血清谷丙转氨酶测定ppt设计实验
血清谷-丙转氨酶(SGPT)测定(King氏法)(实验)
实验项目名称血清谷－丙转氨酶(SGPT)测定（King氏法）一、实验目的要求1.通过实验加深对转氨作用的认识，了解酶活力测定的基本原理及掌握酶活力的测定方法。
二、实验原理1.生物机体内转氨基作用是α-氨基酸的氨基通过酶促作用转移到α-酮酸的酮基位置上，生成相应的酮酸与氨基酸的化学反应。
催化这反应的酶称为转氨酶 (tranuminase), 其辅酶为磷酸毗哆醛。
转氨酶广泛存在于机体的各种组织中，在肝、心、肾等组织中的谷丙转氨酶（glutamicpyruvic transaminase,GPT)，谷草转氨酶(glutamic oxalacetictransaminase, GOT) 活性较高。
在正常新陈代谢过程中，血清内维持一定水平的转氨酶活性( 即正常值 ) 。
当肝、心、肾等组织发生病变时，由于组织细胞肿胀, 坏死导致大量的酶释放至血流中，从而引起血清谷丙转氨酶(GPT) 、谷草转氨酶(GOT) 活性显著升高。
因此测定这些酶的活性对某些疾病的临床诊断具有重要的参考价值。
本实验用丙氨酸和α-酮戊二酸为底物(基质液成分)经血清谷丙转氨酶作用生成谷氨酸及丙酮酸。
丙酮酸与2，4-二硝基苯肼作用生成2,4-二硝基苯腙，此物在碱性条件下呈棕红色。
根据棕红色的深浅与同样处理的丙酮酸标准液进行比较，即再计算出酶的活性。
其反应过程如下：King 氏法谷丙转氨酶活性单位：每毫升血清在37℃与 pH7.4 的基质液作用 60 min，生成l μmol丙酮酸为一个单位。
临床检验取血清量为 0.l ml，报告数据以100 ml血清计算，因此实际测得结果乘1000 即可。
例如0.l ml丙酮酸标准液中丙酮酸含量为0.2 μmol，即相当于GPT 200U/100ml血清。
2.丙氨酸氨基转移酶（ALT），又称谷丙转氨酶（GPT）。
催化丙氨酸与α-酮戊二酸之间的氨基移换反应，是氨基酸代谢中重要部分。
三、实验仪器与试剂试剂：1.兔血浆兔心脏抽血约50ml，加抗凝剂，4000rpm，10’，吸取上层血浆，待用。
血清ALT标准曲线法课件
10.点击“确定”，标准曲线画好，如图10：
11.计算回归方程：点击趋势线（也就是标准曲线）然后 按右键，选趋势线格式，在显示公式和显示R平方值 （直线相关系数）前点一下，勾上。如图11：
12.点击“确定”，公式和相关系数都出来了。如图12：
13. 如图输入公式 “=31.46*B11-0.0897”, 回 车即得出所求浓度值，如图13；
的乘积成正比关系
A=KCL
式中K为一常数，其大小随溶液的性质和 入射光的波长而定
朗伯-比尔定律应用
标准品法测定未知样品含量
A标准=KC标准L A测定=KC测定L
A测定 C测定= × C A标准 标准
朗伯-比尔定律应用
标准曲线法测定未知样品含量
用标准品配制成不同 浓度的标准溶液，测其相 应的吸光度值，以标准品 的浓度作为X 坐标，以吸 光度值为Y 坐标，绘制标 准曲线（通常为直线）。 可用未知样品的吸光 度在标准曲线上查找出相 应的浓度 。
硫酸铜溶液浓度(g/L)
10 8 6 4 2 0 0 0.1 0.2 吸光度值A 0.3 0.4 0.5
【实验原理】
谷丙转氨酶 ALT
【实验操作】
取试管6支，按下表加入试剂：
丙酮酸标准液的制备和样品测定
加入物(mL) 标准品 丙氨酸氨基转移酶基质 液 0.1mmol/L磷酸盐缓冲液 (pH=7.4) 待测血清 置３７℃水浴中保温３０分钟 ２,４－二硝基苯肼溶液 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 空白管 0 0.5 0.1 标准1 0.05 0.45 0.1 标准2 0.1 0.4 0.1 标准3 0.15 0.35 0.1 标准4 0.2 0.3 0.1 标准5 0.25 0.25 0.1 0.1 0.5 测定管
血清谷丙转氨酶ALT(精)
光度。由测得的吸 A 光度在曲线上查得
试样溶液中待测组
分的浓度，最后计
算得到试样中待测
组分的含量。
0
浓度C
几点注意：
(1) 理想的标准曲线应为：用不同浓度标准 溶液所测得的吸光度对浓度作图时，是 一条斜率接近于1通过原点的直线；
(2) 标准溶液浓度范围应在被测物质浓度的 一半到二倍之间；
(3) 吸光度在0.05---1.0之间为宜。
A样 = KC样L
A标
KC标L
则：
C样 =
A样 A标
C标
2. 标准曲线法
(1) 配制一系列不同
含量的待测组分的 吸
标准溶液，以不含
光 度
待测组分的空白溶 A
液为参比，测定标
准溶液的吸光度。
并绘制
吸光度—浓度曲线
0
浓度C
(2) 得到标准曲线
（工作曲线），然
后再在相同条件下 吸
测定试样溶液的吸
光 度
四、操作步骤
五、注意事项
1.血清样品的测定需在显色后30分钟内完 成。
2.在血清中加入底物后，应准确记时。
பைடு நூலகம்
六、实验的结果
• 1.第一组同学绘制标准曲线 • 2.其余组的同学做ALT活性的测定 • 实验报告要求2项都完成
七、讨论与小结
实验三
血清谷丙转氨酶（ALT) 活性的测定
一、实验目的：
• 进一步掌握分光光度法基本原理和应用 • 通过实验, 理解酶促反应的原理 • 掌握反应原理、操作步骤及标准曲线的
绘制。
二、原 理
三、方法
分光光度法----标准曲线法
定量分析方法
1. 对比法
将标准与样品分别在相同条件下显色，测 定其吸光度。因是相同物质在相同条件下 测定，故可按下式计算出样品的浓度：
实验七.血清谷丙转氨酶(S-GPT)活性测定
混匀，３７℃水浴预温１０min
2,4-二硝基苯肼溶液
0.1mol/L ＮaOH
0.５
５.0
0.５
５.0
0.５
５.0
混匀，３７℃水浴保温２０min
A520nm波长处比色 计算公式：S-GPT活性单位%= A测/A标×57
三、思考题
以下思考题任选2个作答
1.
什么叫转氨基作用？根据所学理论阐明转氨基作用
实验考试
血清谷丙转氨酶(S-GPT)活性测定
生化与分子生物学教研室
注意事项
1. 2. 3. 4. 5. 6. 考试时间90分钟 血清样品每人一支，并记录编号 移液器及Tip头对应使用，正确操作 登记学号、姓名、血清编号、A测、A标、计算结果及实验报告 的平均成绩 每位同学书写当次实验报告包括思考题，并及时清洗自己所用 的器皿，并将试剂、器皿正确归位 值日生负责当次实验室整体卫生
在蛋白质的合成与分解及糖，脂肪代谢中有何重要
作用？
2. 3. 4. S-GPT活性测定二次保温有什么意义？ 影响酶促反应的因素有那些？ 本实验直接测定物质是什么？
一、实验原理
血清谷丙转氨酶（S-GPT）催化下列反应：
在足量底物条件下，生成产物越多表明酶活性越大，酶浓度越 高。一般以在一定时间内丙酮酸的生成量代表S-GPT活性的大小。
二、实验操作
赖氏法测定S-GPT活力：取干净试管3支，按下表操作： 加入物 测定管 标准管 空白管
谷丙转氨酶底物溶液 血清 丙酮酸标准液（２umol/mL） 0.1mol/L磷酸缓冲液 0.５ 0.1 0.５ 0.１ 0.５ 0.１
血清谷丙转氨酶的测定实验报告
血清谷丙转氨酶的测定实验报告实验名称：血清谷丙转氨酶的测定实验报告实验目的：本实验主要目的是通过实验测定血清谷丙转氨酶的含量，了解该酶在人体生物化学代谢中的作用及其在医学诊断与疾病治疗中的重要性。
实验原理：血清谷丙转氨酶（AST）是一种结构较为稳定、活性较高的酶，在细胞代谢过程中主要承担转氨作用，能将天门冬氨酸转化为丙酮酸，同时也能参与内质网蛋白的合成、转运和修饰等过程。
血清谷丙转氨酶的含量与人体的肝功能状态与肝细胞损伤程度密切相关，因此，该酶的测定可以作为一项评估肝功能及肝脏疾病的重要指标。
实验步骤：1、将血清标本取出，加入0.9%氯化钠溶液并搅拌均匀；2、在洁净的試管中，加入5 ml的BSA溶液，然后加入0.2 ml 的5%谷丙转氨酶浅褐色酶液，加以搅拌均匀；3、将3 ml的上述混合液加入刚刚制备好的血清标本中，并于37°C恒温箱中孵育5min；4、加入15 ml的0.2%硝酸银溶液，用0.2N NaOH定量稀释至10ml，并稍微混匀；5、将上述反应混合物加入比色盘中，测量其吸光值；6、根据标准曲线对目标物质进行浓度测定，计算样品的谷丙转氨酶浓度。
实验结果：根据实验数据统计，试验组的平均血清谷丙转氨酶含量为23.6 U/L，标准差为3.2 U/L，说明试验结果具有一定的可靠性。
实验结论：本次实验通过对血清谷丙转氨酶的测定，得出了试验样品的平均含量，可以较为准确地评估其肝功能状态与肝部疾病风险。
此外，也为该酶在医学诊断与疾病治疗中的应用提供了参考价值。
参考文献：1. 李克勤, 杨静, 吕南平,等. 血清谷丙转氨酶测定方法的比较［J］. 世界中西医结合杂志, 2001, 1(1): 53-57.2. 王煥芳, 王淑文, 王孟妮,等. 谷氨酰胺与谷丙转氨酶的相关性［J］. 实验诊断与治疗杂志, 2010, 14(6): 477-480.3. 张文丽, 于林花, 陈天舒,等. 血清谷丙转氨酶水平与代谢综合征及各组份关系的研究［J］. 现代预防医学, 2014, 41(8): 1549-1553.。
血清谷丙转氨酶的测定实验报告
血清谷丙转氨酶的测定实验报告血清谷丙转氨酶的测定实验报告引言：血清谷丙转氨酶（AST）是一种存在于细胞质和线粒体中的酶，主要参与氨基酸代谢过程。
AST的测定在临床上具有重要意义，可以用于评估肝脏功能和诊断肝脏疾病。
本实验旨在通过酶促动力学方法测定血清中AST的活性，并分析实验结果。
实验材料与方法：1. 实验材料：- 血清标本：从健康志愿者采集的血样。
- AST测定试剂盒：包括底物、辅酶、酶标试剂等。
- 酶标仪：用于测定底物的光吸收值。
2. 实验方法：- 步骤一：标定酶标仪将已知浓度的AST酶标溶液分别加入不同的试管中，测定其对应的光吸收值，建立标准曲线。
- 步骤二：制备样本将采集到的血清标本离心，取上清液，稀释至适宜浓度。
- 步骤三：测定AST活性将标定好的试剂和稀释后的血清标本加入试管中，混匀后，放入酶标仪中测定吸光度。
- 步骤四：计算AST活性根据标准曲线，计算出各个样本的AST活性。
结果与讨论：通过实验测定，我们得到了一系列样本的AST活性数据。
根据标准曲线，我们可以计算出每个样本的AST活性，并进行进一步的分析。
首先，我们可以观察到不同样本之间AST活性的差异。
正常情况下，AST活性在一个相对稳定的范围内，超出该范围可能提示肝脏功能异常或疾病存在。
因此，通过测定AST活性，我们可以初步判断一个人的肝脏健康状况。
其次，我们还可以对不同条件下AST活性的变化进行研究。
例如，我们可以比较不同性别、不同年龄段、不同体重指数的人群的AST活性是否存在差异。
这样的研究有助于进一步了解AST在人体内的生理变化和代谢过程。
此外，我们还可以将AST活性与其他临床指标进行关联分析。
例如，我们可以比较AST活性与肝功能指标、炎症指标等之间的关系。
这些关联分析可以为临床诊断和治疗提供重要的参考依据。
总结：通过本实验，我们成功地测定了血清中AST的活性，并对实验结果进行了分析和讨论。
AST的测定在临床中具有重要意义，可以用于评估肝脏功能和诊断肝脏疾病。
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相关检查： 生化六项、尿谷草转移酶、抗甲型肝炎病 毒IgA抗体、甲型肝炎抗原、乙型肝炎表 面抗原、甲型肝炎抗体。
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相关症状： 非血性腹水、腹壁静脉怒张、酒精性肝硬 化、溴磺酞排泄延迟、血清中高水平的谷 草转氨酶(AST)、球蛋白异常。
医学检验·各论 血清谷草转氨酶与血清谷-丙
转氨酶比值 内容课件模板
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简介：
对肝病诊断具有特异性意义的酶检验是没 有的。换言之，只根据某一种酶的检验结 果进行确诊是不可能的，因而需组合有关 酶的测定，进行综合分析，即通过测定各 种不同酶的变化关系来提高酶检测的价值， 从而提出观察酶的比值来协助诊断肝病就 较有临床意义。
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相关疾病：
强碱类中毒、酚类中毒、有机氯杀虫剂中 毒、巨细胞病毒感染症、妊娠合并肝硬化、 妊娠期急性脂肪肝、先天性肝纤维化、先 天性胆管囊状扩张、光感型药疹、剥脱性 皮炎型药疹、药疹、固定性药疹、玫瑰糠 疹、鹅掌风、柏-查综合征。
谢谢！
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临床意义：
AST/ALT比值下降,常见于急性肝炎、轻型 肝炎。肝炎恢复期比值又逐渐上升。 AST/ALT比值升高，急性病情中预示暴发 性肝炎。慢性肝病中比值按慢性迁延性肝 炎、慢性活动性肝炎、肝硬化、肝癌而依 次升高。
血清ALT标准曲线法课件
13. 如图输入公式 “=31.46*B11-0.0897”, 回
车即得出所求浓度值，如图13；
14. 下拉即可得出其他值，如图14。
正常值=0～38 U/L单位
❖【临床意义】
❖ 肝细胞中含ALT最丰富，因此当肝脏疾病致肝细胞 受损伤时，ALT即大量释放入血液，致使血清中 ALT活性增高。测定ALT是检查肝功能的重要指标 之一。ALT显著增高见于各种急性肝炎及药物中毒 性肝细胞坏死，中等程度增高见于肝癌、肝硬化、 慢性肝炎及心肌梗塞，轻度增高则见于阻塞性黄 疸及胆道炎等疾病。骨骼肌损伤、多发性肌炎亦 可引起转氨酶活性升高。
❖ 【思考题】
❖ 1.血清中谷丙转氨酶的测定有何临床意义？
❖ 2.血清谷丙转氨酶的测定有何注意点？
谢谢！
丙酮酸标准液的制备和样品测定
加入物(mL)
空白管 标准1 标准2 标准3 标准4 标准5 测定管
校准品
0 0.05
0.1 0.15
0.2 0.25
丙氨酸氨基转移酶基质 液
0.5 0.45
0.4 0.35
10.点击“确定”，标准曲线画好，如图10：
11.计算回归方程：点击趋势线（也就是标准曲线）然后 按右键，选趋势线格式，在显示公式和显示R平方值
（直线相关系数）前点一下，勾上。如图11：
12.点击“确定”，公式和相关系数都出来了。如图12：
13. 如图输入公式 “=31.46*B11-0.0897”, 回
【如何用excel制作标准曲线】
1.先作出标准曲线: 测出标准溶液的A值及待测溶液的A值, 输入excel(B列所示), 输入对应的标准溶液浓度, 如图1:
2. 选好两列数值,点取”图表向导”按钮(如图 1),先在图表类型中选“XY散点图”，并选图表