肝脏谷丙转氨酶活力测定
转氨酶活力测定实验报告
一、实验目的1. 了解转氨酶在生物体内的作用及其在临床诊断中的重要性。
2. 学习并掌握转氨酶活力测定的原理和方法。
3. 通过实验操作，提高对实验仪器的操作技能。
二、实验原理转氨酶（Transaminase）是一类催化氨基酸与α-酮酸之间氨基转移反应的酶，广泛存在于生物体内。
在人体内，转氨酶主要存在于肝脏、心肌、骨骼肌等组织中，其中以谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）最为重要。
ALT和AST活性的测定在临床上具有重要的诊断价值，可作为肝功能异常、心肌梗死等疾病的辅助诊断指标。
本实验采用分光光度法测定ALT活力。
ALT催化L-丙氨酸与α-酮戊二酸之间的转氨反应，生成L-谷氨酸和丙酮酸。
丙酮酸与2，4-二硝基苯肼（2，4-DNPH）反应，生成丙酮酸-2，4-二硝基苯腙（PNP）。
PNP在碱性条件下呈棕色，其最大吸收峰在520nm处，通过测定520nm处的吸光度，可以计算出ALT的活力。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 鸡肝- 0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH 7.4）- 0.1mol/L丙氨酸- 0.1mol/Lα-酮戊二酸- 2，4-二硝基苯肼（2，4-DNPH）- 30%氢氧化钠溶液- 碘化钾溶液- 硫代硫酸钠溶液- 酶活力测定试剂盒2. 实验仪器：- 酶标仪- 电子天平- 移液器- 离心机- 恒温水浴箱- 试管四、实验步骤1. 样品制备：将鸡肝剪碎，加入磷酸盐缓冲液（pH 7.4），匀浆，离心取上清液。
2. 标准曲线绘制：配制一系列不同浓度的丙酮酸标准溶液，加入2，4-DNPH和30%氢氧化钠溶液，在520nm处测定吸光度，绘制标准曲线。
3. 样品测定：将样品溶液、底物溶液、2，4-DNPH和30%氢氧化钠溶液加入试管，混匀，在520nm处测定吸光度。
4. 数据处理：根据标准曲线，计算样品中ALT的活力。
五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：在520nm处，吸光度与丙酮酸浓度呈线性关系。
谷丙转氨酶活力测定
谷丙转氨酶活力测定（改良赖氏法）一，实验目的掌握血清丙氨酸氨基转移酶（ALT ，也称谷丙转氨酶，GPT ）活性测定的原理。
熟悉转氨酶活性测定的操作方法。
了解测定血清丙氨酸氨基转移酶活性的临床意义。
二，相关理论体内蛋白质处于不断降解与合成的动态平衡食物蛋白质经消化吸收的氨基酸和体内组织蛋白质降解产生的氨基酸混在一起，分布于体内各处，作为参与代谢的氨基酸库氨基酸分解代谢的主要反应是脱氨基作用肝脏的脱氨基方式有:氧化脱氨基,氨基转换作用及联合脱氨基氨基转移酶转氨酶： 催化氨基酸与酮酸之间氨基转移的一类酶谷丙转氨酶 glutamic-pyruvic transminase GPT 又称丙氨酸转氨酶alanine aminotransferase ALT三．转氨作用的意义正常时转氨酶主要分布在细胞内，血清中酶活力很低 GOT 以心脏细胞中活力最大，其次为肝脏细胞 GPT 则以肝脏细胞中活力最大谷丙转氨酶的临床意义如果GPT 血清值超过正常上限2－3倍，并持续两周以上，表明有肝胆疾病存在的可能。
参考范围：0-50 U/L ，卡门氏单位0-25 KarU 四．酶活力单位（U ，active unit ）国际单位：61年酶学委员会建议使用统一单位，在特定条件下，1分钟内转化1 μmol底物所需的酶量，称为一个国际单位（IU ，又称U ）1个卡门氏单位的定义是：在温度25℃，pH7.4，波长340nm ，光径1cm 的条件下，1ml 血清使反应液的吸光度下降0.001的转氨酶活性。
卡门氏单位和国际单位换算1 IU/L ＝2.1 KarU 五，实验原理血清中的丙氨酸转氨酶（ALT ），在37℃、pH7.4的条件下，可催化基质（底物）液中的丙氨酸与α-酮戊二酸生成谷氨酸和丙酮酸。
生成的丙酮酸可与起终止和显色作用的2,4二硝基苯肼发生加成反应，生成丙酮酸-2,4-二硝基苯腙，进而在碱性环境中生成红棕色的苯腙硝醌化合物，其颜色的深浅在一定范围内与丙酮酸的生成量，亦即与ALT 活性的高低成正比关系。
血清谷丙转氨酶的测定实验报告
血清谷丙转氨酶的测定实验报告血清谷丙转氨酶（alanine aminotransferase, ALT）是一种重要的肝脏酶，其测定可以用于评估肝功能和诊断肝脏疾病。
本实验旨在通过测定血清中ALT的活性，探究其在肝功能评估中的应用。
实验材料与方法。
1. 实验材料，实验所需材料包括ALT检测试剂盒、标准品、血清标本、比色皿、移液管等。
2. 实验方法：a. 样本处理，将采集的血清标本离心，取上清液置于4℃保存。
b. 实验操作，按照ALT检测试剂盒说明书进行操作，制备标准曲线和待测样本的反应体系。
c. 光度测定，使用分光光度计测定各标准品和待测样本的吸光度值。
d. 计算ALT活性，根据标准曲线计算待测样本中ALT的活性。
实验结果与分析。
经过实验测定，得到不同浓度的ALT标准曲线，吸光度与ALT浓度呈线性关系，相关系数达到0.99以上。
待测样本的吸光度值为X，通过标准曲线计算得到其ALT活性为Y。
进一步分析发现，实验组ALT活性显著高于对照组，说明实验组受到了肝脏损伤。
实验结论。
本实验通过测定血清中ALT的活性，成功评估了肝功能并诊断了肝脏疾病。
实验结果表明，ALT活性的升高与肝脏损伤密切相关，可作为肝功能评估和肝脏疾病诊断的重要指标之一。
实验注意事项。
1. 实验操作中需严格按照操作规程进行，避免操作失误导致结果误差。
2. 实验过程中需注意安全，避免接触有害化学品和受伤。
3. 实验结果需结合临床资料进行分析，以获得准确的诊断结论。
实验展望。
未来，可以进一步探究ALT在肝脏疾病诊断中的应用，寻找更为准确、快速的检测方法，为临床诊断提供更可靠的参考。
结语。
通过本实验，我们深入了解了血清谷丙转氨酶的测定方法和应用，为肝功能评估和肝脏疾病诊断提供了重要的实验依据。
希望本实验能对相关领域的研究和临床应用提供一定的参考价值。
血清中谷丙转氨酶活力测定结果
血清中谷丙转氨酶活力测定结果血清中谷丙转氨酶（ALT）活力测定是一种常见的实验室检测方法，常用于评估肝功能和诊断肝病。
本文将介绍血清中谷丙转氨酶活力测定结果的相关知识。
血清中谷丙转氨酶活力（ALT）是指血液中存在的一种酶的活性，通常用于评估肝脏功能的状况。
正常情况下，谷丙转氨酶的活力是很低的，一般小于40单位/升。
当肝细胞受损或病变时，会释放ALT，使其活力升高。
高浓度的ALT通常与肝脏病变有关，例如肝炎、肝硬化、脂肪肝、药物性肝病等。
此外，高ALT水平还可能与其他疾病有关，例如急性胰腺炎、心肌梗塞、重型结核等。
因此，如果血清中ALT活力超过正常范围，应及时进行检查和诊断。
血清中ALT测定通常是使用血清学方法进行的。
一般情况下，医师会在胳膊上绑上一条缚带，并在手腕或肘部的静脉内取一小样血液。
样本会送到实验室进行分析。
实验室会使用化学试剂和仪器来测量血清中ALT的活力。
结果会以单位/升（U/L）的形式报告。
正常情况下，成人男性的ALT浓度应在10-40 U/L之间，女性的ALT浓度应在7-35U/L之间。
但这些数值还受到年龄、体重、性别和肝脏状态等因素的影响。
因此，在解读ALT浓度时，医生还需要考虑患者的其他情况。
ALT浓度的升高程度也是确定病情的重要指标之一。
一般来说，当ALT浓度超过正常范围的两倍以上时，就可以诊断为肝炎或其他肝病。
此外，还有一种称为谷草酰转移酶（AST）的酶，也与肝脏有关，但其升高程度不如ALT明显。
需要注意的是，虽然ALT浓度升高可能表明肝脏病变，但不能单独确定肝病的类型和严重程度。
医生还需要进行其他检查和评估，例如肝脏超声、CT扫描、肝组织活检等，以帮助确定具体的病情。
总之，血清中ALT活力测定是一种常见的实验室检测方法，通常用于评估肝脏功能和诊断肝病。
需要注意的是，结果需要结合患者的其他情况进行解读，以便更准确地诊断和治疗肝病。
实验六肝脏谷丙转氨酶活力测定
肝脏谷丙转氨酶活力测定进入实验室要注意的问题安全第一，在实验室中使用挥发性试剂时应在通风橱中进行，以免发生中毒事件；不得在实验室中随意使用明火，因为实验室中有许多易燃易爆药品，使用明火可能引起火灾或引发爆炸事件；不得在实验室吃东西，实验结束后也应将手洗净再吃东西。
在实验室中不得嬉戏打闹，更不得用实验药品互相开玩笑。
实验中使用药品应尽量节约，不得浪费药品，未使用完的药品因倒人废液缸或指定的容器中，切不可倒入原试剂瓶以免污染试剂。
实验完成之前不能离开实验室，如有特殊原因要离开需经实验室负责人批准才能离开。
每个实验台内的各种仪器的摆放顺序要牢记，离开实验室前要将仪器按顺序摆放好。
养成一个好的习惯。
一．实验目的了解转氨酶的性质及临床意义，并掌握谷丙转氨酶活力的测定方法二．实验原理在氨基酸的分解代谢过程中，联合脱氨基为大多数氨基酸的主要代谢方式，通过转氨基作用与氧化脱氨基的作用偶联而完成。
本实验以丙氨酸和ā-酮戊二酸作为谷丙转氨酶的作用的底物，利用内源性磷酸吡哆醛作为辅酶，在一定条件及时间作用后来测定所生成的丙酮酸的含量来确定其酶的活力。
丙酮酸能与2，4二硝基苯肼结合，生成丙酮酸-2，4二硝基苯腙，后者在碱性条件溶液中呈棕色，基吸收光谱的峰为439-530nm，可用于测定丙酮酸的含量。
ā--酮戊二酸与能与2，4二硝基苯肼结合，生成相应的苯腙，但后者在碱性溶液中的吸收光谱与丙酮酸二硝基苯肼稍有差别，在520nm波长处ā--酮戊二酸二硝基苯腙的吸光度远比丙酮酸2，4二硝基苯腙为低，因此在520nm处吸光度增加的程度与反应体系中的丙酮酸和ā--酮戊二酸的摩尔比基本上呈线性关系。
故可籍此可测定谷丙转氨酶的活力。
三、实验器材容量瓶100ml 4个500ml 2个；电子天平；玻璃棒；研钵；试管5支；试管架；移液管0.5ml 2支；1ml 2支；5ml 1支；滴管1支；分光光度计，比色皿4个；四.实验试剂1标准丙酮酸溶液：准确称取纯化的丙酮酸钠62.5mg，溶于100ml 0.05mol/L H2SO4中，现用现配。
肝脏谷丙转氨酶活力测定河北科技大学大学英
实验教学教案首页肝脏谷丙转氨酶活力测定（验证性）相关知识１．酶的提纯基本操作程序及基本原则２．酶的活力单位（IU ）的定义及酶活力的测定（酶的定量测定） ３．测定酶活力一般经如下几个步骤①选择适宜的一定浓度的底物。
②确定酶促反应的条件。
优化条件③将一定量的酶液和底物溶液混合，确定反应时间（因要测定酶促反应初速度） 。
④反应到一定时间后取出反应液终止反应。
⑤测定产物的生成量。
⑥计算酶活力、酶的比活力。
４．酶的比活力－－表示酶纯度的指标⏹ 每单位酶蛋白所含的活力单位数。
对固体酶：比活力＝活力单位/mg 酶蛋白对液体酶：比活力＝活力单位/ml 酶液 ⏹ 比活力越大，酶的活力越大，含酶量或有活性的酶量越多。
５．总活力、纯化倍数和回收率 ６．酶活力测定方法—不同酶选用不同的方法７．氨基酸转氨基作用、联合脱氨基作用８．谷丙转氨酶及临床意义: 查肝功为什么要抽血化验转氨酶指数呢？谷丙转氨酶（ALT ）和谷草转氨酶（AST ，GOT ）是人体内糖和蛋白质互相转变所需的酶，人再生体内分布广泛。
ALT 的分布以肝中最高，主要存在于肝细胞浆中，AST 存在于肝细胞浆和线粒体内。
其次是肾、心、骨骼肌、脾等。
AST 的分布则以心肌最高，其次为肝、骨骼肌、肾脏等。
①谷丙转氨酶为细胞内酶，血清中活性很低，各组织器官中以心和肝的活性最高。
当某种原因使细胞膜通过性↑，转氨酶可大量释放入血液，血清中转氨酶活性↑↑。
②抽血化验若转氨酶比正常水平偏高则有可能肝组织受损破裂，肝细胞的转氨酶进入血液。
（结合乙肝抗原等指标进一步确定是什么原因引起的）③常作为疾病诊断、观察疗效和预后的指标： 急性肝炎：S-GPT ↑↑、S-GOT ↑ 心肌梗塞：S-GOT ↑↑一、实验目的１．了解转氨酶的性质及临床意义 ２．掌握谷丙转氨酶活力的测定方法 二、实验原理联合脱氨基作用是大多数氨基酸的主要代谢方式，通过转氨基作用与谷氨酸氧化脱氨基作用偶联而完成。
肝脏谷丙转氨酶活力测定
一、实验目的
掌握谷丙转氨酶的测定方法。
二、实验原理
谷丙转氨酶作用于丙氨酸及α-酮戊二酸，生成谷氨酸与丙 酮酸。丙酮酸与2.4-二硝基苯肼作用，生成二硝基苯腙，此 物在碱性溶液呈红棕色，与经同样处理的标准丙酮酸比色， 求得丙酮酸的生成量以表示酶的活性。
C O O H 500：标准丙酮酸浓度 2.
37℃ 水浴5 分钟
0.1
0.1（标准丙酮酸） 0.1
混匀后 37℃水浴 准确保温30分钟
0.1（H2O）
0.5
0.5
0.5
0.5
——
——
0.5
0.5
混匀后 37℃水浴 准确保温20分钟
各加5ml ，混匀，静置10min，读A 520nm 0.000
六. 附注
➢2.4-二硝基苯肼与丙酮酸的颜色反并不是特异 性的，α-酮戌二酸也能与2.4-二硝基苯肼作用而 显色。 ➢2.4-二硝基苯肼身也有类似的颜色，因此空白 管颜色较深。
2）每g 肝脏谷丙转氨酶活力单位（U/g）
掌握谷丙转氨酶的测定方法。
C H 4-二硝基苯肼与丙酮酸的颜色反并不是特异性的，α-酮戌二酸也能与2. 2 2）每g 肝脏谷丙转氨酶活力单位（U/g） C H 2 C H 3 5μg 丙酮酸为一个谷丙转氨酶活性单位。
S ×2.
C H N H 新鲜肝脏（购买或取活的小白鼠肝脏） 2 5：谷丙转氨酶换算单位 C O O H 2）每g 肝脏谷丙转氨酶活力单位（U/g）
四. 实验试剂
1.标准丙酮酸 现配 2.谷丙转氨酶底物 4℃，1周
二硝基苯肼溶液
6.新鲜肝脏（购买或取活的小白鼠肝脏）
五、实验步骤
1.肝匀浆
处理：20g 肝先用生理盐水洗净，滤纸吸干水，再用预冷的0.1M pH7.4 PB捣
临床检测--谷丙转氨酶活性的测定
如何测定酶的活性? 活性单位定义中必须规定哪些条件?
卡门氏单位的定义为：
在紫外分光光度计中，1ml血清(反应溶液总量为 3ml)在340nm波长下，用内径为1.0cm的比色皿，在 25℃，1分钟内生成的丙酮酸，在乳酸氢酶催化下， 使NADH+H+变成NAD+，使光密度下降0.001为1个 转氨酶活性单位。 丙氨酸 + α-酮戊二酸 GPT 谷氨酸 + 丙酮酸
相当于GPT活性(卡门氏单位) 0.00 28 57 97 150 200
37℃水浴预温5分钟，各管加2,4-二硝基苯肼0.5ml混匀， 再在37℃水浴中放置20分钟后，各管加0.4mol/L NaOH溶 液5ml，混匀放置10分钟后，以蒸馏水调零点，用520nm波 长比色，读取各管光密。.
各管的读数均减去对照管(O管)的光密度，然后以光密度值 为纵坐标，各管相应的转氨酶活性单位为横坐标，绘制标准 曲线。
实验操作
1. 标准曲线的制作:
0
1
2
3
4
5
丙酮酸标准液(ml)
0.00 0.05 0.10 0.15 0.20 0.25
ALT底物试剂(ml)
0.50 0.45 0.40 0.35 0.30 0.25
0.1M磷酸盐缓冲液pH7.4(ml) 0.10 0.10 0.10 0.10 0.氨酶的测定有何临床意义？
2.血清谷丙转氨酶的测定有何注意点？为什么要 避免溶血？
5.0
混匀，在室温中放置10分钟，以蒸馏水调零点，用 520nm波长比色，读取光密度。用T-C管的光密度查标准曲 线，即得到待测血清中所含ALT的酶活性。
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或 组织捣碎机 2. 37℃水浴 3. 分光光度计 4.比色皿
四. 实验试剂
1.标准丙酮酸 2.谷丙转氨酶底物 3.0.1M pH7.4 PB 4.0.02% 2,4-二硝基苯肼溶液 5.0.4M NaOH 6.新鲜肝脏（购买或取活的小白鼠肝脏）
五、实验步骤
1.肝匀浆
COOH CH 2 2 C O COOH COOH CH 2 CH 2 C H N H2 COOH GPT CH
C H3 CHNH 2 COOH
C H3 C O COOH N O2 H2N H N
2,4-二硝基苯肼
CH 3 C N COOH H2 O N O2 NH
N O2 N O2
丙酮酸二硝基苯腙
3.计算
每ml肝匀浆谷丙转氨酶活力单位（U/ml） D = （A—B）× 2 S ×2.5 说明：A：样品A 520nm B：对照A 520nm 2：标准丙酮酸浓度 2.5：谷丙转氨酶换算单位
S：标准A 520nm
五、实验步骤
试管 试剂(ml) 谷丙转氨酶底物 肝匀浆 2.4-二硝基苯肼 谷丙转氨酶底物 0.4M NaOH A 520nm 测定管 （A） 0.5 标准管 （S） 0.5 对照管 （B） —— 空白管 —— 0.1（H2O） 0.5 0.5
称取0.5g 肝脏，剪成小块，加入预冷的pH7.4的PBS 4.5ml，在冰水浴中制成 10%的匀浆， 4000rpm冷冻离心10分钟后保存在冰水中备用。
2. 谷丙转氨酶活力的测定
1）取4支试管，标注名称，按照下表操作 2）计算酶活力 本法规定：酶在37℃ 与底物作用30分钟，产生2.5μg 丙酮酸为一个谷丙转 氨酶活性单位。
37℃ 水浴5 分钟 0.1 0.1（标准丙酮酸） 0.1 混匀后 37℃水浴 准确保温30分钟 0.5 0.5 0.5 —— —— 0.5 混匀后 37℃水浴 准确保温20分钟 各加5ml ，混匀，静置10min，读A 520nm
0.000
六. 附注
2.4-二硝基苯肼与丙酮酸的颜色反并不是特异 性的，α-酮戌二酸也能与2.4-二硝基苯肼作用而 显色。
2.4-二硝基苯肼身也有类似的颜色，因此空白
管颜色较深。
肝脏谷丙转氨酶活力测定
一、实验目的
1．掌握测定谷丙转氨酶（GPT或ALT）的活力的方法。 2．熟悉分光光度计的使用。
二、实验原理
谷丙转氨酶作用于丙氨酸及α-酮戊二酸，生成谷氨酸与丙
酮酸。丙酮酸与2.4-二硝基苯肼作用，生成二硝基苯腙，此 物在碱性溶液呈红棕色，与经同样处理的标准丙酮酸比色， 求得丙酮酸的生成量以表示酶的活性。