细胞污染图片
支原体污染及其检测
支原体污染及其检测支原体污染在细胞培养中最为常见，培养体系中支原体污染的最可能途径是经已被支原体污染的细胞蔓延和传扬，据报道目前约有11％的二倍体细胞和传代细胞存在支原体污染；支原体污染的另一重要来源是培养液中加入了被支原体污染的血清。
支原体是一种介于细菌和病毒之间的能自立生活的微生物，它无细胞壁，形态呈多形性。
最小的支原体直径约200nm，可通过滤菌器。
支原体污染后培养基普通不发生混浊，细胞形态无显然变幻，但事实上细胞已受到各方面的潜在影响，如影响DNA合成，代谢减慢，生长被抑制等。
这种污染造成的危害较大，但支原体污染不易被发觉，因此对支原体的污染必需引起足够的重视，应严加防范。
支原体污染常用的检查办法如下。
1．形态学检查常用相差显微镜检测取洁净载玻片，滴加少许待检的细胞悬液，压上盖片，用相差显微镜油镜观看。
如有支原体污染，镜下可见暗色极小颗粒，类似布朗运动，可位于细胞表面或细胞之间。
要注重支原体与细胞破裂后溢出的内容物如线粒体等相区分。
电镜检测：用普通染色办法难以确定时，可用电镜检查。
详见电子显微镜技术一节。
2．支原体染色镜检支原体经低张处理后用地衣红染色观看，本法简便易行，不仅适用于检测支原体，亦可用于检查真菌和细菌。
【材料】 (1)待检疑有支原体污染的培养物； (2）检测用试剂：低张处理液（0.45%），Carnoy固定液（配方：60ml纯加30ml和10m1）,2％的地衣红染液（配方：2g地衣红，60ml加蒸馏水至100m1 )。
【办法】 (1)取材：吸取待检培养液1 ml, 500～800r/min，离心5分钟后去上清液，余留0.2m1备用。
(2）低张处理：用新奇配制的0.45％溶液0.2m1，加入上述待检标本中，静止低张处理10分钟，然后离心去上清液，留取沉淀物0. 2m1，涂片2～3张，晾干。
(3）固定：用新配制的Carnoy液固定2次，共10分钟。
(4）染色：将晾干的涂片用2％的地衣红染5分钟。
细胞培养中常见的问题
细胞培养中常见的问题2006-11-23 15:53细胞中的颗粒到底是怎么回事？我的细胞总有颗粒，开始是细胞中有，后来细胞之间也好像有许多颗粒。
好像是细胞碎片一样。
是什么东西啊？是支原体污染吗？这可是我刚买回来的细胞啊!我们实验室也有这种情况，是不是黑的小碎片，有人说是细胞代谢产物，后来拿到高倍镜下看还会动，就怀疑是污染了，也想问问大家到底是什么是黑色的小碎片。
我没注意到它会动，只是觉得不像是活的微生物。
我觉得是由于某种污染或外界因素导致的细胞状态变差，裂解出的东西。
但是，是什么东西不清楚。
的确很常见在以前帖子见到说是“黑焦虫”。
长时间培养的很容易出现，我根据自己的经验估计是一种污染，因为随着黑点增多，本来生长旺盛的细胞逐渐停滞甚至死亡。
而且我后来原代培养的几批细胞并没有发现，我怀疑有好多细胞系本身就是污染的。
不过增加换液次数的情况下，好象一般不太娇气的细胞生长不是很受影响。
以前听很有经验的老师说黑焦虫是国产血清的问题，可以有条件换进口血清试试，或者离心一下也可能能解决问题。
那么所谓的“黑焦虫”到底是什么东西啊？有谁知道？我培养的细胞也出现过此中问题，放到高倍镜下看时有东西在动，但培养液不混浊，估计不是细菌污染，可能是血清问题，是支原体污染。
我培养的细胞也出现过这样的问题，我个人认为是一种支原体污染。
国产血清是罪魁祸首，因为只要将细胞饥饿一下，不超过24小时，这种东西就会疯长我培养的细胞也有出现这中情况。
但是并不影响细胞生长。
应该不是支原体污染最近，我复苏细胞细胞的时候也发现过这样的东西，尽管我用的是GIBCO的FBS，后来，每天换液之前洗几遍后，就慢慢变少，现在没了细胞培养的细菌污染我们新建的细胞室。
每周都会做清洁，用0。
2%新洁尔灭消毒，照紫外。
实验前也会照至少30分钟。
培养基中加青霉素，链霉素。
可是培养细胞时还是常有细菌污染，有时甚至分析不出原因。
用培养瓶还好一点，用多孔板或平皿就更凄惨。
SHENTEK
SHENTEK®细胞种属鉴别检测试剂盒（多重PCR法）说明书货号：1801940版本：A/0仅供研究用湖州申科生物技术股份有限公司⏹试剂盒简介细胞种属鉴别检测是重组细胞系的关键监管要求，以确认细胞系的起源物种，并检测是否存在其他细胞系的污染。
SHENTEK®细胞种属鉴别检测试剂盒利用线粒体基因细胞色素氧化酶Ⅰ（COⅠ）和细胞色素B（Cyt B）以及细胞色素氧化酶Ⅱ（COⅡ）作为生物制品生产过程中常用10种细胞系的分子鉴定靶标。
通过多重PCR技术可以根据给定的10组引物是否存在PCR扩增以及PCR扩增子的大小进行物种鉴定和交叉污染检测。
这10种细胞种属分别为：Bos taurus（牛）/Mus musculus（小鼠）/Canis familiaris（犬）/Rattus norvegicus（大鼠）/Cercopithecus aethiops（非洲绿猴）/Macaca mulatta（恒河猴）/Cricetulus griseus（中国仓鼠）/Felis catus（猫）/Homo sapiens（人）/Sus scrofa （猪）,与同工酶分析相比在检测细胞系交叉污染方面更敏感，交叉污染检测限可达到1%及以下。
⏹试剂盒组分表1.试剂盒组分组分产品号装量储存条件DNA Sizing Templates MIX NNA04825μL×2管-18℃及以下Cell Extraction Buffer NNB015 1.25mL×4管-18℃及以下2×Multiplex PCR Buffer NNB016320μL×2管-18℃及以下DNA Sizing Primers MIX NNC082120μL×2管-18℃及以下DEPC水NND0521mL×2管-18℃及以下⏹规格25Reactions×2。
⏹有效期规定储存条件下24个月，具体详见试剂盒标签。
初始污染菌检测讲义课件
衰亡期：稳定期后如再继续培养 细菌死亡率逐渐增加，以 致死亡数大大超过新生数，群 体中活菌数目急剧下降，出现 了“负生长”，此阶段叫衰亡期
稳定期：又称恒定期或最高生长期。处于稳定期 的微生物，新增殖的细胞数与老细胞的 死亡数几乎相等，整个培养物中二者处 于动态平衡，此时生长速度又逐渐趋向 零。
微生物操作技术－无菌环境是前提！ 无菌技术概念
真核细胞型 微生物
病毒 亚病毒因子
细菌 放线菌 衣原体 支原体等
真菌
原生生物
细菌形态特征
• 细菌个体形态
细菌是一类细胞细而短（细胞直径约0.5μm,0.5-5μm）、结 构简单、细胞壁坚韧以二等分裂方式繁殖和水生性较强的原核微生 物，分布广泛。 形态图
•细菌菌落形态
单个或少数细菌细胞生长繁殖后，会形成以母细胞为中心的 一堆肉眼可见、有一定形态构造的子细胞集团，这就是菌落。细 菌菌落常表现为湿润、粘稠、光滑、较透明、易挑取、质地均匀 以及菌落正反面或边缘与中央部位颜色一致等。细菌的菌落特征 因种而异。 可作为鉴定细菌种的依据。 菌落图
无菌技术
•分离技术
•划线分离法
组段间接种环的灭菌、冷却！
分段划线法
无菌技术
•金黄色葡萄球菌的保藏
增菌性培养 一般为冻干粉剂，安瓿 瓶密封包装。
选择性培养基分离菌种。 选择性培养基分离 菌种。
斜面接种、培养
低温保藏
无菌技术
•无菌器材
实验器材 灭菌器材 消毒器材
凡是检验中使用的器材，能灭菌处 理的，必须灭菌处理。如：玻璃器 皿、吸管、培养基、稀释剂、无菌 衣、口罩等，在使用前必须经过适 当方法灭菌，并在较洁净的环境中 保存备用。
凡检验用器材无法灭菌处理的，使 用前必须经消毒处理。如：无菌室 的桌凳、天平、工作台以及工作人 员的手等。
植物组织培养的污染问题
1、真菌的污染真菌(fungi) 一类没有叶绿素，异养的真核微生物。
除极少数种类是单细胞外，绝大多数是由多细胞组成的菌丝，结成一团的菌丝称菌丝体，菌丝分有隔菌丝和无隔菌丝两种。
有隔菌丝是由多个细胞组成，相邻的细胞之间由隔丝隔开。
在地球上广泛存在于空氣、水、土壤以及各類生物的體表或體內。
皆可有真菌生长。
大气中已知的真菌有11255属10万种，在室内常附着在物体表面，能自动或随人的活动而扩散。
种类丰富，分布广泛，繁殖快速，无处没有，无处不在。
一个季节繁殖4-5代，孢子可达1万亿个室内真菌种类：主要有芽枝孢霉属、曲霉属、铰链孢霉属、镰刀霉属、青霉属等，真菌数量的多少，与温度、湿度有很大关系。
真菌以腐生、寄生或共生的型式進行異營性生活。
釋放消化酵素於鄰近的環境，以分解食物成較小的水溶性分子進入細胞內消化。
並可於菌絲產生孢子以完成有性或無性繁殖。
真菌季节变化：春、夏季．尤其是南方的梅雨时节．温暖潮湿，非常适合真菌生长。
冬季室内真菌浓度较高。
空调加重污染：如果长期使用空调而不注意通风，可引起室内真菌污染。
室内有空调比没有空调情况下曲雾菌落数多4倍。
2、细菌（bacteria）的污染细菌是一类微小的单细胞生物，约有２０００多种。
从形态上看，细菌可以分成球菌、杆菌和螺旋菌３类。
细菌是无孔不入的微生物，儿童玩具、手机、计算机键盘和衣服上，甚至植入人体的医用植入物等（如心脏起搏器），都随时有可能沾染细菌，对人体造成危害。
为避免细菌的侵袭，科学家曾尝试用抗微生物材料生产各种用品，但效果不十分理想，因为这些材料虽然能杀死细菌，却充满化学物质。
细菌是处于生物和无生物之间的东西。
泥土里、水里、都市的空气里都有细菌散布着，多到50种以上。
三类细菌的形状：就是球形的，杆形的，及螺旋的。
球形的有的正圆，有的卵圆；杆形的有长有短，有的微弯螺旋形的也有长短和弯曲的转数多少的不同，有的生着细毛，毛长与短多少不定。
虽然概括地说，形状只有球形、杆形、螺旋形这几种，但细分起来，形状还是很不少。
组培污染
1、植物组培污染防治问题（1）污染的来源。
植物组培污染主要是霉菌、细菌和酵母菌引起的污染。
霉菌和酵母菌在培养条件下生长快，很容易观察到，而细菌潜伏期长，植物组织一般不表现症状，所以很难在前期和肉眼观察到[1]。
国外有关学者认为细菌污染的来源主要有三个：一是材料内部灭菌处理不好，这样造成的污染占污染总数的1/3～1/2。
二是在正常的灭菌的条件下，内生菌能够存活，这样的污染占污染源的1/4。
三是来自寄生植物的污染占1/4～1/2。
同时认为有些植物的昆虫和螨虫的体表带有霉菌的孢子和细菌，在九、十月份是重要的污染源，因多种植物昆虫处在大量繁殖阶段，此时大量昆虫造成的污染源最易造成组培污染的严重发生。
近六年来，我们通过对猕猴桃、樱桃、托柄菝葜及大花非洲菊初级培养污染的研究中发现，高温、多雨的环境更有利于污染的发生，而且随着植物材料年龄的增长，植物材料的健康状况不断恶化，组培污染也会更加严重。
另外，外植体的状况，环境条件和操作过程也是引起污染的主要原因。
（2）抗生素对细菌污染的防治。
植物组培污染的控制取决于灭菌技术、灭菌设备、外植体年龄和环境条件等许多方面。
尽管在植物组培过程中尽量使无菌条件更完善，但是污染还是经常发生，甚至有时整个实验室的组培苗突出污染而全部死亡，这是无法挽回的巨大损失，因此人们对细菌污染研究的较多。
细菌污染的消除有些研究人员希望用抗生素防治，抗生素可以直接加入到培养基中，也可以用抗生素喷洒或浸泡外植体。
但植物种类不同，所用抗生素的种类、浓度和处理时间也不同，还有的抗生素对污染消除根本不起作用，因此必须对不同植物采用不同的抗生素的种类、浓度和处理时间进行实验探讨。
一般情况下，为消除革蓝氏阳性菌对有些木本植物污染茎段组培苗，可在培养基中加入氨中噻肟头孢菌素、四环素、利福平和多粘菌素B分别以25mg/L、25mg /L、6mg/L和6mg/L浓度的混合物，可使细菌完全被消除。
另外，用头孢菌素Ⅱ和链霉素消除某些观赏植物外植体中的内生菌也有非常明显的效果。
流式细胞仪及细胞培养常见污染问题
流式细胞术计数法原理流式细胞术(fcm(Flow Cytometry Method))是对细胞和微粒进行快速、灵活、定量分析分类的高精技术，它融合了激光、电子计算机、单克隆抗体、荧光素化学、细胞化学染色等技术的优点。
其基本原理是以激光为光源，将被检细胞用荧光标记抗体结合后输入流式细胞仪，通过高速流动系统对细胞排列成行，一个一个的流经检测区，当细胞从流动室喷嘴处流出时，超声振荡搅动液流，使液流断裂成一连串均匀的小滴，每滴内最多只含有一个细胞，细胞经荧光探针的光反应和标记物的光散射能力中获取信息，由光电倍增管接收并转化成脉冲信号，并进行增强，数据经电脑处理、分辨细胞的类型从而检测出各类淋巴细胞。
检测方法标本使用抗凝全血，在falcon流式进样管内加入20ul t淋巴细胞cd3cd4cd8抗体和反向加样50ul全血，轻轻充分混匀，置室温避光处放置15min，加入10倍稀释facs （ fluorescence-activated cell sorting）溶血素450ul，置室温避光处放置15min。
用multiset 自动软件获取15000个淋巴细胞，自动分析t淋巴细胞免疫亚型，报告cd4+,cd8+t淋巴细胞百分率cd4+,cd8+t淋巴细胞绝对计数及cd4+/cd8+比值。
实验数据用spss 13.0软件包处理，数据采用均数±标准差（x±s）表示。
细胞培养中常见的污染情况总结如下: 常见的污染如下：1、细菌：细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状，根据感染细菌的不同，可有不同的外形，培养液一般会浑浊变黄，对细胞生长影响明显。
仔细检查一下器皿的灭菌情况，是否在高压灭菌时放气时间足够，压力足够！尤其是和储存培养液接触的移液管等物品，连续两次污染的话有可能造成储存液污染，一定要注意！下次使用前检查一下培养液是否存在浑浊的现象！可在培养液中加相应的抗生素处理2、霉菌：培养液是清亮的，倒置显微镜下无杂质，37度孵箱培养2-3天，仍清亮，但出现絮状杂质，镜下可见呈细丝状的团状漂浮物，可看到明显的菌丝，细胞仍可生长，但时间长之后，细胞的活力状态变差，用硫酸铜溶液擦拭CO2孵箱内，再把水盘里也加上饱和量的硫酸铜。
最详尽最清楚的藻类图谱（强烈建议收藏）
最详尽最清楚的藻类图谱（强烈建议收藏）qdgenyuanshuichan 众所周知，在水产养殖过程中，养鱼就是养水。
养水就是培养良好的藻类，对养殖动物起到供氧或者作为生物饵料的作用。
在这里我们将水产养殖过程中的常见藻类做了一个统计，并且将其在显微镜下的特点整理出来，方便大家对藻类的学习（部分图片来自网络）。
蓝藻门蓝藻门的藻类多数属于害藻。
蓝藻是一种浮游生物，有单细胞的，也有多细胞的。
容易在富营养化的水中大量爆发。
池塘中出现蓝藻时就应该提高警觉，可以通过在早期换掉上层水除去蓝藻。
如果使用了杀死蓝藻的药物，切记使用解毒药！蓝藻死后是有毒的，产生的毒素将会对养殖动物构成威胁。
蓝藻门由蓝藻纲组成，这里为大家介绍的常见藻类包括色球藻目的蓝纤维藻（指杆藻）、色球藻（蓝球藻）、平裂藻和微囊藻；颤藻目的颤藻、螺旋藻、席藻（胶鞘藻）和鞘丝藻；念球藻目的拟鱼腥藻、鱼腥藻和念珠藻。
色球藻目1、蓝纤维藻（指杆藻）群体胶被无色透明；淡蓝绿色至亮蓝绿色。
2、色球藻（蓝球藻）群体胶被厚，且单独都有衣鞘，背靠背的两个小球。
与平裂藻相比，排列较为散乱。
3、平裂藻每两个细胞两两成对，2对为一组，4组成一小群；个体胶被不明显。
4、微囊藻具伪空泡颤藻目1、颤藻没有胶质鞘或有极薄胶质鞘；以段殖体进行繁殖。
2、螺旋藻呈螺旋弹簧状3、席藻（胶鞘藻）群体分布。
与颤藻对比，有胶质衣鞘。
4、鞘丝藻有一段空的胶鞘念珠藻目1、拟鱼腥藻异形胞两端各一个2、鱼腥藻异形胞间生单个穿插3、念珠藻异形胞间生，长成串。
硅藻门硅藻门中的常见藻类比较多，而且多为益藻。
包括中心硅藻纲（中心纲）和羽纹硅藻纲（羽纹纲）。
一、中心硅藻纲（中心纲）圆筛藻目1、直链藻两细胞间有假环沟，两边具棘2、圆筛藻孔纹3、小环藻常见于淡水分外围和中央区4、漂流藻圆盘形，壳环面四周有薄而透明的翼状突，翼上有许多射出肋。
5、海链藻以一条胶质线相连成串，有的壳缘有刺。
6、骨条藻胞间以细刺连接7、冠盖藻胞间管状短链相连，胞壁有明显的六角形孔纹。
输液反应.ppt
在实际处理中必须要注意的四个问题
1、要注意控制周围人群的情绪，在发生输液反应时家属和病 人都比较惊慌，情绪比较激动，此时应一边治疗一边安慰 病人和家属，如果生命体征平稳，则可大胆安慰，以减小 不必要的麻烦。
2、必须保持静脉通道，病人和家属都有这样一个毛病，发生 反应时他们都很惊慌，会即时要求护土终止输液，拔除针 头，如果定力不足的护士会按家属的要求抜除针头。 正确的处理方法是：不能抜除针头，必须保持静脉通道方
二、近代以来交通、通讯工具的进步对人们社会生活的影 响
筹办航空事宜
处
三、从驿传到邮政 1．邮政 (1)初办邮政： 1896年成立“大清邮政局”，此后又设 ， 邮传邮正传式部脱离海关。 (2)进一步发展：1913年，北洋政府宣布裁撤全部驿站； 1920年，中国首次参加 万国。邮联大会
2．电讯 (1)开端：1877年，福建巡抚在 架台设湾第一条电报线，成为中国自 办电报的开端。
25mg(小儿0.5—mg/kg/次) 4、肌注复方氨基比林2ml(小儿0.5ml/kg/次) 5、如果出现肢端发凉或皮肤苍白,可肌注或静注654-2针
5mg(小儿0.5—1mg/kg/次),SBP<90mmHg时快速补液同时 静注654-2针10mg。由于输液反应不是速发型变态反应 ，慎用肾上腺素，但如果输液反应并血压急速下降时用 肾上腺素0.5—1mg皮下注射
化后吸入，以减低肺泡内泡沫表面的张力，使泡沫破裂消 散，从而改善肺部气体交换，减轻缺氧症状
必要时进行四肢轮扎止血带（须每隔5－10分钟轮流放松 肢体，可有效地减少回心血量），待症状缓解后，止血带 应逐渐解除
静脉炎
原因 由于长期输注浓度较高、刺 激性较强的药物，或静脉内放置刺 激性强的塑料管时间过长而引起局 部静脉壁的化学炎性反应；也可因 输液过程中无菌操作不严引起局部 静脉感染
植物组织培养的内生细菌污染问题
植物组织培养的内生细菌污染问题植物组织培养是一种重要的组织工程技术，通过该技术可以获得大量的无菌植物组织和植物体细胞。
在实际操作中，植物组织培养往往会受到内生细菌污染的影响，从而影响培养的质量和效果。
本文将从内生细菌的来源、危害以及防治措施等方面进行探讨。
一、内生细菌的来源内生细菌的来源主要包括原植物体、空气、培养基、操作人员和器皿等方面。
1.原植物体：植物体内生细菌是植物体内固有的微生物群落，它们在植物的生长发育过程中与植物体共生。
当进行植物组织培养时，如果植物体不经过充分的无菌处理，就会导致内生细菌的污染。
2.空气：空气中含有大量的微生物，尤其是在无菌操作环境不严谨的情况下，空气中的内生细菌会成为植物组织培养的一大污染源。
3.培养基：培养基中的原料和添加剂可能含有内生细菌，如果在制备培养基的过程中不严格控制无菌操作，就有可能导致培养基中含有内生细菌。
4.操作人员和器皿：操作人员和器皿是植物组织培养中最容易被忽视的污染源。
操作人员身上可能携带有内生细菌，而器皿则可能存在细菌残留。
内生细菌对植物组织培养会带来以下危害：1.影响培养的质量：内生细菌的污染会导致培养物生长缓慢、愈伤组织形成受阻，甚至无法正常生长。
2.引发病变：一些内生细菌可能对植物组织产生病原性，导致植物组织发生病变。
3.污染培养基：内生细菌对培养基中的营养成分进行消耗和改变，降低培养基的营养价值。
4.传播病原体：某些内生细菌可能携带病原体，进而通过培养物传播病害。
为了有效防治植物组织培养中的内生细菌污染，可以从以下几个方面进行处理：1.选择健康的原植物材料：在进行植物组织培养前，对原植物材料进行充分的无菌处理，确保原植物材料是无菌的。
2.严格控制无菌操作环境：在植物组织培养的整个操作过程中，要严格控制操作环境，确保操作场所、器皿、培养基、工具等都是无菌的。
3.培养基的选择和制备：选用高质量的无菌培养基原料，严格按照无菌操作要求制备培养基。
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第一张照片，念珠菌污染：
第二张照片：丝状菌污染
第三张，不知道什么污染
这种微生物大约有细胞的1/100大，有点象弯的哑铃形，或者只有两个分页的中性粒细胞核的样子，活动不
大，基本上不动，长的很慢，可以和细胞共同生长，细胞不死，就是长得很慢，用pbs冲洗后很少几乎看不
到，大约2、3天开始增多，如果一直不换液，越长越多，但细胞不死，这一点不同于普通的细菌感染，也不
是真菌。
上图，细胞间的小点点全都是