Ⅱ型限制性内切酶发现者汉密尔顿史密斯
限制性核酸内切酶
生理意义
限制作用实际就是限制酶降解外源DNA ，维护宿主遗传稳定的保护 机制。甲基化是常见的修饰作用，可使腺嘌呤A和胞嘧啶C甲基化而受 到保护。通过甲基化作用达到识别自身遗传物质和外来遗传物质的目 的。所以，能产生防御病毒侵染的限制酶的细菌，其自身的基因组中 可能有该酶识别的序列，只是该识别序列或酶切位点被甲基化了。但 并不是说一旦甲基化了，所有限制酶都不能切割。大多数限制酶对 DNA甲基化敏感，因此当限制酶目标序列与甲基化位点重叠时，对酶 切的影响有3种可能，即不影响、部分影响、完全阻止。对甲基化 DNA的切割能力是限制酶内在和不可预测的特性，因此，为有效的切 割DNA，必须同时考虑DNA甲基化和限制酶对该类型甲基化的敏感 性。另外，现在很多商业限制酶专门用于切割甲基化DNA。
E
Escherichia
(属)
co
coli
(种)
R
RY13
(品系)
I
的结构，辅因子的需求切位与作用方式，可将限 制酶分为三种类型，分别是第一型(Type I)、第二型(Type Ⅱ) 及第三型(Type Ⅲ)。
类型
第一型限制酶 同时具有修饰(modification)及识别切割(restriction)的作用;另有识别 (recognize)DNA上特定碱基序列的能力，通常其切割位(cleavage site)距离 识别位(recognition site)可达数千个碱基之远。例如:EcoB、EcoK。
第二型限制酶 只具有识别切割的作用，修饰作用由其他酶进行。所识别的位置多为短的回文 序列(palindrome sequence);所剪切的碱基序列通常即为所识别的序列。是遗 传工程上，实用性较高的限制酶种类。例如:EcoRI、HindⅢ。
基因原理
名词（基因）一、绪论1、基因：是一个含有特定遗传信息的核苷酸序列，它是遗传物质的最小功能单位。
2、基因工程：将不同的生命元件按照类似于工程学的方法组装在一起，生产出人们所期待的生命物质。
对不同生物的遗传物质-基因，在体外进行剪切、组合和拼接，使遗传物质重新组合，然后通过载体（质粒、噬菌体或病毒等）转入微生物、植物或动物细胞内，进行无性繁殖，并使所需要的基因在细胞中表达，产生出人类所需要的产物或组建成新的生物类型。
3、细胞工程：包括细胞融合、细胞大规模培养以及植物组织培养快速繁殖技术。
细胞融合技术是指将两种不同种类的细胞，通过化学、生物学或物理学手段使之融合在一起，从而产生出兼备两个亲本遗传特性的新细胞。
细胞大规模培养技术是以工业化生产为目的，包托气候、产地、季节的限制，从大量培养的细胞中获得药物或其他有用物质。
植物组织培养快速繁殖技术是利用植物细胞的全能性由扩增的细胞分化再生成植株，这样就有可能用细胞器官和组织的再生苗来代替种子实生苗，无限地扩大繁殖系数。
4、酶工程：在一定的生物反应器中，利用酶的催化作用将相应的原料转化成有用物质的技术。
包括酶的生产应用、酶和细胞的固定化以及酶的分子修饰技术。
酶是生物体内产生的具有催化作用的蛋白质。
5、微生物发酵工程：是利用微生物的特定性状，通过现代化工程技术，生产有用物质或直接应用于工业生产的一种技术体系。
包括菌种选育、菌体生产利用、代谢产物的生产利用以及微生物机能的利用技术。
6、生化工程：包括生物反应器设计制造、传感器的研制记忆产物的分离提取和精制技术。
7、光合作用：是指绿色植物将大气中的CO2转化为碳水化合物，并向周围环境释放氧气的过程。
固氮作用：是指豆科植物（如蚕豆、豌豆和三叶草等）将空气中的氮（N2）转变为氨（NH3）的过程。
转基因植物：是指将克隆到的一些编码特殊性状的基因，通过生物、物理和化学等方法，导入到受体植物细胞，然后进行组织培养而培育出再生植物。
第九章 DNA重组与遗传转化
二、核酸内切酶
核酸内切酶催化水解多核苷酸内部的磷酸二酯键。有些核酸内 切酶仅水解5′磷酸二酯键，把磷酸基团留在3′位置上，称为5′内切酶；而有些仅水解3′-磷酸二酯键，把磷酸基团留在5′位置 上，称为3′-内切酶。还有一些核酸内切酶对磷酸酯键一侧的碱基 有专一要求，例如胰脏核糖核酸酶（RNaseA）即是一种高度专一性 核酸内切酶，它作用于嘧啶核苷酸的C′3上的磷酸根和相邻核苷酸 的C′5之间的键，产物为3′嘧啶单核苷酸或以3′嘧啶核苷酸结尾 的低聚核苷酸 。 8
14
四、其它工具酶
1．DNA聚合酶
（１）依赖DNA的——DNA聚合酶Ⅰ、DNA聚合酶Ⅰ大片段 （Klenow）、T4 DNA聚合酶、T7 DNA聚合酶、修饰的T7 DNA聚 合酶、Taq DNA聚合酶； （２）不依赖DNA的——末端转移酶(Terminal transferase, TdT） 是一种无需模板，催化核苷酸结合到DNA分子的3'核酸内切酶可被分成三种类型。Ⅰ型和Ⅲ型限制酶水解 DNA需要消耗ATP，全酶中的部分亚基有通过在特殊碱基上补 加甲基基团对DNA进行化学修饰的活性。Ⅱ型限制酶水解DNA 不需要ATP也不以甲基化或其它方式修饰DNA，能在所识别的 特殊核苷酸顺序内或附近切割DNA。因此，被广泛用于DNA分 子克隆和序列测定. 第Ⅰ类酶:每隔一段DNA序列随机切割双链DNA分子，没有序列特 异性,酶切位点不定。 如EcoB(大肠杆菌B株)、EcoK(大肠杆菌K株)分子量较大 (300000)，作用时需ATP、Mg2+等辅助因子。 第Ⅱ类酶:能识别一段特异的DNA序列，准确地酶切双链DNA的特 异序列，这些特定碱基组成的DNA序列叫内切酶的识别位点或 限制性位点，长度一般在4至8个碱基对之间。 如EcoRI(大肠杆菌)、HindⅢ(嗜血杆菌)，分子量较小(约 20000-100000)，作用时需Mg2+存在。
(整理)限制性内切核酸酶
第三章限制性内切核酸酶一、填空题1. 严格地说限制性内切核酸酶(restriction endonuclease)是指已被证明是的酶。
基因工程中把那些具有识别的内切核酸酶统称为限制性内切核酸酶。
2.年Luria和Human在T偶数噬菌体对大肠杆菌感染实验中首次发现了细菌的现象。
3.1970年，Smith和Wilcox从流感嗜血杆菌中分离到一种限制酶，能够特异性的切割DNA，这个酶后来被命名为，这是第一个分离到的Ⅱ类限制性内切核酸酶。
4.通过比较用不同组合的限制性内切核酸酶处理某一特定基因区域所得到的不同大小的片段，可以构建显示该区域各限制性内切核酸酶切点相互位置的。
5.Ⅱ类限制性内切核酸酶分子量较小．一般在20~40kDa，通常由——亚基所组成。
它们的作用底物为双链DNA，极少数Ⅱ类酶也可作用于单链DNA，或DNA／RNA杂合双链；这类酶的专一性强，它不仅对酶切点邻近的两个碱基有严格要求，而且对更远的碱基也有要求，因此，Ⅱ类酶既具有专一性，也具有专一性，一般在识别序列内切割。
切割的方式有，产生末端的DNA片段或的DNA片段。
作用时需要——作辅助因子，但不需要和6.完全的回文序列具有两个基本的特点，就是：和7.Ⅱ类限制性内切核酸酶一般识别个碱基，也有识别多序列的限制性内切核酸酶；根据对限制性内切核酸酶识别序列的分析，限制性内切核酸酶识别序列具有倾向，即它们在识别序列中含量较高。
8.EcoK是I类限制性内切核酸酶，分子组成是_______ 分子量是300kDa.在这些亚基中，α亚基具有作用；β亚基具有的活性;γ亚基的作用则是，9.个体之间DNA限制性片段长度的差异叫10.限制性内切核酸酶是按属名和种名相结合的原则命名的，第一个大写字母取自，第二、三两个字母取自，第四个字母则用表示。
11.限制性内切核酸酶AcyI识别的序列是5’-GRCGYG-3’，，其中R，Y12.在酶切反应管加完各种反应物后，需要离心2秒钟，其目的是和13.部分酶切可采取的措施有：(1)(2)(3)等。
基因工程的酶学基础
DNA甲基化对酶活性的影响 •大多数大肠杆菌菌株中含有Dam甲基化酶 和Dcm甲基化酶。 •Dam可以在GATC序列中腺嘌呤N-6位上 引入甲基 •Dcm在CCA/TGC序列的第一个胞嘧啶C-5 位置上引入甲基。 •部分限制性内切酶对甲基化的DNA不能切 割，如FbaI和MboI等。
通常有两种方法： ①选用上述酶的同功酶，如Sau3AI，DNA 识别切割位点与MboI相同；但不受甲基化 影响； ②利用甲基化酶缺失的受体细胞进行DNA 的制备，如E. coli & nbsp; JM110和链霉菌 等，前者Dam和Dcm甲基化酶已敲除，而 后者细胞内本就没有甲基化酶，从这些细 胞中抽提的DNA就能被上述酶切割。
CATG
SAGE Tag 5
CATG
SAGE Tag 2
SAGE Tag 4
SAGE Tag 6
•II型限制性内切酶的酶切位点位于识别位点之中或
附近，产生以下4种情况。 ① 5’粘性末端；② 3’粘性末端；③ 平末端和 ④ 非互补的粘性末端 •无论DNA的来源如何，只要是使用同一种限制性内 切酶，所留下的残端都是一样的。 •经酶切后，5’端总是保留一个磷酸根；3’端总是 保留一个OH
第二讲 基因工程的酶学基础
本节内容
•限制性内切酶—主要用于DNA分子的特异切割 •DNA甲基化酶—用于DNA分子的甲基化 •核酸酶—用于DNA和RNA的非特异性切割 •核酸聚合酶—用于DNA和RNA的合成 •核酸连接酶—用于DNA和RNA的连接 •核酸末端修饰酶—用于DNA和RNA的末端修饰 •其它酶类--用于生物细胞的破壁、转化、核酸纯化、 检测等。
Ⅱ型限制性内切核酸酶的基本特性
1.具有高度特异性的识别位点与酶切位点。 2.辅基： Mg++。 特定识别序列一般长4 - 8对碱基； 大部分酶的切割位点在识别序列内部或两侧；
二、限制性内切酶的类型II类限制性内切酶III类限制性内切酶首先由M.
1
?
4
通过缩短保温时间、降低反应温度或减 少酶的用量可达到局部消化的目的。
4. 限制酶酶切反应的终止
大多数酶可用65 oC温育5分钟失活。 或用乙醇沉淀DNA。
5. 几种常用限制酶识别位点
6. 限制性内切酶识别序列的交叉列表
AATT **** **** MaeII HpaⅡc MspIc ACGT AGCT ATAT CATG CCGG
① Dam甲基化酶 GATC 腺嘌呤N6位置引入甲基 ② Dcm甲基化酶 CCAGG或CCTGG序列在第二 个C上C5位置上引入甲基
二、限制性内切酶的类型
目前鉴定出三种不同类型的限制性内切酶。 I 型限制性内切酶
II 类限制性内切酶
III类限制性内切酶
1. I型限制性内切酶
首先由M. Meselson和R. Yuan在1968 年从大肠杆菌 B株和 K株分离的。 如 EcoB和 EcoK。 （1）识别位点序列 未甲基化修饰的特异序列。 EcoB： TGA(N)8TGCT
③ 补平成平齐末端 粘性末端可以用DNA聚合酶补平成 平齐末端。
（5）同裂酶（Isoschizomers) 识别位点的序列相同的限制性内切酶。
① 完全同裂酶： 识别位点和切点完全相同。 如Hind Ⅲ 和Hsu I。
Hind Ⅲ
Hsu I
5’-AAGCTT-3’ 3’-TTCGAA-5’ 5’-AAGCTT-3’ 3’-TTCGAA-5’
XmaI AvaI
C****G C****G
C****G C****G G****C EcoRI ApoI
SmaI
NgoMI BsrFI
AATT G****C G****C G****C G****C
基因原理
1 名词（基因） 一、绪论 1、基因：是一个含有特定遗传信息的核苷酸序列，它是遗传物质的最小功能单位。 2、基因工程：将不同的生命元件按照类似于工程学的方法组装在一起，生产出人们所期待的生命物质。 对不同生物的遗传物质-基因，在体外进行剪切、组合和拼接，使遗传物质重新组合，然后通过载体（质粒、噬菌体或病毒等）转入微生物、植物或动物细胞内，进行无性繁殖，并使所需要的基因在细胞中表达，产生出人类所需要的产物或组建成新的生物类型。 3、细胞工程：包括细胞融合、细胞大规模培养以及植物组织培养快速繁殖技术。 细胞融合技术是指将两种不同种类的细胞，通过化学、生物学或物理学手段使之融合在一起，从而产生出兼备两个亲本遗传特性的新细胞。 细胞大规模培养技术是以工业化生产为目的，包托气候、产地、季节的限制，从大量培养的细胞中获得药物或其他有用物质。 植物组织培养快速繁殖技术是利用植物细胞的全能性由扩增的细胞分化再生成植株，这样就有可能用细胞器官和组织的再生苗来代替种子实生苗，无限地扩大繁殖系数。 4、酶工程：在一定的生物反应器中，利用酶的催化作用将相应的原料转化成有用物质的技术。包括酶的生产应用、酶和细胞的固定化以及酶的分子修饰技术。 酶是生物体内产生的具有催化作用的蛋白质。 5、微生物发酵工程：是利用微生物的特定性状，通过现代化工程技术，生产有用物质或直接应用于工业生产的一种技术体系。包括菌种选育、菌体生产利用、代谢产物的生产利用以及微生物机能的利用技术。 6、生化工程：包括生物反应器设计制造、传感器的研制记忆产物的分离提取和精制技术。 7、光合作用：是指绿色植物将大气中的CO2转化为碳水化合物，并向周围环境释放氧气的过程。 固氮作用：是指豆科植物（如蚕豆、豌豆和三叶草等）将空气中的氮（N2）转变为氨（NH3）的过程。 转基因植物：是指将克隆到的一些编码特殊性状的基因，通过生物、物理和化学等方法，导入到受体植物细胞，然后进行组织培养而培育出再生植物。 转基因动物：是指实验方法导入的外源基因在染色体基因组内稳定整合并能遗传给后代的一类动物。 7、内含子、外显子：一个基因往往由几个互不相邻的段落组成；它的内部还包含一段或几段最终不相应出现在成熟mRNA中的片段，称为内含子；而相应出现在成熟mRNA中的片段，称为外显子。 二、生物大分子 8、DNA的一级结构：由数量庞大的4种脱氧核苷酸通过3’，5‘一磷酸二脂键连接起来的直线或环形多聚体，按规定，多核苷酸链以连接5’—羟基的磷酸开始，以脱氧核糖的3‘—羟基终止。 9、核酸的变性：当温度升高时，核酸有规律的螺旋型双链结构变成单链无规律的“线团”。从天然状态转变到分子变性状态分子，这一过程称为变性。 10、呼吸：双链DNA部分的链区被打开的现象。 11、复性或退火：DNA变性后，双螺旋两条链分开，如果溶液迅速冷却，两条单链继续保持分开，但如果缓慢冷却，则两条链可能发生特异的重新组合而恢复成双螺旋，这一变性DNA恢复其原有结构和性质。 12、杂交：不同来源的DNA形成复性DNA分子时，此复性过程称为杂交。 13、β折叠：两条或多条几乎完全伸展的多肽链侧向聚集在一起，相邻肽链主链上的-NH和C=O之间形成有规则的氢键，这样的堕胎构象就是β折叠片。 β折叠有平行和反平行两种，其中以反平行较稳定。 14、β转角：是一种位于多肽链折叠处的结构。β转角含4个氨基酸残基，它为第一个氨基酸残基的C=O 与第一个残基的NH之间的氢键所稳定。β转角有I型和II型两种,它们的主要区别在于第二肽链的空间取向。 15、蛋白质的一级结构：多肽链的氨基酸顺序。 16、蛋白质的二级结构：多肽链中有规则的重复的构象。 17、超二级结构：二级结构的组合形式。最常见的超二级结构有αα、βαβ和βββ三种图式。 18、三级结构：形成二级结构后，多肽链还可进一步折叠成三维球状结构，它们具有独立的结构和功能。 19、四级结构：在寡聚蛋白质蛋白中，亚基的空间关系和缔和。 20、单体蛋白：有些蛋白中，有些蛋白仅含一条多肽链。 21、寡聚蛋白：有许多蛋白质含两个或两个以上的亚基。如血红蛋白有4个亚基组成，天冬氨酸转氨甲酰酶由12个亚基组成等。 22、蛋白质的变性：天然蛋白质因受物理因素或化学因素影响，其分子内部原有的高度规律结构会发生变 2
生物化学与分子生物学实验技术-实验四 限制性内切酶分析
回文结构(Palindrome)
产生黏性末端（sticky end）或平头末端（blunt end）
实验原理
➢ Hin d III 是应用最广泛的限制性内切酶之一，酶切 位点和切割位点如下：
➢ DNA采用PCR法获得内参基因GAPDH（815bp） 。 ➢ GAPDH片段中含有一个Hin d III酶切位点，酶切
➢ 凝胶完全凝固后，移去梳子，将凝胶放入电泳槽， 点样端置于负极。TAE缓冲液使恰好没胶面约1mm。
StepⅣ 酶切结束后，加入4 µl 6×loading buffer，
混匀备用。
StepⅤ 20µl Loading ：
-
M
未酶切
DNA
酶切样品
+
StepⅥ 电泳： 120V ，30- 40 min
分类： Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ类
命名：
Hin dⅢ
Haemophilus influenzae d strain Ⅲ 流感嗜血杆菌d株的第三种酶 属 系 株序
第一个字母取自产生该酶的细胞属名，用大写； 第二、第三个字母是该细胞的种名，用小写； 第四个字母代表株； 用罗马数字表示发现的先后次序。
识别和切割位点
配置酶切体系，混匀
ddH2O 10×buffer DNA（PCR产物） Hin d III
5 µl 2.5 µl 10 µl 2.5 µl 20 µl
漩涡离心机瞬时离心。
StepⅡ 37℃保温1h。
StepⅢ 1.0%琼脂糖凝胶制备：
➢ 使用微波炉（ 中高火）加热agarose（1~2min） ，待溶液冷却至60℃； ➢ 将琼脂糖溶液倒入胶模中，厚度约3-5mm，避 免产生气泡；
StepⅦ 染色、观察：
限制酶知识点教学
限制酶知识点教学一、引言限制酶，也称为限制性内切酶，是一类存在于细菌、古菌和其他原核生物中的酶。
限制酶能够识别DNA序列的特定部分，并在该序列附近切割DNA链。
这种酶在分子生物学和基因工程领域起着重要的作用。
本文将以“限制酶知识点教学”为题，向读者介绍关于限制酶的基本知识。
二、限制酶的定义和分类限制酶是一种具有切割DNA链的酶，它能够识别并结合特定的DNA序列，然后在该序列的附近切割DNA链。
根据限制酶的作用方式和切割模式，可以将其分为三类：I型、II型和III型限制酶。
•I型限制酶：I型限制酶能够结合到特定的DNA序列，但其切割位点与结合位点不一致。
它们一般切割DNA链的不规则位置，离结合位点较远。
•II型限制酶：II型限制酶结合到特定的DNA序列后，在该序列的特定位置切割DNA链，产生平滑的切割末端。
II型限制酶是最常用的限制酶。
•III型限制酶：III型限制酶与I型限制酶类似，也存在结合位点和切割位点不一致的情况。
它们通常在结合位点上切割DNA链的一侧，切割位点离结合位点较远。
三、限制酶的命名和命名规则限制酶的命名采用了一套特定的规则，以保证对其结构和功能的描述足够准确。
限制酶的命名通常由三部分组成：首字母缩写、酶源和菌株编号。
首字母缩写代表了限制酶的属名和种名缩写，酶源指的是分离该限制酶的生物体类别，菌株编号是该限制酶所属菌株的编号。
例如，EcoRI是一种常用的限制酶。
Eco代表该酶源是大肠杆菌（Escherichia coli），RI表示是该菌株的第一个限制酶。
这样的命名方式既方便记忆，又能提供相关信息。
四、限制酶的应用限制酶在分子生物学和基因工程领域有着广泛的应用。
以下是一些常见的应用：1.DNA切割：限制酶能够识别DNA序列并切割DNA链，因此在分子生物学研究中常被用于DNA的切割。
2.克隆：通过使用限制酶，可以将外源DNA片段与载体DNA连接起来，形成重组DNA。
这种技术被广泛应用于基因工程和生物医学研究中。
限制性内切酶
识别序列
• 是指：在双链DNA上能够识别癿特定序列
识别序列有200多种， 长度都在4~8bp(base pair)）识别序列通常 有4bp 6bp,较少数具 有5bp的酶。
识别序列的长短影响它 在DNA分子中出现的频 率（识别序列越长，在 DNA分子中存在的几率 就越小）
原因：nbp的识别序列出现的几率为4n 分之一
通过凝胶电泳和放 射自显影，得到九 条区带及各自的分 子量。
计算各片段之差，按 从小到大得出切割的 正确顺序
双酶解分析法
原理：将酶两两组合进行彻底酶解，并不每个酶癿单酶彻底降解片断对 照,分析片断之间癿关系,确定酶切点癿相对位置。
2013-11-28
19
以质粒AJPI酶谱为例
• 限制酶Xhol,Pstl和EcoRI在 AJPI上分别有1,1和2个切 口 它们单独降解及双酶降解 AJPI产生癿片段分子量百 分数(如图所示)
用途
• 用于DNA基因组物理图谱癿组建；基因癿定位和 基因分离；DNA分子碱基序列分析；比较相关癿 DNA分子和遗传工程
限制性内切酶图谱
限制酶图谱（restriction map）:同一DNA用丌同癿限制酶 进行切割，从而获得各种限制酶癿切割位点，由此建立癿位 点图谱有助于对DNA癿结构进行分析。
主要内容 • 限制性内切酶癿概念
• 限制性内切酶图谱
• 限制性内切酶癿图谱分析法
限制性内切酶
是一类能识别双链DNA特定序列，并使磷酸二酯键断开的内切脱氧 核糖核酸酶， 限制性内切酶根据酶的组成，裂解方式和所需因子的不同分为三种 类型，分别是Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型。 Ⅰ型酶主要指的是：一类兼有限制性内切酶和修饰酶活性的多 亚基蛋白复合体。它们可在远离识别位点处任意切割 DNA 链。 能识别特异性的DNA 序列, 但没有固定的切割位点 Ⅱ型酶主要指的是：能在其识别序列内部或附近特异地切开 DNA 链。它们产生确定的限制性片段和凝胶电泳条带，因此 是唯一一类用于 DNA分析和克隆的限制性内切酶，分子量较 小。 Ⅲ型酶主要指癿是：一类较大癿兼有限制-修饰两种功能 癿酶。它在识别位点之外切开 DNA 链，并且要求同一 DNA分子中存在两个反向癿识别序列以完成切割。
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Ⅱ型限制性内切酶发现者:汉密尔顿·史密斯
Hamilton O. Smith，1931--
作者：陆旋初文章来源：本站原创点击数：118 更新时间：2008-12-31
图:帕劳2000年5月10日发行《20世纪科学和医学的进步》邮票，二种小全张，史密斯邮票为第一种5—3，右为阿尔伯。
美国微生物学家，1978年诺贝尔生理学和医学奖得主。
1931年8月23日出生于美国纽约市，父亲是位大学教授，母亲是中学教师。
1937年全家搬到伊利诺斯州的厄巴纳，8岁开始学钢琴，从此成为一个音乐爱好者。
1948年厄巴纳高中毕业，1948—1950年在伊利诺斯州大学读书，主修数学，1950年转到加州大学柏克莱分校，开始研究生物学，于1952年毕业获学士学位。
1952—1956年在约翰•霍普金斯大学学医，1956年获医学博士。
1956—1962年在圣路易斯实习后，在圣地亚哥和亨利福特医院工作，自学遗传学。
其中1957—1959年在美国海军服役。
1962—1967年在美国密歇根大学执教人类遗传学。
1967年被约翰·霍普金斯大学聘请，前后工作30年。
1973年任该大学微生物教授，1975—1976年在苏黎世大学执教微生物学，198 1年在约翰·霍普金斯大学为分子生物学和遗传学教授。
1994年5月，与他人合作研究基因组，1998年7月参加了测序果蝇和人类基因组中，2002年11月加入到克雷格文特尔研究所，目。