血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)测定
赖氏法-ALT
赖氏法测定血清丙氨酸氨基转移酶【原理】L-丙氨酸 + α-酮戊二酸 α-丙酮酸 + L-谷氨酸 α-丙酮酸 + 2，4-二硝基苯肼 2，4-二硝基苯腙（红棕色，λ=505nm ）利用比色分析原理将样品显色与丙酮酸标准品配制成的系列标准液比较，求出样品中丙氨酸氨基转移酶（ALT ）活性。
【试剂】1．0.1mol/L 磷酸二氢钾溶液 称取KH 2PO 4 13.61g ，溶解于蒸馏水中，加水至1 000ml ，4℃保存。
2．0.1mol/L 磷酸氢二钠溶液 称取Na 2HPO 414.22g ，溶解于蒸馏水中，并稀释至1 000ml ，4℃保存。
3．0.1mol/L 磷酸盐缓冲液（pH7.4） 取420ml 0.1mol/L 磷酸氢二钠溶液和80ml 0.1mol/L 磷酸二氢钾溶液，混匀，即为pH7.4的磷酸盐缓冲液。
加氯仿数滴，4℃保存。
4．基质缓冲液 精确称取D-L-丙氨酸1.79g ，α-酮戊二酸29.2mg ，先溶于0.1mol/L 磷酸盐缓冲液约50ml 中，用1mol/L NaOH 调pH 至7.4，再加磷酸盐缓冲液至100ml ，4～6℃保存，该溶液可稳定2w 。
每升底物缓冲液中可加入麝香草酚0.9g 或加氯仿防腐，4℃保存。
配成200mmol/L 丙氨酸与2.0mmol/Lα-酮戊二酸基质缓冲液。
5．1.0mmol/L 2，4-二硝基苯肼溶液 称取2，4-二硝基苯肼（AR ）19.8mg ，溶于1.0mol/L 盐酸100ml ，置棕色玻璃瓶中，室温中保存，若冰箱保存可稳定2个月。
若有结晶析出，应重新配制。
6．0.4mol/L NaOH 溶液 称取NaOH 1.6g 溶解于蒸馏水中，并加蒸馏水至100ml ，置具塞塑料试剂瓶内，室温中可长期稳定。
7．2.0mmol/L 丙酮酸标准液 准确称取丙酮酸钠（AR ）22.0mg ，置于100ml 容量瓶中，加0.05mol/L 硫酸至刻度。
血清丙氨酸实验报告
一、实验目的1. 了解血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）在肝脏代谢过程中的作用。
2. 掌握血清ALT活性测定的原理和方法。
3. 学会运用分光光度法测定血清ALT活性。
4. 分析血清ALT活性与肝脏疾病之间的关系。
二、实验原理血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）是一种存在于肝脏细胞内的酶，主要催化丙氨酸和α-酮戊二酸之间的氨基转移反应。
当肝脏受到损伤时，ALT会大量释放到血液中，因此，血清ALT活性的测定对肝脏疾病的诊断具有重要意义。
本实验采用分光光度法测定血清ALT活性。
在实验中，ALT催化丙氨酸和α-酮戊二酸反应生成丙酮酸和谷氨酸。
丙酮酸与2，4-二硝基苯肼反应生成丙酮酸2，4-二硝基苯腙，该化合物在碱性条件下呈现棕色，可通过分光光度法测定其在特定波长下的吸光度，从而计算出ALT的活性。
三、实验材料1. 血清样本：取适量血清样本，置于冰浴中保存。
2. 试剂：丙氨酸、α-酮戊二酸、2，4-二硝基苯肼、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氢氧化钠等。
3. 仪器：分光光度计、移液器、试管、试管架等。
四、实验步骤1. 标准曲线的制作：分别配制不同浓度的丙酮酸溶液，加入2，4-二硝基苯肼和氢氧化钠，测定其在特定波长下的吸光度，绘制标准曲线。
2. 血清ALT活性的测定：取血清样本，加入丙氨酸、α-酮戊二酸、磷酸盐缓冲液和2，4-二硝基苯肼，混匀后置于37℃水浴中反应一段时间。
反应结束后，加入氢氧化钠终止反应，测定其在特定波长下的吸光度，根据标准曲线计算ALT的活性。
3. 结果记录与分析：记录实验数据，计算ALT的活性，分析ALT活性与肝脏疾病之间的关系。
五、实验结果1. 标准曲线的制作：绘制标准曲线，得到线性回归方程为y=0.0058x-0.0035，R²=0.998。
2. 血清ALT活性的测定：测定血清样本的ALT活性为540 U/L。
3. 结果分析：根据文献报道，ALT活性在正常范围内为0-40 U/L。
本实验中血清样本的ALT活性为540 U/L，明显高于正常范围，提示可能存在肝脏疾病。
血清丙氨酸氨基转移酶测定
血清丙氨酸氨基转移酶测定1 检验目的指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。
2 实验原理本试剂以国际临床化学会(IFCC)推荐方法为基础，所采用的反应原理与反应式如下。
⑴样本中的丙氨酸氨基转移酶（ALT）催化丙氨酸的氨基转换至α-氧代戊二酸，生成丙酮酸和L谷氨酸。
⑵丙酮酸被试剂中的乳酸脱氢酶（LDH）还原为L-乳酸的同时还原型辅酶I（NADH+ H+）被氧化为辅酶I（NAD+），而使波长340nm处的吸光度值下降。
通过对波长340nm处吸光度值的下降速率进行监测，即可测得样本中丙氨酸氨基转移酶（ALT）的活性。
(3)样本中内源性丙酮酸的干扰，可由试剂中的乳酸脱氢酶（LDH）在测定的延迟时间内快速、完全地消除，不会对测定产生干扰。
ALTL-丙氨酸 + -酮戊二酸丙酮酸 + L-谷LDH（乳酸脱氢酶）氨酸丙酮酸+ NADH + H+L-乳酸 + NAD+ + H2O3 标本3.1病人准备：12小时禁食。
3.2 类型：血清。
3.3. 标本存放：3天内的活性损失：2～8℃保存：<10%；15～25℃保存：<17%；标本稳定性：-20℃保存至少可稳定4周。
3.4 标本运输：常温条件下保存运输。
3.5 标本拒收标准：标本溶血、细菌污染的标本。
4 实验材料4.1 试剂：上海复星长征医学科学有限公司ALT试剂盒（沪食药监械（准）字2014第2400166号 YZB/沪 1546-40-2014）4.1.1 试剂组成试剂1 L丙氨酸 600mmol/L 乳酸脱氢酶＞1820U/L（R1）：NADH 0.26mmol/LTris缓冲液 80mmol/L试剂2（R2）：Tris缓冲液80mmol/L α氧代戊二酸36mmol/LEDTA 5.0mmol/4.1.2 试剂准备：试剂为即用式。
4.1.3 试剂稳定性与贮存：在2～8℃避光、密封的储存条件下，试剂盒自生产之日起有效期为12个月。
4.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。
丙氨酸氨基转移酶检测方法
丙氨酸氨基转移酶检测方法丙氨酸氨基转移酶(ALT)是一种重要的肝脏酶,也是一种常见的生化指标。
检测方法通常用于判断肝脏功能的健康程度和疾病的演变趋势。
下面，我们将对丙氨酸氨基转移酶检测方法进行详细的阐述。
一、常规检测方法常规检测方法是指采用血清学方法检测ALT水平。
具体步骤如下：1.患者空腹4～8小时。
2.采集3～5ml静脉血标本，禁止吸烟和饮酒。
3.将血样放于离心管中，进行离心处理，得到血清样本。
4.通过检测仪器检测血清ALT酶的含量。
二、生物传感器检测方法生物传感器检测方法可以检测非常低的ALT水平，可以提供更加精确的测试结果。
具体步骤如下：1.准备含有具有高选择性的生物传感器的电极。
2.采集患者的静脉血标本。
3.将血样与生物传感器电极接触并依据特定的工艺条件进行分析。
4.通过仪器获得ALT的浓度明确的结果。
三、免疫学方法免疫学方法采用免疫学技术分析ALT特定抗体的含量。
具体步骤如下：1.准备特定的抗ALT抗体试剂。
2.采集患者的静脉血标本。
3.加入抗ALT抗体图谱，进行特异性反应，每个抗原对应一个抗体。
4.使用适当的试剂盒，对空白对照样品和样品进行ELISA测定。
5.通过光学振荡仪读取ALT特定抗体的含量并获得浓度明确的结果。
综上所述，以上列出的三种方法都是常用的丙氨酸氨基转移酶检测方法。
针对不同的病情和检测需求选择不同的检测方法非常重要。
总之，如果您的ALT测试结果不正常，医生会建议您进一步进行了解。
您可以向医生咨询，了解其他可能涉及的测试方法和预防方法。
血清丙氨酸氨基转移酶测定
血清丙氨酸氨基转移酶测定1.实验原理国际临床化学学会(IFCC)推荐的紫外连续监测法。
ALTL-丙氨酸+ -酮戊二酸丙酮LDH（乳酸脱氢酶）酸+ L-谷氨酸丙酮酸+ NADH + H+L-乳酸+ NAD++ H2O 上述偶联反应中，NADH的氧化速率与`样品中ALT的活力成正比,在340nm处NADH呈现特性吸收峰，而NAD+则没有。
因此，可在340nm监测吸光度的下降速率（-△A/min）,计算出ALT的活性单位。
2. 标本：2.1 病人准备：12小时禁食。
2.2 类型：血清，肝素或EDTA血浆。
3. 标本存放：3天内的活性损失：2～8℃保存：<10%；15～25℃保存：<17%；标本稳定性：-20℃保存至少可稳定4周。
4. 标本运输：常温条件下保存运输。
5. 标本拒收标准：标本溶血、细菌污染的标本。
6. 实验材料6.1 试剂欧泰克ALT测定试剂盒6.1.1 试剂组成Tris缓冲液pH 7.4 80mmol/LL-丙氨酸800mmol/LLDH（乳酸脱氢酶）≥1200U/La-酮戊二酸18mmol/LNADH 0.18mmol/L6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。
6.1.3 试剂稳定性与贮存：试剂保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。
试剂不可冰冻。
6.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。
6.1.5 注意事项：试剂中含叠氮钠（0.95g/L）为防腐剂。
不可入口！避免接触皮肤及粘膜。
应采取必要的预防措施使用试剂。
6.2 校准品：使用罗氏公司提供的校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。
6.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。
7. 仪器：日立7060生化分析仪8. 操作步骤8.1 项目基本参数：参见生化检验日立7060生化分析仪项目测定参数.SOP文件8.2 仪器操作步骤：参见生化检验日立7060生化分析仪操作规程.SOP文件9. 检验结果的判断与分析10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。
丙氨酸氨基转移酶
丙氨酸氨基转移酶(ALT)1．检测目的规范丙氨酸氨基转移酶(ALT)检测实验，确保检测结果的准确性和重复性。
2.标本采集(1)ALT测定可以采用血清、肝素或EDTA抗凝血浆。
(2)稳定性：在室温(20℃)可以保存48小时，在4℃冰箱可保存l周，在一25℃以下可保存1个月。
(3)建议使用带分离胶的真空采血管，并及时分离血清。
3.测定方法(1)方法：速率法(2)原理：在ALT速率法测定中酶偶联反应式为L一丙氨酸+α一酮戊二酸 A L T 丙酮酸+L一谷氨酸丙酮酸+NADH+H+L D H L一乳酸+NAD++H20上述偶联反应中．NADH的氧化速率与标本中酶活性呈正比，在340nm波长处，NADH呈现特征性吸收峰，而NAD+则没有。
因此，可在340nm处连续监测吸光度的下降速率( - △A／min)，计算出ALT的活性单位。
4.试剂试剂成份实验深度RⅠa-酮戊二酸NADH乳酸脱氢酶(LDH)15mmol/l0.18mmol/l≥5000U/LRⅡTris缓冲液（PH7.3)L-丙氨酸100mmol/L 500mmol/L5.校准(1)校准物的准备与保存，严格按照购置说明执行。
(2)校准频率：①新仪器设备在开始使用时；②设备进行重要维护保养以及发生故障维修之后；③试剂盒在仪器上28天后；④试剂批号更改后；⑤更换试剂厂家后；⑥由室内质控结果决定；⑦定期校准，可由实验室根据检测系统(仪器与试剂)的情况自行决定校准周期。
6质量控制(1)质控品：质控品应选择稳定、瓶间差小、基质效应小的物质。
同时，因为是定量检测项目，所以应选择两个不同浓度水平的质控品，这样有利于在不同的医学决定性水平上监测方法的性能。
(2)质控方法的选择：备选的质控规则如下：12s(一个质控结果超出i±2SD为违背此规则，提示警告)。
13s(一个质控结果超过i±3SD为违背此规则，提示失控，存在随机误差)。
22s(两个连续质控结果同时超过i±2SD，提示失控，存在系统误差)。
血清丙氨酸氨基转移酶测定
方法学评价： 血清中也含有酮酸及LDH，可以消耗 NADH而使测定结果偏高。 对策：采用过量的NADH（终浓度 0.14~0.2mmol/L），将血清同不含α-酮戊二酸 的所有试剂一起预温，使其他副反应充分进行， 再加入α-酮戊二酸以启动酶反应，监测光吸收 的变化，可完全排除这种干扰。
定时比色法
国内采用的比色测定法有三种： 赖氏法（30min） 金氏法（60min） 改良穆氏法（30min） 三种方法的原理、试剂、操作步骤和酶作用温度 都相似，单位定义和标准曲线绘制方法有差异。
1.
2.3.Biblioteka 国内较多采用赖氏法，其优点为： 标准曲线中两种酮酸的量客观地反映了酶作 用的实际情况； 标准曲线上单位的数字准确地反映出酶活力 的大小； 测定结果可以直接与分光光度法相比较。
赖氏法原理： 赖氏法原理： 丙酮酸和α-酮戊二酸在血清ALT的作用下生成丙 酮酸和谷氨酸，在酶反应到达规定时间内，加入溶于 酸的2，4-二硝基苯肼终止酶反应，并分别与产物丙酮 酸和剩余底物α-酮戊二酸生成相应的二硝基苯腙，在 碱性条件下均呈红棕色，二者吸收光谱在505nm处差 异最大，丙酮酸苯腙的呈色强度约为α-酮戊二酸苯腙 的3倍，据此可算出丙酮酸的生成量，推算出ALT的酶 活力。
血清丙氨酸氨基转移酶测定
转移酶（transferases）
催化特定的基团从一种底物转移到另一种底物 的酶。 反应代表式为： AB+C A+BC B为被转移的基团，如氨基（—NH2）等
转氨酶（transaminase）
又称氨基转移酶。 大多数转氨酶是催化α-氨基酸的氨基转移 到α-酮酸的酮基上，产生另一种α-酮酸和α-氨基 酸。
临床意义 ALT常作为判断肝细胞损伤的灵敏指标。 1、急性病毒性肝炎，可观察病情发展，作预后 判断。 2、慢性病毒性肝炎或脂肪肝，正常或轻度增高。 3、肝硬化、肝癌时，ALT轻度或中度增高，提 示可能并发肝细胞坏死。 4、其它原因引起的肝脏损害、骨骼肌损伤、多 发性肌炎等亦可引起ALT增高。
血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)活力测定5页
血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)活力测定5页一、实验目的1. 掌握测定血清ALT活力的方法和原理。
2. 熟悉ALT在肝脏功能监测中的重要性。
二、实验原理ALT是一种酶，分布在人体的细胞内，主要存在于肝脏、心肌、骨骼肌和肾脏等组织中。
正常情况下，ALT主要在肝脏中发挥作用。
当肝脏受到损伤时，ALT会释放到血液中，导致血液中ALT活力的升高。
因此，测定血清ALT活力是一种常用的肝功能检测方法。
本实验使用比色法测定血清ALT活力。
利用谷草-丙氨酸转移酶测定(AST)所产生的谷草酸，和血清ALT催化产生的丙酮酸反应，生成2,4-二硝基苯胺，其吸光度与丙酮酸的浓度成正比。
由此计算出血清ALT活力。
三、实验步骤1. 将标准品和待测血清样品准备好，室温恢复至20-25°C。
2. 取比色管，在无菌条件下加入以下试剂：2.5ml缓冲液pH7.5、0.25ml 10mmol/L 肌酸盐缓冲液、0.2ml5.5mmol/LNADH、0.2ml2mol/L丙酮酸、0.1ml3%的PEG，混匀。
3. 加入待测血清样品1ml，立即混匀。
4. 马上读测吸光度(Zero)。
5. 在37℃恒温箱中孵育10分钟。
6. 然后再读一次吸光度。
7. 加入ALT试剂，混匀，孵育60秒钟。
8. 反应结束后7分钟内，读取吸光度值，记录。
9. 将标准品同样操作，测定吸光度，计算样品中ALT活力的单位(L_0.9)四、实验注意事项1. 实验中的所有仪器、试剂、杯器等都要事先清洗干净，确保无污染。
2. 实验操作应在干燥、无尘、无异味的净化房间内进行。
3. 操作过程中要注意保持常温。
4. 实验中的吸光度必须在规定时间内完成测定，避免影响结果。
5. 测定前，必须保证血清样品无血浆外渗。
6. 测定期间谨慎操作，防止试剂泼溅，注意安全。
五、实验结果分析ALT活性测定值与肝损伤的程度有一定的相关性。
当ALT活性超过健康人参考范围时，说明肝脏功能出现异常，可能出现肝炎、脂肪肝等肝病状况。
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比色法的基本原理
朗伯-比尔定律: A=KLC 即吸光度A与溶液的浓度C和 溶液的厚度L的乘积成正比关 系 。 在其他条件相同时，溶液的 浓度越大或是厚度越大，则溶 液对光的吸收越强（光密度越 大），而透光度则越小。
比色法的基本原理
当一束单色光通过同一有色溶液的两种不 同浓度的溶液时，可得出下列两式： 标准管：A标=KC标L 测定管：A测＝KC测L 则
C测=A测/A标 ×C标
实验原理
谷丙转氨酶 ALT
α- 酮戊二酸二硝基苯腙(干扰)
实验操作
取试管4支，按下表加入试剂：
静置10分钟，在520nm 下读取各管吸光度。
计算
活力单位：1ml 血清于37℃ 条件下与底物作 用30min产生2.5μg丙酮酸为一个1ALT单位。
C测(ug/ml )=
A测- A测空 A标- A标空
×
C标(100ug/ml)
ALT活力单位/ml=
1ml血清产生的丙酮酸ug数(C测)
2.5ug
生理意义
ALT广泛存在于一般组织细胞中,肝细胞中此 酶含量最多。肝炎、中毒性肝细胞坏死等肝病时， 血清中此酶活性增加，其他疾病如心肌梗塞、心 肌炎等亦有增高。故血清谷丙转氨酶活性得测定 在临床诊断上具有重要意义。
血清丙氨酸氨基 转移酶 （ALT）测定
目的要求
掌握ALT活性测定的基本原理; 掌握比色法的原理和分光光度计的使用 方法; 了解ALT活性测定的临床意义。
比色法的基本原理
比色分析法是通过比较溶液
颜色深浅来测定物质浓度的方法。
比色法的基本原理
当一束单色光通过有色溶液时， 由于溶液吸收了一部分光线， 透过光的强度就减弱。 透光率：T= I/ Io 吸光度(A) : A=-lgT=-lg (I/ Io) 溶液的透光率越大，说明对光 的吸收越少；反之，透光率越 小，说明对光的吸收越多;T值 越小，A值越大。
正常值：2-40单位/ml。
分光光度计的结构和使用
分光光度计的基本原理：利用比 色法的原理，采用棱镜或光栅等 分光器从含有各种波长的混合光 中获得纯度较高的单色光来测量 未知溶液的浓度的仪器称为分光 光度计。
分光光度计的结构和使用
722型分光光度计原理图和仪器图
722型分光光度计
722型分光光度计
Hale Waihona Puke 722型分光光度计722型分光光度计