实例解析——高效液相色谱(hplc)
高效液相色谱分析实验
高效液相色谱分析实验高效液相色谱(HPLC)是一种用于分离、检测和定量分析化学样品的分析技术，具有高分辨率、高灵敏度和高选择性。
在实验室中，HPLC广泛应用于药物分析、环境监测、食品安全等领域。
本文将介绍HPLC的实验原理、步骤及关键技术。
一、实验原理HPLC的原理是将混合物通过高压注射，经过固定相柱进行分离。
在HPLC中，固定相柱是最重要的组成部分之一，它可以根据样品之间的化学性质选择不同的固定相柱，如反相柱、离子交换柱、手性柱等。
在HPLC实验中，样品可以通过两种方式进样，一种是自动进样器，另一种是手动进样。
进样器将样品注入进样站点后，通过高压泵将样品推入柱子中，样品在柱子中分离后，被通过光学检测器检测，进而得到分离的结果。
二、实验步骤1.样品准备：根据实验要求，准备需要进行分析的物质样品，将其溶解或稀释到适当的浓度。
2.选择柱子：根据样品的性质选择适当的固定相柱。
例如，如果样品是极性的，则选择反相柱。
3.设定实验条件：根据样品的特征和实验需求，设置高压泵的流速、检测器、柱温等参数。
4.样品进样：将样品使用自动进样器或手动进样器进行进样。
5.柱子分离：开启高压泵，将样品推入柱子中。
样品将在柱子中根据化学性质进行分离。
6.数据检测和记录：通过光学检测器检测样品的峰值，并记录分离结果。
可以使用计算机软件进行数据分析。
7.清洗和重用：实验完成后，需要对HPLC仪器进行清洗和重置，以便下次使用。
三、关键技术1.换柱：为了保证实验结果的准确性和可靠性，柱子需要定期更换。
柱子的寿命取决于样品的特性和使用情况。
2.校准标准品：在实验中使用标准品校准HPLC仪器，以确保仪器的准确性和灵敏度。
3.优化实验条件：通过改变流速、温度、柱子等实验条件，可以优化分离效果。
4.检测器选择：根据样品的性质选择合适的检测器，例如紫外检测器、荧光检测器等。
5.数据分析：使用HPLC软件对数据进行分析，生成和保存分析报告。
四、实验安全1.注意个人防护：在操作HPLC仪器时，应佩戴安全防护眼镜和手套，避免接触有害物质。
高效液相色谱仪分析应用实例
高效液相色谱仪分析应用实例《高效液相色谱仪分析应用实例》由南京科捷为您收集提供,液相色谱应用实例包括环境气体分析、药物分析、食品分析、生物制药等方面的液相色谱应用实例。
例 1.稠环芳烃分析 (环境气体分析样品:含六苯并苯等 8种稠环芳烃的混合物色谱仪:“南京科捷LC600”液相色谱仪,配有色谱工作站检测器:UV 紫外检测器, 340nm色谱柱:C 18键合相(ODS-224 ,5μm ,柱长 25cm ,柱径 4.6mm流动相:甲醇 -二氯甲烷(8:2混合溶剂流速:1mL/min进样:20μL结果:所有组分在 25min 之内全部流出,各组分完全分离,组分出峰顺序为:六苯并苯,二苯二萘嵌苯,三苯二萘嵌苯,苯萘并二萘嵌苯,四苯二萘嵌苯,萘六苯并苯,二苯萘并二萘嵌苯,苯菲并五苯。
例 2.磺胺分析(药物分析样品:磺胺、磺胺嘧啶、磺胺甲基异噁唑和甲氧苄氨嘧啶的混合物色谱仪:“南京科捷LC600”液相色谱仪, 740色谱数据处理机检测器:UV 481型紫外检测器,波长 240nm色谱柱:μ-Bondapak C18 , 5μm ,柱长 25 cm,柱径 4.6 mm流动相:由 KH 2PO 4(0.05mol/L和 Na 2HPO 4(0.05 mol/L以及 MeOH 所组成,其用量比例为 200:10:165, 流速:1mL/min进样:10μL结果:所有组分在 6min 之内全部流出, 各组分完全分离, 组分出峰顺序为:磺胺保留时间为 2.60 min, 磺胺嘧啶保留时间为 3.18 min、磺胺甲基异噁唑保留时间为4.33 min,甲氧苄氨嘧啶保留时间为 5.19min 。
例 3.银杏内酯分析(药物分析样品:含银杏苦内酯等 4种物质的混合物色谱仪:“南京科捷LC600”液相色谱仪配有 570自动进样器, Rheadyane 77251进样阀, HP 化学工作站检测器:500型 ELSD Alltech 蒸发光散射检测器漂移管温度为 91℃,氮气流速为 2.75L/min色谱柱:Platinum OPS, 5μm ,柱长 25cm ,柱径 4.6mm流动相:水 :甲醇 :四氢呋喃 = 75:20:10流速:1mL/min进样:10μL结果:所有组分在 15min 之内全部流出,各组分完全分离,组分流出顺序为:峰 1为银杏苦内酯 C, 峰 2为白果内酯 , 峰 3银杏苦内酯 A, 峰 4为银杏苦内酯 B 。
高效液相色谱-HPLCppt课件.ppt
色谱法的分类
按固定相的形态分:
平面色谱 o 纸色谱
o 薄层色谱
柱色谱
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色谱法的分类示意图
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▪ 高压梯度洗脱（高压混合，高压进柱，2个 泵。）
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▪安捷伦泵：小视频 ▪色谱学堂：泵
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色谱法原理及分类
什么是色谱法 色谱法溯源 Tswett（茨维特)的实验 色谱法原理 色谱法的分类
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什么是色谱法
色谱法是一种现代的分离分析方法 1906年正式命名(见诸文献) 20世纪30年代开始广泛研究和应用 高效液相色谱法的广泛应用始于20世纪70年代
1. 紫外—可见光度检测器：
①固定波长：254nm ， 低压汞 灯。
② 可 调 波 长 ： 190 ～ 800mm ， 钨灯，氘灯。
UV
③光电二极管矩阵检测器： 190～700nm。
接色谱柱 石英窗 光电倍增管
废液
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高效液相色谱技术在药物分析中的应用
高效液相色谱技术在药物分析中的应用高效液相色谱技术（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种重要的分析技术，广泛应用于药物领域。
本文将探讨HPLC技术在药物分析中的应用，并介绍其原理、方法和优势。
一、HPLC技术的原理HPLC技术基于液相色谱原理，在高压下通过液相柱进行分离和分析。
通常，样品通过进样器进入色谱柱，经过固定相的作用，分离出不同的化合物。
分离后，通过控制流动相的梯度，使不同的化合物逐渐从柱中洗脱出来，最终通过检测器进行检测和定量分析。
二、HPLC技术在药物分析中的应用1. 药物含量测定HPLC技术可以准确、快速地测定药物的含量，是药物质量控制的重要手段。
通过标准曲线法，可以根据药物的峰面积与浓度的关系，确定样品中药物的含量。
2. 药物杂质分析药物分析中，除了测定药物本身的含量外，还需要检测和定量分析药物中的杂质。
HPLC技术可以通过选择合适的固定相和流动相，实现对药物中有机杂质、无机杂质、不溶性杂质等的分离和检测。
3. 生物样品分析在药物代谢、药效和药物动力学研究中，需要对生物样品如血液、尿液、组织等进行分析。
HPLC技术可以通过样品前处理、提取等步骤，将样品中的药物和代谢产物分离出来，实现对药物的定量和定性分析。
4. 药代动力学研究药代动力学研究是研究药物在体内吸收、分布、代谢和排泄过程的一门学科。
HPLC技术可以结合药代动力学的特点，通过测定药物在体内的浓度和代谢产物，研究药物的吸收、排泄、代谢动力学参数，为药物的合理用药提供依据。
三、HPLC技术的优势1. 准确性高：HPLC技术在药物分析中能够实现对微量药物的准确分离和定量分析，具有很高的灵敏度和精度。
2. 选择性好：通过选择合适的固定相、流动相和检测器，HPLC技术可以对复杂的样品进行分离和分析，实现对多个成分的同时检测和定量。
3. 可靠性强：HPLC技术已经成为药物质量控制和生物样品分析的标准方法之一，得到了广泛应用并被广泛认可。
hplc高效液相色谱法
HPLC高效液相色谱法简介高效液相色谱法（HPLC）是一种利用液体作为流动相，通过高压输液系统，将样品中的各组分在固定相和流动相之间进行分配或吸附等作用而实现分离和检测的色谱技术。
HPLC具有分离效率高、灵敏度高、选择性强、分析速度快、样品适用范围广等优点，已成为化学、生物、医药、环境等领域中最重要的分析方法之一。
本文将简要介绍HPLC的基本原理、仪器组成、常用的色谱模式和应用领域，以期对HPLC感兴趣的读者有所帮助。
一、HPLC的基本原理HPLC的基本原理是利用样品中的各组分在固定相和流动相之间的不同亲和力，使其在色谱柱内以不同的速度移动，从而达到分离的目的。
固定相是填充在色谱柱内的颗粒状物质，可以是固体或涂于固体载体上的液体。
流动相是通过高压泵送入色谱柱的溶剂或溶剂混合物，可以是极性或非极性的。
样品是通过进样器注入流动相中，并随流动相进入色谱柱。
当样品中的各组分经过固定相时，会发生吸附、分配、离子交换、排阻等作用，导致它们在固定相中停留不同的时间。
这个时间称为保留时间（retention time），通常用tR表示。
保留时间是反映样品组分在色谱柱内分离程度的重要参数，不同的组分有不同的保留时间。
当样品组分从色谱柱出口流出时，会被检测器检测到，并产生一个信号。
这个信号随时间变化而变化，形成一个色谱峰（chromatographic peak）。
色谱峰的位置反映了样品组分的保留时间，色谱峰的面积或高度反映了样品组分的含量或浓度。
将检测器信号随时间变化而绘制出来，就得到了一条色谱图（chromatogram）。
色谱图上可以看到不同的色谱峰，每个峰对应一个样品组分。
通过比较保留时间和色谱峰面积或高度，就可以对样品进行定性和定量分析。
二、HPLC仪器组成HPLC仪器主要由以下几个部分组成：溶剂供给系统（solvent delivery system）：负责提供恒定压力和流速的流动相，并将溶剂混合成所需比例。
高效液相色谱法实验报告
高效液相色谱法实验报告高效液相色谱法实验报告导言：高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography, HPLC）是一种重要的分析技术，广泛应用于化学、生物、医药等领域。
本实验旨在通过HPLC技术对某种药物样品进行分析，并探讨其应用的可行性和优势。
实验方法：1. 仪器设备：HPLC仪、色谱柱、样品溶液、流动相、检测器等。
2. 实验步骤：a. 样品制备：将药物样品粉末溶解于适当的溶剂中，制备成一定浓度的样品溶液。
b. 色谱柱准备：根据样品特性选择合适的色谱柱，并进行柱平衡处理。
c. 流动相制备：根据样品特性选择合适的流动相组成，并进行气泡排除和气体除湿处理。
d. 参数设置：根据样品特性和实验要求，设置适当的流速、温度、检测波长等参数。
e. 样品注射：使用自动进样器或手动注射器将样品溶液注入色谱柱。
f. 数据采集：通过检测器采集样品在色谱柱中的峰值信号，并记录相关数据。
g. 数据处理：利用计算机软件对采集的数据进行峰面积计算、峰高度计算等处理。
实验结果：通过HPLC技术对药物样品进行分析，得到了以下结果：1. 样品在色谱柱中产生了明确的峰值信号，峰形对称且峰高度适中。
2. 根据峰面积计算，得到了样品的浓度为X mg/mL。
3. 通过与标准品的比对，确认了样品的成分和含量。
讨论：1. HPLC技术在药物分析中的应用优势：a. 高灵敏度：HPLC技术能够检测到极低浓度的物质，对于药物分析中微量成分的检测非常重要。
b. 高选择性：通过调整流动相的组成和色谱柱的特性，可以实现对复杂样品中不同成分的分离和检测。
c. 高分辨率：HPLC技术能够有效地分离样品中的各个成分，提供准确的分析结果。
d. 自动化程度高：HPLC仪器配备了自动进样器和数据采集系统，能够实现实验过程的自动化操作和数据处理，提高了实验效率和准确性。
2. 实验中可能存在的误差和改进方法：a. 样品制备过程中的误差：药物样品的溶解度、稳定性等因素可能会对实验结果产生影响。
实例解析——高效液相色谱(HPLC)
实例解一一高效液相色谱(HPLC)一、原理利用不同物质在两相中(液液、液固、离子交换、尺寸排阻)具有不同的分配系数，当二者相对运动时候，物质在两相中反复多次分配，从而使得物质得到完全分离二、适用范围高沸点、热不稳定的天然产物、生物大分子、高分子化合物、离子型样品、生化样品三、特点高压、高效、高灵敏度四、仪器组成流动液贮存提供脱气，输液系统、进样系统、分离系统、检测系统，控制记录系统贮液瓶、高压泵、进样器、分离柱、检测器、记录仪五、仪器选择由实验条件确定是选用二元高压还是四元低压、一般来说，二元高压的准确度较高。
四元低压是先将样品按比例混合再泵入，而二元高压是先泵入不同比例的溶剂再混合。
确定采用的脱气系统，一般采用在线脱气。
确定进样方式，人工手动六通阀进样，还是进样针自动进样，一个适用于少量样品，一个适用于大量样品。
选择检测器，如果是有较强的紫外吸收的可用紫外可见检测器(二极管阵列检测器)，如果是芳香族化合物，可选用荧光检测器，对于离子可采用电导检测器。
六、实验条件优化配置待测物质的标准溶液1、色谱柱的确定分析样本确定是采用何种类型的色谱柱(1)分配色谱，两项间分配系数流动相选用极性的物质(甲醇、乙腈、水)则固定相选择非极性物质。
一般用C18 ODS 柱。
(2)吸附色谱，(3)离子交换色谱各种离子与树脂上交换集团的交换能力不同。
固定相：离子交换树脂，流动相为无机酸、无机碱。
常用于分离离子或者可解离的化合物(4)排阻色谱法配置含待测物质的标准品溶液，采用不同C18柱分离，检测，对照不同色谱图像，可得到分离效能最高的色谱柱2、最佳流动相梯度洗脱程序的确定梯度洗脱：按照一定的程度，不断改变流动相中个溶剂组成的比例以改变流动相的极性。
将色谱柱上不同的组分洗脱出来。
配置不同的梯度洗脱方案，用标准溶液进行试验，并选取能达到最高分离效能的梯度洗过方案作为最佳流动相梯度洗脱程序3、流动相的确定在分离效能相似条件下选择更经济、毒性小的流动相4、流速确定流速太大，待分离组分来不及与固定相充分作用，故其中的组分较易被洗脱下来，出峰时间变短，而且柱压比较高，会引起泵负荷的增加，进而导致色谱柱的使用命的缩短，色谱峰的分离度变差。
高效液相色谱实验报告
高效液相色谱实验报告一、实验目的。
本实验旨在通过高效液相色谱技术，对给定的混合物进行分离和分析，掌握高效液相色谱仪的操作方法，以及对不同成分的定量分析。
二、实验原理。
高效液相色谱（HPLC）是一种高效、灵敏、准确的分析技术，它利用高压泵将样品溶液以高压送入色谱柱，通过与填料相互作用而进行分离。
在色谱柱中，不同成分将因其在填料中的亲和力不同而被分离开来。
通过检测器检测各个组分的峰面积或峰高，从而进行定量分析。
三、实验步骤。
1. 样品制备，将待分析的混合物溶解于适当的溶剂中，并进行过滤处理。
2. 色谱柱准备，连接色谱柱，并进行平衡处理。
3. 仪器调试，将色谱仪的流动相、检测器等参数进行调试。
4. 样品进样，将处理好的样品通过自动进样器送入色谱柱。
5. 数据采集，通过色谱仪软件进行数据采集和记录。
6. 数据分析，根据色谱图进行各组分的峰识别和定量分析。
四、实验结果。
通过本次实验，我们成功地对给定的混合物进行了分离和定量分析。
得到了混合物中各组分的峰面积和峰高，并通过标准曲线进行了定量分析。
实验结果表明，本实验的色谱分离效果良好，各组分分离度高，定量分析结果准确可靠。
五、实验总结。
通过本次实验，我们掌握了高效液相色谱技木的基本操作方法，了解了色谱柱的选择和调试、样品的制备和进样、数据采集和分析等基本步骤。
同时，我们也认识到了高效液相色谱技术在化学分析中的重要性和广泛应用性。
希望通过今后的实验操作，能够进一步提高我们的操作技术和分析能力。
六、参考文献。
1. Skoog, D. A., Holler, F. J., & Crouch, S. R. (2017). Principles of instrumental analysis. Cengage Learning.2. Snyder, L. R., Kirkland, J. J., & Glajch, J. L. (2011). Practical HPLC method development. John Wiley & Sons.以上就是本次高效液相色谱实验的全部内容，希望对大家有所帮助。
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实例解析——高效液相色谱(HPLC)
一、原理
利用不同物质在两相中（液液、液固、离子交换、尺寸排阻）具有不同的分配系数，当二者相对运动时候，物质在两相中反复多次分配，从而使得物质得到完全分离
二、适用范围
高沸点、热不稳定的天然产物、生物大分子、高分子化合物、离子型样品、生化样品三、特点
高压、高效、高灵敏度
四、仪器组成
流动液贮存提供脱气，输液系统、进样系统、分离系统、检测系统，控制记录系统贮液瓶、高压泵、进样器、分离柱、检测器、记录仪
五、仪器选择
由实验条件确定是选用二元高压还是四元低压、一般来说，二元高压的准确度较高。
四元低压是先将样品按比例混合再泵入，而二元高压是先泵入不同比例的溶剂再混合。
确定采用的脱气系统，一般采用在线脱气。
确定进样方式，人工手动六通阀进样，还是进样针自动进样，一个适用于少量样品，一个适用于大量样品。
选择检测器，如果是有较强的紫外吸收的可用紫外可见检测器(二极管阵列检测器)，如果是芳香族化合物，可选用荧光检测器，对于离子可采用电导检测器。
六、实验条件优化
配置待测物质的标准溶液
1、色谱柱的确定
分析样本确定是采用何种类型的色谱柱
(1)分配色谱，两项间分配系数
流动相选用极性的物质（甲醇、乙腈、水）则固定相选择非极性物质。
一般用
C18 ODS柱。
(2)吸附色谱，
(3)离子交换色谱
各种离子与树脂上交换集团的交换能力不同。
固定相：离子交换树脂，流动相
为无机酸、无机碱。
常用于分离离子或者可解离的化合物
(4)排阻色谱法
配置含待测物质的标准品溶液，采用不同C18柱分离，检测，对照不同色谱图像，可得到分离效能最高的色谱柱
2、最佳流动相梯度洗脱程序的确定
梯度洗脱：按照一定的程度，不断改变流动相中个溶剂组成的比例以改变流动相的
极性。
将色谱柱上不同的组分洗脱出来。
配置不同的梯度洗脱方案，用标准溶液进行试验，并选取能达到最高分离效能的梯
度洗过方案作为最佳流动相梯度洗脱程序
3、流动相的确定
在分离效能相似条件下选择更经济、毒性小的流动相
4、流速确定
流速太大，待分离组分来不及与固定相充分作用，故其中的组分较易被洗脱下来，出峰时间变短，而且柱压比较高，会引起泵负荷的增加，进而导致色谱柱的使用命
的缩短，色谱峰的分离度变差。
流动相流速太低时，会导致
色谱柱柱效降低，使得待测物质难洗脱，各个组分保留时间延长，容易引起色谱
峰变形或者导致色谱峰拖尾严重。
用不同梯度的流速实验确定最佳流速
5、柱温确定
柱温太低会导致色谱组分在两相中的扩散速度大为减小，分配不能迅速平衡，峰变
宽，柱效下降，延长分析时间。
但温度过高，出峰过快，可能会导致峰重叠。
设置
温度梯度进行试验，确定最佳温度
6、对于二极管阵列检测器确定最佳检测波长
测定在不同待测物质最大吸收波长下标准样的出峰情况，选择能使大部分标准样品
出峰的波长作为最佳波长
七、方法评定
(1)确定色谱条件后的色谱
(2)测定分离度R是否符合要求，测定拖尾因子T是否符合要求
(3)侧定不同待测物质的标准曲线
(4)验证该方法的精密度RSD是否在2%以内
八、定性分析
九、定性分析
在最优条件下测定试样中待测组分的谱线情况
1、和和文献相比较，比较保留时间初步确定是否含有待测物质
2、在相同测定条件下，在待测样品中加入可能含有的待测物质的标准样品，测定谱线，
如果在向应保留时间处的峰增高，则可证明该物质的存在
3、和具有定性分析的仪器相连用，例如傅立叶变换红外（FTIR）、质谱(MS)进行检测。
十、定量分析
测量不同质量的标准物的谱线，用公式f=m/s得到待测物质的绝对校正因子
在确定待测物质之后，选择采用的定量分析方法：标准曲线法，内标法，标准加入法
1、标准曲线法（外标法）
用对照物质配制一系列浓度的对照品溶液确定工作曲线，求出斜率、截距。
在完全
相同的条件下，准确进样与对照品溶液相同体积的样品溶液，根据待测组分的信号，从标准曲线上查出其浓度，或用回归方程计算，工作曲线法也可以用外标二点法代
替。
特点：操作和计算简便，不必用校正因子，但要求色谱操作条件稳定，进样重现
性好。
2、归一化法
测定不同纯标准样品的相对质量校正因子Fi，Xi%=FiAi/∑FiAi×100%，可以不需要
知道进样量。
但是需要：1、各组分都应流出，且检测器有信号2、与进样量无关3、
不用标样4、简单
3、内标法
在用内标法做色谱定量分析时，先配制不同重量比的被测组分和内标样品的混合物
做色谱分析，测量峰面积，做重量比和面积比的关系曲线，此曲线即为标准曲线。
在实际样品分析时所采用的色谱条件应尽可能与制作标准曲线时所用的一致。
内标物的选择：
（1）试样中不含有该物质；
（2）与被测组分性质比较接近；
（3）不与试样发生化学反应
（4）出峰位置应位于被测组分附近。
十一、质量控制和保证
1、检出限
最小检出限(Detection Limit或Limit of Detection)一般是指特定分析方法在给定的置信度区间内可以从样品中检出待测物质的最小浓度或最小含量，通常规定为信号值是噪音的3倍(S/N=3)。
2、回收率
加入一定已知量的标准物质测定其回收率对方法的准确度进行评价。
看是否符合要求。