实验五、血清中谷丙转氨酶的测定

（1）丙氨酸+α-酮戊二酸
ALT
丙酮酸+谷氨酸 丙酮酸2,4-二硝基苯肼(黄色)
Hale Waihona Puke Baidu
（2）丙酮酸+2,4-二硝基苯肼 （3） 丙酮酸2,4-二硝基苯肼 NaOH
（黄色）
苯腙硝醌化合物 （红棕色）
510nm
相对血清ALT活力
光吸收法测定
三、实验器材
材料：人血清
试剂：谷丙转氨酶测定试剂盒
用具：分光光度计，微量移液枪，试管，试管架， 恒温水浴锅
注意事项
正确使用比色器皿：手拿比色皿的毛面； 比色液应占比色皿的2/3。
每次测定时都需用试剂空白溶液调零，不 能用蒸馏水代替
微量移液枪的正确使用
思考
1、血清谷丙转氨酶测定的临床意义？
200
2000
冷却至室温后，510nm处比色
比色方法：以空白管调零，读取标准管及样品管光密度值。
（2）计算： 依据朗伯-比尔定律： A=KLC
标准管谷丙转氨酶活力：57U/L
A样 U样= × U 标 A标
样品管光密度值 ×57 样品管谷丙转氨酶活力＝ 标准管光密度值 （U/L）
参考值
谷丙转氨酶 血清参考值：0~ 50U/L
实验五 血清中谷丙转氨酶 的测定
（2,4-二硝基苯肼法）
一、实验目的
掌握血清丙氨酸氨基转移酶活性测定的基本原理。
了解血清丙氨酸氨基转移酶的测定方法及临床意义。
二、实验原理
丙氨酸氨基转移酶(ALT)催化丙氨酸与α-酮戊二酸生成丙酮酸和谷氨 酸。丙酮酸可与2,4-二硝基苯肼在酸性溶液中反应形成相应的2,4-二硝基 苯腙，呈黄色，后者在碱性条件下呈红棕色。
四、实验步骤
（1）取3支试管，按下表加入试剂:
试剂 基质液(uL) 标准液(uL) 血清样品(uL) 蒸馏水(uL) 试剂空白管 200 – – 50.0 标准管 200 50.0 – – 样品管 200 – 50.0 –
显色剂(uL)
稀释NaOH(uL)
混合37℃水浴放置30min 200 200 37℃水浴放置20min 2000 2000