生化课后思考题参考答案要点

聚丙烯酰胺凝胶电泳分析小麦幼苗过氧化物酶同工酶实验的思考题要点：

1、关于电极缓冲液能否回收再用的问题：

从电极缓冲液的作用及电泳后其变化去分析。

电极缓冲液作用主要有两点：“导体”及在浓缩效应中提供慢离子。

据此：不能混合回收使用。因为电泳之后，前后槽的缓冲液的成分和pH值都发生了变化，尤其正极槽一侧掺入了Cl-，混合后的电极缓冲液中就有了Cl-，这将会破坏浓缩效应。而在实际中：由于电极缓冲液使用量大，从经济效益和实验效果均衡考虑，一次电泳之后，负极槽一侧损失少量甘氨酸、pH值略有上升，但变化不大，若单独回收还用于负极，则应该可以保证浓缩效应所要求的慢离子的特点。而正极一侧虽然掺入了Cl-，但若也单独回收还用于正极一侧，Cl-就不会影响浓缩效应。这样，分槽回收分槽使用，再使用一两次应该是可以的。或混合回收只用于正极槽，而负极槽使用新鲜配制的缓冲液，也是可以的。当然，随着使用次数的增加变化大了效果当然就不能保证了，所以一般就是再使用一到两次。

2、40%蔗糖的作用

由电泳槽回路的形成我们知道，负极的电极缓冲液与浓缩胶必须相连，这样样品槽完全浸没在缓冲液中，如何上样？？而蔗糖的加入增加了样品的密度，方便上样，使样品不会对流扩散。同时所形成的高渗透势环境对蛋白质的结构具有保护维持的作用。所以电泳的样品缓冲液里都含有终浓度一般为20%的蔗糖或者甘油。当然这两种物质的选择加入也不是随意的哦，这也是电泳发明过程中科研人员所曾经面临的一个难题，大家利用假期可以去寻古探幽，一定会得到很多极具启发性的发现的。

3、利用电泳技术获得好的实验结果的关键环节：

凝胶浓度和交联度、缓冲体系、样品制备、电泳状态、检测手段。