体外培育牛黄中胆酸、去氧胆酸含量检验方法验证方案

安琪酵母股份有限公司药业分公司

体外培育牛黄中胆酸、去氧

胆酸含量检验方法验证方案 编 号 页 数 1 / 18 制订部门 技质部

颁发部门 技质部 生效日期： 年 月 日

文件目录 一、 概述 .................................................................. 2 二、 目的 .................................................................. 2 三、 范围 .................................................................. 2 四、 职责 .................................................................. 2 五、 验证内容 .............................................................. 2 六、 验证实施 .............................................................. 8 七、验证进度安排 ......................................................... 12 八、偏差处理及报告汇总 ................................................... 12 九、验证结果评定与结论 ................................................... 12 十、附件 ................................................................. 12

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起草人 中心化验室 审核人 中心化验室 审核人 技质部 QA审阅 技质部 批准人 生产管理负责人 批准人 质量管理负责人

本文件根据需要应分发于以下部门：

□√技质部 □生产部 □办公室 □调度室 □制剂车间 □原料药车间 □机修车间 □中心化验室 □仓储 □√档案室 安琪酵母股份有限公司药业分公司 体外培育牛黄中胆酸、去氧胆酸含量检验方法验证方案

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一、 概述 2015版中国药典收录的体外培育牛黄中胆酸、去氧胆酸含量检测使用的是薄层色谱法，此方法因其精密度不能满足要求且方法落后，无法满足检测要求，故变更为高效液相色谱法进行检测。

二、 目的 建立体外培育牛黄中胆酸、去氧胆酸含量的高效液相色谱法检测的方法验证 三、 范围 中心化验室 四、 职责 1、验证委员会 1.1 负责验证管理的日常工作及公司内验证工作总的调度、协调及总结工作； 1.2 负责验证任务的下达及验证小组的确定； 1.3 负责验证计划和验证方案审核和批准工作； 1.4 负责验证报告的评价工作； 1.5 负责验证周期的确定工作； 1.6 负责发放验证证书； 2、技术质量管理部职责 2.1 负责对验证方案和报告的可行性的审核； 3、验证小组职责 3.1 负责验证方案起草，并对批准后的验证方案组织实施； 3.2 负责验证全过程管理并收集、整理验证数椐； 3.3 负责总结、写出验证报告； 3.4 负责验证实施过程中的检测，并出具检测报告； 3.5验证小组人员 小组职务 姓名 所在部门 职务 组长 中心化验室 组员 中心化验室 组员 中心化验室

五、 验证内容 安琪酵母股份有限公司药业分公司 体外培育牛黄中胆酸、去氧胆酸含量检验方法验证方案

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1、验证依据、验证标准： 《中华人民共和国药典》2015年版 2、验证判断标准： 准确度:6份样品的平均回收率限度达到：95-102% 精密度:6份对照品峰面积的重复性（RSD）达到1.5% 专属性:将样品分别置于高温、高湿、酸碱水解、氧化降解、强光照射进行加速破坏，再测定其含量 检测限：将检测限数据使用含量相近的样品进行验证，附图谱及结果 定量限：将定量限数据使用含量相近的样品进行验证，附图谱及结果，应符合准确度、精密度要求。 线性：应有回归方程、相关系数、线性图 范围：对80%-120%供试品溶液浓度的供试液测得的含量应符合准确度、精密度要求。 耐用性：12小时内分别测得的样品含量的RSD应达到1.5% 3、人员 查阅人员档案，确认已经对有关操作人员进行了相关培训，见下表1： （一）人员培训确认记录 人 员 培训内容 检查结果

检验人员 《中华人民共和国药典》2015年版、《体外培育牛黄中胆酸、去氧胆酸含量检验方法验证方案》 （二）人员档案 姓 名 学 历 职位 入厂时间 培 训 结 论 □是□否 □符合要求□不符合要求 □是□否 □符合要求□不符合要求 □是□否 □符合要求□不符合要求 □是□否 □符合要求□不符合要求 □是□否 □符合要求□不符合要求 检查人： 日期： 确认人： 日期：

4、验证用文件 文件编号 文件名称 存放位置 体外培育牛黄中胆酸、去氧胆酸含量检验方 安琪酵母股份有限公司药业分公司 体外培育牛黄中胆酸、去氧胆酸含量检验方法验证方案

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法验证方案 检查人： 日期： 确认人： 日期： 5、实验室环境 项目 可接受标准 结果 结论 温度 18~26℃ □符合要求 □不符合要求 湿度 45~65% □符合要求 □不符合要求 其他 干净、整洁 □符合要求 □不符合要求

6、实验试剂及仪器： 试剂 批号： 生产厂家： 级别 结 论 胆酸对照品 □符合要求□不符合要求 去氧胆酸对照品 □符合要求□不符合要求 甲醇 □符合要求□不符合要求 甲酸 □符合要求□不符合要求 乙腈 □符合要求□不符合要求 盐酸 □符合要求□不符合要求 氢氧化钠 □符合要求□不符合要求 双氧水 □符合要求□不符合要求 检查人： 日期： 确认人： 日期： 仪器 型号 编号 校验有效期 结 论 电子天平 □符合要求□不符合要求 高效液相色谱仪 □符合要求□不符合要求 电热鼓风干燥箱 □符合要求□不符合要求 检查人： 日期： 确认人： 日期： 7、实验样品: 批号： 生产厂家 检查人： 日期： 确认人： 日期： 8、验证内容及结果 8.1对照品溶液的制备 取对胆酸、去氧胆酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成含胆酸240ug/ml和去氧胆酸安琪酵母股份有限公司药业分公司 体外培育牛黄中胆酸、去氧胆酸含量检验方法验证方案

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80ug/ml的混合溶液，即得。 8.2供试品溶液制备 取样品适量，研细，取约50mg，精密称定，置于锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称重，超声处理30min，用甲醇补足减失的重量，摇匀，0.45um滤膜滤过即得。

8.3色谱条件与系统适用性试验 色谱柱：Wondasil C18(4.6mm*250mm，5um)；柱温：25℃；以0.2%甲酸溶液（A）-乙腈（B）为流动相，梯度洗脱（0~7min，5%B；7~15min,5%B→80%B；15~20min，80%B→90%B；20~23min90%B→96%B））；流速：1.0ml/min；用蒸发光散射检测器；氮气流速：2.3ml/min，漂移管温度110℃。样品中各色谱峰分离度大于1.5，理论板数按胆酸峰计算应不低于5000。

8.4 线性关系考察 精密量取对照品溶液2ml、4ml、6ml、8ml、10ml，分别置于10ml容量瓶中，用甲醇定容到刻度，得到胆酸浓度分别为48、96、144、192、240ug/ml；去氧胆酸浓度分别为16、32、48、64、80ug/ml。精密吸取各级对照品溶液10ul注入液相色谱仪测定峰面积。以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

回归方程： 相关系数 胆酸 去氧胆酸 结论： 检查人： 日期： 确认人： 日期：

8.5供试品测定法 取供试品溶液10ul注入液相色谱仪，依法测定峰面积，从标准曲线上读出供试品溶液中胆酸、去氧胆酸的含量，计算，即得。

8.6、精密度 取同对照品溶液10ul连续进样6次，测定峰面积，计算胆酸和去氧胆酸峰面积的RSD 胆酸：

峰面积 RSD 1 2 3 4 5 6 安琪酵母股份有限公司药业分公司 体外培育牛黄中胆酸、去氧胆酸含量检验方法验证方案

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去氧胆酸： 峰面积 RSD 1 2 3 4 5 6 结论： 检查人： 日期： 确认人： 日期： 8.7 耐用性

取供试品10ul，分别于0、2、4、6、8、10、12h进样，依法测定峰面积，计算得到胆酸和去氧胆酸的平均含量、RSD 供试品称样量： 胆酸： 时间（h） 峰面积 溶液浓度（ug/ml） 稀释倍数 测定结果 0 2 4 6 8 10 12 RSD

去氧胆酸： 时间（h） 峰面积 溶液浓度（ug/ml） 稀释倍数 测定结果

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