实验室常用溶液配制

常用溶液的配制

1 细菌培养相关溶液

1）LB培养基：

胰蛋白胨10g

酵母提取物5g

NaCl 10g

5M NaOH调PH至7.0

加去离子水至1000ml

高压灭菌

2）氨苄青霉素：1g溶于10ml水中,使用时1:1000稀释

卡那霉素：1g溶于20ml水中，使用时1:1000稀释。

2 细胞培养相关溶液

1)DMEM培养基：

DMEM干粉（Gibco）1袋加入适量去离子水中

NaHCO3 3.7g

HEPES 3g

搅拌溶解

1M HCl或1M NaOH调节PH至7.0-7.2

定容至1000ml，

0.22µm的微孔滤膜过滤除菌。

2)1640培养基：

1640干粉（Gibco）1袋加入适量去离子水

NaHCO3 2g

HEPES 3g

搅拌溶解

1M HCl或1M NaOH调节PH至7.0-7.2

加入去离子水至1000ml

用0.22µm的微孔滤膜过滤除菌3)胰蛋白酶液（0.25%Trypsin-0.04%EDTA消化

液）：

Trypsin 1.25g

EDTA 0.2g

NaCl 3.5g

Na2HPO4⋅12H2O 0.15g

KH2PO4 0.12g

Tris 1.5g

KCl 0.185g

D-葡萄糖0.5g

酚红0.005g

加去离子水溶解

定容至500ml

0.22µm的微孔滤膜过滤除菌

4)1x PBS(1L) ：

NaCl 8g

KCl 0.2g

Na2HPO4⋅12H2O 1.44g

K2HPO4 0.24g

加蒸馏水800ml

盐酸调PH至7.4

加水定容至1000ml

3 Western-blot 相关试剂

1）30%丙烯酰胺溶液：

丙烯酰胺29g

N,N-亚甲双丙烯酰胺1g

加入适量去离子水充分溶解

定容至100ml(不高压) （至少搅拌半小时）普通滤纸过滤

避光、室温贮存于棕色瓶中

2）1.5M Tris-Cl(PH8.8)：

Tris碱18.15g

去离子水80ml

浓盐酸调PH值8.8

加去离子水定容至100ml

3）1.0M Tris-Cl(PH6.8)：

Tris碱12.1g

去离子水80ml，

浓盐酸调PH至6.8

加去离子水定容至100ml

1.0M Tris Cl

用800ml 蒸馏水溶解121.1g Tris 碱，加浓盐酸调Ph

pH：7.4 HCl：70ml

7.660ml

8.042ml

应使溶液冷却至室温后调pH

加水定容至1L

分装高压灭菌

如果1mol/L 溶液呈现黄色应丢弃

4）10%（m/v）过硫酸胺：

过硫酸胺0.1g溶于1ml去离子水中，现用现配。或者：贮存于4度

5）10%SDS：

在180ml水中溶解20g电泳级SDS

加热至68℃助溶

浓盐酸调PH值至7.2

加水定容至200ml。

6）Tris-甘氨酸电泳缓冲液（5×）：

Tris碱15.1g

甘氨酸94g

SDS 5g

加去离子水溶解

定容至1000ml

7）2×SDS-PAGE凝胶电泳上样缓冲液：

Tris碱0.6g

DTT 1.54g

SDS 2g

溴酚蓝0.1g

甘油10ml

加适量去离子水混匀

定容至50ml

2x SDS Loading buffer

2ml 1M Tris(Ph6.8)

4ml 20% SDS

8ml 50% glycerol

4mg BPB(溴酚蓝)

2ml H2O

共16ml 用时取0.8ml 此母液加入0.2ml 1M DTT 和蛋白酶抑制剂

10x SDS Running buffer

1L：144g glycine

30.25g Tris

10g SDS 加水定容至1L

8）电转移缓冲液：

甘氨酸2.9g

Tris碱5.8g

SDS 0.37g

甲醇200ml

加去离子水定容至1000ml

10x Western转移缓冲液

29g 甘氨酸

58g Tris

18.5ml 20% SDS

补水至800ml（不高压）

用时每80ml稀释10倍另补加200ml甲醇9）甲醇/醋酸脱色液：

甲醇450ml

冰醋酸100ml

加去离子水定容至1000m

考马斯亮蓝（commassise bright blue R250）染液：

考马斯亮蓝0.25g

溶于100ml甲醇/醋酸脱色液中（搅拌半小时以上）

或者：考马斯亮蓝染液：

45ml 水

45ml 甲醇

10ml 冰乙酸

0.25g 考马斯亮蓝R250

搅拌半小时以上

普通滤纸过滤

Whatman 1号滤纸过滤