酸沉淀法提取黄芩苷
灯盏细辛中野黄芩苷提取纯化工艺研究
作者简介 : 田帅华 ( 1984- ) , 男 , 硕士研究生 , 研究方向 : 中药质量评价与新药开发。 * 通讯作者 : 李 钦 ( 1965- ), 男 , 教授 , 博士 , 硕士生导师 , 研究方向 : 中药质量评价。 T e:l ( 0378 ) 3880589, E-m ai: l liq in@ henu. edu . cn
F
图 1 不同提取方法灯盏细辛 HPLC 色谱图
A. 对照品溶液 B. 浸渍提取样品 C. 超声提取样品 F. 回流提取样品 D. 组织破碎提取样品 E. 碱水提取样品
表 1
不同方法提取 野黄芩苷的转移率 ( n = 3)
提取方法 浸泡提取法 超声提取法 组织破碎提取法 碱水提取法 回流提取法 转移率 /% 21. 46 12. 26 24. 97 7. 59 65. 02
水平 乙醇浓 度 A /% 45 60 75
因素水平
溶剂量 B /倍 6 8 10 提取时间 C /m in 30 60 90 提取次 数 D /次 1 2 3
B 1 2 3
表 3
试验号 C 1 2 3 4 5 6 7 D 8 9 A 1 1 1 2 2 2 3 3 3 36. 77 35. 56 K1 K2 K3 R E 42. 03 12. 26 11. 85 14. 01 2. 16
关键词 : 灯盏细辛 ; 野黄芩苷 ; 提取 ; 纯 化 中图分类号 : R 284. 1 文献标识码 : B 文章编号 : 1001 -1528( 2010) 01-0124-04 样 , 按上述色谱条件测定。以进样量 X ( g ) 为横坐标 , 峰面 积值 Y 为纵坐 标 , 绘制 工作 曲 线 , 得回 归 方程 为 Y = 4 271 661 611. 66 X - 193 253 . 90, r = 0 . 999 9 , 线 性范 围 0. 436 ~ 6. 54 g 。 2. 1. 4 精密度试验 精密吸取对照品 溶液 10 L, 重 复进 样 6 次 , 测定 野黄 芩苷的峰面积 , 计算 RSD 为 0. 27% 。 2. 1. 5 稳定性试验 取同一供试品溶液 , 分别在 0、 1、 2、 4 、6 、8 h 进样 10 测定野黄芩苷的峰面积 , 计算 R SD 为 0 . 38 %。 2. 1. 6 重复性试验 同一批号灯盏细辛药材 6 份 , 按 2. 2. 5 项下方 法制备供 试品溶液 , 测定野黄芩 苷的峰面积 , 计算 R SD 为 2 . 21% 。 2. 1. 7 回收率试验 精密称取同一批号灯盏 细辛 药材 , 共 6 份 , 精密 加入对 照品适量 , 按 2. 2. 5 项下方法平行制备 , 测定 , 计算 平均回收 率为 99. 72% , RSD = 1. 46 %。 2. 2 供试液制备 2. 2. 1 浸渍法 取灯盏细辛 30 g , 精密 称定 , 加 60 % 乙醇 1 000 mL浸泡 10 d, 滤过 , 滤液浓缩至无醇味 , 醋酸乙 酯脱脂 , 水相浓 缩 , 烘 干 , 精密称取相 当于 1 g 原药 材的 浸膏 , 用甲 醇溶 解并 转移 至 50 mL 量瓶中 , 加甲醇至刻度 , 即得。 2. 2. 2 超声提取法 取灯盏细辛 30 g , 精密称定 , 于烧杯中 , 加入 60% 乙 醇 1 4. 6 mm, 5 m ), 85 000 mL, 超声处理 ( 功率 225W, 频率 45 kH z) 30 m in, 滤过 , 滤液浓缩至无醇味 , 醋酸乙 酯脱脂 , 水 相浓缩 , 烘 干 , 精密称 取相当于 1 g 原药材的浸膏 , 用甲 醇溶解并转 移至 50 mL 量 瓶中 , 加甲醇至刻度 , 即得。 2. 2. 3 组织破碎提取法 取灯盏细辛 30 g , 精密称定 , 加 60% 乙醇 1 000 mL, 用闪 式提取器提取 3 次 , 每次 1 m in, 滤过 , 滤液浓缩至无醇 味 , 醋 酸乙酯脱脂 , 水相浓缩 , 烘干 , 精 密称取相当 于 1 g原 药材的 浸膏 , 用甲醇溶解并转移至 50 mL 量瓶中 , 加甲醇至刻度 , 即 g取率最高的是 回流提取法 , 故选择回流提 取法。 2. 5 回流提取工艺参数优化 2. 5. 1 提取工艺的正交试验考察
黄芩中黄芩苷提取工艺影响因素的研究
０ ． ５ 、 １ ． ０ 、 １ ． ５ 、 ２ ． ０ 、 ２ ． ５ 、 ３ ， ０ 、 ３ ． ５ 、 ４ ． ０毫 升 于 １ ０ ０毫 升 容
样 品含 量 的测定 。用 医用 电子天 平精 确 称取 ５ ０
毫克黄芩苷粗品 ， 用５ ０ ％的乙醇溶解 ， 并定容于 １ ０ ０ 毫升容量瓶 中。用干燥 的滤纸过滤 ， 弃去初滤液 ， 再
置于 １ ０ ０毫升 容量瓶 中 ， 再用 ５ ０ ％的 乙醇定 容 。另 取 ５ ０ ％的 乙醇作 为空 白对 照 ， 于２ ７ ８ 纳 米波 长 处测 吸 光 度， 由方程 式计 算 出对 应 样 品浓度 。 不 同 的提取 方 法对 董
综 合 各方 面 因素 ， 在 保证 提 取 效率 的同 时 ， 避免 黄 芩 苷损失最 少情 况下 ， 以７ ５ ℃保 温较适 宜 。
不同 ｐ Ｈ值对黄芩苷水溶液稳定性的影 响。 吸取 黄 芩苷 水溶液 ，用氢氧 化钠 溶液 和盐 酸调 节制 成 Ｄ Ｈ
值为 ２ 、 ３ 、 ４ 、 ５ 、 ６的溶液 。 以上溶 液至 ｌ Ｏ ０ ｃ Ｉ ＝ 加热 １ 小 时 ，然 后 冷 却 ，测 得 黄 芩 苷 得 率 分 别 为 １ ５ ． ５ ４ ％、
哼 研 究 与 综 述
黄 芩 中 黄 芩 苷 提 取 工 艺 影 响 因 素 的 研 究
张 伍林 孟 繁娇 高丽 红 ２
（ １ ． 大庆志 飞 生物化 工有 限公 司 黑龙 江 大庆 １ ６ ３ ４ １ １ ， ２ ． 大庆华科 股份 有 限公 司 黑龙 江 大庆 １ ６ ３ ３ １ ６） 黄芩 为 唇形 科 植物 ， 具 有 凉血 安 胎 ， 清 热燥 湿 以 及解 毒 的功效 ， 在 中 国医药 当 中常 常 以根 人 药 。黄芩 苷 是从 黄芩 根 中提 取 分 离 出来 的 ， 具有抗炎 、 利尿、
黄芩药材中活性成分黄芩苷的研究概况
１．２ 溶 剂 提取法 本 法是 根据 黄芩 苷 的溶 解性 ，选 用 合适的溶剂和方法提取。林秀英等 对黄芩苷的溶 出 效率 用薄 层扫 描法 考 察 溶 剂 发 现 ：溶 出效 率 与溶 剂 的 极性之 间 有 明显的关 联 ，极 性 大 的溶 剂 溶 出效率 高 ，极
黄芩 苷 的提 取 方 法 主 要 有 沉 淀 法 、溶 剂 法 、超 声 法 、微 波 法 、超 临界 流体 萃取 法 、超 滤 法等 。 １．１ 沉淀 提取 法 本法 依据 黄芩 苷 溶 于水 、化 学结 构 中有 葡 糖醛 酸 、显 弱酸 性 、在 碱 性 溶 液 中溶 解 、在 酸性 溶液 中析 出的特 性 设 计 。其 一 般 流 程 为 ：黄芩 药 材粗 粉水 煎 煮 （２次 ）一 酸 调 ｐＨ １～２（７０～８０￣Ｃ保 温 ）一 静
黄芩 药材来源 为唇 形科植物 黄芩 Ｓｃｕｔｅｌｌａｒｉａ ｂａ— 置 １２～２４ ｈ。使 用 酸碱 溶 剂 时 ，要 注意 酸性 或 碱 性 的
ｉｃａｌｅｎｓｉｓ Ｇｅｏｒｇｉａ野生 品种 的 干 燥 根 ，对 其 质 量 评 价 通 强 度 、与黄芩 苷接 触 的时 间 ，避免 黄芩 苷 水解 导 致收 率
Ａ ｂｓｔｒａｃｔ Ｂａｉｃａｌｉｎ ｉｓ ｏｎｅ ｏｆ ｔｈｅ ａｃｔｉｖｅ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ｍ ｅｄｉｃｉｎａｌ ｍ ａｔｅｒｉａｌｓ Ｓｃｕｔｅｌｌａｒｉａ ｂａｉｃａｌｅｎｓｉｓ． Ｔｈｉｓ ｐａｐｅｒ ｓｕｍｍａｒｉｅｓ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｅ— ｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ Ｂａｉｅａｌｉｎ ｆｒｏｍ Ｓｃｕｔｅｌｌａｒｉａ Ｂａｉｅａｌｅｎｓｉｓ，ｔｈｅ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆ ｃｏｎｔｅｎｔ ａｓ ｗｅｌｌ ａｓ ｔｈｅ ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ，ＳＯ ａｓ ｔｏ ｐｒｏｖｉｄｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｄａｔａ ｆｏｒ ｆｕｒｔｈｅｒ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｂａｉｃａｌｉｎ ａｎｄ ｉｔｓ ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ，ａｓ ｗｅｌｌ ａｓ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ ｏｆ ｑｕａｌｉｔｙ ｓｔａｎｄａｒｄ ｆ ｏ ｒ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｂａｉｅａｌｉｎ ａｎｄ ｉｔｓ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ． Ｋｅｙ Ｗ ｏｒｄｓ Ｓｃｕｔｅｌｌａｒｉａ ｂａｉｃａｌｅｎｓｉｓ；Ａｃｔｉｖｅ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ；Ｂａｉｃａｌｉｎ；Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｓｕｒｖｅｙ ｄｏｉ：１０．３９６９／ｉ．ｉｓｓｎ．１６７３—７２０２．２０１３．０４．０４２
黄芩的鉴别实验报告
一、实验目的1. 掌握黄芩药材的性状特征。
2. 熟悉黄芩苷的提取、鉴定方法。
3. 提高对中药药材鉴别实验的操作技能。
二、实验原理黄芩（Scutellaria baicalensis Georgi）为唇形科植物，其干燥根茎具有清热燥湿、泻火解毒、凉血止血等功效。
黄芩苷（Baicalin）是黄芩的主要有效成分，具有显著的抗菌、抗炎、抗氧化等生物活性。
本实验通过观察黄芩药材的性状特征，提取并鉴定黄芩苷，以鉴别黄芩的真伪。
三、实验材料与仪器材料：1. 黄芩药材（正品、伪品）2. 甲醇3. 乙醇4. 硫酸5. 水合氯醛6. 氯仿7. 碘化铋钾溶液8. 香草醛-硫酸溶液仪器：1. 超声波清洗器2. 热水浴锅3. 蒸发皿4. 滴定管5. 移液管6. 烧杯7. 试管8. 漏斗9. 滤纸10. 显微镜四、实验方法与步骤1. 性状鉴别：- 观察正品和伪品黄芩药材的形状、颜色、断面等特征。
- 正品黄芩药材呈长圆锥形，表面棕黄色或棕褐色，有纵皱纹，断面呈黄色，味苦。
- 伪品黄芩药材表面颜色较浅，无纵皱纹，断面呈白色或淡黄色，味微苦。
2. 黄芩苷提取：- 称取黄芩药材粉末2.0g，加入50ml甲醇，超声提取30分钟。
- 提取液过滤，滤液蒸发至干，残渣用少量甲醇溶解。
- 取上清液，加入等体积的氯仿，振荡、静置，分取氯仿层。
- 氯仿层蒸干，残渣用少量甲醇溶解，待鉴定。
3. 黄芩苷鉴定：- 取少量甲醇溶液，加入碘化铋钾溶液，观察是否产生橘红色沉淀。
- 取少量甲醇溶液，加入香草醛-硫酸溶液，观察是否产生蓝紫色沉淀。
- 取少量甲醇溶液，加入硫酸，观察是否产生黄色沉淀。
五、实验结果与分析1. 性状鉴别：- 正品黄芩药材符合性状特征，伪品黄芩药材与正品差异较大。
2. 黄芩苷提取：- 提取液经处理后，得到黄芩苷粗品。
3. 黄芩苷鉴定：- 加入碘化铋钾溶液，出现橘红色沉淀，证明含有黄芩苷。
- 加入香草醛-硫酸溶液，出现蓝紫色沉淀，进一步证实为黄芩苷。
黄芩苷的研究概况
综述黄芩中黄芩苷的研究概况一前言黄芩苷(baicalin)是由唇形科植物黄芩Scutellariabaicalensis Georgi 的干燥根中提取的一种黄酮类化合物。
其原植物主要产于东北、河北、山西、河南、陕西、内蒙古等地,以山西产量最大,河北承德产的质量最好。
黄芩味苦,性寒。
归肺、肝、胆、大肠、小肠经。
功能清热燥湿,泻火解毒,止血,安胎[1]。
黄芩苷是黄芩的主要有效成分之一,是黄芩及其制剂的主要质量控制指标成分,据药理学研究报道,黄芩苷具有抗微生物、抗变态反应、降压和镇静、利胆、保肝和解痉等作用[2]。
本文对黄芩苷的最新研究现状作一综述。
二药理作用研究概况黄芩苷(baicalin)是唇形科植物黄芩(scutellaria baicalensisgeorgi)的有效成分之一,属葡萄糖醛酸苷类,水解后产生黄芩素和葡萄糖醛酸,具有清热解毒、抗炎、利胆、降压、利尿、螯合金属离子、抗变态反应等多方面的作用[3]。
近年来随着国际上对黄芩苷研究的持续升温以及认识的逐步深入,认为黄芩苷在清除氧自由基、减轻组织的缺血再灌注损伤、调节免疫、促进细胞凋亡以及抗肿瘤和HIV等多方面均有作用。
1 解热作用发热是一个多环节多因素参与的复杂过程，若其中某些因素、环节被抑制或阻断，则可防止体温升高，从而产生解热效应。
目前。
对于黄芩苷解热机制方面的研究报道甚少。
综合近几年研究发现，黄芩总提物及单一活性成分(黄芩苷野黄芩苷)在整体动物实验、方面表现出显著的解热作用，且在一定剂量下其作用强度可高于以临床剂量折算的阿司匹林[4]。
2 抗炎作用张罗修等[5]报道了黄芩苷对刺激剂Ca2+载体A23187诱导大鼠腹腔巨噬细胞PGE2的合成有抑制作用，这可能提示了黄芩苷抗炎作用的部分机理。
陈先福等[6]应用兔感染性脑水肿模型，测定了黄芩苷、川芎嗪、甘露醇对血清和脑脊液(CSF)中磷脂酶A2 活性的抑制作用及改善脑水肿关系，结果显示黄芩苷与川芎嗪均可抑制磷脂酶A2 活性和脂质过氧化，从而减轻脑水肿、降低颅内压。
黄酮类化合物的提取分离方法
一.黄酮类化合物的提取分离方法按所用溶剂不同分类(1)热水提取法(以水作溶剂)---------- 灵芝多糖热水提取(2)有机溶剂萃取法-----------生产茶多酚工业试验、乳酸(3)碱提取酸沉淀法.---------- 橙皮苷、黄芩苷、芦丁等都可用此法提取.2.按提取条件不同分类(1)回流提取法----------从苦楝树皮中提取苦楝素(2)索式提取法----------柑橘属类黄酮(3)微波辅助提取法----------采用微波辅助法从黎蒿中提取黄酮类化合物(4)超声提取法----------提取山楂中黄酮类物质(5)超滤法----------黄岑甙(6)酶提取法----------采用纤维素酶对红景天进行酶解处理,可提高黄酮类物质的浸出率(7)超临界流体提取法----------竹叶黄酮、从干姜片中提取挥发油PH梯度萃取法：石榴果皮褐变产物、葛花总异黄酮高效液相色谱分析法：五味子、葛根高速逆流色谱分离法：甘草、分离蜜环菌发酵液乙醇提取部位柱色谱法（1）硅胶柱色谱：姜黄素（2）聚酰胺柱色谱：紫锥菊（3）葡聚糖凝胶柱色谱：回心草、茵陈蒿（4）大孔吸附树脂分离法：川草乌、三七总皂甙二. 槐米中芸香苷（芦丁）的提取方法有哪些（设计）方法：渗漉法、煎煮法、回流提取法（1）槐米粗粉20g加约120ml的%硼砂水溶液，提碱搅拌下加入石灰乳至pH8-9，取溶1v1.0 可编辑可修改2 并保持该pH 值煮沸20分钟，四层纱布趁热滤过，反复2次提取液 药渣浓盐酸调pH2~3搅拌，静置放冷，滤过。
滤液 沉淀 热水或乙醇重结晶芸香苷结晶碱溶酸沉法提取分离槐米中芸香苷的流程图（2）取30g 槐花米，置于250mL 烧杯中，加入%硼砂沸水200ml ，在搅拌下缓缓加入石灰乳调节pH=8～9，在此pH 下保持微沸20～30min ，趁热用棉花滤过，残渣再加水，同上法再煎一次，趁热抽滤。
合并滤液，在60～70℃下用浓盐酸调至pH=4—5，静置。
第五章黄酮类化合物
2. Na(K)BH4反应
NaBH4 KBH4
是二氢黄酮旳专属试剂
反应颜色: 红~紫色
反应机理:
Na BH4
BH 4
BH4 + C
C
Up to date known。
>9000 different flavonoids are
2. 它们大多是以苷旳形式存在于植物体旳各个部位，尤其是花、 叶部分。大多存在于高等植物及蕨类植物中。
一、黄酮类化合物生物合成旳基本途径
1. 基本骨架 指具有下列基本构造(C6-C3-C6)旳黄色色素
8
7
(单糖苷, 双糖苷)
水液
n-BuOH萃取
n-BuOH液
(双糖苷, 三糖苷)
水液
(水溶性杂质)
(2) 除去亲脂性杂质
醇提取液
conc
水液 石油醚 提取
石油醚液(亲脂性杂质) 水液
(3) 除去水溶性杂质
水提取液 conc 浓缩水液 加入数倍量 乙醇
沉淀物(蛋白质,多糖等) 醇水液
2. 碱提取酸沉淀法
A
6 5
1
2`
O2
B 4`
C
43
6`
O
2-苯基色原酮
结构特征
具有高度共轭体系—为基本生色团，且母核上有 OH或OCH3取代（助色团），大多为黄色，构造 中有酮基。所以称为黄酮类化合物。 符合C6-C3-C6 基本骨架（桂皮酸途径）。 均属酚类衍生物
例：
O
OH O
黄酮醇
【执业药师考试】黄酮的提取与分离、含黄酮类化合物的中药实例、鉴别与结构鉴定
【score:1 分】 【A】 【此项为本题正确答案】 【B】 【C】 【D】 【E】
本题思路： 19.从下列中药中分离黄酮类成分，可采用氧化铝吸 附柱层析的是 A．黄芩 B．银杏叶 C．葛根 D．槐米 E．陈皮
本题思路： 2.用碱溶酸沉法从花、果实类药材中提取黄酮类化合 物，碱液宜选用 A．5%NaHCO3 B．5%Na2CO3 C．5%NaOH D．10%NaOH E．饱和石灰水
【score:1 分】 【A】 【B】 【C】 【D】 【E】 【此项为本题正确答案】
本题思路： 3.从黄芩中提取黄芩苷多采用的提取方法是 A．水浸泡酸沉淀 B．碱水提取酸沉淀 C．甲醇提取 酸沉淀 D．乙醇提取酸沉淀 E．丙酮提取酸沉淀
黄酮的提取与分离、含黄酮类化合物的中药实例、鉴 别与结构鉴定
(总分：111 分，做题时间：90 分钟) 一、最佳选择题(总题数：63，score:63 分) 1.黄酮苷类化合物不能采用的提取方法是 A．酸提碱沉 B．碱提酸沉 C．沸水提取 D．乙醇提取 E．甲醇提取
【score:1 分】 【A】 【此项为本题正确答案】 【B】 【C】 【D】 【E】
【score:1 分】 【A】 【B】 【C】 【D】 【E】 【此项为本题正确答案】
本题思路： 12.若仅需提取黄酮多糖苷，最常用的提取溶剂是 A．沸水 B．酸水 C．乙醇 D．醋酸乙酯 E．氯仿
【score:1 分】 【A】 【此项为本题正确答案】 【B】 【C】 【D】 【E】
本题思路：
13.从总黄酮乙醇浸膏中萃取黄酮单糖苷，用 A．石油醚 B．醋酸乙酯 C．氯仿 D．乙醚 E．苯
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酸沉淀法提取黄芩苷
字数：969
来源：学术理论与探索2011年4期字体：大中小打印当页正文摘要：探讨黄芩中黄芩苷的提取工艺。
选取了酸沉法，考察了药材粒度、提取次数、提取时间和分离方式等因素对黄芩苷收率的影响。
关键词：黄芩；黄芩苷；提取工艺；稳定性
1.方法原理
酸沉淀法是一种较为传统的分离纯化方法，其原理为黄芩苷溶于水，其化学结构中有葡萄糖醛酸，显弱酸性，溶于碱，遇较强的无机酸易析出，本法即利用了其在碱性溶液中溶解、在酸性溶液中析出的特性。
其过程为水煎煮黄芩粗粉，酸调、静置将沉淀物过滤，再碱调至溶解后，加入乙醇搅拌过滤，最后再次酸调得黄芩苷结晶。
此法已被广泛应用于黄芩苷的提取。
2.黄芩酸沉工艺的研究
用正交试验，以黄芩总苷含量（即沉淀量）为指标，选择浓缩液相对密度、加酸后的PH值、保温温度、保温时间、静置时间5个因素，每个因素各选2个水平，采用L8(2７)正交表进行设计试验（表1）。
表1黄芩酸沉工艺因素水平表
称取黄芩饮片800g，第一次煎煮2h，第2、3次各煎煮1h,每次加12倍
量水，合并煎液，滤过，将滤液平均分成8份，按表1酸沉工艺因素水平和表2酸沉工艺正交试验设计及黄芩总苷含量进行试验，以黄芩总苷含量（即沉淀量）为指标（表2）。
用正交试验的直观分析法进行分析，从R值的大小可知；因素的主次顺序为A>B>D>C>E。
最优组合为A1B1C1D1E1。
对上述资料进行方差分析见表3.
*P<0.05;**P<0.01
方差分析可见A,B,C,D均达到显著水平，仅E没达到，可以控制在任意水平。
即最佳组合为：A1B1C1D1E1，可以浓缩至相对密度1.05~1.10，80°C测定，加稀盐酸调节PH1~2.80°C保温1h，静置24h之后达到最佳提纯效果。