甲基化特异性PCR(MSP)检测服务

甲基化特异性PCR（MSP）检测服务

MSP原理：双链DNA变性解链后，在亚硫酸氢钠作用下发生C→U （T）转化，C若已有甲基化则不会改变；DNA甲基化修饰只发生于CpG岛上，因此在亚硫酸氢钠作用下，CpG岛若无甲基化修饰，则序列中的C完全转化为U，CG→UG，若有甲基化则C不会变为U，针对CpG岛甲基化和非甲基化两种DNA设计甲基化引物MF/MR和非甲基化引物UF/UR进行PCR，如果DNA CpG岛未发生甲基化（正常组织），那么非甲基化引物UF/UR会扩增出相应条带；如果DNA CpG岛发生甲基化（癌变组织），那么甲基化引物MF/MR会扩增出相应条带。

方法：分别从正常组织和石蜡切片中提取基因组DNA，用亚硫酸氢钠处理基因组DNA，试剂盒纯化DNA做为模板，分别用甲基化引物MF/MR和非甲基化引物UF/UR进行PCR，从而确定基因有无CpG岛甲基化。

MSP特点：适于研究中大量样本的DNA片段，具有方便快捷，灵敏度高的优点。

DNA甲基化是最早发现的表观基因修饰方式之一，可能存在于所有高等生物中。DNA甲基化能关闭某些基因的活性，而去甲基化诱导了

基因的重新活化和表达。甲基化的主要形式有5-甲基胞嘧啶,N6-甲基腺嘌呤和7-甲基鸟嘌呤，DNA的甲基化是在DNA甲基化转移酶（DNMTs）的作用下使CpG二核苷酸5端的胞嘧啶转变为5甲基胞嘧啶。

DNA的甲基化修饰是基因表达调控的一种重要手段，基因组DNA 甲基化分布的有序建立和维持对保证个体正常发育至关重要，相反，如果这套甲基化调控机制出现问题，细胞功能将发生不正常改变，可能导致细胞癌变，因此基因甲基化研究是肿瘤机制研究中的一大热点。DNA 的甲基化主要发生在CpG岛，其甲基化状态的确定主要是通过甲基化测序来实现：样本经亚硫氢酸盐处理后，甲基化的胞嘧啶（C）保持不变，但非甲基化的胞嘧啶被转化成脲嘧啶，因此在利用该处理产物作为模板的PCR产物中，甲基化的胞嘧啶还是胞嘧啶，但非甲基化胞嘧啶变成了胸腺嘧啶，通过测序可以很容易看出目的片断哪些胞嘧啶是甲基化的，哪些没有，而且还可以对甲基化比例作初步分析。