类叶升麻苷抗鱼藤酮致SH-SY5Y细胞损伤机制的研究
中药有效成分及方剂多靶点调控治疗帕金森病研究进展
第22卷 第8期 2020 年 8 月辽宁中医药大学学报JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCMVol. 22No. 8Aug .，2020摘要：帕金森病（PD）的基本病理特征是黑质-纹状体多巴胺能神经元的丢失及路易小体的形成，最终造成PD 特有的运动功能障碍。
目前治疗帕金森病的西药种类较多，但每一类药物都有不少不良反应。
大量研究表明中药有效成分及方剂在治疗PD方面具有独特的优势。
该文从中药有效成分及方剂抑制黑质多巴胺能神经元凋亡、保护线粒体功能、增加多巴胺释放或保护多巴胺能神经元、抑制神经元免疫与炎症反应及改变氧化应激等方面综述了近年来国内外期刊报道的中药有效成分及方剂防治PD的研究进展，以为PD的新药及方剂研发提供理论依据。
关键词：中药有效成分；帕金森病；作用靶点；研究进展中图分类号：R742.5 文献标志码：A文章编号：1673-842X (2020) 08- 0162- 04Research Progress on Prevention and Treatment of Parkinson'sDisease by TCM Active Components and PrescriptionFENG Shirui1，ZHANG Qingping2（1.Guangxi University of Traditional Chinese Medicine，Nanning 530001，Guangxi，China；2.The First Affiliated Hospital to Guangxi University of Traditional Chinese Medicine，Nanning 530023，Guangxi，China）Abstract：The basic pathological features of Parkinson's disease are the loss of dopaminergic neurons in the substantia nigra stratum and the formation of the lewy bodies，which eventually lead to the motor dysfunction peculiar to PD. At present，there are many kinds of western medicine for Parkinson's disease，but each kind of medicine has many adverse reactions. A large of studies have shown that Chinese medicine effective component and has the unique superiority in the treatment of PD prescriptions in the paper，from the traditional Chinese medicine effective component and inhibition of substantia nigra dopamine prescriptions glue can neurons apoptosis，mitochondrial function，increase dopamine release or protect dopaminergic neurons，inhibition of immune and inflammatory research and the change of oxidative stress were reviewed at home and abroad in recent years，the research progress of prevention and control of traditional Chinese medicine effective component and prescription of PD，PD provide theoretical basis for the new drug and prescription research and development.Keywords：active constituents of traditional Chinese medicine；Parkinson's disease；target；research progress帕金森病（Parkinson disease，PD）临床上以静止性震颤、运动迟缓、肌强直和姿势平衡障碍为主要特征。
苯乙醇苷类化合物的研究进展
Journal of Organic Chemistry Research 有机化学研究, 2017, 5(2), 114-119Published Online June 2017 in Hans. /journal/jocrhttps:///10.12677/jocr.2017.52015Progress of Phenylethanol Glycosides inPlantsGang Xue, Chenghong Ma, Yujuan Chen*School of Life Science and Technology, Changchun University of Science and Technology, Changchun JilinReceived: May 21st, 2017; accepted: Jun. 18th, 2017; published: Jun. 21st, 2017AbstractPhenylethanol glycoside compounds have a strong biological activity and significant pharmaco-logical activity characteristics. They are widely distributed in plants, mainly distributed in Scrophulariaceae, Rosaceae, Orobanchaceae, Plantaginaceae, Verbenaceae and so on. These com-pounds have significant activity, which are Potential drugs. There are many researches about their activity and medical structures. In this paper, the recent studies on phenylethanol glycoside com-pounds are reviewed. The main sources, extraction, separation and synthesis methods, chemical structures, physical and chemical properties of phenylethanoid glycosides are studied in this pa-per. Pharmacological mechanism of the mechanism are descript in detail. It is useful to study phenylethanol glycosides in the further.KeywordsPhenylethanoid Glycoside, Activity, Structure, Content Determination, Research Progress苯乙醇苷类化合物的研究进展薛刚，马成红，陈玉娟*长春理工大学生命科学技术学院，吉林长春收稿日期：2017年5月21日；录用日期：2017年6月18日；发布日期：2017年6月21日摘要苯乙醇苷化合物具有较强的生物活性且具有显著的药理活性特性。
肉苁蓉不同提取部位对db
㊀基金项目:国家中医药管理局－重点实验室研究领域的中医临床疗效提升项目(Ｎｏ.２１００２２２１７９)ꎻ国家自然科学基金(Ｎｏ.８１８７４３４５)ꎻ辽宁省自然科学基金－资助面上项目(Ｎｏ.２０２２－ＭＳ－２２３)作者简介:程世赞ꎬ女ꎬ硕士生ꎬ研究方向:中药炮制学ꎬＥ－ｍａｉｌ:１３７６３２４３０４＠ｑｑ.ｃｏｍ通信作者:史辑ꎬ女ꎬ博士ꎬ教授ꎬ博士生导师ꎬ研究方向:中药炮制化学ꎬＴｅｌ:０４１１－８５８９０１５７ꎬＥ－ｍａｉｌ:ｌｎｓｈｉｊｉ＠１６３.ｃｏｍ肉苁蓉不同提取部位对ｄｂ/ｄｂ小黑鼠降血糖作用程世赞１ꎬ廉婧１ꎬ聂紫璇１ꎬ苏国明１ꎬ常源１ꎬ史辑１ꎬ２ꎬ贾天柱１ꎬ２(１.辽宁中医药大学药学院ꎬ辽宁大连１１６６００ꎻ２.辽宁省中药炮制技术产业创新中心ꎬ辽宁大连１１６６００)摘要:目的㊀探讨肉苁蓉和酒苁蓉不同提取部位对ｄｂ/ｄｂ小黑鼠降血糖的作用及机制ꎮ方法㊀富集肉苁蓉和酒苁蓉总多糖㊁总寡糖和总苷部分ꎬ对其含量进行了比较分析ꎮ选用ｄｂ/ｄｂ小黑鼠为实验动物ꎬ给药２８ｄ后ꎬ记录小黑鼠体重㊁进食量㊁饮水量ꎬ检测血糖ꎬ采用ＥＬＩＳＡ检测血清胰岛素(ＩＮＳ)㊁糖化血红蛋白(ＨｂＡ１ｃ)ꎬ肝脏甘油三酯(ＴＧ)㊁总胆固醇(ＴＣ)㊁低密度脂蛋白(ＬＤＬ－Ｃ)㊁高密度脂蛋白(ＨＤＬ－Ｃ)㊁丙二醛(ＭＤＡ)㊁超氧化物歧化酶(ＳＯＤ)ꎬ血浆和尿液中尿酸(ＵＡ)㊁肌酐(Ｃｒ)以及尿微量白蛋白(ｍＡＬＢ)水平ꎻＨＥ染色方法制备胰腺和肾脏组织病理切片ꎻＩＨＣ测定肾脏ｔｙｐｅ－ＩＶｃｏｌｌａｇｅｎ蛋白表达水平ꎮ结果㊀肉苁蓉多糖部位经过酒蒸后含量下降ꎬ肉苁蓉寡糖部位中的甜菜碱经过酒蒸后含量增加ꎬ总苷类成分酒蒸后松果菊苷的含量稍有下降ꎬ毛蕊花糖苷含量下降ꎬ异类叶升麻苷含量上升ꎮ与模型组相比ꎬ肉苁蓉和酒苁蓉不同提取部位能降低体重㊁空腹血糖(ＦＢＧ)㊁口服葡萄糖耐量(ＯＧＴＴ)㊁ＨｂＡ１ｃ㊁胰岛素抵抗指数(ＨＯＭＡ－ＩＲ)㊁胰岛β细胞分泌指数(ＨＯＭＡ－β)㊁ＭＤＡ㊁ＬＤＬ－Ｃ㊁ＵＡ㊁Ｃｒ以及ｍＡＬＢꎬＩＮＳ和ＨＤＬ－Ｃ有上升趋势(Ｐ<０.０５ꎬＰ<０.０１)ꎬ且能改善胰腺和肾脏的病理损伤以及ｔｙｐｅ－ＩＶｃｏｌｌａｇｅｎ的表达ꎮ结论㊀肉苁蓉和酒苁蓉总苷组降血糖作用较好ꎬ酒苁蓉多糖和寡糖也有一定的降血糖作用ꎮ关键词:肉苁蓉ꎻ总多糖ꎻ总寡糖ꎻ总苷ꎻｄｂ/ｄｂ小黑鼠ꎻ降血糖中图分类号:Ｒ２８５.５㊀文献标志码:Ａ㊀文章编号:２０９５－５３７５(２０２４)０１－０００６－００９ｄｏｉ:１０.１３５０６/ｊ.ｃｎｋｉ.ｊｐｒ.２０２４.０１.００２ＨｙｐｏｇｌｙｃｅｍｉｃｅｆｆｅｃｔｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｅｘｔｒａｃｔｓｏｆＣｉｓｔａｎｃｈｅｄｅｓｅｒｔｉｃｏｌａｏｎｄｂ/ｄｂｍｉｃｅＣＨＥＮＧＳｈｉｚａｎ１ꎬＬＩＡＮＪｉｎｇ１ꎬＮＩＥＺｉｘｕａｎ１ꎬＳＵＧｕｏｍｉｎｇ１ꎬＣＨＡＮＧＹｕａｎ１ꎬＳＨＩＪｉ１ꎬ２ꎬＪＩＡＴｉａｎｚｈｕ１ꎬ２(１.ＳｃｈｏｏｌｏｆＰｈａｒｍａｃｙꎬＬｉａｏｎｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅꎬＤａｌｉａｎ１１６６００ꎬＣｈｉｎａꎻ２.ＬｉａｏｎｉｎｇＴＣＭＰｒｏｃｅｓｓｉｎｇＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｅｒꎬＤａｌｉａｎ１１６６００ꎬＣｈｉｎａ)Ａｂｓｔｒａｃｔ:Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ㊀ＴｏｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｈｙｐｏｇｌｙｃｅｍｉｃｅｆｆｅｃｔａｎｄｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｅｘｔｒａｃｔｓｏｆＣｉｓｔａｎｃｈｅｄｅｓｅｒｔｉｃｏｌａａｎｄｐｒｏｃｅｓｓｅｄＣ.ｄｅｓｅｒｔｉｃｏｌａｏｎｄｂ/ｄｂｍｉｃｅ.Ｍｅｔｈｏｄｓ㊀ＴｈｅｔｏｔａｌｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓꎬｔｏｔａｌｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓａｎｄｔｏｔａｌｇｌｙｃｏｓｉｄｅｓｏｆＣ.ｄｅｓｅｒｔｉｃｏｌａａｎｄｐｒｏｃｅｓｓｅｄＣ.ｄｅｓｅｒｔｉｃｏｌａｗｅｒｅｅｎｒｉｃｈｅｄꎬａｎｄｔｈｅｉｒｃｏｎｔｅｎｔｓｗｅｒｅｃｏｍｐａｒｅｄａｎｄａｎａｌｙｚｅｄ.Ｓｅｌｅｃｔｄｂ/ｄｂｍｉｃｅａｓｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌａｎｉｍａｌｓ.Ａｆｔｅｒ２８ｄａｙｓｏｆａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎꎬｒｅｃｏｒｄｔｈｅｂｏｄｙｗｅｉｇｈｔꎬｆｏｏｄｉｎｔａｋｅꎬｗａｔｅｒｃｏｎｓｕｍｐｔｉｏｎꎬｂｌｏｏｄｇｌｕｃｏｓｅꎬｓｅｒｕｍｉｎｓｕｌｉｎ(ＩＮＳ)ꎬｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｅｄｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎ(ＨｂＡ１ｃ)ꎬｌｉｖｅｒｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅ(ＴＧ)ꎬｔｏｔａｌｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ(ＴＣ)ꎬｌｏｗｄｅｎｓｉｔｙｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ(ＬＤＬ－Ｃ)ꎬｈｉｇｈｄｅｎｓｉｔｙｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ(ＨＤＬ－Ｃ)ꎬｍａｌｏｎｄｉａｌｄｅｈｙｄｅ(ＭＤＡ)ꎬｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅｄｉｓｍｕｔａｓｅ(ＳＯＤ)ꎬｕｒｉｃａｃｉｄ(ＵＡ)ｉｎｐｌａｓｍａａｎｄｕｒｉｎｅｃｒｅａｔｉｎｉｎｅ(Ｃｒ)ａｎｄｕｒｉｎａｒｙｍｉｃｒｏａｌｂｕｍｉｎ(ｍＡＬＢ)ｌｅｖｅｌｓꎻＰａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｓｅｃｔｉｏｎｓｏｆｐａｎｃｒｅａｓａｎｄｋｉｄｎｅｙｗｅｒｅｐｒｅｐａｒｅｄｂｙＨＥｓｔａｉｎｉｎｇꎻＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｏｆｔｙｐｅ－ＩＶｃｏｌｌａｇｅｎｐｒｏｔｅｉｎｉｎｋｉｄｎｅｙｗａｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙｉｍｍｕ￣ｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ.Ｒｅｓｕｌｔｓ㊀ＴｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｉｎＣ.ｄｅｓｅｒｔｉｃｏｌａｄｅｃｒｅａｓｅｄａｆｔｅｒｗｉｎｅｓｔｅａｍｉｎｇꎬｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｂｅｔａ￣ｉｎｅｉｎｔｈｅｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｉｎＣ.ｄｅｓｅｒｔｉｃｏｌａｉｎｃｒｅａｓｅｄａｆｔｅｒｗｉｎｅｓｔｅａｍｉｎｇꎬｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｔｏｔａｌｇｌｙｃｏｓｉｄｅｓｄｅｃｒｅａｓｅｄｓｌｉｇｈｔｌｙａｆ￣ｔｅｒｗｉｎｅｓｔｅａｍｉｎｇꎬｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｖｅｒｂａｓｃｏｓｉｄｅｄｅｃｒｅａｓｅｄꎬａｎｄｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｉｓｏａｃｔｅｏｓｉｄｅｉｎｃｒｅａｓｅｄ.Ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐꎬｔｈｅｆａｓｔｉｎｇｂｌｏｏｄｇｌｕｃｏｓｅ(ＦＢＧ)ꎬｏｒａｌｇｌｕｃｏｓｅｔｏｌｅｒａｎｃｅ(ＯＧＴＴ)ꎬＨｂＡ１ｃꎬｉｎｓｕｌｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｉｎｄｅｘ(ＨＯＭＡ－ＩＲ)ꎬＨＯ￣ＭＡ－βꎬＭＤＡꎬＬＤＬ－ＣꎬＵＡꎬＣｒａｎｄｍＡＬＢｉｎｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｅｘｔｒａｃｔｓｏｆＣ.ｄｅｓｅｒｔｉｃｏｌａａｎｄｐｒｏｃｅｓｓｅｄＣ.ｄｅｓｅｒｔｉｃｏｌａｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉ￣ｃａｎｔｌｙｄｅｃｒｅａｓｅｄꎬＩＮＳａｎｄＨＤＬ－Ｃｓｈｏｗｅｄａｎｕｐｗａｒｄｔｒｅｎｄ(Ｐ<０.０５ꎬＰ<０.０１)ꎬａｎｄｃａｎｉｍｐｒｏｖｅｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｄａｍａｇｅｔｏｔｈｅｐａｎｃｒｅａｓａｎｄｋｉｄｎｅｙｓꎬａｓｗｅｌｌａｓｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｙｐｅ－ＩＶｃｏｌｌａｇｅｎ.Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ㊀ＴｈｅｔｏｔａｌｇｌｙｃｏｓｉｄｅｓｏｆＣ.ｄｅｓｅｒｔｉｃｏｌａａｎｄｐｒｏｃｅｓｓｅｄＣ.ｄｅｓｅｒｔｉｃｏｌａｈａｖｅｂｅｔｔｅｒｈｙｐｏｇｌｙｃｅｍｉｃｅｆｆｅｃｔｓꎬｗｈｉｌｅｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓａｎｄｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓｏｆｐｒｏｃｅｓｓｅｄＣ.ｄｅｓｅｒｔｉ￣ｃｏｌａａｌｓｏｈａｖｅｃｅｒｔａｉｎｈｙｐｏｇｌｙｃｅｍｉｃｅｆｆｅｃｔｓ.Ｋｅｙｗｏｒｄｓ:Ｃ.ｄｅｓｅｒｔｉｃｏｌａꎻＴｏｔａｌｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅꎻＴｏｔａｌｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅꎻＴｏｔａｌｇｌｙｃｏｓｉｄｅｓꎻｄｂ/ｄｂｍｉｃｅꎻＨｙｐｏｇｌｙｃｅｍｉｃ㊀㊀肉苁蓉为列当科植物肉苁蓉或管花肉苁蓉的干燥带鳞叶的肉质茎ꎮ春季苗刚出土时或秋季冻土之前采挖ꎬ除去茎尖ꎬ切段ꎬ晒干[１]ꎮ肉苁蓉具有补肾阳㊁益精血㊁润肠通便的功效ꎬ临床上多用于肾阳不足㊁精血亏虚㊁阳痿不孕㊁腰膝酸软㊁筋骨无力㊁肠燥便秘等ꎮ肉苁蓉的药理作用包括抗衰老㊁抗氧化㊁抗痴呆㊁抗疲劳以及润肠通便等[２－３]ꎮ肉苁蓉主要成分有苯乙醇苷类㊁环烯醚萜苷类㊁多糖等ꎬ其中苯乙醇苷类㊁多糖类成分为主要药效物质[４]ꎮ现代的药理研究表明ꎬ肉苁蓉多糖具有调节免疫活性㊁抗衰老㊁改善学习记忆能力㊁保护神经㊁抗肝损伤㊁抗病毒㊁抗肿瘤㊁影响肠道菌群等诸多药理作用[５]ꎮ肉苁蓉总苷具有滋补肝肾㊁益精血㊁抗氧化㊁抗衰老㊁免疫增强和神经保护作用[６]ꎮ«中国药典»２０２０年版(一部)收载有肉苁蓉片和酒苁蓉两个炮制品种ꎬ课题组前期研究发现ꎬ生品肉苁蓉偏于润肠通便ꎬ酒苁蓉补肾助阳作用明显增强ꎮ肉苁蓉总苷和总多糖为补肾阳的有效部位ꎬ肉苁蓉寡糖类成分为其润肠通便的有效部位[７]ꎮ肉苁蓉酒蒸过程中ꎬ苯乙醇苷类成分发生较大的变化ꎬ毛蕊花糖苷含量下降ꎬ而其同分异构体异毛蕊花糖苷含量明显增加[８]ꎮ２型糖尿病是由胰岛素抵抗ꎬ伴随胰岛β细胞结构和功能性损伤ꎬ继而导致胰岛素分泌不足ꎬ以血糖升高为主要特征的代谢疾病[９]ꎮ中医认为糖尿病往往与肾精有关ꎬ肾藏精ꎬ精亏则可诱发糖尿病ꎬ甚至会导致糖尿病肾病ꎮ２型糖尿病症状多表现为尿多㊁乏力㊁口渴喜饮㊁多食易饥等与肾阳虚类似症状ꎬ故中医临床治疗糖尿病多以补肾固本㊁补益肾阳为主[１０－１１]ꎮ文献报道ꎬ肉苁蓉中的苯乙醇苷类成分ꎬ如松果菊苷和毛蕊花糖苷不仅能够抑制餐后血糖水平的增加ꎬ而且能提高淀粉负荷小鼠的葡萄糖耐量[１２－１５]ꎮ这也提示着肉苁蓉具有降血糖的作用ꎮｄｂ/ｄｂ小黑鼠是由于瘦素(ｌｅｐｔｉｎ)受体基因缺陷导致的先天肥胖性Ｔ２ＤＭ小鼠ꎬ其瘦素受体基因失去功能ꎬ在出生后２周内就发生高胰岛素血症ꎬ３~４周发展为肥胖ꎬ８周后就发展为非常严重的高血糖症ꎬ期间伴有胰岛素抵抗ꎬβ细胞功能衰竭[１６－１７]ꎬ一般在８~１０个月内死亡ꎬ可并发明显的肾脏疾病[１８]ꎮ本研究以ｄｂ/ｄｂ小黑鼠为实验对象ꎬ分别富集肉苁蓉和酒苁蓉的总多糖㊁总寡糖和总苷类成分ꎬ并对不同提取部位的降血糖作用进行了比较研究ꎬ期望为肉苁蓉酒蒸的炮制机理提供科学依据ꎮ１㊀材料与仪器１.１㊀实验动物㊀自发性２型糖尿病小鼠模型的ＢＫＳ.Ｃｇ－Ｄｏｃｋ７ｍ＋/＋Ｌｅｐｒｄｂ/ＪＮｊｕ(基因型:ｄｂ/ｄｂ糖尿病小黑鼠)雄性７周龄的小黑鼠ꎬ体重３５~４０ｇꎬｄｂ/ｄｂｍ＋(基因型:ｄｂ/ｍ＋小黑鼠)雄性７周小黑鼠ꎬ体重量１８~２０ｇꎬ由南京大学－南京生物医药研究院ꎬ南京大学模式动物研究所提供ꎮ本研究方案通过辽宁中医药大学实验动物伦理委员会审核ꎬ批准编号:２０１８ＹＳＤＷ－０３０－０２ꎮ１.２㊀药物与试剂㊀肉苁蓉药材于２０１９年５月采自内蒙古阿拉善(批号:２０１９０５０８－１)ꎬ经辽宁中医药大学药学院翟延君教授鉴定为列当科植物肉苁蓉(ＣｉｓｔａｎｃｈｅｄｅｓｅｒｔｉｃｏｌａＹ.Ｃ.Ｍａ)的干燥带鳞叶肉质茎ꎬ标本保存于辽宁省中药炮制技术产业创新中心ꎮ松果菊苷(ｅｃｈｉｎａｃｏｓｉｄｅ)对照品(批号:ＭＵＳＴ－１３０８０８０１ꎬ纯度ȡ９８％)㊁毛蕊花糖苷(ｖｅｒｂａｓｃｏｓｉｄｅ)对照品(批号:ＭＵＳＴ－１３１２２７１１ꎬ纯度ȡ９８％)㊁异毛蕊花糖苷(ｉｓｏａｃｔｅｏｓｉｄｅ)对照品(批号:ＭＵＳＴ－１５０８１００１ꎬ纯度ȡ９９.７７％)㊁甜菜碱对照品(批号:８９４－２００００１ꎬ纯度ȡ９８％)均购自中国药品生物制品检定所ꎻＤ１０１型大孔树脂由成都曼斯特生物科技有限公司提供ꎮ小鼠抗８－羟基脱氧鸟苷(８－ＯＨｄＧ)单克隆抗体[批号:ａｂ６２６２３ꎬ艾博抗(上海)贸易有限公司]ꎻＰＡＳ(批号:Ｇ１２８１ꎬ北京索莱宝科技有限公司)ꎻ抗荧光淬灭封片液(海碧云天生物技术有限公司)ꎻＳＰ９００１兔ＳＰ检测试剂盒(无锡傲锐东源生物科技有限公司)ꎻＤＡＢ㊁胰岛素(ＩＮＳ)㊁糖化血红蛋白(ＨｂＡ１ｃ)㊁甘油三酯(ＴＧ)㊁小鼠总胆固醇(ＴＣ)㊁低密度脂蛋白(ＬＤＬ－Ｃ)㊁高密度脂蛋白(ＨＤＬ－Ｃ)㊁尿酸(ＵＡ)㊁肌酐(Ｃｒ)㊁丙二醛(ＭＤＡ)㊁超氧化物歧化酶(ＳＯＤ)㊁尿微量白蛋白(ｍＡＬＢ)试剂盒(上海朗顿生物技术有限公司)ꎮ胆固醇㊁二甲苯㊁无水乙醇㊁乙腈㊁甲醇为色谱纯ꎬ水为超纯水ꎬ其他试剂均为分析纯ꎮ１.３㊀主要仪器㊀ＡＣＱＵＩＴＹＨ－ＣｌａｓｓＵＰＬＣ(美国Ｗａｔｅｒｓ公司)ꎻ血糖仪和血糖试纸条(拜耳医药保健有限公司)ꎻＡＥ２４０型１/１０万电子分析天平(瑞士梅特勒－托利多公司)ꎻＦＡ１００４型电子天平(上海精密科学仪器有限公司)ꎻＢＮ－５１８生物组织自动包埋机(湖北伯纳医疗科技有限公司)ꎻ电热恒温干燥箱(忠伟电子仪表有限公司)ꎻＬｅｉｃａＲＭ２２４５切片机(德国ＬｅｉｃａＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ公司)ꎻｐＨ酸度计(上海鹏顺科学仪器有限公司)ꎻＭｉｌｌｉ－ＱＩｎｔｅｇｒａｌ３型净水机(法国Ｍｏｌｓｈｅｉｍ公司)ꎮ２㊀实验方法２.１㊀肉苁蓉炮制品制备㊀肉苁蓉:取肉苁蓉药材ꎬ洗净杂质ꎬ上锅常压蒸制２ｈꎬ切成６ｍｍꎬ７０ħ烘干ꎮ酒苁蓉:取肉苁蓉饮片ꎬ加入适量黄酒拌匀ꎬ闷润８ｈ(黄酒ʒ水＝１ʒ１)ꎬ高压蒸制４ｈꎬ７０ħ烘干ꎮ(每１００ｇ肉苁蓉用黄酒３０ｍＬ)ꎮ２.２㊀肉苁蓉/酒苁蓉不同提取部位富集㊀取肉苁蓉/酒苁蓉粗粉３０ｇꎬ加１０倍量水加热回流提取２次ꎬ每次２ｈꎬ合并提取液ꎬ浓缩ꎬ加乙醇至含醇量达６０％ꎬ低温沉淀１２ｈꎬ抽滤ꎬ沉淀即为粗多糖部位ꎮ将上清液浓缩至适当浓度ꎬ上Ｄ１０１大孔吸附树脂ꎬ依次用水和不同浓度的乙醇洗脱ꎬ收集水洗脱液ꎬ减压浓缩至稠膏ꎬ即为总寡糖部位ꎻ４０％乙醇洗脱液ꎬ减压浓缩干燥ꎬ即为肉苁蓉总苷部位ꎮ２.３㊀肉苁蓉/酒苁蓉不同提取部位含量测定２.３.１㊀肉苁蓉/酒苁蓉总多糖的含量测定㊀称取葡萄糖样品２０.００ｍｇ于５０ｍＬ容量瓶中ꎬ制成０.４ｍｇ ｍＬ－１的葡萄糖标准溶液ꎬ分别吸取３㊁４㊁５㊁６㊁７ｍＬ置于５０ｍＬ容量瓶ꎬ用水定容至刻度ꎬ分别吸取各个浓度梯度的葡萄糖溶液２.０ｍＬ于试管中ꎬ另取等量蒸馏水作空白对照ꎬ在各管加入１ｍＬ５％苯酚ꎬ摇匀ꎬ迅速加入５ｍＬ浓硫酸ꎬ放置１０ｍｉｎꎬ置４０ħ水浴中保持１５ｍｉｎꎬ取出ꎬ迅速冷却至室温ꎬ在４９０ｎｍ处测其吸光度值ꎬ以吸光度(Ａ)为纵坐标ꎬ葡萄糖浓度(Ｃ)为横坐标ꎬ绘制标准曲线ꎬ得回归方程Ｙ＝８.３７Ｘ－０.１６２８(Ｒ２＝０.９９４６)ꎮ精密称取生㊁制品总多糖部分的粉末１.０ｇꎬ分别置于５０ｍＬ容量瓶中ꎬ加水溶解并定容至刻度ꎬ精密吸取２.０ｍＬ于试管中ꎬ同标准曲线制备方法ꎬ测定ꎬ即得ꎮ２.３.２㊀肉苁蓉/酒苁蓉中甜菜碱的含量测定２.３.２.１㊀对照品溶液制备㊀精密称定甜菜碱对照品１.１７ｍｇꎬ放入５ｍＬ量瓶中ꎬ加入５０％甲醇溶解并定容ꎬ即得ꎮ２.３.２.２㊀色谱条件㊀色谱柱为Ｅｃｏｓｉｌ１２０－５－ＡＭＩＮＯ色谱柱(４.６ｍｍˑ２５０ｍｍꎬ５μｍ)ꎬ流动相:乙腈－水(９９.５ʒ０.５)ꎬ柱温:３０ħꎬ检测波长:１９４ｎｍꎬ流速:０.６ｍＬ ｍｉｎ－１ꎬ进样量１０μＬꎬ色谱图见图１ꎮＡ.甜菜碱对照品ꎻＢ.肉苁蓉总寡糖部位ꎻＣ.酒苁蓉总寡糖部位图１㊀肉苁蓉/酒苁蓉总寡糖部位的高效液相色谱图２.３.２.３㊀供试品溶液的制备㊀精密称取生㊁制品总寡糖部位的粉末１.０ｇꎬ分别置于５ｍＬ容量瓶中ꎬ加蒸馏水溶解并定容至刻度ꎬ摇匀ꎬ过０.４５μＬ微孔滤膜ꎬ即得ꎮ２.３.２.４㊀样品含量测定㊀精密吸取生㊁制肉苁蓉中总寡糖供试品溶液ꎬ按 ２.３.２.２ 项下条件测定ꎬ计算样品中甜菜碱含量ꎮ２.３.３㊀肉苁蓉/酒苁蓉中松果菊苷㊁毛蕊花糖苷和异类叶升麻苷含量测定２.３.３.１㊀对照品溶液的制备㊀精密称定松果菊苷４.５０ｍｇ㊁毛蕊花糖苷４.８０ｍｇ㊁异类叶升麻苷５.０５ｍｇ分别放入５ｍＬ容量瓶内ꎬ加５０％甲醇溶解并定容至刻度ꎬ分别取各对照品溶液２００μＬꎬ置于进样小瓶内ꎬ加４００μＬ５０％甲醇ꎬ混匀ꎬ制成混合对照品溶液ꎬ摇匀ꎬ即得ꎮ２.３.３.２㊀色谱条件㊀色谱柱为ＥｃｏｓｉｌＣ１８(４.６ｍｍˑ２５０ｍｍꎬ５μｍ)ꎬ甲醇为流动相Ａꎬ０.１％甲酸为流动相Ｂꎬ梯度洗脱ꎬ０~４５ｍｉｎꎬ３０％Ａң７０％Ａꎬ流速１.０ｍＬ ｍｉｎ－１ꎬ柱温３０ħꎬ检测波长３３０ｎｍꎬ进样量１０μＬꎬ色谱图见图２ꎮＡ.混合对照品ꎻＢ.肉苁蓉总苷部位ꎻＣ.酒苁蓉总苷部位㊀１.松果菊苷ꎻ２.毛蕊花糖苷ꎻ３.异类叶升麻苷图２㊀肉苁蓉/酒苁蓉总苷的样品高效液相色谱图２.３.３.３㊀供试品溶液的制备㊀精密称取生㊁制品总苷部分粉末１.０ｇꎬ分别置于１００ｍＬ容量瓶中ꎬ加５０％甲醇溶解并定容至刻度ꎬ摇匀ꎮ各精密吸取５ｍＬ置于１０ｍＬ容量瓶中ꎬ加入５０％甲醇定容ꎬ摇匀ꎬ过０.４５μｍ微孔滤膜ꎬ即得ꎮ２.３.３.４㊀样品含量测定㊀精密吸取肉苁蓉总苷样品ꎬ按 ２.３.３.２ 项下条件测定ꎮ计算样品中松果菊苷㊁毛蕊花糖苷以及异类叶升麻苷的含量ꎮ２.４㊀动物分组㊁造模及给药㊀动物房为１２ｈ光照㊁１２ｈ黑暗ꎬ相对湿度为５０％~７０％ꎬ室温为１８~２２ħꎮｄｂ/ｄｂ小黑鼠和ｄｂ/ｍ小黑鼠(正常对照组)以普通饲料正常喂养ꎬ至９周龄开始实验ꎬ除去正常对照组外ꎬ其余ｄｂ/ｄｂ小黑鼠根据血糖值及体重随机分为８组ꎬ分别是模型组㊁阳性对照组㊁肉苁蓉总多糖组㊁肉苁蓉总寡糖组㊁肉苁蓉总苷组㊁酒苁蓉总多糖组㊁酒苁蓉总寡糖组㊁酒苁蓉总苷组ꎮ除正常对照组和模型组外ꎬ其余各组大鼠按２ｍＬ/１００ｇ的剂量连续４周灌胃给药ꎬ药液浓度均为４.１ｇ ｋｇ－１ꎬ正常对照组和模型组同法同量灌胃生理盐水ꎮ２.５㊀肉苁蓉不同炮制品提取部位对ｄｂ/ｄｂ小黑鼠血糖水平的影响２.５.１㊀口服葡萄糖耐量(ＯＧＴＴ)检测㊀给药２６ｄ后ꎬ禁食１２ｈꎬ次日给药６０ｍｉｎ后ꎬ各组小黑鼠分别给予２.０ｇ ｋｇ－１的葡萄糖ꎬ分别于０㊁０.５㊁１.０㊁２.０ｈ尾静脉取血测定血糖值ꎬ以血糖值为纵坐标ꎬ时间为横坐标ꎬ制作血糖变化图ꎬ并按公式计算各实验组血糖曲线的线下面积(ＡＵＣꎬｈｍｍｏＬ Ｌ－１)[１９]ꎮＡＵＣ＝Ａˑ０.２５＋Ｂˑ０.５０＋Ｃˑ０.７５＋Ｄ式中:Ａ㊁Ｂ㊁Ｃ㊁Ｄ分别为０㊁０.５㊁１.０㊁２.０ｈ的血糖值ꎮ２.５.２㊀胰岛素抵抗指数及动脉硬化指数计算㊀根据文献方法计算胰岛素抵抗指数[２０]:ＨＯＭＡ－ＩＲ＝ＧｌｕｃｏｓｅˑＩｎｓｕｌｉｎ/２２.５ꎬＨＯＭＡ－β＝２０ˑＩｎｓｕｌｉｎ/(Ｇｌｕｃｏｓｅ－３.５)ˑ１００％ꎮＩＲ是胰岛素抵抗ꎬβ(％)是β细胞功能ꎮ葡萄糖的摩尔单位ｍｍｏＬ Ｌ－１ꎮ胰岛素以ｍＵ Ｌ－１给出ꎮ葡萄糖和胰岛素数字都是在禁食期间检测ꎮ根据Ｚｈｅｎｇ等[２１]描述的方法计算动脉硬化指数(Ａｔｈｅｒｏｇｅｎｉｃｉｎｄｅｘ)ꎬ计算方法:Ａｔｈｅｒｏ￣ｇｅｎｉｃｉｎｄｅｘ＝(ＴＣ－ＨＤＬ－Ｃ)/ＨＤＬ－Ｃꎮ２.５.３㊀肉苁蓉/酒苁蓉不同提取部位对ｄｂ/ｄｂ小黑鼠血清ＩＮＳ㊁ＨｂＡ１ｃ的影响㊀取冻存血清样品放至室温后ꎬ用于ＩＮＳ㊁ＨｂＡ１ｃ酶联免疫试剂盒的测试ꎬ严格按照试剂盒说明书的方法及步骤进行操作ꎮ２.６㊀肉苁蓉/酒苁蓉不同提取部位对ｄｂ/ｄｂ小黑鼠肝脏氧化应激水平影响㊀取冻存血清样品放至室温后ꎬ用于ＭＤＡ㊁ＳＯＤ酶联免疫试剂盒的测试ꎬ严格按照试剂盒说明书的方法及步骤进行操作ꎮ２.７㊀肉苁蓉/酒苁蓉不同提取部位对ｄｂ/ｄｂ小黑鼠肝脏脂肪代谢的影响㊀大鼠血清ＴＧ㊁ＴＣ㊁ＨＤＬ－Ｃ㊁ＬＤＬ－Ｃ水平测定均采用相关试剂盒测定ꎬ具体测定步骤参考试剂盒说明书ꎮ２.８㊀肉苁蓉/酒苁蓉不同提取部位对ｄｂ/ｄｂ小黑鼠血浆和尿液中ＵＡ㊁Ｃｒ以及ｍＡＬＢ的影响㊀取冻存血浆㊁尿液样品放至室温后ꎬ用于ＵＡ㊁Ｃｒ㊁ｍＡＬＢ酶联免疫试剂盒的测试ꎬ严格按照试剂盒说明书的方法及步骤进行操作ꎮ２.９㊀ＨＥ染色法观察胰腺和肾脏病理切片㊀取出经１０％多聚甲醛固定液浸泡２４ｈ后的胰腺㊁肾脏组织ꎬ蒸馏水清洗组织后保存于７０％乙醇中ꎮ取出组织样品ꎬ经过梯度乙醇脱水㊁透明处理㊁石蜡包埋和切片处理ꎬ然后用苏木精和伊红染色(Ｈ＆Ｅ染色)ꎮ待切片胶干后用高分辨率数码成像系统观察切片并拍照ꎮ２.１０㊀免疫组化法测定肾脏组织ｔｙｐｅ－ＩＶｃｏｌｌａｇｅｎ的表达㊀取肾脏切片脱蜡至水后进行抗原修复ꎬ１０％山羊血清封闭ꎬ一抗４ħ孵育过夜ꎬ洗涤后孵育二抗ꎬ现配溶液ＤＡＢ显色ꎬ洗涤㊁脱水㊁封片ꎬ于光学显微镜下观察肾脏组织ｔｙｐｅ－ＩＶｃｏｌｌａｇｅｎ蛋白表达ꎮ２.１１㊀统计学方法㊀运用ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍＶｅｒｓｉｏｎ５.０１(２００７ꎬＧｒａｐｈＰａｄＳｏｆｔｗａｒｅｉｎｃ)软件分析数据ꎬ结果以ｍｅａｎʃＳ.Ｅ.Ｍ.表示ꎬ两组间差异进行Ｏｎｅ－ｗａｙＡＮＯＶＡ(ｆｏｌｌｏｗｅｄｂｙＢｏｎｆｅｒｒｏｎｉᶄｓｃｏｍｐａｒｅｓｅｌｅｃｔｅｄｐａｉｒｓｏｆｃｏｌｕｍｎｔｅｓｔ)方法ꎬＰ<０.０５为差异显著ꎬ具有统计学意义ꎮ３㊀实验结果３.１㊀肉苁蓉/酒苁蓉不同提取部位含量测定结果㊀按 ２.３ 项下条件测定ꎬ肉苁蓉及酒苁蓉不同提取部位含量测定结果见表１ꎮ表１㊀肉苁蓉/酒苁蓉不同提取部位含量测定结果成分总多糖(％)甜菜碱/ｍｇ ｇ－１松果菊苷/ｍｇ ｇ－１毛蕊花糖苷/ｍｇ ｇ－１异类叶升麻苷/ｍｇ ｇ－１肉苁蓉１.３８０.９８７５２.０１０２０.９５８２０.５８２０酒苁蓉１.１９１.０４４１１.８２６７０.７１４７０.６７０５３.２㊀药理学指标测定结果３.２.１㊀一般情况观察㊀动物实验周期为４周ꎬ每周测定小黑鼠的空腹体重ꎬ结果见表２ꎮ灌胃实验开始至结束ꎬ模型组小黑鼠的体重出现持续上升ꎬ符合２型糖尿病模型体重增加的特征ꎮ正常对照组大鼠的体重基本不变ꎮ不同给药组对ｄｂ/ｄｂ小黑鼠灌胃１周后ꎬ与模型组相比ꎬ各给药组大鼠体重增加的状态均有不同程度改善ꎬ其中以酒苁蓉总苷的改善作用最为明显(Ｐ<０.０５)ꎻ不同给药组对ｄｂ/ｄｂ小黑鼠灌胃２周和４周后ꎬ酒苁蓉寡糖体重改善明显(Ｐ<０.０５或Ｐ<０.０１)ꎮ以上结果表明ꎬ肉苁蓉及酒苁蓉不同提取部位对ｄｂ/ｄｂ小黑鼠有降低体重的作用ꎬ结果见表２ꎮ表２㊀肉苁蓉/酒苁蓉不同提取部位对ｄｂ/ｄｂ小黑鼠体重的影响(ｇ)组别０ｄ７ｄ１４ｄ２１ｄ２８ｄ正常对照组２０.００ʃ０.３９２０.４７ʃ０.６７１８.０７ʃ１.００１９.５７ʃ１.３３１９.９７ʃ１.４７模型组３８.７８ʃ０.５０＃４０.７５ʃ１.６８＃＃３７.９３ʃ１.２０＃＃４１.３０ʃ０.８０＃＃４６.５５ʃ１.１９＃＃阳性对照组３７.９０ʃ１.８０３９.８８ʃ１.７４３６.９５ʃ１.９４３８.６０ʃ１.５６４３.４７ʃ１.９６肉苁蓉多糖组３９.９７ʃ１.０３３９.６０ʃ０.７６３７.９２ʃ１.４４４２.１７ʃ１.４８４４.８３ʃ１.４０肉苁蓉寡糖组３９.３３ʃ１.７１４０.４２ʃ２.０２３９.４７ʃ１.３８４１.０３ʃ２.１６４３.９２ʃ２.１４肉苁蓉总苷组３９.５３ʃ１.２４４０.４７ʃ１.１６３９.５５ʃ１.０９４２.６３ʃ１.２４４６.２２ʃ１.１８酒苁蓉多糖组３９.２０ʃ１.１６３９.４５ʃ１.２８３８.１７ʃ０.８１４２.４５ʃ０.９３４４.７０ʃ１.０５酒苁蓉寡糖组３６.８８ʃ０.６２３８.５８ʃ１.１７３４.１０ʃ０.５５∗３８.０３ʃ０.７１４０.６８ʃ０.６１∗∗酒苁蓉总苷组３７.２５ʃ０.６５３６.１０ʃ０.９７∗３６.１０ʃ０.４３３９.５８ʃ１.０３４３.４２ʃ１.０３㊀注:与正常对照组比较ꎬ＃Ｐ<０.０５ꎬ＃＃Ｐ<０.０１ꎻ与模型组比较ꎬ∗Ｐ<０.０５ꎬ∗∗Ｐ<０.０１ꎮ３.２.２㊀肉苁蓉不同炮制品提取部位对ｄｂ/ｄｂ小黑鼠血糖水平的影响㊀正常对照组ｄｂ/ｄｂ小黑鼠血糖均维持在一个正常水平(４.３~５.７ｍｍｏＬ Ｌ－１)ꎬ而模型组小黑鼠血糖持续升高(Ｐ<０.０１)ꎮ与模型组相比ꎬ给药１周后ꎬ肉苁蓉总多糖㊁总寡糖㊁总苷组及酒苁蓉总多糖㊁总寡糖㊁总苷ＦＢＧ降低(Ｐ<０.０１)ꎻ给药２周后ꎬ酒苁蓉总苷ＦＢＧ降低(Ｐ<０.０５)ꎻ给药３周后ꎬ肉苁蓉总多糖和酒苁蓉总寡糖ＦＢＧ降低(Ｐ<０.０５或Ｐ<０.０１)ꎻ给药４周后ꎬ肉苁蓉总多糖㊁总寡糖及酒苁蓉总多糖㊁总寡糖㊁总苷ＦＢＧ降低(Ｐ<０.０５)ꎬ结果见表３ꎮ㊀㊀在口服葡萄糖耐量实验(见表４)中ꎬ正常对照组小黑鼠的平均血糖水平在３０ｍｉｎ时达到峰值ꎬ然后快速下降到正常水平ꎮ而模型组小黑鼠的平均血糖水平在３０ｍｉｎ达到峰值后ꎬ继续保持在较高的水平ꎮ与模型组相比ꎬ各给药组小黑鼠血糖达到最高值后呈不同程度的下降趋势ꎬ其中酒苁蓉总多糖㊁总寡糖和总苷组下降速度较快ꎮ此外ꎬ根据计算得各组ＡＵＣꎬ结果显示各给药组小黑鼠ＡＵＣ均低于模型组ꎬ肉苁蓉总多糖和酒苁蓉总苷降低了给予葡萄糖后２个时间点(９０㊁１２０ｍｉｎ)的血糖值(Ｐ<０.０５或Ｐ<０.０１)ꎬ肉苁蓉总寡糖和酒苁蓉总多糖降低了给予葡萄糖１２０ｍｉｎ后的血糖值(Ｐ<０.０５)ꎬ酒苁蓉总寡糖降低了给予葡萄糖后３个时间点(０㊁９０㊁１２０ｍｉｎ)及曲线下面积(Ｐ<０.０５或Ｐ<０.０１)ꎮ结果表明ꎬ肉苁蓉和酒苁蓉可改善ｄｂ/ｄｂ小黑鼠的ＯＧＴＴ能力ꎮ表３㊀肉苁蓉不同炮制品及提取部位对ｄｂ/ｄｂ小黑鼠ＦＢＧ值的影响(ｍｍｏＬ Ｌ－１)组别０ｄ７ｄ１４ｄ２１ｄ２８ｄ正常对照组５.３３ʃ０.２８４.９７ʃ０.５２４.３３ʃ０.２２５.６７ʃ０.５３５.１０ʃ０.３３模型组１６.９２ʃ１.８８＃＃１９.５５ʃ３.３１＃＃１４.９０ʃ１.４０＃＃１２.４０ʃ０.７８＃＃１２.８２ʃ０.７７＃＃阳性对照组１６.９２ʃ１.０６１４.２０ʃ１.９１∗８.６０ʃ０.８９∗∗１０.２０ʃ１.４８１０.３５ʃ２.０８肉苁蓉多糖组１５.４７ʃ０.８６１１.３２ʃ１.０９∗∗１４.０７ʃ１.７７７.７３ʃ０.７７∗９.０５ʃ１.１４∗肉苁蓉寡糖组１７.３５ʃ３.２３１０.００ʃ１.０５∗∗１１.５５ʃ１.０８１１.０２ʃ０.７９９.１８ʃ１.００∗肉苁蓉总苷组１６.６３ʃ１.５８８.３２ʃ１.９５∗∗１２.７７ʃ２.０１１４.８５ʃ３.０７１２.００ʃ１.９３酒苁蓉多糖组１７.１５ʃ１.７６１１.３０ʃ１.４９∗∗１４.６８ʃ１.２５１２.５５ʃ１.００８.８２ʃ０.９１∗酒苁蓉寡糖组１３.００ʃ１.３１９.４３ʃ１.６９∗∗６.４３ʃ１.５６.５５ʃ０.５８∗∗８.９０ʃ１.０３∗酒苁蓉总苷组１４.６３ʃ０.５７１２.７５ʃ０.９６∗∗１０.６３ʃ１.４８∗９.８０ʃ１.１０８.２７ʃ０.３４∗㊀注:与正常对照组比较ꎬ＃Ｐ<０.０５ꎬ＃＃Ｐ<０.０１ꎻ与模型组比较ꎬ∗Ｐ<０.０５ꎬ∗∗Ｐ<０.０１ꎮ㊀㊀与正常对照组相比ꎬ模型组小黑鼠胰岛素抵抗指数(ＨＯＭＡ－ＩＲ)㊁ＨｂＡ１ｃ水平升高(Ｐ<０.０５)ꎬ胰岛β细胞分泌指数(ＨＯＭＡ－β)水平降低ꎮ与模型组相比ꎬ肉苁蓉寡糖组㊁肉苁蓉多糖组㊁酒苁蓉寡糖组与酒苁蓉总苷组血清ＨｂＡ１ｃ含量明显降低(Ｐ<０.０５)ꎻ肉苁蓉多糖组㊁酒苁蓉多糖组㊁酒苁蓉寡糖组与酒苁蓉总苷组ＨＯＭＡ－ＩＲ指数明显降低(Ｐ<０.０５)ꎻ经过给药组干预４周后ꎬ与模型组相比ꎬ各给药组小黑鼠胰岛β细胞分泌指数水平均有不同程度的升高ꎬ结果见表５ꎮ胰岛素属于一种蛋白质激素ꎬ主要由胰腺组织中的胰岛β细胞合成与分泌ꎬ参与机体的糖代谢ꎬ维持机体血糖平衡ꎬ血清ＩＮＳ水平可反映糖尿病治疗的效果ꎮ从表５可知ꎬ与正常组相比ꎬ模型组小黑鼠的ＩＮＳ水平显著降低(Ｐ<０.０１)ꎮ经过给药组干预４周后ꎬ与模型组相比ꎬ各给药组小黑鼠空腹血清胰岛素水平均有不同程度的升高ꎬ其中以肉苁蓉和酒苁蓉的总苷组升高最为明显ꎮ结果表明ꎬ各给药组可提高ｄｂ/ｄｂ小黑鼠的血清胰岛素水平ꎬ促进胰岛β－细胞分泌胰岛素ꎮ表４㊀肉苁蓉不同炮制品及提取部位对ｄｂ/ｄｂ小黑鼠ＯＧＴＴ的影响组别ＡＵＣ/ｈ ｍｍｏＬ Ｌ－１０ｍｉｎ３０ｍｉｎ６０ｍｉｎ９０ｍｉｎ１２０ｍｉｎ正常对照组１４.９８ʃ２.９４４.６５ʃ０.３０９.００ʃ３.５７６.６５ʃ１.３２４.６８ʃ０.３３４.３２ʃ０.５７模型组３６.９１ʃ１.２２＃＃１２.２３ʃ１.１８＃＃２３.０２ʃ２.４２＃＃１３.３８ʃ０.８５＃＃１２.４ʃ０.２３＃＃１２.１３ʃ０.３６＃＃阳性对照组３０.９６ʃ２.６２１０.５０ʃ０.８７２０.６３ʃ２.７３１３.４０ʃ１.６６８.４３ʃ１.０２∗∗７.９７ʃ０.５４∗∗肉苁蓉多糖组３３.９０ʃ０.９０１４.７０ʃ２.８０２８.４２ʃ２.６９１０.６３ʃ０.４０８.２５ʃ０.２４∗∗８.０５ʃ０.５８∗∗肉苁蓉寡糖组３６.８１ʃ０.３６１３.２０ʃ１.７４２９.７５ʃ０.５６１２.８５ʃ０.９７９.８０ʃ０.９７９.００ʃ０.３２∗肉苁蓉总苷组３５.９７ʃ２.７８１５.０８ʃ３.３３２８.２０ʃ４.７７１３.８８ʃ３.３３１１.７０ʃ１.２４１０.２０ʃ０.６５酒苁蓉多糖组３３.２５ʃ２.７８１１.１０ʃ１.１０２６.４０ʃ２.４７１０.９０ʃ１.０７１０.９８ʃ１.４５９.１０ʃ１.５０∗酒苁蓉寡糖组２６.４２ʃ２.７１∗∗８.００ʃ０.８８∗２１.１５ʃ３.４３９.４３ʃ１.４１８.０５ʃ１.００∗∗６.７８ʃ０.３６∗∗酒苁蓉总苷组３２.９７ʃ２.４７１０.７３ʃ０.３３２６.２２ʃ２.５６１１.２０ʃ１.２０８.８５ʃ０.９５∗８.７７ʃ０.９３∗㊀注:与正常对照组比较ꎬ＃Ｐ<０.０５ꎬ＃＃Ｐ<０.０１ꎻ与模型组比较ꎬ∗Ｐ<０.０５ꎬ∗∗Ｐ<０.０１ꎮ表５㊀ｄｂ/ｄｂ小黑鼠的ＨＯＭＡ－ＩＲ㊁ＨＯＭＡ－β和血清ＨｂＡ１ｃ㊁ＩＮＳ水平组别ＨｂＡ１ｃ/ｎｇ ｍＬ－１ＩＮＳ/ｍＵ Ｌ－１ＨＯＭＡ－ＩＲＨＯＭＡ－β正常对照组３９.９１ʃ２.５３６６.３９ʃ６.１６１２.１７ʃ０.５７６３.４８ʃ５.８３模型组５０.６２ʃ４.２０＃４５.９５ʃ１.８１＃＃３１.３４ʃ６.６４＃＃１６.３２ʃ１.１８＃＃阳性对照组４５.８３ʃ３.１８５４.９１ʃ３.３１∗２６.０１ʃ６.４６２１.９０ʃ１.８６肉苁蓉多糖组３８.４３ʃ０.２０∗４８.５０ʃ３.１０１９.６４ʃ２.９９∗１８.２７ʃ１.８９肉苁蓉寡糖组３７.６０ʃ３.６８∗５２.９５ʃ２.８９２１.８９ʃ３.３３２０.９４ʃ２.３６肉苁蓉总苷组４０.３７ʃ３.６７５３.４２ʃ２.３５２７.３５ʃ４.０２１９.７１ʃ１.４５酒苁蓉多糖组４５.１３ʃ３.６７４６.１６ʃ３.１２１８.２４ʃ２.６０∗１７.０９ʃ１.００酒苁蓉寡糖组３７.３０ʃ５.９９∗４７.９５ʃ６.０３１９.３２ʃ３.８０∗２０.２０ʃ３.２７酒苁蓉总苷组４０.２０ʃ１.０１∗５１.９４ʃ３.０７１９.０４ʃ１.０８∗２０.５４ʃ１.８６㊀注:与正常对照组比较ꎬ＃Ｐ<０.０５ꎬ＃＃Ｐ<０.０１ꎻ与模型组比较ꎬ∗Ｐ<０.０５ꎬ∗∗Ｐ<０.０１ꎮ３.２.３㊀肉苁蓉/酒苁蓉不同提取部位对ｄｂ/ｄｂ小黑鼠肝脏氧化应激水平影响㊀模型组小黑鼠肝脏ＭＤＡ水平显著高于正常组(Ｐ<０.０５)ꎮ经过给药组干预４周后ꎬ与模型组相比ꎬ各给药组的ＭＤＡ水平均出现不同程度下降(Ｐ<０.０５)ꎬ其中肉苁蓉总多糖㊁肉苁蓉总寡糖㊁肉苁蓉总苷㊁酒苁蓉总苷和酒苁蓉总寡糖的小黑鼠肝脏组织ＭＤＡ水平减少最明显(Ｐ<０.０５或Ｐ<０.０１)ꎮ结果表明ꎬ肉苁蓉对降低ｄｂ/ｄｂ小黑鼠肝脏组织ＭＤＡ水平具有一定的效果ꎬ改善效果好于酒苁蓉给药组ꎮ模型组小黑鼠肝组织中ＳＯＤ活力低于正常对照组(Ｐ<０.０５)ꎮ当给予肉苁蓉和酒苁蓉不同提取部位灌胃后ꎬ可提高ｄｂ/ｄｂ小黑鼠肝脏组织中ＳＯＤ活力ꎬ与模型组相比ꎬ各给药组均可恢复ＳＯＤ活力ꎬ其中肉苁蓉总苷组差异有统计学意义(Ｐ<０.０５)ꎬ结果见表６ꎮ３.２.４㊀肉苁蓉/酒苁蓉不同提取部位对ｄｂ/ｄｂ小黑鼠肝脏脂肪代谢的影响㊀为评价肉苁蓉/酒苁蓉对ｄｂ/ｄｂ小黑鼠的血清血脂代谢水平影响ꎬ实验检测了糖尿病脂质代谢相关标志物ꎮ从表７可知ꎬ与正常对照组相比ꎬ模型组小黑鼠血清ＬＤＬ－Ｃ水平显著升高(Ｐ<０.０５)ꎬＨＤＬ－Ｃ水平降低ꎮ经过给药干预４周后ꎬ与模型组相比ꎬ肉苁蓉总多糖㊁总寡糖和总苷组以及酒苁蓉总多糖㊁总寡糖和总苷组的血清ＴＧ㊁ＴＣ和ＬＤＬ－Ｃ水平均出现不同程度降低ꎬＨＤＬ－Ｃ水平升高ꎬ其中肉苁蓉总苷组有改善ＴＣ水平作用(Ｐ<０.０５)ꎮ结果表明ꎬ肉苁蓉和酒苁蓉在一定程度上可改善ｄｂ/ｄｂ小黑鼠的脂代谢紊乱ꎮ表６㊀ｄｂ/ｄｂ小黑鼠的肝脏重量㊁相对肝脏重量和肝脏ＳＯＤ㊁ＭＤＡ水平组别肝脏重量/ｇ相对肝脏重量(％)ＳＯＤ/ｎｍｏＬ ｍＬ－１ＭＤＡ/ｎｇ ｍＬ－１正常对照组０.８６ʃ０.０３４.３３ʃ０.２０１９.８９ʃ０.５４３３.９４ʃ１.０５模型组２.３９ʃ０.０９＃＃５.１２ʃ０.１１＃１７.３６ʃ０.９８＃３８.３２ʃ０.９４＃阳性对照组２.１３ʃ０.２０４.８７ʃ０.２８１６.９２ʃ０.１９３０.５３ʃ０.８６∗∗肉苁蓉多糖组２.１３ʃ０.０６４.７５ʃ０.１７１８.５３ʃ０.５６３１.３１ʃ０.４１∗∗肉苁蓉寡糖组２.１８ʃ１.１３４.８５ʃ０.３９１８.９５ʃ０.８７３１.８１ʃ０.４２∗∗肉苁蓉总苷组２.３５ʃ０.２１５.０８ʃ０.４２１９.８２ʃ０.５０∗３０.５１ʃ１.３８∗∗酒苁蓉多糖组２.３３ʃ０.０５５.２３ʃ０.２０１８.０３ʃ０.４０３６.４６ʃ１.２５酒苁蓉寡糖组１.７７ʃ０.１２∗∗４.３５ʃ０.２４∗１９.１７ʃ０.８６３４.０６ʃ０.８７∗酒苁蓉总苷组２.２２ʃ０.０５５.１３ʃ０.２０１８.６１ʃ１.４７３３.１９ʃ３.１５∗㊀注:与正常对照组比较ꎬ＃Ｐ<０.０５ꎬ＃＃Ｐ<０.０１ꎻ与模型组比较ꎬ∗Ｐ<０.０５ꎬ∗∗Ｐ<０.０１ꎮ３.２.５㊀肉苁蓉/酒苁蓉不同提取部位对ｄｂ/ｄｂ小黑鼠血浆和尿液中ＵＡ㊁Ｃｒ以及ｍＡＬＢ的影响㊀给药４周后ꎬ与模型组相比ꎬ肉苁蓉总多糖㊁总寡糖以及酒苁蓉总苷组的ＵＡ㊁Ｃｒ以及ｍＡＬＢ水平均出现不同程度的降低ꎬ其中肉苁蓉总苷组对血浆中的Ｃｒ以及尿液中的Ｃｒ㊁ＵＡ和ｍＡＬＢ有降低作用(Ｐ<０.０５或Ｐ<０.０１)ꎬ酒苁蓉多糖组对尿液中的ＵＡ㊁Ｃｒ以及ｍＡＬＢ水平改善作用(Ｐ<０.０５或Ｐ<０.０１)ꎬ酒苁蓉对血浆中ＵＡ水平有改善作用(Ｐ<０.０５)ꎬ肉苁蓉总苷一定程度上可降低ｄｂ/ｄｂ小黑鼠血浆ＵＡ㊁Ｃｒ以及ｍＡＬＢ水平ꎮ３.２.６㊀肉苁蓉不同炮制品及提取部位对ｄｂ/ｄｂ小黑鼠胰腺㊁肾脏组织病理学影响㊀正常对照组小黑鼠胰腺组织无病理学损伤ꎬ胰岛可见清晰边缘ꎬ胰岛细胞呈椭圆形且有序排列在胞浆中ꎬ细胞核呈圆形ꎬ胰岛数量较多且体积较大ꎮ模型组小黑鼠胰腺组织无完整胰岛ꎬ胰岛边缘不清晰且形状不完整ꎬ胰岛β细胞排列杂乱无章ꎬ数量较少ꎬ并出现萎缩现象ꎬ胰腺出现严重损伤ꎮ与模型组大鼠相比ꎬ经过肉苁蓉/酒苁蓉不同提取部位灌胃４周后ꎬ各提取部位给药组的胰岛组织部分恢复ꎬ胰岛细胞体积出现不同程度变大ꎬ胰岛细胞可见清晰的边界ꎬ排列无序的状况得到改善ꎮ其中ꎬ以肉苁蓉和酒苁蓉总苷组恢复的最好ꎮ表７㊀ｄｂ/ｄｂ小黑鼠的肝脏ＴＣ㊁ＬＤＬ－Ｃ㊁ＨＤＬ－Ｃ和ＴＧ水平组别ＴＧ/μｍｏＬ Ｌ－１ＬＤＬ－Ｃ/ｍｍｏＬ Ｌ－１ＴＣ/ｍｍｏＬ Ｌ－１ＨＤＬ－Ｃ/μｍｏＬ ｍＬ－１ＨＤＬ－Ｃ/ＴＣ动脉硬化指数正常对照组１.１２ʃ０.０４１.５８ʃ０.３０３.５６ʃ０.０９２.２８ʃ０.０２０.６４ʃ０.０２０.５６ʃ０.０４模型组１.１９ʃ０.０６２.２６ʃ０.１１＃＃３.６８ʃ０.１３＃＃２.２６ʃ０.０２０.６２ʃ０.０２０.６３ʃ０.０６阳性对照组１.０９ʃ０.０４２.１５ʃ０.０９３.２０ʃ０.１２２.１０ʃ０.０５０.６６ʃ０.０３０.５３ʃ０.０７肉苁蓉多糖组１.２３ʃ０.０５２.１１ʃ０.０８３.９７ʃ０.３３２.１８ʃ０.０４０.５６ʃ０.０４０.８２ʃ０.１４肉苁蓉寡糖组１.２８ʃ０.０９２.０３ʃ０.０９３.４６ʃ０.１８２.２７ʃ０.０５０.６６ʃ０.０４０.５３ʃ０.０９肉苁蓉总苷组１.１８ʃ０.０３１.９６ʃ０.０６３.０７ʃ０.２２∗２.１１ʃ０.０７０.７０ʃ０.０６０.４６ʃ０.１２酒苁蓉多糖组１.２６ʃ０.０３２.１９ʃ０.０４３.５９ʃ０.０７２.１４ʃ０.０５０.６０ʃ０.０２０.６８ʃ０.０７酒苁蓉寡糖组１.３７ʃ０.０３２.２７ʃ０.０９３.６３ʃ０.０８２.２７ʃ０.０６０.６３ʃ０.０２０.６０ʃ０.０６酒苁蓉总苷组１.２６ʃ０.０６２.２２ʃ０.０８３.６９ʃ０.２４２.２４ʃ０.０７０.６１ʃ０.０４０.６５ʃ０.０９㊀注:与正常对照组比较ꎬ＃Ｐ<０.０５ꎬ＃＃Ｐ<０.０１ꎻ与模型组比较ꎬ∗Ｐ<０.０５ꎬ∗∗Ｐ<０.０１ꎮ表８㊀治疗第２８天ｄｂ/ｄｂ小黑鼠血浆和尿液中ＵＡ㊁Ｃｒ以及ｍＡＬＢ水平组别Ｃｒ/ｍｇ ｄＬ－１ＵＡ/ｍｇ ｄＬ－１血浆尿液血浆尿液ｍＡＬＢ/μｇ ｄＬ－１正常对照组１.３５ʃ０.０２０.０４１ʃ０.００１１.５６ʃ０.０１９.８０ʃ０.０９８.８５ʃ０.１７模型组１.６２ʃ０.０８＃０.０４４ʃ０.００４１.６７ʃ０.０６＃＃１０.４０ʃ０.７６１１.１１ʃ０.１２阳性对照组１.４１ʃ０.０２０.０４７ʃ０.００１１.８２ʃ０.０７９.５７ʃ０.４８１０.６４ʃ０.７１肉苁蓉多糖组１.４７ʃ０.０８０.０４４ʃ０.００３１.６０ʃ０.０６９.４２ʃ１.０５９.２６ʃ１.４８肉苁蓉寡糖组１.４２ʃ０.０７０.０４０ʃ０.００２１.６３ʃ０.０５８.９４ʃ０.６４１１.０２ʃ０.８１肉苁蓉总苷组１.３３ʃ０.０８∗０.０３４ʃ０.００３∗１.７７ʃ０.１３７.７５ʃ０.５２∗∗９.１５ʃ０.４７∗酒苁蓉多糖组１.５８ʃ０.１１０.０３６ʃ０.００１∗１.６９ʃ０.０７８.０５ʃ０.０６∗∗７.８５ʃ０.６５∗酒苁蓉寡糖组１.４３ʃ０.９９∗０.０５２ʃ０.００４１.６６ʃ０.０７９.８６ʃ０.０６８.００ʃ１.２４酒苁蓉总苷组１.５３ʃ０.０９０.０４３ʃ０.００４１.８３ʃ０.０４９.２１ʃ０.３６１０.５９ʃ１.１９㊀注:与正常对照组比较ꎬ＃Ｐ<０.０５ꎬ＃＃Ｐ<０.０１ꎻ与模型组比较ꎬ∗Ｐ<０.０５ꎬ∗∗Ｐ<０.０１ꎮ图３㊀肉苁蓉/酒苁蓉不同提取部位对ｄｂ/ｄｂ小黑鼠胰腺病理学的影响(Ｈ＆Ｅꎬ２００ˑ)㊀㊀正常对照组小黑鼠的肾脏组织无明显损伤ꎬ肾小球结构㊁形态以及与肾小球囊腔的比例正常ꎬ近端小管与远端小管的管壁薄厚㊁管腔大小正常ꎮ模型组小黑鼠肾小球结构㊁形态㊁大小不规则ꎬ血管球萎缩㊁肾球囊腔消失ꎬ近端小管与远端小管的管壁薄厚不匀㊁管腔大小不一㊁界限不清模糊ꎬ肿胀坏死ꎬ有大量的炎性细胞浸润ꎮ与模型组大鼠相比ꎬ经过肉苁蓉/酒苁蓉不同提取部位灌胃４周后ꎬ各提取部位给药组的肾脏组织有所改善ꎬ肾小球结构㊁形态㊁大小接近正常ꎬ近端小管与远端小管的管壁薄㊁管腔大小得到改善ꎬ肿胀减轻ꎬ有的部位仍可见少量的炎性细胞浸润ꎮ其中以肉苁蓉多糖组和酒苁蓉多糖组恢复最好ꎮ３.２.７㊀肉苁蓉/酒苁蓉不同提取部位对ｄｂ/ｄｂ小黑鼠肾脏组织中ｔｙｐｅ－ＩＶｃｏｌｌａｇｅｎ表达㊀与正常组相图４㊀肉苁蓉/酒苁蓉不同提取部位对ｄｂ/ｄｂ小黑鼠肾脏病理学的影响(Ｈ＆Ｅꎬ２００ˑ)比ꎬ模型组小黑鼠肾脏ｔｙｐｅ－ＩＶｃｏｌｌａｇｅｎ蛋白表达发生了明显变化(Ｐ<０.０５)ꎮ与模型组相比ꎬ各给药组小黑鼠的平均肾膜基质面积增加ꎬ其中肉苁蓉多糖组㊁酒苁蓉寡糖组㊁酒苁蓉总苷组中ｔｙｐｅ－ＩＶｃｏｌｌａｇｅｎ的表达改善ꎬ而肾基膜中的ｔｙｐｅ－ＩＶｃｏｌｌａｇｅｎ表达差异无统计学意义ꎮ图５㊀肉苁蓉/酒苁蓉不同提取部位对ｄｂ/ｄｂ小黑鼠肾脏ｔｙｐｅ－ＩＶｃｏｌｌａｇｅｎ表达型胶原的表达结果４㊀讨论与结论本文研究表明肉苁蓉多糖部位经过酒蒸后含量下降ꎬ推测多糖在酒蒸过程中发生水解ꎻ肉苁蓉寡糖部位中的甜菜碱经过酒蒸后含量增加ꎬ炮制过程中可能生成了甜菜碱类成分ꎬ而使甜菜碱含量增加ꎻ总苷类成分ꎬ松果菊苷的含量稍有下降ꎬ毛蕊花糖苷含量下降ꎬ异类叶升麻苷含量上升ꎮ２型糖尿病(Ｔ２ＤＭ)的病因众多ꎬ其病机是由于β细胞功能障碍和胰岛素抵抗而引起糖㊁脂肪㊁蛋白质的代谢紊乱ꎮ其中基因㊁肥胖和体力活动显然是２型糖尿病最重要的风险因素[２２]ꎮ从中医学角度分析ꎬ２型糖尿病属于 消渴 范畴ꎬ而脾肾阳虚证是因为阳气耗损ꎬ在脾阳虚的状态下无法发挥滋补脾肾的作用ꎬ从而导致阳气损伤的发生[２３]ꎮＨｂＡ１ｃ是评价糖尿病血糖控制的 金标准 ꎮ英国前瞻性糖尿病研究发现ＨｂＡ１ｃ水平越高ꎬ糖尿病慢性并发症发生风险越大ꎮ本实验表明ꎬ肉苁蓉多糖和寡糖及酒苁蓉寡糖和总苷显著降低ＨｂＡ１ｃ水平ꎮＩＮＳ分泌相对不足是２型糖尿病的发病机制之一[２４]ꎮ本研究证明ꎬ肉苁蓉及酒苁蓉各部位均能提高胰岛素水平ꎬ说明生制肉苁蓉不同提取部位可增加胰岛素分泌ꎮｍＡＬＢ对于早期肾损害具有重要参考意义ꎬ而尿Ｃｒ能准确反映肾功能状态[２５]ꎮ肉苁蓉总苷和酒苁蓉总多糖显著降低了ｍＡＬＢ水平ꎬ肉苁蓉总苷㊁酒苁蓉多糖和寡糖显著降低了Ｃｒ水平ꎬ降低了肾功能损害ꎮＵＡ通过参与氧化应激ꎬ导致内皮功能障碍ꎬ加重胰岛素抵抗[２６]ꎮ肉苁蓉总苷和酒苁蓉总多糖显著降低ＵＡ水平ꎬ使尿酸分泌减少ꎬ降低胰岛素抵抗ꎮ２型糖尿病血脂异常的主要表现为ＨＤＬ－Ｃ㊁ＬＤＬ－Ｃ㊁ＴＧ水平升高等ꎬ这些因素同样是诱发动脉粥样硬化的因素[２７]ꎮ本实验中ꎬ肉苁蓉总多糖㊁总寡糖和总苷组以及酒苁蓉总多糖和总苷组的血清ＨＤＬ－Ｃ㊁ＬＤＬ－Ｃ以及ＴＧ水平均出现不同程度降低ꎬ一定程度上可降低血脂从而促进降血糖作用ꎮ肉苁蓉不同提取部位可显著提高ＨＤＬ－Ｃ/ＴＣ水平ꎬ降低动脉粥样硬化指数ꎮ提示肉苁蓉不同提取部位对糖尿病和心血管疾病的治疗均有益处ꎮ研究发现ꎬＭＤＡ在糖尿病患者体内的表达水平比正常人高ꎻ超氧化物歧化酶ＳＯＤ在糖尿病患者的活性比正常人低ꎬ提示氧化应激可能在糖尿病肾病的发生发展中起重要作用[２８]ꎮ本实验各给药组的ＭＤＡ水平均出现不同程度下降ꎬＳＯＤ活力均有提高ꎬ提示在肉苁蓉及酒苁蓉各提取部位有抑制氧化应激的作用ꎮ本文深入研究了肉苁蓉不同提取部位的降血糖作用ꎬ发现肉苁蓉和酒苁蓉总苷具有较好的降血糖作用ꎬ酒苁蓉多糖和寡糖也有一定的降血糖作用ꎬ为临床合理应用肉苁蓉及其炮制品提供可靠实验依据ꎮ肉苁蓉是我国著名的补益中药ꎬ其药理作用广泛ꎬ在临床疾病的预防和治疗中发挥巨大的作用ꎬ其有很好的应用前景ꎮ然而ꎬ肉苁蓉具有抗高血糖和降血脂作用的生物活性成分和机制有待进一步研究ꎮ参考文献:[１]㊀国家药典委员会.中华人民共和国药典２０２０年版(一部)[Ｓ].北京:中国医药科技出版社ꎬ２０２０:１４０. [２]ＬＩＹꎬＰＥＮＧＹꎬＷＡＮＧＭＹꎬｅｔａｌ.Ｒａｐｉｄｓｃｒｅｅｎｉｎｇａｎｄｉ￣ｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓｂｅｔｗｅｅｎｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓｏｆＣｉｓｔａｎｃｈｅｄｅｓｅｒｔｉｃｏｌａａｎｄＣ.ｔｕｂｕｌｏｓａｗａｔｅｒｅｘｔｒａｃｔｉｎｒａｔｓｂｙＵＰＬＣ－Ｑ－ＴＯＦ－ＭＳｃｏｍｂｉｎｅｄｐａｔｔｅｒｎｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎａｎａｌ￣ｙｓｉｓ[Ｊ].ＪＰｈａｒｍＢｉｏｍｅｄＡｎａｌꎬ２０１６(１３１):３６４－３７２. [３]刘博男ꎬ史辑ꎬ贾天柱ꎬ等.肉苁蓉高压蒸制工艺的优化[Ｊ].中成药ꎬ２０１９ꎬ４１(１１):２５７６－２５８０.[４]ＺＨＡＮＧＸꎬＺＨＥＮＧＦＪꎬＺＨＡＮＧＺ.ＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｅｆｆｅｃｔｏｆＣｉｓｔａｎｃｈｅｄｅｓｅｒｔｉｃｏｌａｏｎｄｅｆｅｃａｔｉｏｎｉｎｓｅｎｉｌｅｃｏｎｓｔｉｐａｔｉｏｎｒａｔｍｏｄｅｌｔｈｒｏｕｇｈｓｔｅｍｃｅｌｌｆａｃｔｏｒ/Ｃ－ｋｉｔｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙ[Ｊ].ＷｏｒｌｄＪＧａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌꎬ２０２１ꎬ２７(３２):５３９２. [５]ＦＡＮＬꎬＰＥＮＧＹꎬＣＨＥＮＸＮꎬｅｔａｌ.ＩｎｔｅｇｒａｔｅｄａｎａｌｙｓｉｓｏｆｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｃａｌｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎꎬｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓꎬａｎｄｎｅｔｗｏｒｋｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙｔｏｐｒｏｂｅｄｉｓｔｉｎｃｔｉｏｎｓｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｓｔｅｍｓｏｆＣｉｓｔａｎｃｈｅｄｅｓｅｒｔｉｃｏｌａａｎｄＣ.ｔｕｂｕｌｏｓａｂａｓｅｄｏｎａｎ￣ｔｉｄｅｐｒｅｓｓａｎｔａｃｔｉｖｉｔｙ[Ｊ].ＦｏｏｄＦｕｎｃｔꎬ２０２２ꎬ１３(１６):８５４２－８５５７.[６]樊燕燕ꎬ张石在.肉苁蓉总苷通过调控ｌｎｃＲＮＡＧＡＳ５保护神经细胞缺血再灌注损伤[Ｊ].中成药ꎬ２０２２ꎬ４４(７):２３２０－２３２４.[７]范亚楠ꎬ王佳ꎬ贾天柱ꎬ等.肉苁蓉不同提取部位对便秘大鼠通便作用的影响[Ｊ].中国医院药学杂志ꎬ２０１７ꎬ３７(１３):１２５６－１２５８.[８]高云佳ꎬ姜勇ꎬ戴昉ꎬ等.肉苁蓉润肠通便的药效物质研究[Ｊ].中国现代中药ꎬ２０１５ꎬ１７(４):３０７－３１０. [９]张超ꎬ华悦ꎬ廉婧ꎬ等.肉苁蓉炮制过程中苯乙醇苷类成分含量变化规律研究[Ｊ].中国中医药信息杂志ꎬ２０２２ꎬ２９(４):９２－９７.[１０]徐灿坤ꎬ黄延芹.络以治微[Ｍ].济南:山东科学技术出版社ꎬ２０１９.[１１]ＬＩＡＯＺＺꎬＺＨＡＮＧＪＹꎬＬＩＵＢꎬｅｔａｌ.Ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｆｒｏｍｏｋｒａ(Ａｂｅｌｍｏｓｃｈｕｓｅｓｃｕｌｅｎｔｕｓ(Ｌ.)Ｍｏｅｎｃｈ)ｉｍｐｒｏｖｅｓａｎ￣ｔｉｏｘｉｄａｎｔｃａｐａｃｉｔｙｖｉａＰＩ３Ｋ/ＡＫＴｐａｔｈｗａｙｓａｎｄＮｒｆ２ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎｉｎａｔｙｐｅ２ｄｉａｂｅｔｅｓｍｏｄｅｌ[Ｊ].Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓꎬ２０１９ꎬ２４(１０):１９０６.。
管花肉苁蓉的研究进展
穗状花序，花萼筒状，花冠筒状漏斗形，雄蕊４枚，花丝着生于
距筒基部Ｏ．７埘．８ ｃｎｌ处，花药卵形，长０．４＿ｏ．６ ｃｍ，密被黄白色
长柔毛，基部钝圆，不具小尖头，蒴果长圆形，种子多数近圆 形，干后变黑褐色，外面网状，花期５＿６月，果期７—８月，与本属 其他种易区别。 ２．２显微特征茎横切面：表皮为一层扁平细胞，外被角质 层。皮层由数十层薄壁细胞组成。通常外侧ｌＯ—１４层细胞内含 淡黄棕色色素，向内有多层大型薄壁细胞。细胞内含淀粉粒； 中柱维管束散在，有的束间有空隙，中央无髓部。鳞叶横切 面：上下表皮为一层扁平多边形细胞，叶肉组织不分化，均为
Ｓｔｕｄｙ Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｏｆ
Ｃ．ｔｕｂｕｌｏｓａ（Ｓｃｈｅｎｋ）Ｒ Ｗｉｇｈｔ
Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｎｉｎｇｂｏ，Ｚｂｅｊｉａｎｇ，Ｃｈｉｎａ，３１５１００
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ＴＡＮＧ Ｘｉａｏ－ｌｅｉ，ＳＵＮ Ｐｉｎｇ－ｆｅｉ
Ｚｈｅｊｉａｎｇ 【Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｔｈｅ
ａｒｔｉｃｌｅ ｓｕｍｍａｒｉｚｅｄ
明确的中药中的多糖成分进行了一系列的免疫功能的研究， 其中肉苁蓉多糖不仅能使受试动物存活时间延长，减少死 亡，而且能够明显抑制ＣＨ∞的降低；在抗癌实验中肉苁蓉多糖 能够明显延长接种腹水型肉瘤Ｓ１８０癌细胞小鼠的生存期；能 够促进正常小鼠淋巴细胞的分泌和合成ＰＦＣ，从而增强了小 鼠体液的免疫功能。蒋晓燕等ｐ嗵过对ｍＣｏ照射损伤小鼠Ｔ淋 巴细胞功能的影响研究发现肉苁蓉总苷对辐射损伤小鼠的Ｔ 淋巴细胞功能具有较强的保护作用。施大文等１４１以不同种肉 苁蓉乙酸乙酯提取物和水提取物进行免疫药理试验结果表
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万方数据
第１５卷第５期
Ｖ０１．１５ Ｎｏ．５
卞莲药车最
Ｇｕｉｄｉｎｇ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｐｈａｒｍａｃｙ
Rotenone_线粒体复合物I电子传递链抑制剂_83-79-4_Apexbio
化学性质
产品名: Rotenone 修订日期: 6/30/2016
产品名: Cas No.: 分子量: 分子式:
Rotenone 83-79-4 394.42 C23H22O6
化学名: SMILES: 溶解性: 储存条件: 一般建议:
运输条件:
生物活性
(2R,6aR,12aS)-8,9-dimethoxy-2-(prop-1-en-2-yl)-1,2,12,12a-tetrahyd rochromeno[3,4-b]furo[2,3-h]chromen-6(6aH)-one
实验操作
细胞实验: 细胞系 溶解方法
反应时间 应用
分化的 SH-SY5Y 神经母细胞瘤细胞
在 DMSO 中的溶解度>19.65mg/mL。为了获得更高的浓度，可以 将离心管在 37℃加热 10 分钟和/或在超声波浴中震荡一段时间。 原液可以在-20℃以下储存几个月。
在分化的 SH-SY5Y 神经母细胞瘤细胞中，Rotenone（50nM）产生 了在第 6 天有~40%的损失，在 18 天和 21 天之间产生了第二次下 降至~60％的损失的双相存活曲线。线粒体运动速度在第 8 天降 低。
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号通路:
Oxidative Phosphorylation
参考文献: [1]. Chen Y, McMillan-Ward E, Kong J, et al. Mitochondrial electron-transport-chain inhibitors of complexes I and II induce autophagic cell death mediated by reactive oxygen species. J Cell Sci, 2007, 120(Pt 23): 4155-4166. [2].Newhouse K, Hsuan SL, Chang SH, et al. Rotenone-induced apoptosis is mediated by p38 and JNK MAP kinases in human dopaminergic SH-SY5Y cells. Toxicol Sci, 2004, 79(1): 137-146. [3].Borland MK, Trimmer PA, Rubinstein JD, et al. Chronic, low-dose rotenone reproduces Lewy neurites found in early stages of Parkinson's disease, reduces mitochondrial movement and slowly kills differentiated SH-SY5Y neural cells. Mol Neurodegener, 2008, 3: 21.
益智仁中的原儿茶酸对鱼藤酮损伤PC12细胞的保护作用
益智仁中的原儿茶酸对鱼藤酮损伤PC12细胞的保护作用刘叶明;郑甜甜;徐美娟;林景峰;孙淑华;李其久【摘要】建立鱼藤酮(rotenone)诱导的大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤细胞(Pheochromocytoma,PC12)损伤的类帕金森病细胞模型,探讨益智仁中的原儿茶酸(PCA)对该类帕金森病细胞模型的保护作用及其可能作用机制.采用四唑盐(MTr)方法检测细胞活力,并且采用乳酸脱氢酶(LDH)方法作为细胞活力的进一步验证;对于细胞形态变化采用Hoechst 33258染色法进行观察;采用细胞内常见的抗氧化酶试剂盒(超氧化物歧化酶(SOD),过氧化氢酶(CAT),谷胱苷肽过氧化物酶(GSH-Px))分别检测细胞内各抗氧化酶含量的变化;对于细胞内活性氧(ROS)水平的变化采用2',7'-二氯荧光素二乙酸(DCF-DA)进行检测;用Caspase-3/CPP32 Colorimetric 试剂盒检测细胞内Caspase-3的活性.将0.5μM鱼藤酮作用于PC12细胞48 h后,诱导其产生典型间接氧化应激过程并产生凋亡特征,益智仁中的1mM原儿茶酸对鱼藤酮诱导的PC12细胞损伤有明显的抗凋亡保护作用,其可能机制是增强细胞内源性抗氧化酶的活力,抑制活性氧的产生,阻止Caspase-3的激活途径,从而达到减少或抑制细胞凋亡的目的.【期刊名称】《辽宁大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2016(043)001【总页数】7页(P61-67)【关键词】原儿茶酸;鱼藤酮;氧化应激;凋亡;PC12细胞【作者】刘叶明;郑甜甜;徐美娟;林景峰;孙淑华;李其久【作者单位】大连诚泽检测有限公司,辽宁大连116011;辽宁大学生命科学院,辽宁沈阳116036;辽宁仙人洞国家级自然保护区管理局,辽宁庄河116407;辽宁仙人洞国家级自然保护区管理局,辽宁庄河116407;辽宁仙人洞国家级自然保护区管理局,辽宁庄河116407;辽宁大学生命科学院,辽宁沈阳116036【正文语种】中文【中图分类】Q26常见的中枢神经系统退行性疾病的病理学特征是选择性黑质致密部里的多巴胺能神经元凋亡或变性，帕金森病(Parkinsons disease,PD)就是其中的一种.在大多数天然有机杀虫剂中，鱼滕酮具有亲脂性的，并可透过血脑屏障，强烈抑制脑组织线粒体呼吸链复合体Ⅰ的活性，而且引起黑质-纹状体多巴胺的神经系统选择性的变性，增强多巴胺能神经元对氧化应激的敏感程度.大量研究表明[1-2]，由于物质的代谢失衡而导致的氧化应激在PD中起主要作用.大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤细胞(Pheochromocytoma,PC12)与多巴胺能神经元在生理生化特征方面有许多相似之处.能够表达多巴胺转运体,并分泌多巴胺[3]，是研究体外神经细胞损伤及保护最为广泛的细胞系.作为我国的四大南药之一的益智仁，以往被大多数人用在温和脾胃，预防腹泻，摄唾涎，固精缩尿等方面.经过现代药理学研究后表明，益智仁提取物还在强心，防癌，抗过敏，延缓衰老等方面有着特殊的药理作用.最近文献表明，从益智仁中已经首次提取单体活性化合物原儿茶酸，具有明显神经保护作用[4].本文的研究是采用不同浓度鱼藤酮对PC12细胞进行不同时间的孵育作用，考察其对PC12细胞增殖和凋亡的影响，以建立一种类帕金森病的细胞损伤模型.在鱼藤酮诱导的PC12细胞损伤之后，探讨原儿茶酸对其是否具有保护作用，并研究了其可能的药理作用机制，在防治由氧化应激介导的帕金森病药物开发中，可以将原儿茶酸作为主要成分之一而提供有力依据.1.1 材料大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞：采购于中科院上海细胞所细胞库；胎牛血清和DMEM培养基：采购于美国Gibco公司；青霉素和链霉素：采购于大连美罗制药；四唑盐，鱼藤酮，Hoechst 33258和碘化丙啶(propidium iodide，PI)，2′,7′-二氯荧光素二乙酸(2′,7′-dichlorofluorescin diacetate，DCF-DA)：采购于Sigma公司；Caspase-3/CPP32 Colorimetric检测试剂盒：采购于美国BioVision；LDH，SOD，CAT，GSH-Px检测试剂盒：采购于自南京建成生物工程研究所；益智仁：采购于大连中医药大厦；其余试剂为国产分析纯.益智仁中原儿茶酸的制备[4]：将3kg益智仁干粉采用95%乙醇室温渗漉，提取液通过减压蒸馏的方式，使其浓缩至浸膏，然后加水分散后，用氯仿、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取，收集其中的乙酸乙酯相，并采用100~140目硅胶柱进行干法上样层析，洗脱液为氯仿-甲醇一系列浓度梯度，同时采用细胞活性跟踪实验，收集具有活性的层析组分并重新溶解于甲醇中，最后采用Sephadex LH-20凝胶层析，甲醇洗脱，重结晶后得到活性单体化合物PCA，即原儿茶酸(如图1所示)，用于实验.1.2 PC12细胞的培养及药物处理1.2.1 细胞培养在37 ℃，5% CO2的孵箱中培养PC12细胞，细胞培养基是DMEM基础上添加10%灭活胎牛血清,100 U/mL青霉素,100 mg/L链霉素，培养48 h后换液.在细胞传代时，首先吸去培养瓶中的培养基，并加入适量的0.25%胰蛋白酶消化后轻轻吹打，达到吹散细胞团的目的，并取对数生长期的细胞进行以下实验.1.2.2 鱼藤酮对PC12损伤模型的建立在96孔培养板中接种细胞，每孔接种100 μL，接种密度为1×105个/mL，培养24 h后，在细胞培养基中添加不同量的鱼藤酮(事先用DMSO溶解，终浓度小于0.1%)，使其终浓度分别为0.01，0.05，0.1，0.25，0.5μM，并在孵箱中分别继续培养细胞24 h和48 h后，终止培养，采用MTT法检测细胞的活力.1.2.3 原儿茶酸的药物干预研究不同浓度原儿茶酸对鱼藤酮诱导的PC12损伤细胞时的影响，原儿茶酸预孵0.5 h后，再加入0.5 μM鱼藤酮处理，共同培养48 h，采用MTT法检测细胞活力，其中，原儿茶酸终浓度分别为0.1，0.2，0.5，1.0 mM.1.3 MTT法检测细胞存活率[5]在96孔培养板中接种细胞，每孔100 μL，接种密度为1×105个/mL，经过药物处理终止培养前，每孔加入MTT，使其终浓度为0.5 mg/mL，并继续在37 ℃，5% CO2孵箱中培养4 h后，将培养液吸出，在每孔中加入100 μL的DMSO，待紫色结晶物质完全溶解后，在570 nm处，参比波长设定为630 nm，采用M450型酶标仪测定每孔吸光值，计算细胞存活率.细胞存活率=(各浓度组吸光值/对照组吸光值)×100%1.4 细胞内乳酸脱氢酶(LDH)漏出率的测定在24孔培养板中接种细胞，每孔500 μL，接种密度为1×105个/mL，在培养24 h后加鱼藤酮于培养孔中，使其终浓度为0.5 μM，同时分别加入终浓度为0.1，0.2，0.5，1.0 mM的原儿茶酸，再培养48 h后，收集培养液.实验按照LDH检测试剂盒说明操作，通过如下公式计算细胞培养液的LDH漏出率.LDH漏出率=(培养液OD值)/(培养液OD值+细胞匀浆液OD值)×100%1.5 Hoechst 33258染色的细胞形态学变化观察参照文献[6]，细胞经过不同处理作用48 h后终止培养，将培养液吸出，4%多聚甲醛固定30 min，吸去多聚甲醛后以PBS洗3次，每次5 min.加入Hoechst 33258至终浓度为10 μg/mL，37 ℃避光染色15 min.荧光显微镜观察、拍照.1.6 细胞内相关抗氧化酶活力变化在24孔培养板中接种细胞，每孔500 μL，接种密度为1×105个/mL，在培养24 h后加鱼藤酮于培养孔中，使其终浓度为0.5 μM，同时加入终浓度为1.0 mM 的原儿茶酸，再培养48 h 后，收集培养液和细胞，按照SOD，CAT，GSH-Px检测试剂盒说明书，采用Bradford(1976)[7]的方法测定蛋白含量.1.7 细胞内活性氧(ROS)水平变化参照文献[8-9]，PC12细胞经过不同处理后，加入DCF-DA(终浓度1 mM)在37 ℃，5% CO2的孵箱中孵育PC12细胞60分钟后，用PBS清洗三次.细胞经1 000 g离心5 min，并去掉上清液后，采用1%TritonX-100溶解，在激发波长480 nm，发射波长540 nm处，应用荧光分光光度仪测定细胞内ROS水平. 1.8 细胞内的Caspase-3活性变化收集不同处理组的细胞(大约2×106个)分别于1.5 mL离心管中，并加入50 μL 预冷的Cell Lysis Buffer，在冰上孵育10 min；于4 ℃下，10 000 g离心1 min 后，缓慢将上清液(即胞质提取液)吸取至新的1.5 mL离心管中，放在冰上保存待用；对样品中蛋白含量进行测量，并根据所测每个样品的蛋白浓度，分别稀释一定量的蛋白(50~200 μg)至50 μL的Cell Lysis Buffer中，进行下一步的实验；加入50μL的2×Reaction Buffer(含有10 mM DTT)，再加入5 μL的4 mM DEVD-pNA底物(终浓度200 μM)，在37℃孵育1~2 h后，转移至96孔板中，用酶标仪在405 nm处测定其吸光值，并采用Bradford(1976)[7]的方法测定蛋白含量.1.9 统计学处理采用统计软件Origin 7.5对实验结果进行统计分析，数据用表示，组间比较用t 检验，P< 0.05为差异显著，P< 0.01为差异极显著.2.1 鱼藤酮对PC12细胞的损伤作用如图2所示，低浓度鱼藤酮(0.01 μM与0.05 μM)对PC12细胞的损伤不明显，但是当浓度超过0.1 μM以上时，PC12细胞存活率降低，并且鱼藤酮损伤程度呈时间、剂量依赖性，培养时间越长，即当鱼藤酮添加浓度越大，其诱导的细胞损伤程度越大.其中，终浓度0.5 μM的鱼藤酮处理48 h后，细胞存活率降低到(40.08±2.28)%，接近于半数细胞损伤，所以选择0.5 μM鱼藤酮作用于PC12细胞48 h，以考察原儿茶酸作用于这种损伤细胞的影响.2.2 原儿茶酸对鱼藤酮损伤的PC12细胞活力的影响如图3所示，不同浓度的原儿茶酸保护细胞的存活率都高于单独鱼藤酮损伤组，说明原儿茶酸可以抑制鱼藤酮对PC12细胞的损伤，其中，0.5 mM及1.0 mM保护组与损伤组相比有极显著差异，具有明显的保护作用.2.3 原儿茶酸对鱼藤酮损伤的PC12细胞胞内LDH漏出率的影响如图4所示，在终浓度0.5 μmol鱼藤酮处理PC12细胞48 h后，导致了细胞中LDH的漏出率为(64.26±2.11)%，而对照细胞的漏出率仅为(2.51±1.10)%.随着原儿茶酸的加入，可以剂量依赖地减轻了LDH的漏出，0.1，0.2，0.5，1.0 mM的原儿茶酸分别使细胞中LDH的漏出减少到(54.36±2.11)%，(50.38±2.00)%，(32.36±1.60)%和(17.36±2.00)%.因此，这更深层次揭示了在鱼藤酮造成的PC12细胞质膜破坏而生存力丧失后，原儿茶酸能够减弱这种影响，并减少LDH从细胞中漏出.2.4 Hoechst 33258染色观察细胞凋亡如图5所示，在荧光显微镜下观察，正常对照组(如图5A所示)中，PC12的染色质分布均匀，显示出极淡的荧光，当0.5 μM鱼藤酮与PC12细胞共同孵育48 h 后，有大量的细胞核呈致密浓染或碎块状浓染的固缩形态，显示出较强的荧光，产生少量凋亡小体(如图5B所示)，发生了明显的凋亡特征.但是在同时加入1 mM原儿茶酸(如图5C所示)时，可以看出细胞荧光强度明显减弱，染色体浓缩以及出现凋亡小体的细胞减少，细胞核状态接近于正常对照组，这揭示了原儿茶酸能抑制鱼藤酮诱导的PC12细胞凋亡.2.5 原儿茶酸对胞内相关抗氧化酶活性的影响如图6所示，与正常对照组相比，单独添加1 mM原儿茶酸没有影响PC12细胞中SOD，CAT和GSH-Px的活性，而0.5 μM鱼藤酮处理组同时降低了这三种抗氧化酶的活性.当细胞在鱼藤酮和原儿茶酸同时处理后，比较单独鱼藤酮处理组，尽管GSH-Px的活性没有明显的变化，但SOD和CAT的活性得到了明显的提高.而且与正常对照组相比，在0.5 μM鱼藤酮和1 mM原儿茶酸的共同孵育48 h后，CAT的活性提高了103.43%.这个结果提示：在单独添加原儿茶酸处理后，虽然对正常PC12细胞内的抗氧化酶表达没有影响，但在鱼藤酮刺激下，能够激活抗氧化酶表达途径，对由于鱼藤酮所引起的细胞内抗氧化酶活性降低起到明显抑制作用. 2.6 原儿茶酸对胞内活性氧(ROS)的水平的影响如图7所示，与正常对照组相比，当PC12细胞被加入0.5 μM鱼藤酮处理48 h 后，引起细胞内ROS水平增加到(225.54±7.89)%，而添加原儿茶酸后，其明显抑制了ROS的形成，0.1，0.2，0.5及1.0 mM的原儿茶酸分别使ROS水平剂量依赖地下降至(217.15±12.24)%，(199.92±10.10)%，(174.91±11.53)%和(136.63±10.05)%.这说明损伤的PC12细胞受到氧化应激程度，随原儿茶酸浓度增加而呈明显地剂量依赖性减弱.2.7 原儿茶酸对胞内的Caspase-3活性的影响如图8所示，与正常对照组相比，当PC12细胞被加入0.5 μM鱼藤酮处理48 h 后，细胞内caspase-3活性增加到正常对照组的(242.34±12.74)%，而原儿茶酸的加入明显抑制了caspase-3的活性，0.1，0.2，0.5，1.0 mM的原儿茶酸分别使Caspase-3的活性下降至(235.39±13.49)%，(220.96±13.02)%，(160.39±12.93)%及(130.59±12.87)%.这说明原儿茶酸抑制caspase-3的活性呈明显地剂量依赖性.最近的许多文献表明,神经退行性疾病发病过程中，神经元凋亡或缺失发挥着重要作用[10],但是其凋亡或缺失的原因和机制还没有完全被阐明，普遍存在的一种观点认为，这与神经元在受到氧化应激过程中的敏感程度强弱有密切关系.因此，直接或间接地增强机体抗氧化防御体系，减少或抑制细胞凋亡是目前防治神经退行性疾病的基本策略之一.本实验采用不同浓度的鱼藤酮，在体外建立诱导PC12细胞凋亡的类帕金森病细胞损伤模型之后,探讨原儿茶酸在体外对该模型的保护作用.通过PC12细胞与鱼藤酮共同孵育,采用四唑盐(MTT)方法、乳酸脱氢酶(LDH)方法及细胞核形态观察等方法，证明鱼藤酮诱导的PC12细胞凋亡是典型的类帕金森病细胞损伤模型，并进一步通过胞内抗氧化酶活性，活性氧水平，及Caspase-3活性分析实验表明，推测该凋亡可能Caspase依赖的线粒体通路有关.实验结果表明，当0.5 μM鱼藤酮作用于PC12细胞48 h后，细胞质膜被破坏，乳酸脱氢酶(LDH)漏出率明显升高；从形态上观察，细胞性状发生变化，皱缩成圆形或椭圆形，在胞浆中可见到存在的颗粒及空泡，并且细胞核中的DNA发生凝集和断裂，通过Hoechst 33258染色法可以观察到高亮蓝色荧光，并有凋亡小体存在,表现出明显的凋亡特征.本课题组先前实验显示，益智仁中的原儿茶酸在细胞[11-12]与动物[13]水平上具有明显的神经保护作用，本文的研究揭示，在鱼藤酮诱导的PC12细胞凋亡过程中，原儿茶酸起到明显地抑制作用.当加入1.0 mM原儿茶酸时,通过Hoechst 33258染色法观察到蓝色荧光明显减弱,出现凋亡小体的细胞明显减少，细胞内源性抗氧化酶活性由于鱼藤酮导致的氧化应激所激发而增强，产生的活性氧含量受到明显抑制，并且Caspase-3的激活途径被阻止.因此，原儿茶酸对鱼藤酮诱导的PC12细胞保护作用的可能机制与以下几个方面有关，一是增强细胞内源性抗氧化酶的活力；二是抑制活性氧的产生；三是阻止Caspase-3的激活途径，从而达到减少或抑制细胞凋亡的目的.【相关文献】[1]Zhang J,Perry G,Smith MA,et al.Parkinson′s disease is associated with oxidative damage to cytoplasmic DNA and RNA in substantia nigra neurons[J].Am J Pathol,1999,154(5):1423-1429.[2]Yoritaka A,Hattori N,Mori H,et al.An immunohistochemical study on manganese superoxide dismutase in Parkinson′s disease[J].J Neurol Sick,1997,148(2):181-186.[3]Kadota T,Yamaai T,Saito Y,et al.Expression of dopamine transporter at the tips of growing neuritis of PC12 cells[J].J Histo-chem Cytochem,1996,44(9):989-996.[4] An L J,Guan S,Shi G F,et al.Protocatechuic acid from Alpinia oxyphylla against MPP+-induced neurotoxicity in PC12 cells[J].Food 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Offen.Apoptosis and Parkinson′s disease[J].Progress in Ne uro-psychopharmacology & Biological Psychiatry,2003,27:245-250.[11] Guan S,Jiang B,Bao Y M,et al.Protocatechuic acid suppresses MPP+-induced mitochondrial dysfunction and apoptotic cell death in PC12 cells[J].Food and Che mical Toxicology,2006,44:1659-1666.[12]Guan S,Bao Y M,Jiang B,et al.Protective effect of protocatechuic acid from Alpinia oxyphyll a on hydrogen peroxide-induced oxidative PC12 cell death[J].European Journal of Pharmacology,2006,538(1-3):73-79.[13]Shi G F,An L J,Jiang B,et al.Alpinia protocatechuic acid protects against oxidative damage i n vitro and reduces oxidative stress in vivo[J].Neuroscience Letters,2006,403:206-210.。
1升麻总皂苷在体肠吸收动力学研究
况． 在口服药物制剂的处方前研究中，有必要对药
物口服后的体内吸收部位和情况进行考察． 目前， 评价药物肠道吸收的方法有离体法、在体法和体内 法［5］． 其中，在体法中的大鼠单向肠灌流法( SPIP) 因能很好地模拟人体的体内环境，且结果与人体试 验结果有良好的相关性而得到广泛应用［6 －7］． 因 此，本研究在体肠吸收实验采用 SPIP 法．
SD 大鼠，雌性，体重( 190 ± 10) g，山东绿叶制 药有限公司提供．
2 方法与结果
2． 1 溶液配制 2． 1． 1 对照品溶液的制备 分别精密称取干燥至 恒重的升麻苷 A、升麻苷 B、升麻苷 C、升麻苷 D 和升麻苷 E 适量，加甲醇溶解，配制成含 5 种升 麻苷均为 1 mg / mL 的混合储备液． 精密量取混合 储备液适量至容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，配成 浓度为 20、100、240、400、800 ng / mL 的升麻苷混 合工作溶液． 精密称取酚红适量，加 K 氏液配制 成含酚红 10 mg / L 的 储 备 液． 精 密 称 取 5. 0 mg Rg3 标准品，置 50 mL 容量瓶中，加甲醇溶解，并 稀释至刻度，配制成 0. 10 mg / mL 的内标储备液， 取适量内标储备液用甲醇稀释至浓度为 100 ng / mL． 2． 1． 2 Krebs-Ringer 缓冲液( K 氏液) ［8］ 分别 称取氯化钠 7. 8g、碳酸氢钠 1. 37 g、磷酸二氢钠 0. 32 g、氯 化 镁 0. 02 g、氯 化 钾 0. 35 g、氯 化 钙 0. 37 g、葡萄糖 1. 4 g，加蒸馏水适量 使 溶 解，用 0. 2 mol / L 的 NaOH 调节 pH 为 7. 4，定容至 1 000 mL，混匀即得． 2． 1． 3 供试品溶液的制备 精密称取升麻苷 20 mg 和酚红 4 mg，用 pH7. 4 的 K 氏液定容至 200 mL，制得肠灌流液． 2． 2 色谱条件及质谱条件
石榴皮多酚对人前列腺癌PC-3细胞增殖及凋亡的影响
ｌ ｏ ｇ ｉ ｃ ｉ ｎ ｊ ｕ ｒ ｙ ｉ ｎ ｐ ｒ ｉ ｍａ ｒ ｙ ｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ｅ ｄ ｒ ａ ｔ ｈ ｅ ｐ ａ ｔ ｏ ｃ ｙ ｔ ｅ ｓ
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二 。
吕
Ｄ Ｄ Ｂ的作用 类似 。作 为一 种 自由基 ， ＮＯ 的过度 产生 也可 直接 导致 机体 正 常 组 织 的损 伤 。肝 巨 噬细 胞 可 通过 释放 ＮＯ 对肝 细胞 产生毒 性 ， 且肝 细胞 在体外 也 可经 特异性 细 胞 因子 及 Ｌ Ｐ Ｓ协 同诱 导 ， 持 续 产 生 大
西北药学杂志
２ ０ １ ３年 ５月 第２ ８卷
第 ３期
２ ７ １
示， 类 叶升麻苷 在 ６ ， １ ２和 ２ ４ ｈ均可 不 同程 度 地使 升 高 的 ＡＳ Ｔ 和 ＡＬ Ｔ活性降低， 说 明该 成 分 对 免 疫 性
肝损 伤 具 有 较 好 的 降 酶 作 用 ， 且 与 阳 性 对 照 药 物
ｅ ｎ ｔ ｅ ｒ ｏ ｌ ， ２ ０ ０ ２， ８ （ ４ ） ， ７ ２ ８ — ７ ３ ３ ．
［ ６ ］ 章 国良， 林 志彬． 细 胞 因 子 对 内 毒 素 刺 激 的 原 代 培 养 大 鼠细 胞 一 氧 化 氮 生 成 的 影 响 ［ Ｊ ］ ． 北 京 医科 大学 学 报 ，
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类叶升麻苷抗鱼藤酮致SH-SY5Y细胞损伤机制的研究
高燕;蒲小平
【期刊名称】《中国药理学通报》
【年(卷),期】2007(23)2
【摘要】目的研究类叶升麻苷抗鱼藤酮致多巴胺能神经元SH-SY5Y细胞损伤,对帕金森病相关蛋白Parkin、α-突触核蛋白(α-Synuclein, α-Syn)表达的影响,探讨类叶升麻苷抗细胞损伤的分子机制.方法化学比色法测定细胞培养液乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)活性,蛋白质印迹法(Western blot)检测Parkin、α-Syn的表达,免疫荧光法检测SH-SY5Y细胞α-Syn分布.结果①类叶升麻苷(10,20或40 mg·L-1)可明显降低鱼藤酮诱导的SH-SY5Y细胞乳酸脱氢酶(LDH)的释放;②0.5 μmol·L-1的鱼藤酮处理SH-SY5Y细胞48 h能引起Parkin蛋白的明显降解及α-Syn蛋白二聚体增加;③预先用类叶升麻苷(10,20或40 mg·L-1)处理细胞,能够有效减少鱼藤酮诱导的Parkin蛋白的降解,呈浓度依赖性;并能够抑制鱼藤酮诱导的α-Syn蛋白二聚体增加及α-Syn阳性细胞数增加.结论类叶升麻苷对鱼藤酮致SH-SY5Y细胞损伤具有神经保护作用,其作用机制可能与减少Parkin蛋白的降解和抑制α-Syn蛋白的二聚体形成有关.
【总页数】5页(P161-165)
【作者】高燕;蒲小平
【作者单位】北京大学药学院分子与细胞药理学系,天然药物及仿生药物国家重点实验室,北京,100083;北京大学药学院分子与细胞药理学系,天然药物及仿生药物国家重点实验室,北京,100083
【正文语种】中文
【中图分类】R282.71;R284.1;R329.24;R338.1;R394.2
【相关文献】
1.类叶升麻苷对缺糖缺氧诱导PC12细胞损伤的保护作用 [J], 高莉;彭晓明;霍仕霞;何燕;闫明
2.类叶升麻苷通过诱导血红素加氧酶-1的表达抑制MPP+诱导的PC12细胞损伤[J], 王洪权;王玉敏;崔其福;赵伟丽;成龙
3.类叶升麻苷对谷氨酸损伤 PC12细胞的保护作用 [J], 彭晓明;霍仕霞;高莉;何燕;闫明
4.类叶升麻苷对鱼藤酮致SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用 [J], 杨芳艳;蒲小平
5.木犀草素抗鱼藤酮致小鼠多巴胺能细胞损伤机制的研究 [J], 刘琦;温雅;贾珍;王珊;王梁;董惠
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