液相色谱
液相色谱与气相色谱的异同点
液相色谱与气相色谱的异同点
液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）
和气相色谱（Gas Chromatography，GC）都是常见的分离分析方法，它们的主要异同点如下：
相同点：
1. 原理：都是基于样品在移动相和固定相之间的分配平衡来实现分离的。
2. 色谱柱：都需要特定的色谱柱用于分离分析，色谱柱的选择对于分离效果至关重要。
3. 检测器：可以使用不同类型的检测器，如紫外/可见光检测器、荧光检测器等。
4. 数据处理：都需要对检测到的数据进行处理和分析。
异同点：
1. 移动相：液相色谱使用液体作为移动相，气相色谱使用气体作为移动相。
2. 固定相：液相色谱使用固定于色谱柱内部的固定相，气相色谱使用涂覆在固定相上的液体固定相。
3. 分析范围：液相色谱适用于分析极性化合物，气相色谱适用于分析非极性化合物。
4. 分析速度：液相色谱分析速度较慢，气相色谱分析速度较快。
5. 样品状态：液相色谱适用于液态样品，气相色谱适用于气态和固态样品。
6. 分离机理：液相色谱分离主要基于样品与固定相之间的物理相互作用，如极性、氢键等；气相色谱分离主要基于色谱柱中的固定相与样品的挥发性和热性质之间的相互作用。
7. 使用领域：液相色谱常用于生物医药、食品安全、环境监测等领域，气相色谱常用于石油化工、环境监测、毒理学等领域。
需要注意的是，液相色谱和气相色谱并不是互相替代的，而是根据不同的分离需求和样品特性选择使用的。
液相色谱的原理
液相色谱的原理
液相色谱（Liquid chromatography，简称LC）是指以液体为流动相，以固体或涂有固体表面的液相作为静相，利用化学成分在两相之间的
分配差异进行分离的一种色谱方法。
它广泛应用于生命科学、化学分析、药物分析等领域。
液相色谱的原理主要包括分配作用、吸附作用
以及离子交换作用三种。
1. 分配作用
分配作用是指样品中的化学成分在液相和固相之间发生一定的分配，
使得不同成分在具有不同亲和性的相之间分离。
以正己烷和水为例，
若将一个带有化合物的溶液加入到能与水和正己烷分配的液相中，则
化合物进入液相中后将在液相和正己烷间分配，达到化合物在水相中
的浓度与该物在正己烷中的浓度比值称为分配系数（K）。
2. 吸附作用
吸附作用是指物质分子在液相和固相、固相表面之间发生吸附，使得
物质在两相中的浓度不同而达到分离作用。
固定相表面的配体对吸附
物质有亲和性，因此能够将物质从流动相中吸附到固定相表面上，并
使物质在固定相表面积蓝和液相中的浓度差达到分离作用。
3. 离子交换作用
离子交换作用是指样品中离子物质和离子固相表面上的载体分子间进
行互换作用，使其在液相和固相之间发生分配，从而达到分离作用。
离子固相表面可能是以阴、阳离子载体为基础的阴、阳离子固相材料，也可以是由多种功能团组成的混合固相材料。
综上所述，液相色谱是一种基于样品化学成分在液-固相或者液相石墨
毡表面之间互相分配、吸附或者交换作用而达到分离的方法。
液相色
谱的选择性和灵敏度都很高，可以对各种物质进行分离和检测。
液相色谱仪检测项目
液相色谱仪检测项目
1.蛋白质分析：液相色谱仪可以用于蛋白质的鉴定和分析，比如氨基酸组成分析、肽段组成分析、糖基化分析等。
2. 药物分析：液相色谱仪可以用于药物的定量和质量控制，比如抗生素、抗癌药物、激素类药物等。
3. 食品分析：液相色谱仪可以用于食品中的添加剂、残留农药、重金属等的检测，保障食品质量安全。
4. 环境监测：液相色谱仪可以用于环境中的有害物质的检测，比如水中的有机污染物、空气中的挥发性有机物等。
5. 生化分析：液相色谱仪可以用于生化分析，比如生物体内代谢产物的定量和分析。
6. 质谱联用：液相色谱仪与质谱联用可以提高分析的灵敏度和特异性，用于分析分子量较大、结构复杂的物质。
总之，液相色谱仪是一种重要的分析仪器，在许多领域都有广泛的应用。
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高效液相色谱样品预处理步骤
高效液相色谱样品预处理步骤1. 样品准备在准备高效液相色谱样品时，需要确保样品的稳定性，防止样品在分析过程中发生变化。
因此，在样品准备过程中需要注意以下几点：（1）选择合适的样品存储容器，避免样品被污染或发生变化；（2）确保样品在分析前达到室温，以避免样品在注射到色谱柱时产生气泡；（3）注射适量的样品，以避免色谱柱被过度磨损或样品过载。
2. 样品过滤在进行高效液相色谱分析前，需要将样品通过过滤器进行过滤，以去除样品中的固体杂质或悬浮物，从而防止其对色谱柱的堵塞或损坏。
通常使用的过滤器有不同规格的筛网或滤膜。
3. 样品衍生化在一些情况下，需要对样品进行衍生化处理，以便更好地进行高效液相色谱分析。
衍生化处理可以将样品中的某些化合物转化为更易分析的形式，例如将某些极性化合物转化为非极性化合物，使其更适合用有机溶剂进行洗脱。
4. 样品稀释在某些情况下，需要将样品进行稀释，以便更好地进行高效液相色谱分析。
过浓的样品可能会导致色谱峰过宽或重叠，影响分析结果的准确性。
通常使用的的是溶剂或水进行稀释。
5. 样品进样在进行高效液相色谱分析时，需要将样品通过进样针注入到色谱柱中。
在进行进样时，需要注意以下几点：（1）注射适量的样品，以避免色谱柱被过度磨损或样品过载；（2）确保进样针的清洁和干燥，以避免对分析结果产生干扰。
6. 样品分离在将样品注入到色谱柱后，需要对其进行分离。
通常使用的的是高压泵将流动相通过色谱柱，将样品中的各个化合物进行分离。
在进行分离时，需要注意以下几点：（1）选择合适的流动相，以便将样品中的各个化合物进行分离；（2）调整流动相的流速和比例，以便获得更好的分离效果。
7. 检测器检测在分离后的各个化合物通过色谱柱流出时，需要使用检测器进行检测。
常见的检测器有紫外可见光检测器、电导检测器、荧光检测器等。
检测器可以提供样品的信号，并记录下各个化合物的在色谱图中的保留时间。
8. 数据处理在检测器检测完成后，需要对数据进行处理。
液相色谱教程液相色谱定量分析原理
液相色谱教程液相色谱定量分析原理液相色谱（Liquid Chromatography，LC）是一种广泛应用于各个科学领域的分析技术。
它是一种基于分子相互作用的分离技术，利用样品溶解在流动相中，在固定相上进行分离和分析。
液相色谱可以用于定性和定量分析，其中定量分析是液相色谱非常重要的应用之一液相色谱定量分析的原理主要基于分离物质的定量关系。
在液相色谱中，样品溶解在流动相中，与固定相发生相互作用，并在固定相上进行分离。
不同组分分离的速度和程度取决于它们与固定相之间的相互作用。
在定量分析中，通过测量特定组分在柱上的峰面积或峰高，可以得到该组分的浓度。
液相色谱定量分析的步骤包括：溶液的制备、样品的进样、色谱柱的选择、流动相的选择、检测器的选择和峰面积或峰高的测量。
首先，需要将待分析的样品溶解在适当的溶液中，以便进行液相色谱分析。
然后，样品被进样器进样到色谱柱中。
色谱柱的选择根据需要分离和分析的组分而确定，不同的色谱柱可以实现对不同组分的分离。
流动相的选择根据样品的特性和色谱柱的要求，需要考虑流动相的溶解度、挥发性、毒性等因素。
检测器的选择取决于分析的目的和需求，液相色谱中常用的检测器包括紫外-可见吸收检测器、荧光检测器、质谱检测器等。
最后，通过测量峰面积或峰高，可以根据已知的标准曲线或计算公式得到待测组分的浓度。
液相色谱定量分析的准确性和精确性可以通过一系列的方法来提高。
首先，样品的制备要准确和精确，避免样品中残留物和杂质的干扰。
其次，使用适当的内标物可以提高定量分析的准确性和精确性。
内标物是在样品中添加的标记物，与待测组分的性质相似，并且在色谱分析中能够产生特定的信号。
通过测量内标物和待测组分的信号比，可以减小样品制备和仪器操作的误差对定量结果的影响。
此外，还可以使用多点标定法、外标法、内标法等进行定量分析，以提高准确性和精确性。
总之，液相色谱定量分析是一种重要的分析技术，广泛应用于化学、生物、环境等领域。
液相色谱的分类
液相色谱分类液相色谱是一种常用的分离和分析方法，广泛应用于化学、生物、医药等领域。
根据不同的分离机制和填料，液相色谱分析法可以分为以下几类：1.吸附色谱法2.吸附色谱法的固定相为吸附剂，色谱的分离过程是在吸附剂表面进行的，不进入固定相的内部。
与气相色谱不同，流动相（即溶剂）分子也与吸附剂表面发生吸附作用。
在吸附剂表面，样品分子与流动相分子进行吸附竞争，因此流动相的选择对分离效果有很大的影响，一般可采用梯度淋洗法来提高色谱分离效率。
在聚合物的分析中，吸附色谱一般用来分离添加剂，如偶氮染料、抗氧化剂、表面活性剂等，也可用于石油烃类的组成分析。
3.分配色谱法4.分配色谱法是一种利用固定相和流动相之间的分配平衡来进行分离的方法。
固定相可以是纸、薄板或填充床等。
流动相是液体溶剂，通过流动相的推动力，样品在固定相和流动相之间进行分配平衡。
分配色谱的分离效果取决于样品分子与固定相和流动相之间的相互作用。
5.离子交换色谱法6.离子交换色谱法的固定相为离子交换剂，是一种带电荷的合成树脂。
流动相是电解质溶液，通过流动相的推动力，样品在离子交换剂和电解质溶液之间进行离子交换。
离子交换色谱的分离效果取决于样品分子与离子交换剂和电解质溶液之间的相互作用。
7.凝胶色谱法8.凝胶色谱法的固定相为凝胶，是一种具有分子筛性质的聚合物。
流动相是液体溶剂，通过流动相的推动力，样品在凝胶和溶剂之间进行分离。
凝胶色谱的分离效果取决于样品分子与凝胶之间的相互作用。
凝胶色谱法主要用于大分子物质的分离和分析，如蛋白质、核酸等。
液相色谱按其分离机理，可分为上述四种类型。
然而，在实际应用中，可以根据需要结合不同类型的方法，以获得更好的分离效果。
例如，可以将离子交换色谱法和凝胶色谱法结合使用，以分离不同分子量的蛋白质混合物。
此外，液相色谱技术也在不断发展和改进。
例如，高效液相色谱（HPLC）是一种常用的液相色谱方法，具有高分辨率、高速度和高效能等优点。
液相色谱特点
液相色谱的特点
液相色谱的特点是：
1.高压：液相色谱法以液体为流动相(称为载液)，液体流经色谱柱，受到阻力较大，为了迅速地通过色谱柱，必须对载液施加高压。
一般可达150～350×105Pa。
2. 高速：流动相在柱内的流速较经典色谱快得多，一般可达1～10ml/min。
液相色谱法所需的分析时间较之经典液相色谱法少得多，一般少于 1h 。
3. ：HPLC的分离效率高于普通液相色谱，在发展过程中又出现了许多新型固定相，使分离效率大大提高。
4.高灵敏度：液相色谱已广泛采用高灵敏度的检测器，进一步提高了分析的灵敏度。
如荧光检测器灵敏度可达10-11g。
另外，用样量小，一般微升。
5. 适应范围宽：气相色谱法与液相色谱法的比较：气相色谱法虽具有分离能力好，灵敏度高，分析速度快，操作方便等优点，但是受技术条件的限制，沸点太高的物质或热稳定性差的物质都难于应用气相色谱法进行分析。
而液相色谱法，只要求试样能制成溶液，而不需要气化，因此不受试样挥发性的限制。
对于高沸点、热稳定性差、相对分子量大(大于 400 以上)的有机物(这些物质几乎占有机物总数的 75% ～ 80% )原则上都可应用液相色谱法来进行分离、分析。
据统计，在已知化合物中，能用气相色谱分析的约占20%，而能用液相色谱分析的约占70～
80%。
液相色谱(HPLC)是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。
液相色谱使用的流程
液相色谱使用的流程介绍液相色谱（Liquid Chromatography，简称LC）是一种常用的分离和分析技术，广泛应用于化学、生物、环境等多个领域。
本文将介绍液相色谱使用的基本流程和注意事项。
流程液相色谱使用的流程主要包括以下几个步骤：1.样品准备–将待分析的样品制备成适合液相色谱测试的溶液。
–使用适当的溶剂和方法进行样品的预处理，如稀释、提取等，以保证样品能够被注射进液相色谱系统。
2.仪器设置–打开液相色谱系统，并进行相关的准备工作，如冲洗流路、校准仪器等。
–设置合适的流速、温度和检测波长等参数，以确保实验的准确性和重复性。
3.标样注射–使用自动进样器或手动注射器将样品溶液注入液相色谱系统的进样口。
–控制注射量并记录注射时间，以保证实验的可重复性。
4.色谱分离–开始样品的色谱分离过程。
–根据化合物的特性，选择合适的色谱柱和流动相，以实现样品的分离。
–监测色谱图的峰形和峰面积，根据需要进行优化。
5.数据分析–根据色谱图的结果，对样品中的目标化合物进行定性和定量分析。
–通过标准曲线、保留时间和峰面积等参数进行定量计算。
6.结果记录–将实验结果进行记录，包括样品信息、色谱条件、分析结果等。
–保留原始数据和处理数据。
7.仪器保养–完成实验后，对液相色谱系统进行清洗和保养。
–检查仪器的状态，及时更换损坏的部件，并进行标定和验证。
注意事项液相色谱实验中，还需要注意以下几点：•样品的选择：合适的样品溶解度和化学性质对分析结果至关重要。
•色谱柱的选择：根据分析项目和样品性质选择合适的色谱柱。
•流动相的选择：根据样品性质和分离要求选择合适的流动相。
•流速的控制：过高的流速可能导致分离不完全或峰形失真。
•温度的控制：合适的温度对分离效果和信号峰形有直接影响。
•校准的进行：定期进行仪器的校准，确保结果的准确性和可靠性。
•废液处理：根据实验室规定，正确处理废液和废弃物。
总结：液相色谱使用的流程包括样品准备、仪器设置、标样注射、色谱分离、数据分析、结果记录和仪器保养等步骤。
气相色谱液相色谱的适用范围
气相色谱液相色谱的适用范围
气相色谱和液相色谱是化学分析中两种常用的分离技术，它们分别
适用于不同类型的化合物的分离和分析。
气相色谱适用的范围：
1. 描述分子的化学结构非常复杂的挥发性或半挥发性化合物的分离和
定量分析。
例如，气相色谱可用于分离和分析芳香族化合物、酚类、
多环芳烃和杂环化合物等。
2. 用于分析描写分子量低、分子结构比较简单的单体，特别是在聚合
物合成过程中分析单体纯度和聚合反应情况。
例如，气相色谱可用于
分离丙烯酸和丙烯酸甲酯等单体。
3. 气相色谱可用于无机化合物和某些有机盐类的分析，例如氟化物。
液相色谱适用的范围：
1. 用于分离和分析极性和非极性化合物，包括非极性有机化合物、高
沸点化合物和极性化合物。
例如，液相色谱可用于分离氨基酸、激素、荧光染料和糖类等。
2. 用于分析具有极性官能团的样品，如醇、酸、酮等。
例如，液相色
谱可用于分离和分析脂肪酸甲酯和糖醛酸等。
3. 液相色谱也适用于分析大分子化合物，如蛋白质和核酸。
例如，液
相色谱可以用于 DNA 和 RNA 的分离和分析。
总之，气相色谱和液相色谱是化学分析中常用的技术，它们各自适用
于不同类型的化合物的分离和分析。
根据样品类型和试验需求，分析师可以选择适当的分离技术进行分析。
高效液相色谱组成
高效液相色谱（High-Performance Liquid Chromatography，简称HPLC）是一种常用的分析方法，主要用于分离和分析混合物。
高效液相色谱系统一般由以下几个部分组成：
1. 流动相：流动相是液相色谱中的溶剂，用于将样品分离成不同的组分。
常见的流动相包括水、甲醇、乙腈等。
2. 泵：泵是整个系统的核心部件，负责抽取流动相并推动其在系统中流动。
泵通常包括高压输液泵、过滤器和脱气装置等。
3. 进样系统：进样系统用于将样品注入到流动相中。
常见的进样方式有手动进样和自动进样。
4. 色谱柱：色谱柱是分离混合物的主要部件，样品在色谱柱中通过固定相和流动相之间的相互作用进行分离。
常见的色谱柱类型有反相色谱柱、正相色谱柱等。
5. 检测器：检测器用于检测分离后的样品组分。
常见的检测器包括紫外检测器、荧光检测器、电化学检测器等。
6. 数据处理系统：数据处理系统用于收集和处理检测器产生的信号，以便分析和识别样品中的成分。
数据处理系统可以包括计算机、工作站和相应的软件。
7. 控制系统：控制系统用于监控和调节整个液相色谱系统的运行参数，如流速、温度、压力等。
8. 辅助设备：辅助设备包括如压缩空气、冷却装置、真空泵等，用于支持整个系统的正常运行。
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液相色谱仪操作规程
仪器名称：液相色谱仪Waters2695型（带光电二极管阵列PDA 2998、蒸发光散射ELS 2424
检测器）
光电二极管阵列一般可用5mg/L来试条件。 第一步：准备工作
（1） 把水和有机相分别加入各瓶中。(纯水一周一换，换溶剂时需小心，不要
用手触摸管道)。有机相必须为进口色谱级纯度。 （2）开机 顺序：电脑→泵→检测器→工
作站
1）泵的开启，在2695主机界面上直接操作。待仪器自检完毕，显示Idle后，选择Menu status
进行各项操作：
a. 仪器长久不用，管路干了，应使用Dry prime功能。
b. 每次开机，都要用Wet prime功能，将要用的各个通道冲洗一遍（A为甲醇，C为乙腈，D
为纯水），排除气泡。此过程流动相不通过柱子。具体操作为：用方向键选择一个通道，比
例调成100%，其余通道为0%，在direct function 中选择wet prime，按默认值进行。冲洗完
成后，进行下一个通道的冲洗，直到完成。仪器使用过程中，如果哪个通道更换或增加了溶
剂，都要用Wet prime将此通道冲洗一遍。
c. 温度设置：直接将柱温设置成所需温度，一般为30℃。
d. Purge injection：在direct function中选择Purge injection，按默认值进行。 e. Equilibrium：
将流量从0调至1mL/min，如果长久不用，不能直接调，而应逐渐将流速调至1mL/min。将
通道比例调成所需比例，注意此过程流动相通过柱子，所以切记不能出现纯水通道100%的
情况，纯水比例最大为95%。在direct function中选择Equilibrium，按默认值进行。 注意：
每一步操作都应在仪器显示Idle状态后再进行。
2）检测器的开启
绿灯状态为自检；灯为黄色、不闪并听见提示音，为启动完成。 3）工作站的开启
Empower登陆：用户名为system，密码为manager
窗口左边选择项目，窗口右边选择系统（检测器）。点“确定”进入。 检查仪器的连接情况：
管理→配置→节点→窗口右边黑色部分，右击→属性，显示“是”即为已连接。 第二步：
创建项目
管理→创建新项目。 主要设置：
表空间：推荐设置为100MB。将支持„全面审计追踪‟前的勾去掉。源项目：选择从其他项
目要拷贝的内容，一般选默认Defaults。
在登陆工作站时调用所建项目。 第三步：创建方法和方法组 （1）首先应创建仪器方法。
查看方法→仪器。 主要设置：
泵2695：通用：单次输送体积（50毫升=1.23毫升/分） 流量：泵模式（等度/梯度）、总流
量（流动相设置，调节流动相比例， 2min以后出峰较好） 温度：目标柱温（30℃）、柱温
范围（超出此范围仪器会发出警报）
PDA2998：通用：灯开启打勾、启用3D通道打勾、λ范围（设置全扫波长，分离度：4.8纳
米） 2D通道：设置特定波长，分离度：1.2纳米
方法编辑好后，保存方法，文件→保存。 （2）再将仪器方法保存为方法组。
查看方法→方法组：调用方法，保存。 第四步：创建样品组方法 运行样品→样品队列。 主
要设置：
样品瓶（样品瓶所摆放位置编号）、进样体积（0.1-100μL）、进样数（第一个样品可进样两
次，以稳定系统，采用第二次进样数据）、样品名称、方法组/报告方法、运行时间、下一个
进样延迟。
编辑好后，保存，以后使用可直接调用。文件→保存样品组方法。 也可使用向导建立样品
组和样品组方法。 第五步：查看数据
浏览项目→通道：双击要查看的数据
数据即做即抄，以免丢失或者覆盖，不准用U盘拷贝，如实在需要谱图可告知老师用光盘
刻录走。
第六步：关机
（1）待全部样品分析完后（当流动相中有缓冲溶液或盐时，需先将盐通道换到纯水中用95%
的水相冲洗通道10min以去除盐，再用95%的有机相冲洗5min以保护色谱柱），方可关机。
首先关闭检测器，再将泵流量逐渐降为0，关闭泵，关闭电脑。
（2）为节省检测器氘灯使用时间，应尽量集中测样。频繁的开关灯也会减少氘灯寿命，离
开超过4h方关灯。
（3）认真填写《大型仪器设备开放使用记录本》