病原菌毒力因子的分离和分析
牛肉样品中产志贺毒素大肠埃希氏菌和肠致病性大肠埃希氏菌的分离鉴定
牛肉样品中产志贺毒素大肠埃希氏菌和肠致病性大肠埃希氏菌的分离鉴定朱应飞，聂 翔，熊丽霞，吴学平，占忠旭，匡佩琳（江西省检验检测认证总院食品检验检测研究院，江西南昌 330000）摘 要：于2018年9月—2019年3月，每个月从超市和农贸市场中抽取20个样本，共抽取140个牛肉及制品样本，在qPCR初筛时stx阳性率为45.8%，eae的阳性率为52.2%。
每月的stx初筛阳性率分别为65%、60%、80%、5%、25%、45%和40%；eae初筛阳性率分别为70%、70%、65%、0%、40%、65%和55%。
检出携带stx基因的产类志贺毒素大肠埃希氏菌样本4份，样本阳性菌株检出率为2.9%；检出携带eae基因的肠致病性大肠埃希氏菌样本12份，样本阳性菌株检出率为8.6%。
关键词：产志贺毒素大肠埃希氏菌；肠致病性大肠埃希氏菌；分离；鉴定Isolation and Identification of Shiga Toxin Producing Escherichia coli and Enteropathogenic Escherichia coli in BeefSamplesZHU Yingfei, NIE Xiang, XIONG Lixia, WU Xueping, ZHAN Zhongxu, KUANG Peilin (Jiangxi General Institute of Testing and Certification Food Testing Institute, Nanchang 330000, China)Abstract: From September 2018 to March 2019, 20 samples were taken from supermarkets and farmers’ markets every month, with a total of 140 beef and product samples taken. the positive rate of stx was 45.8%, and the positive rate of eae was 52.2%. The monthly positive rates of stx initial screening positive rates of 65%, 60%, 80%, 5%, 25%, 45%, and 40%, respectively; The positive rates of eae initial screening were 70%, 70%, 65%, 0%, 40%, 65%, and 55%, respectively. Four Shiga toxin producing Escherichia coli samples carrying the stx gene were detected, with a positive strain detection rate of 2.9%; From September 2018 to March 2019, 12 samples of enteropathogenic Escherichia coli carrying the eae gene were detected, with a positive strain detection rate of 8.6%.Keywords: Shiga toxin producing Escherichia coli; enterogenic Escherichi coli; separation; appraisal产志贺菌毒素的大肠杆菌（Shiga Toxin Producing Escherichia coli，STEC）和肠致病性埃希氏菌（Enterogenic Escherichi coli，EPEC）是世界上最重要的食源性病原体之一。
溶血性曼氏杆菌及其毒力因子研究进展
溶血性曼氏杆菌及其毒力因子研究进展胡玉婷，杨发龙，刀筱芳(西南民族大学生命科学与技术学院，四川成都610041)中图分类号：S852.61+2文献标志码:A溶血性曼氏杆菌(Mannheimia haemolytica,MH)属于巴氏杆菌科，是一种革兰阴性球杆菌,其作为一种条件致病菌常存在于牛、羊等反刍动物上呼吸道的鼻腔和扁桃体隐窝等部位⑷。
当动物因长途运输、饲养条件及天气环境变化而受到应激，或因支原体和病毒等病原感染而导致免疫功能下降时，其会迅速增殖并下行扩散至肺部，引起严重的肺炎。
该病原是引起牛的呼吸道疾病综合征(Bovine respiratory disease complex,BRDC)(运输热)最为重要的病原之一凶。
同时，溶血性曼氏杆菌也能感染山羊及绵羊等小反刍动物和美洲野牛、大角羊、大耳羊、麋鹿、驼鹿、鹿和叉角羚等反刍野生动物。
也有研究发现，其还能够感染某些非反刍动物，例如骡、兔、猪、鳄鱼、狗和猫等⑶。
目前,溶血性曼氏杆菌在世界范围内广泛流行，给养殖业造成了巨大的经济损失⑷。
由于溶血性曼氏杆菌对牛、羊养殖业带来的巨大威胁，因此，国内外学者对其致病机制，特别是对一些重要毒力因子的生物学特征以及在致病过程中发挥的作用进行了一系列研究，本文对近年来的相关研究进展进行了综述。
1分类地位及命名目前，溶血性曼氏杆菌被归为变形菌门(Pro-teobacteria)、十变形菌纲(Gammaproteob-acteria)、巴氏杆菌目(Pasteurellales)、巴氏杆菌科(Pasteurel-laceae)、曼氏杆菌属(Pasteurella)［5］。
溶血性曼氏杆菌自首次分离以来,其分类和命名经历了多次变化。
起初,Kitt同于1885年将其命名为多杀性双极杆菌(加次血m bipolare multocidum)o1932年，Ne・wsom等E根据其在血平板表现弱溶血性的特点将其更名为溶血性巴氏杆菌(Pasteurella haemolytica)o收稿日期:2020-08-06基金项目：中央高校基本科研业务费专项(2018NQN21)；西南民族大学研究生创新项目(CX2019SZ131)作者简介:胡玉婷(1995-)，女，硕士生,主要从事动物病原分子生物学和快速检测技术研究,E-mail：1104078723@ 通信作者:刀筱芳,E-mail:yang.falong@文章编号：0529-6005(2021)08-0059-051959年,Smiths根据不同菌株发酵阿拉伯糖和海藻糖的能力将其分为2个生物型，即A型和T型。
病原菌分离培养与鉴定
细 菌 专性厌氧菌
纯
培
养 兼性厌氧菌 物
鉴 定
的
鉴
需氧菌
定
形态和染色 菌落特征 生化试验 药物敏感试验 毒力试验 病原菌抗原 生物芯片检测
（四）生物芯片技术
将核酸片段、蛋白质或酶、抗原或抗体、细胞及组织 等生物样品有序地固定于硅片、尼龙膜等固相支持物上 在一定的条件下进行生化反应。 用化学荧光法、酶标法或同位素法显示反应结果， 通过特定的仪器读取与收集数据，并用软件进行数据 分析，从而判断样品中靶分子的种类和数量。
1929 – Penicillin discovered
1930s– Sulfa drugs discovered
1969 – US surgeon Gen, claims end infectious diseases
Today – Bacteria with multi-drug resistance
Fleming Domagk
一、抗菌药物的杀菌机制
• 抑制细菌细胞壁的合成：青霉素、溶菌酶等 • 影响细菌胞浆膜通透性：多粘菌素等抗生素 • 抑制细菌蛋白质的合成：红霉素、链霉素等 • 抑制细菌的核酸代谢：利福平等抗生素 • 抑制细菌的叶酸代谢：磺胺类等抗生素
Cell wall synthesis
collection and transportation of specimen
避免杂菌污染
标本的采集和送检六原则
不同期不同标本 用抗生素以前
采集病变明显部位
标本必须新鲜
运送注意保存
细菌感
（二）病原菌分离培养与鉴定：形态学检查
不染色检查法 压滴法 悬滴法 暗视野显微镜法
检查用仪器 普通光学显微镜 light microscope 暗视野显微镜 dark-field microscope 荧光显微镜 fluorescence microscope ……
大肠埃希菌毒力基因研究进展
大肠埃希菌毒力基因研究进展张金宝;李晓娜;王桂琴【摘要】大肠埃希菌是寄生于人或动物肠道内的一种肠杆菌科的革兰阴性菌，常引起幼畜严重腹泻和败血症、猪水肿病、人的出血性结肠炎-溶血性尿毒综合征、新生儿脑膜炎及肾炎等多种疾病，其毒力基因主要有escs、eaeA、Stx1、Stx2、Stx2e、sep、esp、astA、aggA、hlyE、ST （STa、STb）、LT 等。
论文主要介绍eaeA、Stx2e、ST（STa、STb）、astA 4个毒力基因的来源、结构、所致疾病及其与大肠埃希菌耐药性之间的相关性，旨在为动物疾病的传染源及疾病的流行病学调查和防控提供相关证据。
%Escherichia coli is a Gram-negative bacteria of Enterobacteriaceae in the intestine of human or animals .It often causes severe diarrhea and sepsis in young animals ,pig edema disease ,human hemor-rhagic colitis-hemolytic uremic syndrome ,neonatal meningitis and nephritis and other diseases .Its viru-lence genes mainly includeescs ,eaeA ,Stx1 ,Stx2 ,Stx2e ,Sep ,esp ,astA ,aggA ,hlyE ,ST (STa ,STb) ,LT ,etc .This article briefly described the source ,structure ,the illness caused of the eaeA ,Stx2e , ST (STa ,STb) and astA ,and the correlation between virulence genes and E .coli resistance .The aim is to provide relevant evidence for the infectious source of animal diseases and epidemiology investigations and control .【期刊名称】《动物医学进展》【年(卷),期】2014(000)008【总页数】5页(P70-73,74)【关键词】大肠埃希菌;毒力基因;耐药性【作者】张金宝;李晓娜;王桂琴【作者单位】宁夏大学农学院，宁夏银川750021;宁夏大学农学院，宁夏银川750021;宁夏大学农学院，宁夏银川750021【正文语种】中文【中图分类】S852.612大肠埃希菌是澳大利亚医学家Escherich在1885年借助显微镜首次发现的。
动物微生物第五章
• ２.稳定状态感染
• 有些病毒（流感病毒）在宿主细胞增值过程中， 以出芽方式释放病毒，细胞暂时不出现溶解和死 亡，称为稳定状态感染。 • 以后可引起宿主细胞发生细胞融合或细胞表面出 现新抗原等多种变化。
• ３.包涵体形成
• 某些病毒在细胞内增殖后，在细胞内形成的一种 光学显微镜可以看到的特殊“斑块”。
• 2.内毒素 是存在于革兰氏阴性菌细胞壁最外层的 结构成分(脂多糖)，只有菌细胞死亡、自溶或人 为地破坏菌细胞时，才释放出来。外毒素与内毒 素在毒性、化学组成、耐热性及抗原性等方面不 同。 • 内毒素对组织细胞的选择性不强，不同革兰氏阴 性细菌内毒素的毒性作用大致相同： • （1）发热反应 • （2）对白细胞的作用 • （3）弥漫性血管内凝血 • （4）内毒素血症与内毒素休克
生物，通过适当的侵入门户进入动物机体。病原 微生物是感染发生的首要因素，没有病原微生物，
感染不可能发生；病原微生物必须具有足够的毒
力和数量，才能抵抗机体的防御机制，向组织扩 散；病原微生物还必须经适当途径侵入易感动物 体内，到达特定部位，才有可能在体内生长繁殖 并引起感染。
2．易感动物
对病原微生物具有感受性的动物称为易感动物。 动物种类不同，对各种病原微生物有不同的易感 性。如草食动物对炭疽杆菌非常易感，但禽类在 正常情况下对炭疽杆菌则无感受性。马骡等单蹄 动物，对口蹄疫病毒不易感，而牛、猪等偶蹄动 物则易感性强。动物对病原微生物的易感性，是 属于动物的种属特异性，是动物长期进化的结果。 动物机体由于年龄、性别、营养状况、生理机能 及免疫状况等不同，易感性也有差异。
④磷脂酶 ⑤卵磷脂酶 ⑥激酶
⑦凝固酶 ⑧脱氧核糖核酸酶
4 干扰或逃避宿主的防御机制 病原菌黏附于细胞或组织表面后，必须克 服机体局部的防御机制，特别是要干扰或 逃避局部的吞噬作用及体液免疫作用，才 能建立感染。 具有抵抗吞噬及体液中杀菌物质作用的表 面结构---荚膜、微荚膜、葡萄球菌A蛋白 等。
细菌致病的分子基础及重要肠道病原菌的致病因子
III型分泌系统的基因，对致病菌侵袭宿主上皮细胞以及在巨噬细 胞内的存活具有重要意义。
二、细菌间基因的水平转移与致病性
• 微生物群体间的水平基因交换的四种方式： －转化(Transformation)：
一、致病相关的遗传物质
4、毒力岛(pathogenicity island，PAI)
细菌染色体上编码毒力相关基因簇的一个分子量较大的DNA片段（20~100kb左右）。 • 两侧具有重复序列（RS）和插入元件（I或附近，或者位于与质粒、噬菌体整合有关的位点； • G+C百分比、密码使用与宿主菌染色体具有明显差异； • 毒力岛具有不稳定性，并含有一些潜在的可移动成分，如IS序列、整合酶、转座酶，以
一、致病相关的遗传物质
3、噬菌体(Bacteriophage)
细菌中是广泛存在的。 几乎所有已发现的细菌，在“种”的水平上，都含有噬菌体。 • 噬菌体编码某些毒素的产生: 白喉毒素、肉毒毒素、志贺样毒素等。 霍乱弧菌中的CT毒素、出血性大肠杆菌O157中的VT毒素，均 由溶原性噬菌体编码，在某些因子的诱导下可以裂解释放。 • 其它许多噬菌体的真正功能还不甚清楚。
Kinds of PAIs 2 1 1 1 2 2 1 26 1 2 3 5 5 1 10 17 6 16 1 1 4 1 3 112
GenBank accessions
22 1 1 1 4 9 8 76 5 478 24 14 5 1 38 70 16 39 1 5 38 11 22 889
Virulenc e genes
一、致病相关的遗传物质
2、质粒（plasmid）
金色葡萄球菌毒力强弱的鉴定要点
金色葡萄球菌是一种常见的细菌，它可以引起一系列疾病，包括皮肤感染、食物中毒和肺炎等。
而其毒力的强弱对疾病的严重程度起着重要作用。
鉴定金色葡萄球菌的毒力强弱对于预防和治疗该细菌引起的疾病具有重要意义。
1. 荚膜形成能力金色葡萄球菌的荚膜形成能力是其毒力的重要指标之一。
荚膜是一种由多糖组成的外层结构，能够帮助细菌逃避宿主的免疫系统攻击，从而提高其对宿主的侵袭能力。
鉴定金色葡萄球菌的荚膜形成能力可以通过不同的实验方法，如黏附实验、酚红素实验等，来评估细菌荚膜的形成情况，从而判断其毒力的强弱。
2. 溶血酶和凝集素产生能力金色葡萄球菌产生的溶血酶和凝集素是其主要毒力因子之一。
溶血酶能够破坏宿主的红细胞和其他细胞，导致宿主组织的破坏和溶解。
凝集素则能够促使金色葡萄球菌与宿主细胞粘附并侵入，加剧感染的严重程度。
通过检测金色葡萄球菌产生溶血酶和凝集素的能力，可以评估其毒力的强弱程度。
3. 抗生素敏感性金色葡萄球菌对抗生素的敏感性也是评估其毒力的重要指标之一。
毒力强的金色葡萄球菌往往具有更强的耐药性，能够抵御常规抗生素的杀菌作用。
通过对金色葡萄球菌的抗生素敏感性进行测试，可以为临床治疗提供重要参考依据，同时也间接反映了其毒力的强弱程度。
4. 基因检测最近，分子生物学技术的发展为金色葡萄球菌毒力的鉴定提供了新的途径。
通过检测金色葡萄球菌的毒力相关基因，可以直接评估其毒力的强弱程度。
金色葡萄球菌的pvl基因编码产生毒力相关蛋白，其存在与否与金色葡萄球菌的毒力强弱有密切关系。
通过基因检测，可以准确快速地确定金色葡萄球菌的毒力强弱，为临床治疗提供重要的参考依据。
金色葡萄球菌毒力的强弱鉴定对于预防和治疗金色葡萄球菌引起的疾病具有重要意义。
通过对其荚膜形成能力、溶血酶和凝集素产生能力、抗生素敏感性以及基因检测等多方面指标进行综合评估，可以准确地判断金色葡萄球菌的毒力强弱，为临床治疗提供重要的参考依据。
随着科学技术的不断进步，相信金色葡萄球菌毒力鉴定的方法会越来越准确和可靠，为临床治疗提供更大的帮助。
细菌毒力因子对人类健康的影响
细菌毒力因子对人类健康的影响细菌是一种微生物，在自然界中普遍存在。
其中大多数细菌是有益的，能够帮助维持生态平衡；然而，也有一些细菌是有害的，它们会产生毒力因子，对人类健康造成危害。
细菌毒力因子是指细菌产生的一类化合物，它们能够对人类细胞和组织产生不同程度的损害。
这些毒力因子常见的有内毒素、外毒素、脂多糖、蛋白酶等等。
这些因子在细菌进入人体后，会破坏人体的免疫系统和正常细胞结构，并引发一系列的疾病和感染，如流感、疟疾、肺炎等。
内毒素是细菌中最常见的毒力因子之一，它主要存在于革兰氏阴性菌的细胞壁和外膜中。
当这些菌进入人体后，它们的细胞壁会被破坏并释放出内毒素，引起一系列症状，如发热、休克、血管扩张等。
内毒素会影响人体的免疫系统，抑制巨噬细胞和T细胞的功能，导致人体容易受到其他病原体的感染。
外毒素是另一种细菌毒力因子，它是一种蛋白质分子，可在细胞外溶解，从而破坏人体组织，影响人体的免疫系统和血管系统。
外毒素在人类健康方面的影响是非常大的，它可以引起多种疾病，如丹毒、流行性感冒等等。
此外，外毒素还可以导致严重的组织坏死、肝功能损伤，并致癌。
细菌脂多糖是一种在细菌细胞壁中非常常见的糖脂复合物，它是一种专门刺激免疫系统的成分。
当感染细菌进入人体后，细菌脂多糖能够刺激单核细胞和巨噬细胞的免疫反应，使人体产生一定的抵抗力。
然而，细菌脂多糖也会引起剧烈的免疫反应，导致多种疾病的产生，如内毒素休克、急性肾衰竭等。
蛋白酶是细菌中另一种常见的毒力因子，它可以破坏人体的组织、细胞膜和骨骼。
当感染细菌进入人体后，蛋白酶会分泌出来，引起一系列的疾病，如创伤性切口感染、化脓性脑膜炎等等。
蛋白酶会破坏人体的正常组织结构，使细胞无法正常运作，并产生细胞质毒性，从而影响人类健康。
总的来说，细菌毒力因子对人类健康的影响非常大，它们可以引起多种严重疾病。
人们应该加强对细菌的认识，提高卫生意识，避免接触细菌和感染。
同时，经常洗手、饮食卫生、保持适当运动、合理膳食，都是保持身体健康的必要措施。
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病原菌毒力因子的分离和分析
随着人类对生物学的深入探索，对于病原菌的认识也越来越深入了解，病原菌对于人类健康危害不可忽视。
而病原菌的毒力因子则是其危害的关键所在。
因此，对病原菌毒力因子的研究也显得尤为重要。
一、病原菌毒力因子的定义和作用
什么是病原菌毒力因子？病原菌毒力因子，简称毒因子，是一种菌体分泌或释放出来的有害物质，可以对宿主人体造成损伤和危害，是细菌致病能力的关键因素之一。
病原菌毒力因子的作用主要包括以下几个方面：
1. 促进病原菌侵入宿主细胞：毒因子可以改变宿主细胞的生物活性，使宿主细胞对病原菌产生亲和力和黏附力，为病原菌的侵入提供条件。
2. 破坏宿主细胞膜结构：毒因子可以破坏宿主细胞的生物膜结构，使细胞内部的重要物质外漏，导致细胞死亡。
3. 减弱宿主免疫系统：毒因子能够抑制宿主免疫系统的正常功能，使宿主对细菌的抵抗力降低，从而加重细菌感染的严重程度。
二、常见病原菌的毒力因子
常见的病原菌有很多种，每种病原菌都有其特定的毒力因子。
下面介绍一下常见病原菌的毒力因子：
1. 猪链球菌的毒力因子包括M蛋白、Streptococcal pyrogenic exotoxin和Streptolysin O等，可以引起急性喉炎、败血症等疾病。
2. 病毒性肝炎病毒的毒力因子主要是病毒的表面蛋白，能够诱导宿主的免疫系统产生病毒抗体，导致肝脏炎症。
3. 大肠杆菌的毒力因子包括肠毒素和贴附因子等，可以引起腹泻等疾病。
4. 沙门氏菌的毒力因子主要包括肠毒素和菌体纤毛等，可以引起食物中毒和肠道感染。
以上只是常见病原菌的一部分毒力因子，实际上每种病原菌都有其独特的毒力因子，都需要在实验室中进行分离和分析。
三、那么，病原菌毒力因子到底是如何被分离和分析的呢？其实，这个过程主要包括以下几个步骤：
1. 病原菌种植。
首先需要在实验室中培养病原菌，有些病原菌需要在特定的培养基上生长。
2. 准备细胞滤液。
将培养好的病原菌离心去细胞后，将上清液称为细胞滤液。
3. 确定毒力因子类型。
对细胞滤液进行酶解、过滤、分离等处理，可以帮助确定毒力因子的类型。
4. 确定毒力因子的分子质量。
利用凝胶电泳等方法，可以帮助确定毒力因子的分子质量和分子结构。
5. 确定毒力因子的活性。
最后一步是确定毒力因子的活性，例如通过质谱分析等方法，确定毒力因子的活性浓度和识别毒力因子的受体等信息。
以上就是病原菌毒力因子的分离和分析的大致步骤，这些步骤需要用到分子生物学、微生物学等多种学科的知识和技能。
研究病原菌毒力因子的分离和分析，可以为疾病治疗和病原菌感染的预防提供重要的理论和实践基础。
综上所述，病原菌毒力因子的研究对于维护人类健康至关重要，需要我们综合运用各种科学技术和知识，加强病原菌毒力因子的分离、鉴定以及评价和研究，从而进一步完善对病原菌的认识和理解。
同时，在实践中还需要注重开展合理的防控措施和教育宣传工作，以预防和控制病原菌危害，保障人民群众的健康和安全。