基因工程基本操作定
《基因工程的基本操作程序》 知识清单
《基因工程的基本操作程序》知识清单基因工程，这个听起来高大上的词汇，其实与我们的生活息息相关。
从转基因食品到基因治疗，基因工程正在逐渐改变着我们的世界。
那么，基因工程到底是怎么实现的呢？这就不得不提到它的基本操作程序。
一、目的基因的获取要进行基因工程，首先得有我们想要的那个基因，也就是目的基因。
获取目的基因的方法主要有以下几种：1、从基因文库中获取基因文库就像是一个基因的大仓库，里面存放着各种各样的基因。
我们可以根据目的基因的有关信息，比如它的核苷酸序列、功能等，在基因文库中进行筛选和查找。
2、利用 PCR 技术扩增目的基因如果我们已经知道了目的基因的核苷酸序列，就可以通过 PCR（聚合酶链式反应）技术来大量扩增它。
PCR 就像是一个复制机器，能够让目的基因在短时间内迅速增加。
3、人工合成法如果目的基因的核苷酸序列比较短，而且又已知其序列，我们还可以通过化学方法直接人工合成。
二、基因表达载体的构建有了目的基因，接下来就要把它装到一个“车子”里，这个“车子”就是基因表达载体。
基因表达载体的构建是基因工程的核心步骤。
一个好的基因表达载体至少要包含以下几个部分：1、启动子启动子就像是基因表达的“开关”，它能够启动基因的转录。
2、终止子终止子则是基因表达的“刹车”，告诉RNA 聚合酶在哪里停止转录。
3、目的基因这是我们最想要的“乘客”。
4、标记基因标记基因的作用是方便我们筛选和鉴定含有目的基因的细胞。
构建基因表达载体时，需要用同一种限制酶分别切割目的基因和载体，然后再用DNA 连接酶把它们连接起来，形成一个重组DNA 分子。
三、将目的基因导入受体细胞把构建好的基因表达载体导入到受体细胞中，这是基因工程的关键一步。
不同的受体细胞，导入的方法也不一样。
1、导入植物细胞常用的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法。
农杆菌转化法是利用农杆菌能够感染植物细胞的特点，将目的基因整合到植物细胞的染色体 DNA 上。
人教版高中生物选修3专题1第2节基因工程的基本操作程序(共42张PPT)
目前被广泛提取使用的目的基因有：苏云金杆菌 抗虫基因、植物抗病基因（抗病毒、抗细菌)、人胰 岛素基因等。
（一）获取目的基因的常用方法有哪些?
初始目的基因的来源 1. 从生物中直接获取 2. 人工合成
注意：要保持基因的完整性
目的基因的核苷酸序列未知）含有某种生物不同基因的许多DNA片断， 导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有 这种生物的不同基因，称为基因。基因基因组
部分基因 （如:cDNA）•9、要学生做的事，教职员躬亲共做；要学生学的知识，教职员躬亲共学；要学生守的规则，教职员躬亲共守。2021/8/122021/8/12Thursday, August 12, 2021 •10、阅读一切好书如同和过去最杰出的人谈话。2021/8/122021/8/122021/8/128/12/2021 9:54:53 PM •11、只有让学生不把全部时间都用在学习上，而留下许多自由支配的时间，他才能顺利地学习……（这）是教育过程的逻辑。2021/8/122021/8/122021/8/12Aug-2112-Aug-21 •12、要记住，你不仅是教课的教师，也是学生的教育者，生活的导师和道德的引路人。2021/8/122021/8/122021/8/12Thursday, August 12, 2021
PCR技术扩增与DNA复制的比较
碱基互补配对 四种脱氧核苷酸
模板、能量、酶
DNA在高温下 变性解旋
体外复制
解旋酶催化 细胞核内
热稳定的DNA聚合酶 细胞内的DNA聚合酶
大量的DNA片段 形成整个DNA分子
3.人工合成
——根据已知的氨基酸序列合成DNA 蛋白质的氨基酸序列
基因工程的基本步骤
基因工程的基本步骤基因工程是指利用生物学技术对生物体的基因组进行人为操作，使其具备特定的性状或功能。
基本上，基因工程的步骤可以分为六个主要阶段：1.确定目标基因：在基因工程开始之前，需要先确定需要操作的目标基因。
这可以通过研究和了解生物的性状或功能来完成。
目标基因的选择通常是基于改善生物的其中一种属性，提高产量或抗病能力等。
2.基因克隆：基因克隆是基因工程的基本步骤之一，用于将目标基因从一个生物体中复制并放置到另一个生物体中。
这一步骤通常分为几个关键步骤：DNA提取、酶切、DNA连接和转化。
-DNA提取：从源生物体提取DNA，常用的方法是通过细胞裂解将DNA释放出来。
-酶切：用限制性内切酶切割DNA，生成特定的DNA片段。
-DNA连接：将目标基因与载体DNA连接，通常是通过DNA连接酶的作用。
-转化：将连接好的DNA导入宿主生物体中。
常用的转化方法包括化学法、电穿孔法和冲击法。
3.重组DNA的构建：一旦目标基因被克隆到载体中，可以通过多种方法进行DNA的重组构建，以进一步优化基因工程的效果。
这包括基因片段的串接、引入启动子或选择标记等。
4.基因表达：一旦重组DNA被构建完成，下一步就是将其表达出来。
这通常涉及将重组DNA导入宿主细胞中，并使用适当的启动子、增材剂和培养条件来促进基因的表达。
通常使用细菌、酵母、植物细胞或动物细胞等作为宿主。
5.选择性筛选：在基因表达后，筛选和选择性培养可以帮助确定哪些宿主细胞成功地表达了目标基因，并且可以通过对宿主细胞进行筛选和选择来鉴定这些细胞。
6. 验证和分析：一旦基因工程完成，需要将其验证和分析，以确保达到预期的结果。
这可以通过PCR分析、Southern印迹等方法来检测目标基因的存在和表达。
需要注意的是，这只是基因工程的基本步骤，实际操作可能有所不同。
此外，随着技术的不断发展，基因工程领域正在不断创新和进步，可能会有新的方法和技术被应用，以提高基因工程的效率和精度。
基因工程操作步骤
4.目的基因的检测与鉴定 在受体细胞中稳定遗传和正 确表达。
一、目的基因的获取
1 目的基因主要是编码蛋白质的基因： 如：与生物抗性相关的基因、与优良品质相 关的基因、与生物药物和保健品相关的基因、 与毒物降解相关的基因、与工业用酶相关的 基因、具调控作用的因子等。
合成
热稳定的DNA聚合酶
特点
半保留复制、 边解旋变复制
半保留复制、 全解旋再复制
结果
形成整个DNA分子
大量的DNA片段
随堂闯关 PCR技术扩增过程
a、DNA变性（90℃-95℃）: 双链DNA模板 在热作用下， 氢断键裂，形成____单__链_
b、复性（55℃-60℃）: 系统温度D降N低A ，引物 与DNA模板结合，形成局部__双__链____。
③例: 转基因抗虫棉
2.将目的基因导入动物细胞
①方法: 显微注射法
①程序
目的基因表达载体提纯
显微注射
受精卵
取卵（受精卵） 新性状动物
3.将目的基因导入微生物细胞
①微生物作受体细胞原因:
繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对少
②常用菌: 大肠杆菌
③常用法: Ca2+处理获得感受态细胞
④过程:
Ca2+处理 大肠杆菌
1.2 基因工程的基本操作程序
知识回顾: 基因工程基本操作的四个步骤
有了目的基因, 我们才能赋予
1.目的基因的获取 一种生物以另一种生物的遗 传特性。
使目的基因在受体细胞中稳
2.基因表达载体的构建 定存在, 并可进行遗传、表达 和发挥作用
载体进入受体细胞稳定表达,
3.目的基因导入受体细胞 才能实现一种生物的基因在 另一种生物中的转化。
基因工程操作步骤
基因工程操作步骤1.提取目标基因2.质粒构建质粒是一种小型的DNA分子，可以被细菌细胞容纳和复制。
在基因工程中，质粒通常用作目标基因的携带体。
构建质粒的第一步是选择合适的质粒载体（如pUC19或pBR322），然后将目标基因序列与其连接。
连接的方法通常是通过PCR扩增目标基因，然后使用酶切和DNA连接酶将其插入到质粒中。
3.变性、酶切和连接在将目标基因插入到质粒中之前，通常需要对质粒和目标基因进行变性。
变性是指将核酸分子的双链断裂为单链，通常通过加热和短暂降温的方式实现。
然后，使用酶切酶对质粒和目标基因进行酶切。
酶切酶可以识别特定的DNA序列，并在其周围剪切。
通过选择合适的酶切酶，可以在目标基因和质粒中生成互补的黏性末端。
接下来，使用DNA连接酶将目标基因和质粒连接在一起。
4.转化、筛选和鉴定接下来的步骤是将构建好的质粒导入宿主细胞。
质粒可以通过热冲击、电穿孔或化学方法等引导宿主细胞进行转化。
转化成功后，利用培养基中添加特定抗生素或选择性培养基来筛选出携带目标基因的细胞。
通过筛选，可以获得大量携带目标基因的细胞。
然后，通过PCR、酶切和DNA测序等方法对携带目标基因的细胞进行鉴定，确保其目标基因的正确性和完整性。
5.表达和纯化一旦确定细胞中携带目标基因的准确性和完整性，可以开始目标基因的表达和纯化。
这通常包括选择合适的表达宿主，如E. coli、酵母或哺乳动物细胞，以及合适的表达载体。
在表达载体中，目标基因和其相应的启动子、终止子和调控元件被组装在一起，使得基因可以在宿主细胞中被转录和翻译。
然后，通过离心、柱层析、电泳等方法对表达产物进行纯化和分离。
6.功能分析和应用完成基因表达和纯化后，可以对目标基因进行功能分析和应用研究。
功能分析包括使用各种技术方法来研究目标基因的功能和调控机制，如转录、翻译、蛋白质互作和代谢途径等。
应用研究包括将目标基因进行遗传改良、农业改良、生物药物生产、疾病治疗等方面的应用。
基因工程的基本操作程序
基因工程的基本操作程序基因工程是一项综合性的技术，它涉及到从一个生物体中获得DNA序列的特定片段，然后通过各种技术方法将这些片段插入到另一个生物体中。
基因工程的基本操作程序包括以下步骤：1.DNA提取：首先需要从源生物体中提取目标DNA片段。
这通常涉及到细胞破碎、核酸提取和纯化等步骤。
现代基因工程技术还可以利用聚合酶链式反应（PCR）直接扩增特定的DNA片段。
2.DNA切割：接下来，需要将目标DNA片段切割成更小的片段。
这可以通过使用限制酶来实现，限制酶能够识别特定的DNA序列，并在这些序列上切割DNA。
切割后的DNA片段具有粘性末端，即其中一末端具有未配对的碱基。
3.DNA连接：将需要连接的DNA片段混合在一起，并通过DNA连接酶的作用将它们连接起来。
DNA连接酶可以识别并连接具有互补碱基的末端，从而形成连续的DNA分子。
这个过程也可以通过使用DNA连接酶以外的方法，如化学连接或缩合酶连接等。
4.DNA插入：将连接好的DNA片段插入到目标生物体中。
这可以通过多种技术手段来实现，例如：转化（将DNA通过物理或化学方法导入到细胞中）、转染（通过封装在载体中的DNA转导到细胞中）和病毒载体等。
5.基因表达：一旦DNA片段被成功插入到目标生物体中，就可以进行基因表达。
这通常涉及到通过细胞的生物学过程，如转录和翻译，在转录时生成RNA分子，并通过翻译将其转化成蛋白质。
6.分析和鉴定：最后，需要对基因工程产品进行验证和鉴定。
这可以通过多种技术方法来实现，如聚合酶链式反应（PCR）、DNA测序、基因组学和蛋白质分析等。
需要注意的是，基因工程的具体操作步骤可能因应用领域和技术要求而有所不同。
此外，基因工程涉及到复杂的技术和伦理问题，因此需要专业人士具备严格的实验操作和伦理意识。
人教版高中生物选择性必修第3册 精品讲义 3.2 基因工程的基本操作程序(教师版)
3.2 基因工程的基本操作程序 教学目标教学重点1.基因工程基本操作程序的四个步骤。
2.DNA 片段的扩增及电泳鉴定。
教学难点1. 利用PCR 获取和扩增目的基因。
2. DNA 片段的扩增及电泳鉴定。
知识点01 第一步：目的基因的筛选与获取1.目的基因：在基因工程的设计和操作中，用于改变受体细胞性状或获得预期表达产物等的基因。
也指能够编码特定蛋白质的基因，也可以是一些具有调控作用课程标准目标解读 基因工程是一种重组DNA 技术。
1. 阐明基因工程的基本操作程序主要包括目的基因的获取、基因表达载体的构建、目的基因导入受体细胞和目的基因及其表达产物的检测鉴定等步骤。
1. 阐明基因工程的原理和基本操作程序。
2. 针对人类生产或生活中的某一需求，选取适当的基因工程的技术和方法，尝试设计获得某一转基因产品的方案。
3. 尝试进行PCR 的基本操作并用电泳鉴定PCR 的产物。
知识精讲目标导航的因子。
2.筛选目的基因：从相关的已知结构和功能清晰的基因中筛选，是较为有效的方法之一3.获取目的基因：（1）人工合成（2）基因文库中获取目的基因（3）利用PCR获取和扩增①PCR：PCR全称为聚合酶链式反应，又叫做体外DNA扩增技术。
根据DNA半保留复制的原理，在体外提供参与DNA复制的各种组分与反应条件，对目的基因的核苷酸序列进行大量复制的技术。
通过这项技术可在短时间内大量扩增目的基因。
②PCR利用的原理：DNA半保留复制③DNA复制的基本条件：④PCR的前提：有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成引物。
⑤PCR的条件：DNA模板（需含有目的基因）。
分别与模板DNA相结合的2种引物。
四种脱氧核苷酸（或四种dNTP：dATP、dTTP、dGTP、dCTP）。
耐高温的DNA聚合酶(Taq酶）。
稳定的缓冲溶液（一般添加Mg2+）。
能严格控制温度的温控设备。
⑥PCR的过程：⑦PCR的结果：以指数方式扩增，即2n（n为扩增循环的次数）⑧鉴定PCR的产物：常采用琼脂糖凝胶电泳来鉴定产物知识点02 第二步：基因表达载体的构建基因表达载体的组成：目的基因、标记基因、启动子、终止子基因表达载体构建过程：一般用同一种限制酶分别切割载体和含有目的基因的DNA片段，再用DNA连接酶将两者连接。
基因工程操作的基本技术路线
基因工程操作的基本技术路线一、确定目的基因在基因工程操作中，首先要明确目的基因，即需要操作的基因。
目的基因可以是已知功能的基因，也可以是未知功能的基因。
确定目的基因是基因工程操作的第一步，也是关键的一步。
二、获取基因组DNA获取目的基因的DNA是基因工程操作的第二步。
可以通过从生物体内提取DNA的方法获得，也可以通过合成的方法得到。
获取基因组DNA是基因工程操作的基础。
三、基因克隆基因克隆是将目的基因插入到载体中，并导入受体细胞进行复制的过程。
基因克隆是基因工程操作的核心步骤，可以通过不同的载体和受体细胞进行克隆。
四、转化受体细胞转化受体细胞是将克隆好的目的基因导入受体细胞中。
转化方法有多种，如化学转化法、电穿孔法等。
转化受体细胞的成功与否直接影响到目的基因的表达和产物的生成。
五、筛选阳性克隆筛选阳性克隆是在转化受体细胞后进行的步骤，其目的是筛选出含有目的基因的阳性克隆。
可以通过不同的筛选方法进行筛选，如PCR筛选、酶切鉴定等。
六、扩增目的基因扩增目的基因是在筛选出阳性克隆后进行的步骤，其目的是将目的基因进行大量扩增。
可以通过不同的扩增方法进行扩增，如质粒扩增、PCR扩增等。
七、鉴定目的基因鉴定目的基因是基因工程操作的最后一步，其目的是确定目的基因是否正确表达和产物是否正确。
可以通过不同的鉴定方法进行鉴定，如Western blot鉴定、ELISA鉴定等。
总之，基因工程操作的基本技术路线包括确定目的基因、获取基因组DNA、基因克隆、转化受体细胞、筛选阳性克隆、扩增目的基因和鉴定目的基因等步骤。
这些步骤是相互联系、相互影响的，只有正确掌握每个步骤的操作技巧和注意事项，才能保证基因工程操作的成功和有效性。
【高中生物】基因工程的基本操作程序课件+高二下学期生物人教版选择性必修3
新课讲解
二、基因表达载体的构建 重组载体的构建是基因工程的核心，其目的是把目的基因和载体组合
成一个新的DNA分子，以便将目的基因送进受体细胞。
(一)基因表达载体的作用： 1.使目的基因在受体细胞中稳定存在，并能(通过复制)遗传给下一代。 2.使目的基因能够受体细胞中表达和发挥作用。
(二)基因表达载体的组成：
苏云金杆 菌内获得 Bt抗虫蛋
白基因
与载体 结合
转入棉花细 胞内
检查转基因抗虫棉 是否培育成功
将转化成功的细胞 进行组织培养，获得
转基因抗虫植株
新课讲解
基因工程的基本操作主要包括四个步骤：目的基因的筛选与获取、基因表 达载体的构建、将目的基因导入受体细胞(转化)、目的基因的检测与鉴定。
新课讲解
一、目的基因的筛选与获取
②需要四种脱氧核苷酸作原料；
③子链延伸的方向都是从5′端向3′端 ④都遵循碱基互补配对。
观察思考
1、n代后，DNA分子有__2_n__个。 2、n代后，DNA链有__2_n+_1_条。 3、第__3__代开始符合要求的目的基因。 4、n代后，含引物的DNA分子有__2_n__个。 5、n代后，共消耗_____2_n+_1_-2__个引物。 6、第n代复制，消耗了___2_n__个引物。 7、n代后，完整的目的基因有___2_n-_2_n__个。
新课讲解
▼相关信息：
1.Bt抗虫蛋白的抗虫原理：
当Bt抗虫蛋白被分解为多肽后，多肽与害虫肠上皮细胞的特异性受 体结合，导致细胞膜穿孔，最后造成害虫死亡。
2.抗虫棉中的Bt抗虫蛋白会不会对人畜产生危害？
Bt抗虫蛋白只有在某类昆虫肠道的碱性环境中才能表现出毒性，而 人和牲畜的胃液呈酸性，肠道细胞也没有特异性受体，因此，Bt抗虫 蛋白不会对人畜产生上述影响。
《基因工程的基本操作程序》 讲义
《基因工程的基本操作程序》讲义一、基因工程的概念基因工程，也叫基因拼接技术或 DNA 重组技术，是指按照人们的意愿，把一种生物的某种基因提取出来，加以修饰改造，然后放到另一种生物的细胞里，定向地改造生物的遗传性状。
基因工程是在分子水平上进行的操作，它打破了物种之间的界限，能够让人们按照自己的意愿，直接定向地改造生物的遗传性状。
二、基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序主要包括以下四个步骤：目的基因的获取、基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定。
（一）目的基因的获取1、从基因文库中获取目的基因基因文库包括基因组文库和部分基因文库（如 cDNA 文库）。
基因组文库包含了一种生物的全部基因，而 cDNA 文库只包含了一种生物的部分基因，是由 mRNA 反转录得到的 DNA 组成。
2、利用 PCR 技术扩增目的基因PCR 技术，即聚合酶链式反应，是一种在体外快速扩增特定基因或DNA 序列的技术。
其基本原理是 DNA 半保留复制。
通过设计一对特异性引物，在热稳定 DNA 聚合酶的作用下，经过多次循环，实现目的基因的大量扩增。
3、人工合成目的基因如果基因较小，核苷酸序列已知，可以通过 DNA 合成仪用化学方法直接人工合成。
（二）基因表达载体的构建这是基因工程的核心步骤。
基因表达载体的构建是使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用。
一个基因表达载体通常包括目的基因、启动子、终止子、标记基因等部分。
启动子是一段有特殊结构的 DNA 片段，位于基因的首端，是 RNA 聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出 mRNA。
终止子位于基因的尾端，也是一段有特殊结构的 DNA 片段，能终止 mRNA 的转录。
标记基因的作用是为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。
（三）将目的基因导入受体细胞1、将目的基因导入植物细胞（1）农杆菌转化法农杆菌中的 Ti 质粒上的 TDNA 可以转移到受体细胞，并整合到受体细胞的染色体 DNA 上。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
本操Ti质粒的T-DNA可转移至受体细胞的染色体上
作
程
序
2. 目的基因插入Ti质粒的T-DNA上 农杆菌
转 导入植物细胞 整合到受体细胞的染色体上
陕化 目的基因的遗传特性得以维持稳定和表达
西
师
大 附 中
（2）基因枪法 （3）花粉管通道法
整理课件
11
（二）导入动物细胞
显微注射技术
基 含目的基 显微 动 物 的
• 条件：
程
四种脱氧核苷酸
序
DNA的两条链为模板
PCR扩增仪
热稳定DNA聚合酶(Taq酶）
陕
西 师
一对引物
大
附 中
温度控制
整理课件
4
PCR技术扩增过程
基a、DNA变性（90℃-95℃）：双链DNA模板
因 工
在热作用下，
氢断键裂，形成____单__链_
程的基b、复性（55℃-60℃）：系统温度DN降A低，引物
①利用mRNA反转录形成 ②从基因组中提取基 ③从受体细胞中提取 ④利用PCR技术
因 工
⑤利用DNA转录
⑥人工合成
程 A.①②③⑤ B.①②⑤⑥ C.①②③④ D.①②④⑥
的
3基本. PCR技术扩增DNA,需要的条件是( )
①操作 目的基因②引物③四种脱氧核苷酸④DNA聚合酶
等程序 ⑤mRNA⑥核糖体
本 操
与DNA模板结合，形成局部__双__链____。
作
程序c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下，
从
引物的DN5′A端→3′端延伸，合成与模板互补
陕 西 师
的___链双__链__D_N。A是在高温条件下解链为单链DNA的，
大
附 中
因此整个过程不需要解旋酶。
整理课件
5
（三）通过DNA合成仪直接合成目的基因
因 因的表达 注射 受 精 卵
工 程
载体
的
基 本
早 期 分裂 含目的基因
操
胚 胎 分化 的受精卵
作 程 序
移 植
雌性动物输 发
转基因
卵管或子宫 育 动 物
陕 西
问题
师
大 附
为什么将目的基因导入动物细胞常用的受
中
体细胞是受精卵整理？课件
12
（三）导入微生物细胞
1. 过程
Ca2+ 处理法
基 因
（1）制备感受态细胞：用Ca2+（CaCl2）处理细菌，
1.2基因工程的基本操作程序
基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序
陕
西
师
大
附
中
整理课件
1
一、目的基因的获取
指满足人们需要，能编码蛋含了某种生物所有的基因，该受体菌
操作 群体称为这种生物的基因组。程序2. 部分
显出 杂交带
的
基2. 检测目的基因是否转录出了mRNA
本
（表明目的基因已插入）
操
作 提取受体生
程 序
物的mRNA
用同位素标记的 目的基因片段杂交
显出 杂交带
（表明目的基因已转录出了mRNA）
检测DNA利用的是DNA与DNA杂交，检测mRNA
陕
Байду номын сангаас
西
师 大
利用的是DNA与mRNA杂交。
工
程
使细菌细胞壁通透性增加，易于接受外源DNA分子。
的
基
本
操 作
（2）重组DNA分子与感受态细胞混合孵育，完成转化。
程 序
2. 优点
繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少、操
作简单、价格低廉。
陕 西 师
3. 常用受体细胞
大
附 中
大肠杆菌（E.coli）
整理课件
13
四、目的基因的检测与鉴定
基
目的基因是否真正插入受体细胞的DNA中，
作
程
序
逆转录酶 核酸酶H DNA聚合酶
与载体连接
该生物导入受体菌群 cDNA陕 西mRNA 杂交双链
单链DNA
双链DNA
师
大
附
中
整理课件
3
（二P）CR利技用术P—CR聚技合术酶扩链增式目反的基因
• 原理： 应
基
因 工 程
•
DNA双链复制的基本原理
前提：
的
基
本 操 作
一段已知目的基因的核苷酸序列
基
当基因比较小、蛋白质的氨基酸序列可以测得
因
工 程
或核苷酸序列已知时，可采用此种方法。
的
基
本
操 蛋白质的氨
推
mRAN
推 基因DNA 合
目的
作 程
基酸顺序
测 核苷酸序列 测 的核苷酸 成
基因
序
序列
陕
西
师
大
附
中
整理课件
6
二、基因表达载体的构建
a、目的基因
基
因
工 程
b、启动子
的
基
本 操
c、终止子
作
程
序
d、标记基因
附
中
整理课件
15
3. 检测目的基因是否翻译出蛋白质 抗原—抗体杂交技术
基 因 工
提取受体生 与相应抗体杂交 物的蛋白质
显出 杂交带
程的（二）个体水平
基
本操例：用棉铃饲喂棉铃虫，如虫吃后不出现中毒症状，
作程序说明未摄入目的基因或摄入目（白的表质明产基目品因的）未基表因达已。形成如蛋虫吃
受体菌包含了一种生物部分基因，该受体菌群体
陕 西称为这种生物的部分基因，如cDNA。师大
附
中
整理课件23. 基因的构建（1）基因组的构建
基
因
工 提取某生物 用适当
许多
与载体连接
该生物基
程 的
全部DNA 限制酶切录段形不同成的DNA片段）
A、①②③④
B、②③④⑤
C、①③④⑤
陕 西 师 大 附 中
D、①②③⑥
整理课件
9
基 4.细菌的质粒分子带有一个抗菌素抗性基因，该抗
因 性基因在基因工程中的主要作用是
工 程
A．提高受体细胞在自然环境中的耐药性
的 基
B．有利于对目的基因是否导入进行检测
本 操
C．增加质粒分子的分子量
作 D．便于与外源基因连接
目的：使目的基因在受体细胞中稳定存
陕 西
在，并且可以遗传给下一代，同时使目
师
大 附
的基因能够表达和发挥作用。
中
整理课件
7
随堂闯关
基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序
1.下表关于基因工程中有关基因操作 的名词及对应的内容，正确的组合是
陕 西 师 大 附 中
整理课件
8
2、下列属于获取目的基因的方法的是( )
因
工 程
是否能够在受体细胞中稳定遗传和正确表达，
的
基
只有通过检测、鉴定才能得知。
本
操
作
程 常用的检测手段主要从分子水平和个体水平
序
进行。
陕
西
师
大
附
中
整理课件
14
（一）分子水平
分子杂交技术
1. 检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因
基 因
提取受体生
工 程
物全部DNA
适当限制 酶切割
DNA片段
程 序
5.哪项不是基因表达载体的组成部分(
)
A.启动子
B.终止密码
C.标记基因
陕 西 师 大 附 中
D.目的基因
整理课件
10
三、将目的基因导入受体细胞
导入受体细胞的方法 主要 是借鉴细菌或病毒侵染细
胞的途径，且因受体细胞的不同而不同。
基
（因工 一）导入植物细胞
程
的 基
1.农杆菌特点：易感染双子叶植物和裸子植物。