血清谷丙转氨酶标准曲线
生化检测方法汇总
一、血清谷丙转氨酶（SGPT）赖氏改良法器材:试管及试管架、移液器或吸量管、恒温水浴锅、721型分光光度计、温度计、动物血清试剂:（1）0.1mol/L pH7.4磷酸盐缓冲液：①0.1mol/L磷酸氢二钠溶液：称取Na2HPO414.22g或Na2HPO4·2H2O17.8g溶解于蒸馏水中，并稀释至1 000ml,4℃保存。
②0.1mol/L磷酸二氢钾溶液：称KH2PO413.61g溶解dH2O中，稀释至1000ml,4℃保存。
③将0.1mol/L磷酸氢二钠溶液420ml和0.1mol/L磷酸二氢钾溶液80ml混和即为0.1mol/L pH7.4的磷酸盐缓冲液。
加氯仿数滴，4℃保存。
（2）标准丙酮酸（含丙酮酸2.0μmol/mL）：取标准丙酮酸钠10mg，用上述缓冲液准拟定容为50mL。
此液须当天用当天配。
（3）SGPT底物液(含α-酮戊二酸2μmol/ml及DL-丙氨酸200μmol/ml) : 取α-酮戊二酸29.2mg，DL-丙氨酸7g ,用试剂1溶成100ml，在稀释到刻度前，以1mol /L NaOH调pH 7.4（由于转氨酶在pH7.3以下或7.6以上的环境中酶活性下降），加数滴氯仿防腐。
此液于冰箱保存可使用4天。
（4）GOT底物液(DL–天冬氨酸200mmol/L ,α-酮戊二酸 2mmol/L):称取α- 酮戊二酸29.2mg 和DL-门冬氨酸2.66g置于一小烧杯中,加入1mol/L氢氧化钠20.5ml使溶解,并校正pH 至7.4,然后将溶液移入100ml容量瓶内,用0.1mol/L磷酸盐缓冲液定容至刻度。
放置冰箱内保存。
（5）2.4-二硝基苯肼溶液:取分析纯2,4-二硝基苯肼19.8mg，用1mol/L HCl溶于100ml，置棕色瓶中保存。
（6）0.4mol/L NaOH溶液:称取16g固体NaOH，用蒸馏水溶解，冷却至室温，定容至1000mL，备用。
操作环节：1、标准曲线绘制：取试管18支按下表操作。
血清谷丙转氨酶实验报告
血清谷丙转氨酶实验报告背景介绍血清谷丙转氨酶（alanine aminotransferase，简称ALT）是一种存在于肝脏中的酶类物质，主要参与蛋白质的代谢过程。
正常情况下，ALT的活性较低，而当肝脏受到损伤时，ALT会释放到血液中，血液中的ALT水平也会升高。
因此，检测血清中ALT的水平可以作为评估肝脏功能以及肝脏疾病的重要指标之一。
实验目的本实验旨在通过检测血清中ALT的水平，了解被检测个体的肝脏功能状态，提供诊断肝脏疾病的参考依据。
实验材料1.血清样本：被检测个体的血清样本，需通过静脉采血获取。
2.ALT试剂盒：包含必要的试剂和材料，用于检测血清中ALT的水平。
实验步骤1.获取血清样本：用无菌的注射器从被检测个体的静脉中采集足够的血液样本，约5-10毫升即可。
2.处理血清样本：将采集到的血液样本放置在无菌离心管中，离心约10分钟以分离血清和血细胞。
将分离得到的血清转移至干净的试管中。
3.准备实验室试剂：取出ALT试剂盒，按照说明书中的指引，准备所需的试剂和材料。
4.进行实验操作：根据ALT试剂盒的说明，将一定量的血清样本与试剂盒中的试剂混合，进行反应。
反应时间和条件需根据试剂盒的要求进行。
5.反应结果读取：按照ALT试剂盒说明，使用光度计等设备测量反应体系的吸光度。
吸光度的数值与血清中ALT的浓度成正比。
6.数据分析和结果解读：根据测定结果，比较样本中ALT的浓度与正常范围进行对比。
若ALT浓度超过正常范围，可能提示存在肝脏损伤或疾病。
结果与讨论本实验的结果即为测定得到的血清中ALT的浓度。
根据测定结果，我们可以初步判断被检测个体的肝脏功能状态。
若ALT浓度超过正常范围，可能存在肝脏疾病，需要进一步的检查和诊断。
值得注意的是，ALT浓度的升高不一定说明肝脏疾病，还可能受到其他因素的影响，如药物的使用等。
结论通过本实验，我们可以通过检测血清中ALT的水平来评估被检测个体的肝脏功能状态。
ALT浓度的升高可能提示肝脏损伤或疾病，但需要结合其他临床检查和诊断方法来进行综合分析和判断。
血清谷丙转氨酶ALT(精)
光度。由测得的吸 A 光度在曲线上查得
试样溶液中待测组
分的浓度，最后计
算得到试样中待测
组分的含量。
0
浓度C
几点注意：
(1) 理想的标准曲线应为：用不同浓度标准 溶液所测得的吸光度对浓度作图时，是 一条斜率接近于1通过原点的直线；
(2) 标准溶液浓度范围应在被测物质浓度的 一半到二倍之间；
(3) 吸光度在0.05---1.0之间为宜。
A样 = KC样L
A标
KC标L
则：
C样 =
A样 A标
C标
2. 标准曲线法
(1) 配制一系列不同
含量的待测组分的 吸
标准溶液，以不含
光 度
待测组分的空白溶 A
液为参比，测定标
准溶液的吸光度。
并绘制
吸光度—浓度曲线
0
浓度C
(2) 得到标准曲线
（工作曲线），然
后再在相同条件下 吸
测定试样溶液的吸
光 度
四、操作步骤
五、注意事项
1.血清样品的测定需在显色后30分钟内完 成。
2.在血清中加入底物后，应准确记时。
பைடு நூலகம்
六、实验的结果
• 1.第一组同学绘制标准曲线 • 2.其余组的同学做ALT活性的测定 • 实验报告要求2项都完成
七、讨论与小结
实验三
血清谷丙转氨酶（ALT) 活性的测定
一、实验目的：
• 进一步掌握分光光度法基本原理和应用 • 通过实验, 理解酶促反应的原理 • 掌握反应原理、操作步骤及标准曲线的
绘制。
二、原 理
三、方法
分光光度法----标准曲线法
定量分析方法
1. 对比法
将标准与样品分别在相同条件下显色，测 定其吸光度。因是相同物质在相同条件下 测定，故可按下式计算出样品的浓度：
谷丙转氨酶（ALT7.0L）——肝功能损害最敏感的检测指标。
谷丙转氨酶（ALT7.0L）——肝功能损害最敏感的检测指标。
谷丙转氨酶(又名谷氨酸转氨酶、丙氨酸氨基转移酶，简称GPT、ALT)升高在临床是很常见的现象。
肝脏是人体最大的解毒器官，该脏器是不是正常，对人体来说是非常重要的。
GPT升高是肝脏功能出现问题的一个重要指标。
在常见的因素里，各类肝炎都可以引起GPT升高，这是由于肝脏受到破坏所造成的。
一些药物如抗肿瘤药、抗结核药，都会引起肝脏功能损害。
大量喝酒、食用某些食物也会引起肝功能短时间损害。
谷丙转氨酶长期升高会引发病变，严重者会引发肝癌。
基本信息基本信息谷丙转氨酶，ALT是由两条相同的多肽链亚单位组成的二聚体，分子量为110 kD。
5′-磷酸吡哆醛（P-5′-P）即Vit B6是ALT的辅酶。
血浆ALT的半衰期为37~57h，从血管内空间消除的速率常数为0.43~0.70 U/h。
ALT二种同工酶，一种为可溶性胞浆ALT（s-ALT），另一种为线粒体ALT（m-ALT）。
正常人血清ALT以s-ALT为主，m-ALT只占一小部分（约11%）。
s-ALT至少有20多种变异体。
人肝s-ALT的3种普通型变异体分别是s-ALT1、s-ALT2-1和s-ALT2。
s-ALT1和s-ALT2由常染色体ALT位点上的Gpt1和Gpt2等位基因表达，s-ALT2-1为其杂合子。
三种s-ALT变异体的分子量相同，均为110±5 kD。
但是，它们的电泳和酶动力学特性存在明显差别。
在等电聚焦电泳上s-ALT1和s-ALT2均为单一条带，等电点（PI）分别为6.45和6.1，而s-ALT2-1为3条带，PI分别为6.1、6.2、和6.45。
P-5′-P对三种s-ALT变异体均有激活作用，但程度有异，以s-ALT1增高幅度最大（54.1%以上），而s-ALT2-1次之（48.5%以上），s-ALT2最小（13.7%以上）此外，三种变异体的表现Km值以及对热和尿素处理的稳定性也存在明显差别。
生化试验观察血清中谷丙转氨酶的活力变化讲解
= SALT活力
测定管微克数—对照管微克数 （单位） 2.5×0.1
五、注意事项
1. 2，4-二硝基苯肼可与有酮基的化合物作用形成苯腙 2. 吸量应准确，严格控制反应时间和温度。 3. 在测定SALT活力时，应事先将底物、血清在37℃水浴中恒 温 4. 溶血标本不宜采用，因血细胞内转氨酶活力较高，影响测定 结果。 5．在测定时，如酶活力较大（大于100单位），应将样品稀释 后再进行测定。
serum Aminotransferase/ transaminase
catalyze alanine α-ketoglutarate glutamic acid pyruvic acid alkali substrate
ABSTRACT
Observing Enzyme Activity Changes of Alanine Aminotransferase in Sample
三、实验原理
COOH
C H3
CH2 α-ketoglutarate C H2
C H N H2 COOH
CO
alanine
COOH
COOH GPT
SUBSTRATE
C H2 CH2
C H N H2 COOH
pyrivic acid
C H3 CO COOH
pyruvic acid glutamic acid
0.50 0.50
0.50
0.50
0.50
0.50
37℃水浴保温20min
氢氧化钠ml
5
5
5
5
5
5
室温下静置10min
蒸馏水调零点，于520nm处测吸光度
生物化学实验谷丙转氨酶活性的鉴定及活力单位的测定
谷丙转氨酶活性的鉴定及活力单位的测定一、[实验目的]1.用纸层折法观察肝脏丙转氨酶ALT的转氨作用；2.用分光光度法测定血清丙转氨酶的活力；3.学习治疗检测SGPT的方法及原理；4.了解检测肝损伤模型的制备及SGPT在科研中的应用。
二、[仪器与试剂]1．实验材料动物肝脏2．实验试剂（1）0.9%NaCl溶液（2）海砂（3）1%谷氨酸溶液（1%KOH溶液中和）（4）1%丙酮酸钠溶液（用1%KOH溶液中和）（5）0.1%KHCO3溶液（6）0.025%一溴乙酸溶液（用1%KOH中和）（7）2%乙酸溶液（8）酚的饱和水溶液：将2份酚和2份水（按重量计算）混合，放入分液漏斗中，振荡。
静止24h以后分层，将下部酚层放入瓶中备用。
新配制的酚展层剂可以反复使用1周。
（9）0.1%水合茚三酮的正丁醇溶液（10）0.1%标准谷氨酸溶液（11）0.1%标准丙氨酸溶液（12）1%KOH溶液谷丙转氨酶活性的鉴定（纸层析法）一、[实验原理]观察肌肉糜中谷丙转氨酶所催化的氨基移换反应。
通过纸层析法检查底物谷氨酸的减少和产物丙氨酸的生成。
为防止丙酮酸被肌肉糜中的其它酶所氧化或还原，在反应系统中加入了抑制剂溴乙酸。
二、[实验操作]1.谷丙转氨酶提取液制备：2g肝脏+0.9%NaCL 6mL+海砂 200mg，在低温下，研磨成浆，用稀薄的脱脂棉过滤，得提取液（滤液不清）。
2.转氨作用取试管2支，按下表加入试剂，加入试剂的单位为mL加脱脂棉塞，45℃水浴，1.5h，时时振荡内容物沸水浴2min，使蛋白质完全沉下，过滤，作层析3.纸层析操作方法取圆形层析滤纸1张，在圆心处用圆规绘出直径为3cm的同心圆（滤纸不可以折），通过中心将滤纸绘成四等分扇形。
用毛细管点样2-4次（直径不超过2mm），在滤纸的圆心上剪一小孔，直径约1-2mm，取一小滤纸条，将下端剪成刷状，在卷成灯芯插入圆形小孔，不能使灯芯突出纸面，将圆形滤纸平放在盛有层析液（水饱和酚）培养皿上，使灯芯向下与溶剂接触，用大小相同的培养皿盖在滤纸上，溶剂通过灯芯上升到滤纸上向四周展层，直到溶剂前沿移至距滤纸边缘约1cm处时停止（展层时间为1h），80-100℃烘箱干燥，喷洒水合茚三酮的正丁醇溶液，80-100℃显色。
血清ALT标准曲线法课件
13. 如图输入公式 “=31.46*B11-0.0897”, 回
车即得出所求浓度值，如图13；
14. 下拉即可得出其他值，如图14。
正常值=0～38 U/L单位
❖【临床意义】
❖ 肝细胞中含ALT最丰富，因此当肝脏疾病致肝细胞 受损伤时，ALT即大量释放入血液，致使血清中 ALT活性增高。测定ALT是检查肝功能的重要指标 之一。ALT显著增高见于各种急性肝炎及药物中毒 性肝细胞坏死，中等程度增高见于肝癌、肝硬化、 慢性肝炎及心肌梗塞，轻度增高则见于阻塞性黄 疸及胆道炎等疾病。骨骼肌损伤、多发性肌炎亦 可引起转氨酶活性升高。
❖ 【思考题】
❖ 1.血清中谷丙转氨酶的测定有何临床意义？
❖ 2.血清谷丙转氨酶的测定有何注意点？
谢谢！
丙酮酸标准液的制备和样品测定
加入物(mL)
空白管 标准1 标准2 标准3 标准4 标准5 测定管
校准品
0 0.05
0.1 0.15
0.2 0.25
丙氨酸氨基转移酶基质 液
0.5 0.45
0.4 0.35
10.点击“确定”，标准曲线画好，如图10：
11.计算回归方程：点击趋势线（也就是标准曲线）然后 按右键，选趋势线格式，在显示公式和显示R平方值
（直线相关系数）前点一下，勾上。如图11：
12.点击“确定”，公式和相关系数都出来了。如图12：
13. 如图输入公式 “=31.46*B11-0.0897”, 回
【如何用excel制作标准曲线】
1.先作出标准曲线: 测出标准溶液的A值及待测溶液的A值, 输入excel(B列所示), 输入对应的标准溶液浓度, 如图1:
2. 选好两列数值,点取”图表向导”按钮(如图 1),先在图表类型中选“XY散点图”，并选图表
血清转氨酶(GPT、GOT)活性的测定
血清转氨酶（GPT、GOT）活性的测定【原理】酶的活性即酶的催化效能，在一定条件下酶活性的高低代表酶的含量的多少，故酶活性的测定也即相当于酶含量的测定。
酶的活性通常都是在一定条件下（最适温度、最适的pH、必要的激动剂等），一定的时间内，测定该酶所催化的反应系统中底物的消耗量或产物生成量来确定的。
血清谷丙转氨酶（SGPT）及血清谷草转氨酸（SGOT）分别以丙氨酸和α-酮戊二酸；天冬氨酸和α-酮戊二酸为底物，催化它们进行如下反应：在SGOT催化下所生成的草酰乙酸又可在β脱羧酶和枸橼酸苯胺作用下脱羧，生成丙酮酸，而丙酮酸则可与2，4二硝基苯肼作用，生成丙酮酸2，4二硝基苯腙，后者在碱性溶液中呈棕色，在520nm比色时，α-酮戊二酸二硝基苯腙之光吸收远丙酮酸二硝基苯腙为低。
在反应后，α-酮戊二酸减少而丙酮酸增加，故520nm处光密度增加之程度与反应体系中丙酮酸与α-酮戊二酸之克分子比例成线性关系。
一般临床上用以测定SGPT及SGOT活性的方法有改良的穆氏法、金氏法及赖氏法，这些方法都是基于上述原理而设计的，操作也基本相同，只是这些实验的某些条件、活性单位的规定和计算有所差异。
改良的穆氏法（Mohun）规定血清在37（pH7.4）的条件下，与底物作用30分钟后，每生成2.5μg丙酮酸为一个转氨酶活性单位。
金氏法（King）则规定在同上条件下，与底物作用60分钟后，每生成1μM丙酮酸为一个转氨酶活性单位。
赖氏法（Reitman）本身并未对转氨酶活性单位提出规定，他是用卡门氏法（Karman）来定单位的。
卡门氏法是在紫外分光光度计中用1毫升血清，反应溶液总量为3毫升，在340nm波长下，用内径为1.0cm的比色皿，25℃ 1分钟内所产生的丙酮酸，在乳酸脱氢酶作用下，使NADH变成NAD+，而引起光密度下降0.001为1个转氨酶活性单位。
而赖氏法则是用卡门氏法所测出的单位数相当于赖氏法所产生的丙酮酸量的相关系数，套用卡门氏单位而来。
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血清谷丙转氨酶标准曲线
血清谷丙转氨酶（alanine aminotransferase，ALT）是一种存在于细胞质中的酶，主要存在于肝脏、肾脏和心肌等组织中。
血清谷丙转氨酶的检测可以帮助医生判断肝脏功能是否正常，对于诊断肝脏疾病具有重要的临床意义。
而血清谷丙转氨酶的标准曲线则是进行血清谷丙转氨酶测定的重要参考依据之一。
一、实验原理。
血清谷丙转氨酶标准曲线实验是通过将不同浓度的血清谷丙转氨酶标准品加入
到反应系统中，测定其对应的吸光值，然后根据吸光值与血清谷丙转氨酶浓度的关系绘制出标准曲线。
通过标准曲线可以准确地计算出待测样本中血清谷丙转氨酶的浓度，从而判断肝脏功能的健康状况。
二、实验步骤。
1. 准备工作，将实验所需的试剂和仪器准备齐全，并按照实验要求进行预处理。
2. 标准曲线制备，依次取一系列不同浓度的血清谷丙转氨酶标准品，加入到反
应系统中，然后测定其吸光值。
3. 数据处理，将实验得到的吸光值与标准品的浓度进行对应，然后绘制标准曲线。
4. 标准曲线验证，使用已知浓度的血清谷丙转氨酶标准品进行实验，验证标准
曲线的准确性。
5. 待测样本测定，将待测样本加入到反应系统中，测定其吸光值，并利用标准
曲线计算出样本中血清谷丙转氨酶的浓度。
三、实验注意事项。
1. 实验过程中要严格按照操作规程进行，避免操作失误导致实验结果不准确。
2. 实验室操作要注意个人防护，避免接触有害化学品。
3. 实验中使用的试剂和仪器要保持干净整洁，确保实验结果的准确性。
4. 实验结束后要及时清理实验台面和仪器，做好实验室卫生。
四、实验结果分析。
通过血清谷丙转氨酶标准曲线实验，我们可以得到待测样本中血清谷丙转氨酶
的浓度，进而判断肝脏功能的健康状况。
标准曲线的制备和验证是保证实验结果准确性的重要步骤，实验中需要严格按照操作规程进行，确保实验结果的可靠性。
总之，血清谷丙转氨酶标准曲线实验对于肝脏功能的评估具有重要的临床意义，正确的实验操作和准确的数据处理是保证实验结果准确性的关键。
希望本文所述内容对您有所帮助，谢谢阅读！。