沉降菌国标
沉降菌检测操作规程
●1、目的规范洁净区和洁净室沉降菌测试条件和测试方法。
●2、适用范围适用于公司洁净区、洁净室或局部空气净化区域（如：洁净工作台）的沉降菌的测试和环境验证。
●3、引用文件⏹化妆品卫生规范-2007⏹GB/T 16294-2010 医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法●4、定义⏹ 4.1 沉降菌：用本测试规定的方法收集空气中的活微生物粒子，通过专门的培养基，在适宜的生长条件下繁殖的可见菌落数。
⏹ 4.2 沉降菌菌落数：规定时间内每个平板培养皿收集到空气中沉降菌的数目，以（个/皿）表示●5、仪器和设备⏹ 5.1 灭菌培养皿90mm *15mm⏹ 5.2 培养基。
⏹ 5.3 恒温培养箱。
⏹ 5.4 高压灭菌器。
⏹ 5.5 放大镜●6、培养基和试剂⏹ 6.1 生理盐水：成份﹕氯化钠 8.5g蒸馏水加至 1000ml制法﹕溶解后﹐分装到加玻璃珠的三角瓶内﹐每瓶90ml﹐121℃（15 1b）2 0 mi n，高压灭菌。
⏹ 6.2 卵磷脂、吐温80—营养琼脂培养基6.2.1 成分：蛋白胨20g牛肉膏3g氯化钠5g琼脂15g卵磷脂1g吐温80 7g蒸馏水1000mL6.2.2制法：先将卵磷脂加到少量蒸馏水中，加热溶解，加入吐温80，将其他成分（除琼脂外）加到其余的蒸馏水中，溶解。
加入已溶解的卵磷脂、• 吐温80，混匀，调pH 值为7.1～7.4，加入琼脂，103.43kPa（121℃15 lb）20min 高压灭菌，储存于冷暗处备用。
●7、操作步骤⏹7.1 取样：7.1.1 取样点的设置：A) 最少取样点数：灌装间、制造间3个，其他洁净区2 个；B) 取样点的位置：取样点应均匀分布在待测试区域内，一般离地高度为0.8m左右，关键设备处可增加取样点；C）每个取样点一般取样一次，每次一般为2个取样皿；D) 布置采样点时，应避免回风口；7.1.2 取样时间：可采用动态取样和静态取样：A) 动态取样：正常生产，且空气净化系统正常运转30分钟后开始取样；B）静态取样：员工己撤离生产区域，且空气净化系统正常运转至少20分钟后；静态取样时人员不得多于2人；7.1.3 取样A）将制备好的培养皿逐个放置到采样点，然后从里到外逐个打开培养皿盖，使培养皿暴露在空气中；B）静态测试时，培养皿的暴露时间为30分钟以上；动态测试时，培养皿的暴露时间不得大于4个小时⏹7.2 置于37±1℃恒温培养箱内培养至少48小时，记录每个平皿的菌落数；●8、菌落计数方法：⏹8.1先用肉眼观察，点数菌落数，然后再用放大5 倍～10 倍的放大镜检查，以防遗漏；⏹每个测点的沉降菌总数为该测点所有培养皿菌落数的平均数；●9、结果评定：⏹9.1 每个测点的菌落数必需低于该洁净区的标准时判定符合要求；⏹9.2 静态测试时，如某测点的的菌落平均数超过标准，应再重新取样两次，两次都低于标准时才能判定符合；。
关于食品生产企业环境监测沉降菌(空气落菌)和涂抹试验(接触面)的浅见
关于食品生产企业环境监测沉降菌（空气落菌）和涂抹试验（接触面）的浅见各位看官，GB 14881 明确了作为食品生产企业应定期监测生产环境的要求，但是食品相关的检测标准相当匮乏。
在此整理了部分可参考标准及一些个人想法和众伙伴交流，不当疏失之处敬请指正。
首先列举一下参考标准：1、GB 15979-2002 一次性使用卫生用品卫生标准附录E （沉降菌和涂抹）2、GB 15982-2012 医院消毒卫生标准附录A A1-4 （沉降菌和涂抹）3、GB/T 18204.3-2013 公共场所卫生检验方法第3 部分：空气微生物（沉降菌）4、GB/T 16294-2010 医药工业洁净室(区)沉降菌的测试方法（沉降菌）5、SN/T 4426-2016 出口食品加工表面卫生取样方法（涂抹）6、GB 14934-2016 食品安全国家标准消毒餐（饮）具（涂抹）7、GB 31641-2016 食品安全国家标准航空食品卫生规范（周期和限值）其次，沉降菌分为细菌和真菌，细菌可以选择PCA、TSA 等非选择性计数培养基；真菌可以选择孟加拉红、马铃薯葡萄糖、SDA 等适合真菌类计数培养基；且培养条件和日常其他菌落总数、霉菌微生物实验条件保持一致为妥，可以不必要再进行其他温度的校准工作，或者增加培养设备；第四，涂抹有接触碟法和棉拭子法，接触碟法适合面积大较平整规则的接触面取样，棉拭子法适合设备角落、人员手部等不平整不规则接触面的取样；然后是检测结果的表达，无论是取样25cm²，整只手，均可以自己定义最终表示单位，例：CFU/cm²、CFU/25cm²、CFU/手，这是菌落总数的单位，下面说说大肠菌群。
大肠菌群从GB 4789.3 来看有平板计数法也有MPN 法（多管发酵法、最大可能数法）据我了解很多企业采样后沿袭老一套使用MPN 进行后续检验，也有人使用平板法，觉得平板法不用那么多试管比MPN 简便。
d级洁净区沉降菌标准
d级洁净区沉降菌标准D级洁净区沉降菌标准是指对洁净区域内空气中的沉降菌进行监测和控制的一套标准。
洁净区是指在一定的环境条件下，需要具备一定洁净程度的区域，通常应用于生产制造、实验室、医疗卫生等领域。
沉降菌是指悬浮在空气中并沉降在落尘器上的微生物。
对于洁净区来说，沉降菌的数量和种类是反映空气质量的重要指标。
因此，制定和执行D级洁净区沉降菌标准对于维护洁净区的空气质量至关重要。
D级洁净区沉降菌标准主要包括以下几个方面：1.沉降菌样品采集：根据标准的要求，洁净区内的沉降菌样品需要定期采集。
采样点的选择应考虑空气流动情况，例如靠近送风口和排风口的地方。
采样过程中需要注意避免污染，采样器材要经过严格的清洁和消毒处理。
2.沉降菌菌落总数：沉降菌样品采集后，将其培养在特定的培养基上，在一定的时间和温度下培养。
培养完毕后，对菌落进行统计和计算，得到菌落总数。
根据标准，菌落总数不能超过某个特定的限定值。
如果超过限定值，需要采取相应的措施，如加强清洁消毒、调整通风设备等。
3.沉降菌的种类和特定菌群监测：除了菌落总数，标准还要求监测沉降菌的种类和特定菌群。
常见的方法是通过培养和鉴定技术，将菌落进行分类和鉴定。
通过监测种类和特定菌群的变化，可以及时发现和处理空气质量问题。
4.沉降菌标准值的设定：标准中还包括对沉降菌的标准限定值的设定。
这些标准限定值一般由相关的技术委员会和标准化组织在充分的专业技术和经验的基础上确定。
标准限定值的设定应综合考虑洁净区的应用领域、环境条件和安全性要求。
5.沉降菌监测报告和记录：洁净区内沉降菌监测的结果应及时记录并报告。
监测报告应包括采样时间、采样点、菌落总数、沉降菌种类和特定菌群的情况等。
监测报告的记录和保存有助于对洁净区空气质量进行长期监测和趋势分析。
总之，D级洁净区沉降菌标准是对洁净区空气质量监测和控制的重要标准，对于保障洁净区内的空气质量和生产环境的安全性至关重要。
标准的制定和执行需要充分考虑洁净区的实际情况和要求，以确保标准的实施能够达到预期的效果。
沉降菌检验标准操作规程
01.0目的01.1阐述洁净室（区）空气中沉降菌检测操作规程，保证药品的质量，防止生产环境对产品的污染，保证实验室的环境达到检测产品的要求。
02.0适用范围02.1适用于本公司的洁净室（区）的沉降菌监测和洁净度等级的验证。
03.0人员职责测试人员对洁净室（区）沉降菌的测试。
04.0内容04.1术语和定义下列术语和定义适用于本规程。
04.1.1菌落：细菌培养后，由一个或几个细菌繁殖而形成的细菌集落，简称CFU，通常用个数来表示。
04.1.2沉降菌：用GB/T16292-2010 提及的方法收集空气中的活性微生物粒子，通过专门的培养基在适宜的生长条件下系繁殖到可见到的菌落数。
04.1.3沉降菌菌落数：规定时间内每个平板培养皿收集到空气中沉降菌的数目，以cfu/皿表示。
04.2测试原理：本测试方法利用沉降法，即通过自然沉降原理收集空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落数，以平板培养中的菌落数来评定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净区的洁净度。
04.3监测周期：A级洁每次室验做监控，B级每周一次，C级每季度一次，D级每半年一次监控。
04.4测试方法：04.4.1使用设备与材料高压灭菌锅：使用时应严格按照操作规程进行。
恒温恒湿培养箱：必须定期对培养箱进行校验。
培养皿：一般采用φ90mm×15mm培养皿。
培养基：胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA）；已灭菌配制好的培养基平皿放入30-35℃恒温培养箱中培养72小时，若培养基平皿上确无菌落生生即可供采样用，制备好的培养基平皿应放在2-8℃的环境中存放。
清洁剂：75%酒精04.4.2测试时间：（1）对单向流，如A级净化房间内及超净工作台，测试应在净化空调系统正常运行不少于10分钟后开始。
（2）对非单向流，如B级、C级、D级以上的净化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于30分钟后开始。
（3）培养皿的采样时间：静态测试时，培养皿暴露时间为30min以上；动态测试时，培养皿暴露时间为不大于4小时。
沉降菌标准静态标准
沉降菌标准静态标准沉降菌标准是指在一定时间内，细菌在液体培养基中的沉降速度达到一定的标准。
沉降菌标准静态标准是指在静态条件下，细菌在液体培养基中的沉降速度符合一定的标准。
沉降菌标准的制定对于细菌的培养、分离和鉴定具有重要意义，同时也对于微生物学研究和实验室工作具有指导作用。
一、沉降菌标准的意义。
沉降菌标准的制定可以帮助实验室确定细菌在液体培养基中的沉降速度，进而影响到细菌的培养、分离和鉴定。
通过沉降菌标准，可以更准确地控制细菌在培养基中的数量和分布，有利于细菌的纯化和提取。
此外，沉降菌标准还可以帮助实验室评估细菌的生长状态和活力，为微生物学研究提供重要参考。
二、沉降菌标准的制定。
制定沉降菌标准需要考虑多个因素，包括细菌种类、培养基成分、培养条件等。
首先，需要选择适当的细菌种类作为研究对象，不同种类的细菌对于沉降速度的影响可能有所不同。
其次，需要确定合适的培养基成分，包括培养基的pH值、温度、营养成分等，这些因素都会影响细菌的生长和沉降速度。
最后，需要确定合适的培养条件，包括培养时间、培养方式等，这些条件对于细菌的沉降速度也有重要影响。
三、沉降菌标准的应用。
沉降菌标准在微生物学研究和实验室工作中有着广泛的应用。
首先，沉降菌标准可以帮助实验室评估细菌的生长状态和活力，及时发现细菌的异常情况。
其次，沉降菌标准可以帮助实验室控制细菌在培养基中的数量和分布，有利于细菌的纯化和提取。
此外，沉降菌标准还可以帮助实验室进行细菌的分离和鉴定，提高实验结果的准确性和可靠性。
四、沉降菌标准的检测方法。
目前，常用的沉降菌标准检测方法包括目视法、光密度法和电子显微镜法等。
其中，目视法是最为简便和常用的方法，通过观察细菌在培养基中的沉降情况来判断是否符合标准。
光密度法则是利用光密度计测量细菌在培养基中的沉降速度，具有较高的准确性和精度。
电子显微镜法则是通过电子显微镜观察细菌在培养基中的沉降情况，可以提供更为精细的信息。
五、结语。
车间洁净区沉降菌测试办法
4.1检验依据：GB/T16294-2010 医药工业洁净室(区)沉降菌的测试方法YY0033-2000 无菌医疗器具生产管理规范4.2方法概述：采用沉降法，即通过自然沉降原理收集空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境中的活微生物数，并以此来评定洁净室（区）的洁净度。
4.3仪器和设备：高压蒸汽灭菌锅恒温培养箱培养皿，¢90mm×15mm硅硼酸玻璃培养皿培养基，大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA）或沙氏培养基（SDA）4.4准备操作：将¢90mm培养皿置于121℃湿热灭菌20min或180℃干热灭菌2h。
按比例配置营养琼脂培养基，将其装入三角烧瓶，置于121℃湿热灭菌30min。
将加热溶化并冷却至45℃，在无菌操作要求下将培养基倒入培养皿，一般15ml/皿。
4.5采样方法：将已制好的培养皿按相关要求放置，打开培养皿盖（口向下），使培养基表面暴露0.5h，再将培养皿盖盖上后倒置。
4.6培养：全部采样结束后将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。
大豆酪蛋白琼脂培养基，培养温度34℃，培养时间：2d；沙氏培养基，培养温度：24℃，培养时间：5d。
每批培养基选定3只培养皿做对照培养。
4.6菌落计数：用肉眼直接计数，然后用5~10倍放大镜检查，有否遗漏。
若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上的菌落计数。
计数时一般透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落。
4.7结果评定：用平均菌落数判断洁净室（区）空气中的微生物。
4.8注意事项：4.8.1测试用具要作灭菌处理，以确保测试的可靠性、正确性。
4.8.2对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。
4.8.3采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现破损或污染的应剔除。
5.0测试规则：5.1测试状态：5.1.1沉降菌测试前，被测试洁净室（区）的温湿度须达到规定的要求，静压差、换气次数、空气流速必须控制在技术指标规定值内。
沉降菌检测
测试方法
5、注意事项: 测试状态有静态和动态两种,在空调系统验流时、长期
停产恢复生产前、设施设备大修复产前进行静态测试, 在日常监测时进行动态监测。 测试人员:测试人员必须穿戴符合环境级别的工作服。 静态测试时,室内测试人员不得多于2个人。
测试方法
6、结果计算: 用计数方法得出各个培养皿的菌落数。 平均菌落数的汁算见下式:
测试方法
3、采样点数目及其布置: 在满足最少测点数的同时,不宜满足最少培养皿数,见表2
测试方法
3、采样点数目及其布置: （2）采样点的布置: 除受洁净区的设备限制外,取样点应在洁净区均匀布置。 在日常监控时,那些与产品相邻近的区域,以及可能与产
品直接接触的空气及设备附近应考虑增加取样点和取 样次数(与产品非接触区相比,这些Байду номын сангаас域应视为关键区): 人员活动频繁或人员较集中的区域也应视为关键区,需 加强监控。
本测试方法利用沉降法,即通过自然沉降原理收集在 空气中的生物粒子于培养基平皿,经若干时间,在适宜的 条件下让其繁殖到可见的菌落数,以平板培养皿中的菌 落数来评定洁净环境内的活微生物数,并以此来评定洁 净区的洁净度。
测试方法
1、使用的仪器设备和培养基: （1）高压消毒锅:使用时应严格按照操作规程进行。 （2）恒温培养箱:必须定期对培养箱的温度计进行检定。 （3）培养皿:一般采用φ90mm×15mm硼硅酸玻璃培养
皿。使用前将培养皿置于121℃湿热灭菌20min。
测试方法
1、使用的仪器设备和培养基: （4）培养基:胰酪大豆胨琼脂培养基。 将培养基加热熔化,冷却至约45℃在无菌操作条件下将培
养基注入培养皿,每皿约15ml。待琼脂培养基凝固后,将 培养基平皿放入32℃恒温培养箱中培养72 小时若培养 基平皿上确无菌落生长即可供采样用,制备好的培养基 平皿应在2-8℃的坏境中存放。
无尘室浮游菌、沉降菌的检测规范规定
C.16.1根据生产工艺要求必须控制无尘室（区）内的微生物污染时，应进行无尘室（区）内空气中微生物污染的检测。
微生物污染的检测可在三种占用状态中的任一种状态进行。
宜采用浮游菌的测试方法和沉降菌的测试方法。
C.16.2浮游菌的测试方法是通过采样器采集在空气中的活微生物粒子，通过专门的培养基，在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌落数。
浮游菌的测试方法应符合现行国家标准《医药工业无尘室（区）浮游菌的测试方法》GB/T16293的要求。
C.16.3沉降菌的测试方法是通过培养皿收集到的活微生物粒子，通过专用的培养基，在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌落数。
沉降菌的测试方法应符合现行国家标准《医药工业无尘室（区）沉降菌的测试方法》GB/T16294的要求。
C.16.4根据生产工艺要求必须控制无尘室（区）内的微生物活粒子时，还可进行表面微生物污染测量，其测量方法参照ISO14698-1中的附录C。
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沉降菌国标
摘要：
I.沉降菌国标简介
A.沉降菌的定义
B.沉降菌国标的作用和意义
II.沉降菌国标的主要内容
A.检测方法
1.平板法
2.膜过滤法
B.菌落计数
1.活菌计数
2.死菌计数
C.标准菌液制备
D.实验环境要求
III.沉降菌国标在行业中的应用
A.制药行业
B.食品行业
C.化妆品行业
D.其他行业
IV.沉降菌国标的发展趋势
A.与国际标准的接轨
B.更新检测方法和技术
C.提高行业整体水平
正文：
沉降菌国标是对空气中沉降菌的检测和计数进行规范的标准，对于控制生产环境中的微生物污染、保证产品质量具有重要意义。
本文将简要介绍沉降菌国标的相关内容，并探讨其在各行业中的应用及发展趋势。
一、沉降菌国标简介
沉降菌是指在特定条件下，空气中悬浮的微生物粒子由于重力作用而沉降至培养基表面形成的菌落。
沉降菌国标规定了沉降菌的检测方法、菌落计数方法、标准菌液制备以及实验环境要求等内容，为我国各行业提供了统一的检测标准。
二、沉降菌国标的主要内容
（一）检测方法
沉降菌国标规定了两种检测方法：平板法和膜过滤法。
平板法是将收集到的沉降菌悬液均匀涂布在含有营养物质的培养基上，通过菌落形态观察和计数，判断空气中沉降菌的数量。
膜过滤法则是将收集到的沉降菌悬液通过膜过滤器过滤，将微生物粒子截留在膜上，然后将膜放在含有营养物质的培养基上培养，通过计数菌落数量来推算空气中沉降菌的数量。
（二）菌落计数
沉降菌国标规定了活菌计数和死菌计数两种菌落计数方法。
活菌计数是指对培养基上生长的活菌进行计数，而死菌计数则是对培养基上生长的死菌进行计数。
这两种计数方法可以相互印证，从而更准确地反映空气中沉降菌的数
量。
（三）标准菌液制备
沉降菌国标对标准菌液的制备方法进行了详细规定，包括菌株选择、培养基制备、菌液浓度确定等步骤，以确保制备出的标准菌液具有较高的稳定性和可靠性。
（四）实验环境要求
沉降菌国标对实验环境提出了明确的要求，包括实验空间的空气质量、温度、湿度以及实验操作过程中的无菌操作等，以保证实验结果的准确性。
三、沉降菌国标在行业中的应用
沉降菌国标在制药、食品、化妆品等行业具有广泛的应用。
在制药行业，沉降菌国标用于监测药品生产过程中的环境洁净度；在食品行业，可以用于检测食品生产过程中的卫生状况；在化妆品行业，可以评估化妆品生产车间的微生物污染程度。
此外，沉降菌国标还广泛应用于其他行业，如生物制品、医疗器械等。
四、沉降菌国标的发展趋势
（一）与国际标准的接轨
随着我国经济的发展和与国际交流的日益增多，沉降菌国标将不断修订和完善，与国际标准接轨，提高我国在国际标准制定中的话语权。
（二）更新检测方法和技术
随着科学技术的进步，沉降菌国标将不断引入新的检测方法和技术，提高检测灵敏度和准确性，满足行业发展的需求。
（三）提高行业整体水平
沉降菌国标将不断推动我国各行业提高生产环境洁净度，提升产品质量，从而提高行业整体水平。