ＰＶ６０００（北京　中杉生物技术有限公司）：应用０，０１Ｍ枸橼酸盐缓冲液（ｐＨ６．Ｏ）　一抗制备：通过高压热修复对ＶＥＧＦ、ＨＩＦ—ｌｅｔ灭活内源性过　氧化物酶，在避光室３％Ｈ２０　去离子水中温孵育２０ｍｉｎ；滴加　一抗后在３７℃恒温箱湿箱内放置６０ｍｉｎ．滴加常规型ｌｇＧ抗　体（Ｆａｂ段）一ＨＲＰ多聚体。室温再次放置３０ｒａｉｎ，采用０．０２％　３．３’二氨基联苯显色，常规苏木精复染，并脱水、透明，封片及　观察　１．３　ＶＥＧＦ和ＨＩＦ—ｌｅｔ判定　阳性：细胞有棕黄色颗粒。按　色程度评分与阳性细胞所占比例评分。　１．４统计学方法　采用ＳＰＳＳ　１５．０行统计分析．等级资料比　较采用秩和检验．相关性分析采用Ｓｐｅａｒｍａｎ检验．Ｐ＜Ｏ．０５差　异具有统计学意义　２结果　２．１　ＶＥＧＦ在实验组和空白组中的表达ＶＥＧＦ在实验组中　的表达高于空白组。差异具有统计学意义（Ｐ＜Ｏ．０５）。见表１。　表１　ＶＥＧＦ在实验组和空白组中的表达（ＤＡＢｘ２００）　２．２　ＨＩＦ一１　０【在实验组和空白组中的表达ＨＩＦ—ｌｅｔ在实验　组中的表达高于空白组，差异具有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。见　表２。　表２　ＨＩＦ．１　ｏｃ在实验组和空白组中的表达（ＤＡＢｘ２００）　２．３　ＶＥＧＦ与ＨＩＦ一１　相关性分析ＶＥＧＦ和ＨＩＦ—ｌｅｔ在糖　尿病心肌病模型中的表达差异，有显著相关性（Ｐ＜Ｏ．０５）。见　表３。　表３糖尿病心肌病模型中ＶＥＧＦ与ＨＩＦ－１ａ相关性分析　ＶＥＣＦ　一　＋　＋＋　＋＋＋　Ｐ　３讨论　１９９２年由Ｓｅｍｅｎｚａ等　５］发现低氧诱导因子一１（ＨＩＦ一１）是　在Ｈｅｐ３Ｂ细胞株中的一种ＤＮＡ结合蛋白．后者可以通过某　种机制可调控许多基因的表达　随着学者们对ＨＩＦ—ｌ研究的　深入，发现ＨＩＦ一１是由０【和Ｂ两个亚基组成的异源二聚体。　一方面．ＨＩＦ一１通过缺血缺氧状态下机体的各种应答反应．与　各种调控基因密切相关：另一方面．ＨＩＦ一１可以使细胞适应低　氧环境。血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）作为促进血管新生的调　控因子。ＶＥＧＦ信号通路促进血管内皮细胞分裂、增殖。最终　诱导新生血管的形成。当机体处于缺血或缺氧等状态时配体　与受体结合可以促进内皮细胞增殖、迁移以及促进血管新生　等生物学功能。ＨＩＦ一１￣ｔ结合位点低氧反应元件（ＨＲＥ）在　ＶＥＧＦ５’端增强子内发现　ＨＩＦ一１　０【对ＶＥＧＦ的调控机制通过　ＨＩＦ—ｌｅｔ与ＶＥＧＦ５’端增强子相互作用，并转录调节ＶＥＧＦ。　当组织或器官缺氧时ＨＲＥ积聚并与ＤＮＡ活性增加．通过前　者与ＶＥＧＦ基因的ＨＲＥ的结合．使ＶＥＧＦ的转录活性和表达　增强　ＨＩＦ一１　通过两方面调节ＶＥＧＦ的转录活性与ＶＥＧＦ　ｍＲＮＡ稳定性．并影响ＶＥＧＦ的表达　如ＶＥＧＦ　ｍＲＮＡ的水　平提高。提示ＨＩＦ一１仪过度表达。一方面如ＨＩＦ一１Ⅸ突变则不　能与ＶＥＧＦ增强子内的ＨＲＥ结合．使增强子的作用消失。可　以导致ＶＥＧＦ　ｍＲＮＡ水平显著降低　尽管组织或器官处于低　氧条件下。ＶＥＧＦｍＲＮＡ仍有可能未被诱导表达。另一方面诱　导ＶＥＧＦ上的ＨＲＥ缺失．同样使ＨＩＦ—ｌｅｔ不能与其结合而发　挥转录作用　糖尿病心脏病中通过心肌细胞增殖增加了氧的消耗．同　时表皮肥厚导致了氧供应的障碍．很可能参与了糖尿病心脏　病的恢复过程　在正常生理状态及病理状态下，ＶＥＧＦ是心肌　新生血管形成的重要调节因子．在缺血心肌心肌细胞及血管　的形成及基质降解中起重要作用　ＨＩＦ—ｌｅｔ在机体缺氧情况　下促使ＶＥＧＦ的转录激活，诱导糖尿病心脏病心肌细胞再生　成　本实验结果显示在糖尿病心脏病ＶＥＧＦ的表达与ＨＩＦ一　１　的表达呈正相关，在低氧状态下。ＨＩＦ—ｌｅｔ降解减少，分泌　增加．而ＶＥＧＦ为其调控表达的重要因子。糖尿病心脏病心　肌细胞的过度增殖导致了局部的缺氧而激活，后者激活ＨＩＦ一　１ｄ并刺激ＶＥＧＦ分泌使得局部组织或器官星缺氧状态．当细　胞在受到缺氧刺激后．可以通过自分泌或旁分泌的方式释放　细胞因子　后者可以促进ＶＥＧＦ表达，并与心肌细胞上的内　皮细胞特异性受体结合．使细胞发生系列功能改变：血管通　透性增加及血管内皮细胞增殖、迁移，促进新生血管形成。