实验五 血液中谷丙转氨酶活力的测定

实验五血液中谷丙转氨酶活力的测定

【目的和要求】

了解转氨酶在代谢过程中的重要作用及其在临床诊断中的意义，学习转氨酶活力测定的原理和方法。

【原理】

生物体内广泛存在的氨基移换酶也称转氨酶，能催化α-氨基酸的α-氨基与α-酮基酸的α-酮基互换，在氨基酸的合成和分解、尿素和嘌呤的合成等中间代谢过程中有重要作用。转氨酶的最适pH接近7.4，它的种类甚多，其中以谷氨酸-草酰乙酸转氨酶（简称谷草转氨酶）和谷氨酸-丙酮酸转氨酶（简称谷丙转氨酶）的活力最强。它们催化的反应如下。

正常人血清中只含有少量转氨酶。当发生肝炎，心肌梗死等病患时，血清中转氨酶活力常显著增加，所以在临床诊断上转氨酶活力的测定有重要意义。

测定转氨酶活力的方法很多，本实验采用分光光度法。谷丙转氨酶作用于丙氨酸α-酮戊二酸后，生成的丙酮酸与2，4-二硝基苯肼作用生成丙酮酸2，4-二

硝基苯腙。

2

2

16012345

试剂(ml)

试管号

0 1 2 3 4 5

丙酮酸钠标准液- 0.05 0.10 0.15 0.20 0.25

谷丙转氨酶底物0.50 0.45 0.40 0.35 0.30 0.25 磷酸缓冲液

（0.1mol/L,pH7.4）

0.10 0.100.100.100.100.10

2,4-硝基苯肼可与有酮基的化合物作用形成苯腙。底物中的α-酮戊二酸与2，4-二硝基苯肼反应，生成α-酮戊二酸苯腙。因此，在制作标准曲线时，须加（内含α-酮戊二酸）以抵消由α-酮戊二酸产生的消光影响。

先将试管置于37℃恒温水浴中保温10min以平衡内外温度。向各管内加入，4-二硝基苯肼溶液后再保温20min，最后，分别向各管内加入0.4mol/L 5ml。在室温下静置30min，以0号管作空白，测定520nm的光吸2．酶活力的测定：取2支试管并标号，用第1号试管做为未知管，第2号

0.5ml,置于37℃水浴内10min，

取血清0.1ml加到第1号试管内，继续保温60min。到60min 向两支试管内各加入2，4-二硝基苯肼试剂0.5ml，于37℃保温20min,然后2支管中加入0.4mol/L氢氧化钠溶液5ml。在室温下静置30min后，测定520nm波长光吸收值（显色后30min至2小时内其色度稳定）。在标准

（用1μmol丙酮酸代表1.0单位酶活力）。计算100ml血清中转氨酶的活力单位数。

一`试剂

1．试管及试管架

2．吸管

3．恒温水浴

4

1

2 2.0

3

7.4

2.0200

42

2

2

5

6