急性皮肤刺激试验
毒理学 第六章-一般毒性作用(人卫)
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6. 生理与健康状况
健康、未产未孕 给药前检疫观察 大、小鼠、兔、豚鼠1周，犬、猴2~3周 ①适应新环境，减少环境和生理条件变化可 能对试验结果的影响 ②筛检健康状况不符合试验要求的动物
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（二） 染毒方式
最常用的染毒途径为经口、经呼吸道、经皮及注射途径。 ❖ 工业化学物：经皮肤和呼吸道 ❖ 农用化学物：经口、经皮肤和呼吸道 ❖ 药品：经口和注射 ❖ 食品：经口 ❖ 环境污染物：经口、皮肤和呼吸道
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3.急性毒性分级法 （acute toxic class method）
选用剂量(25、200、2 000 mg/kg)之一，单性别3只动物进 行试验，确定动物的生死后再进行下一步试验。 有3种可能的结局：
a. 不需进一步试验即可分级， b.下一阶段以相同剂量再做另一性别试验， c.下一阶段以较高或较低的剂量水平进行。 根据在某一染毒剂量下，死亡发生的数量来判定大致的 LD50值范围，直接进行危害评估和毒性分级。
有关急性毒性试验设计及方法
曲线拟合：概率 单位法，即Bliss 法
插值法：寇氏法
中，不正确的是
A．采用寇氏法和 Bliss 法一般 设5～8组 B．寇氏法和 Bliss 法一般以
一般设5～8个剂量 组；霍恩法固定设4 个剂量组。
i=(LD100 –LD0 )/(n-1)公式计算 组距 C．使用霍恩氏法固定设4个剂 量组
种属和品系
性别、年龄、体重
微生物学等级 饲养环境
动物数目 实验前处理
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实验动物
种属和品系 首选大鼠 还需选择一种非 啮齿动物：狗
性别、年龄、体重
雌雄各半 刚成年、健康、未曾 交配和受孕的动物
大鼠180～240g 小鼠18～25g 家兔2～2.5kg
TCC
TCC是Trichlorocarban的简称，俗称三氯碳酰替苯胺或三氯卡班。
化学名称：3，4-二氯苯基-4-氯苯基脲，3，4，4-三氯均二苯脲
英文名称：Triclocarban (3,4,4-Trichlorocarbanilide)
TCC分子式：
C13H9N2Cl3O
TCC结构式：
TCC分子量：315.5
白色粉末，熔点250 -255℃
TCC是一种高效、广谱抗菌剂，对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、真菌、酵母菌、病毒都具有高效抑杀作用。
TCC能迅速杀灭真菌、酵母菌、革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌等数十种致病性细菌以及甲肝、乙肝病毒,在低浓度时仍具抑杀作用，据资料，稀释到三千万倍的TCC溶液，尚可完全抑制某些致病性细菌的生长。
与传统的氯系和氧系杀菌剂相比，TCC配伍性优良，光热相对稳定，在正常使用浓度下，对皮肤和眼睛无毒无刺激。
TCC不溶于水，吸附于皮肤和纤维组织上持续发挥杀菌效果，
安全性数据：
急性经口毒性试验：LD50 >5600mg/kg（鼠）
急性皮肤刺激试验：LD50 >7940mg/kg（兔）
对眼睛和皮肤无刺激、对皮肤无潜在过敏性
TCC有杀菌、抑菌、防腐和除臭功效。
在各领域得到广泛应用。
医疗消毒剂中用于杀灭病菌、洗手消毒，个人日用品如洗衣粉、香皂、沐浴露、洗手液、抗菌餐具洗涤剂等添加TCC用于杀灭病菌；洗面奶、清洁霜中加入TCC 杀灭细菌用于痤疮治疗。
洗发水加入TCC用于止痒去屑，TCC也添加于除臭产品如牙膏等口腔制品，舒肤佳香皂中的除菌抑菌功效物“迪保肤”，据资料介绍,其主要化学成分就是TCC。
各类防腐剂特性
迪美RMT 化学组成：2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮和3-碘-2-丙炔基-丁基氨基甲酸酯质量指标：1.性状：无色至淡黄色透明液体2.活性物含量：≥7.0%应用：可用于面霜、乳液、婴儿产品、防晒产品、香波、湿纸巾以及其它停留在皮肤上的产品。
配伍性：可于化妆品中存在的各种组分相配伍，实验结果表明其抑菌能力不受化妆品中的表面活性剂、蛋白质、中草药、ZPT以及Parsol 1789等添加物的影响。
抗菌性能：广谱抗菌活性，能有效地抑制革兰氏阴性菌、阳性菌、酵母菌及霉菌。
用量及特点：1.一般添加量为0.05~0.2%，用户也可根据自己产品的特点，试验筛选用量比例，在低于45℃最后加入较好。
2.pH值使用范围为：2~12。
适用pH值范围广泛，可以覆盖所有化妆品、日化产品的pH值范围。
3.本品使用方便、性能稳定、安全可靠，在使用浓度下对皮肤、眼粘膜均无刺激性，对环境无污染。
4.每一种化妆品均需各自独特的防腐体系来保证其防腐效果，因此，每一种新开发或改进的产品，均需进行挑战性试验，以确保其防腐效果。
对微生物的抑杀效果微生物菌种最低抑制浓度(ppm)枯草芽孢杆菌200表皮葡萄球菌200肺炎杆菌200大肠杆菌150铜绿假单胞菌300黑曲霉20桔青霉20杂色曲霉20蜡叶芽枝40绳状青霉20毒理试验：急性口服毒性试验（大鼠）： L D50 = 1210mg/kg急性皮肤刺激试验（家兔）：无刺激性（0.1%浓度）迪美RMB 化学组成：2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮和2-溴-2-硝基-1,3-丙二醇质量指标：1.性状：无色至淡黄色透明液体2.活性物含量：≥19.0%应用：可用于面霜、乳液、婴儿产品、防晒产品、香波、湿纸巾以及其它停留在皮肤上的产品。
配伍性：可于化妆品中存在的各种组分相配伍，实验结果表明其抑菌能力不受化妆品中的表面活性剂、蛋白质、中草药、ZPT以及Parsol 1789等添加物的影响。
抗菌性能：广谱抗菌活性，能有效地抑制革兰氏阴性菌、阳性菌、酵母菌及霉菌。
毒理学实验
积分
0 1 2 3 4
0 1 2 3 4
应选作实验动物。 – (6)消化道：无呕吐、腹泻，粪便成形，肛门附近被毛洁净。 – (7)神经系统：无震颤、麻痹。若动物(大鼠、小鼠)出现圆圈动
作或提尾倒置呈圆圈摆应放弃该动物。 – (8)四肢及尾：四肢、趾及尾无红肿及溃疡。
（二）动物性别鉴定
• (1)大鼠、小鼠：主要依肛门与生殖孔间的距离 区分，间距大者为雄性，小者为雌性。成年雄鼠 卧位可见到辜丸，雌性在腹部可见乳头。
1：k系列稀释法 • 最大剂量组浓度C1 （母液浓度）
C1=200mg/kg=2mg/10g 0.2ml/10g→2mg/0.2ml=10mg/ml • 每组最大体积m=20ml（设每只鼠需2ml
） • k：相邻两组剂量之比=64.89/85.981=0.75 • V总=m/（1-k）=81.53ml（各组母液和
急性毒性、急性毒性分级标准
• 急性毒性：一次或多次接触，短时间产生 的毒性效应，包括一般行为和外观改变， 大体形态改变以及死亡效应等。
• 农药的急性毒性分级：低、中、高、剧毒
LD50计算方法
• 改良寇氏法：计算简便，准确率高，常用 • 霍恩法 • 序贯法 • Bliss法
改良寇氏法要求
• 每组动物数相等 • 各剂量组组距呈等比级数 • 死亡呈正态分布 • 最低剂量组死亡<20% • 最高剂量组死亡>80%
表 1 皮肤刺激反应评分 皮肤反应
红斑和焦痂形成 无红斑 轻微红斑（仅仅可觉察到） 明显红斑 中等程度到重度程度红斑 严重红斑（轻微的结痂）至轻度焦痂（深度损伤）
水肿形成 无水肿 很轻微水肿（仅仅可觉察到） 轻微水肿（肿起部位边界清楚） 中度水肿（隆起约 lmm） 严重水肿（隆起约 lmm，超出染毒部位）
蒙药消肿散涂膜剂皮肤刺激和皮肤过敏实验研究
Ｍ ｄ ａ Ｃ ｌ ｇ， ｈｒ ａｙ ａｕｔ Ｎ ｉ ｅｇｕＨ ｈｈ ｏ ， １０ ９ Ｃ ｉ ） ｅｉ ｏ ｅｅ ｐ ａｍ ｃ ｃｌ ， ｅ ｎｇ ｕ ｅａｔ ０ ０ ５ ， ｈ ａ ｃ ｌ ｌ ｆ ｙ ｍ ｅ ｎ
２ 实验 方 法
２１ 皮 肤刺 激性 实验 ．
１ 实 验 料
１ 药品试剂 药品： ． １ 消肿散涂膜剂， 基质 ，均 由内 （ 蒙古医学院药学系 中草药教研室提供 ）消肿散散剂 ， （ 由内蒙古乌 兰浩特 中蒙 药 有 限公 司生 产 ，批号 ０ １０ ２用醋或鸡蛋清调 和用于实验 ） ４６６ ， 。试剂 ： ， ２一 ４ 二 硝 基 氯代 苯 （ 析 纯 ， 海 化 学 试 剂 厂 分装 厂 ， 分 上 批
［ 摘
锋 李文娜 但 家立 ， ， ， 夏
嫱 张述 禹 ２ ，
ｆ． 医学 院珠海校 区， １ 遵义 广东 珠海 ５ ９ ４ ；２ 内蒙古医学院药学 院 ， １０ １ ． 内蒙古 呼和浩 特 ０ ０ ５ ） １０ ９ 要】 目的 对 消肿散 涂膜 剂皮 肤的刺激性和致敏性进行了动物实验观察 。方 法 以家兔为模型进行一次给药 消肿散涂 膜剂对家兔皮 肤未
号 ０ ００ ） ４ ８ １
１ 动 物 健 康 成年 家 兔 （． ± ． ｋ ） ． ２ １ １ Ｏ ９ｇ 、豚 鼠 ８ ２ （０ ．５ ３ ． ｇ均 由遵义 医学 院珠 海 校 区动物 中心 ３ ９８￣ ４１ ） ８
提供 。
急性毒性,经口（类别5）皮肤腐蚀刺激（类别1B）
1.化学品名称:氯化铝2.危险性概述2.1GHS危险性类别急性毒性,经口(类别5)皮肤腐蚀/刺激(类别1B)严重眼睛损伤/眼睛刺激性(类别1)特异性靶器官系统毒性（反复接触）,吸入(类别1),肺特异性靶器官系统毒性（反复接触）,经口(类别2),中枢神经系统急性水生毒性(类别3)2.2GHS标签要素，包括防范说明象形图信号词危险危险申明H303吞咽可能有害。
H314造成严重皮肤灼伤和眼损伤。
H372长期吸入或反复接触会对(肺)器官造成损害。
H373长期吞咽或反复接触可能损害(中枢神经系统)器官。
H402对水生生物有害。
警告申明预防措施P260不要吸入粉尘/烟/气体/烟雾/蒸气/喷雾。
P264作业后彻底清洗皮肤。
P270使用本产品时不要进食、饮水或吸烟。
P273避免释放到环境中。
P280戴防护手套/穿防护服/戴防护眼罩/戴防护面具。
事故响应P301+P330+P331如误吞咽：漱口。
不要诱导呕吐。
P303+P361+P353如果皮肤（或头发）接触：立即除去∕脱掉所有沾污的衣物。
用水清洗皮肤∕淋浴。
P304+P340+P310如果吸入：将受害人移至空气新鲜处并保持呼吸舒适的姿势休息。
立即呼叫解毒中心或就医。
P305+P351+P338+P310如溅入眼睛，用水小心冲洗几分钟。
如戴隐形眼镜且便于取出，取出隐形眼镜，继续冲洗。
立即呼叫解毒中心或就医。
P312如感觉不适，呼叫解毒中心或医生。
P363沾染的衣服清洗后方可重新使用。
储存P405存放处须加锁。
废弃处置P501将内装物/容器送到批准的废物处理厂处理。
3.成分/组成信息分子式:A l C l3分子量:133.34g/mo l4.急救措施4.1必要的急救措施描述一般的建议请教医生。
向到现场的医生出示此安全技术说明书。
吸入如果吸入,请将患者移到新鲜空气处。
如呼吸停止，进行人工呼吸。
请教医生。
皮肤接触立即脱掉被污染的衣服和鞋。
用肥皂和大量的水冲洗。
立即将患者送往医院。
医学知识之皮肤试验
皮肤试验皮肤试验（skintest）简称皮试，是在皮肤的体内免疫学试验。
当试验抗原进入致敏者皮肤时，皮肤中结合有IgE的肥大细胞或致敏T细胞就会与试验抗原结合，引发即刻型或迟发型的皮肤超敏反应。
试验抗原也可从注射部位进入微血管，与循环中的相应抗体结合，形成的免疫复合物可在局部沉积，激活补体引起炎症。
所以皮肤试验主要用于检测型和型变态反应，有时也用于检测Ⅲ型变态反应。
一、试验准备首先应当制备试验用抗原，如有合格商品可直接购买。
可以作为变应原的物质种类繁多，例如动物皮毛、家禽羽毛、鸽粪、昆虫、螨类、真菌、花粉、杂草、物理粉尘和各种食品等都可能成为变应原。
不同抗原的制备方法不同，但一般包括以下几个步骤：①收集原料；②粉碎与匀浆；③脱脂与提取；④过滤与分离；⑤分装保存。
分装保存之前应对提取产物进行鉴定。
首先必须经过无菌试验、急性毒性试验和热原检查，保证提取产物无明显的毒副作用；还要测定产物的蛋白含量，用凯氏定氮法或磷钨酸沉淀法标定出总氮单位或蛋白氮单位。
变应原的范围很广，难以做得完全，所以查找变应原需依靠患者的病史和医师的经验以将可疑范围缩小,学样成功的机会就大得多。
一般医院和卫生所都能做药物过敏试验，多在注射室完成；防疫部位在一些免疫接种之前有时也要做皮肤试敏；其余的均在变态反应科或检验科的专门实验室。
实验室应有专人负责，除具备各种专用试验器材之外，还应备有意外抢救的药品及设施。
试验部位应清洗干净，严格消毒，以免皮肤的不洁物引起非特异性反应或感染。
当皮肤患湿疹、感染、皮炎或外伤时不宜进行皮肤试验。
正在或近日服用免疫抑制剂或抗组胺药物者也不宜进行皮肤试验。
二、试验类型及方法皮肤试验的最常用部位是前臂曲侧，因此处皮肤较为光滑细腻，而且便于试验操作和结果观察。
按正规作法，左右两臂一侧作试验，另一侧作对照。
需要时也可选用上臂或背部皮肤。
具体试验方法可分为皮内试验（intracutaneoustest）、挑刺试验（pricktest）和斑贴试验（patchtest）。
中药退黄外洗液皮肤给药刺激性试验
中药退黄外洗液皮肤给药刺激性试验（作者:___________单位: ___________邮编: ___________）作者：黄仕孙，高桂娥，吴曙粤，曾宪彪，王艳宁，余莉玲【摘要】目的：观察婴幼儿使用的院内制剂中药退黄外洗液对豚鼠的皮肤刺激性。
方法：中药退黄外洗液以29.6 g和7.4 g生药/kg（为临床剂量的40倍和10倍）给豚鼠分别作单次和多次完整皮肤和损伤皮肤刺激性试验，用药后测量豚鼠体重，观察外观体征、行为活动、进食、排泄等一般情况，并作受药部位皮肤组织病理学检查。
结果：中药退黄外洗液高、低剂量组单次或多次接触豚鼠，其外观体征、行为活动、体重和皮肤组织病理学检查与空白对照组无显著差异。
结论：本品短期内对豚鼠无刺激性，表明临床拟用剂量用于局部或全身皮肤是安全的。
【关键词】中药退黄外洗液；皮肤给药;刺激性试验；豚鼠［Abstract］Obtective:To observe the reaction to Chinese herbal jaundice-abating lotion applied on Guinea pigs’skin which was developed by the first people hospital for infant externaluse.Methods:The healthy skin and the wounded skin of the Guinea pigs were treated with Chinese herbal jaundice-abating lotion with the doses of 29.6 g and 7.4 g raw materials/kg (40 and 10 times that of the practical use),respectively. What were undertaken after the above treatments was the weighing of guinea pigs and a series of regular records of guinea pigs,such as physical signs, activities,eating and the egesta etc.Samples from the treated parts of the skin of guinea pigs were collected and the pathologic measurements were also undertaken.Results:No significant differences were found between the health and the wounded in their physical signs, activities, and the weights of Guinea pigs and among the results of the pathologic measurements after treatments designed either once or several times to guinea pigs with high and low doses of Chinese herbal jaundice-abating lotion.Conclusions:No negative reactions were found in the short time period after the medicine was applied on the skin of Guinea pigs,which implies that it is safe to apply the medicine locally or for the whole body.［Key words］Jaundice-abating Chinese Herbal lotion;External Use;Reaction test;Guinea pigs中药退黄外洗液是南宁市第一人民医院研制的婴幼儿院内制剂，其处方组成为茵陈、栀子、大黄、丹参、柴胡、郁金、枳壳、金钱草、车前草、白术、党参、茯苓、麦芽、鸡内金、甘草。
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急性皮肤刺激试验
1 目的
确定化学品对哺乳动物皮肤局部是否有刺激作用及程度，为制定化学品对皮肤的保护措施提供依据。
2 制定依据
《化妆品卫生规范（2007版）》。
3试验方法
3.1受试样品处理
液体受试物一般不需稀释，可直接使用原液。
若受试物为固体，应将其研磨成细粉状，并用水或其它无刺激性溶剂充分湿润，以保证受试物与皮肤有良好的接触。
使用其它溶剂，应考虑到该溶剂对受试物皮肤刺激性的影响。
需稀释后使用的产品，先进行产品原型的皮肤刺激性/腐蚀性试验，如果试验结果显示中度以上刺激性，可按使用浓度为受试物再进行皮肤刺激性/腐蚀性试验。
受试物为强酸或强碱（pH 值≤2 或≥11.5），可以不再进行皮肤刺激试验。
此外，若已知受试物有很强的经皮吸收毒性，经皮LD50 小于200 mg/kg 体重或在急性经皮毒性试验中受试物剂量为2000 mg/kg 体重仍未出现皮肤刺激性作用，也无需进行急性皮肤刺激性试验。
3.2实验动物和饲养环境
多种哺乳动物均可被选为实验动物，首选白色家兔。
应使用成年、健康、皮肤无损伤的动物，雌性和雄性均可，但雌性动物应是未孕和未曾产仔的。
实验动物至少要用4只，如要澄清某些可疑的反应则需增加实验动物数。
实验动物应单笼饲养，试验前动物要在实验动物房环境中至少适应3d 时间。
实验动物及实验动物房应符合国家相应规定。
选用常规饲料，饮水不限制。
3.3 急性皮肤刺激性试验步骤
3.3.1 试验前约24h，将实验动物背部脊柱两侧毛剪掉，不可损伤表皮，去毛范围左、右各约3cm×3cm。
3.3.2 取受试物约0.5mL（g）直接涂在皮肤上，然后用二层纱布（2.5cm×2.5cm）和一层玻璃纸或类似物覆盖，再用无刺激性胶布和绷带加以固定。
另一侧皮肤作为对照。
采用封闭试验，敷用时间为4h。
对化妆品产品而言，可根据人的实际使用和产品类型，延长或缩短敷用时间。
对用后冲洗的化妆品产品，仅采用2h 敷用试验。
试验结束后用温水或无刺激性溶剂
清除残留受试物。
如怀疑受试物可能引起严重刺激或腐蚀作用，可采取分段试验，将三个涂布受试物的纱布块同时或先后敷贴在一只家兔背部脱毛区皮肤上，分别于涂敷后3min、60min 和4h 取下一块纱布，皮肤涂敷部位在任一时间点出现腐蚀作用，即可停止试验。
3.3.3 于清除受试物后的1、24、48 和72h 观察涂抹部位皮肤反应，按表1 进行皮肤反应评分，以受试动物积分的平均值进行综合评价，根据24、48 和72 h 各观察时点最高积分均值，按表2 判定皮肤刺激强度。
3.3.4 观察时间的确定应足以观察到可逆或不可逆刺激作用的全过程，一般不超过14d。
3.4 多次皮肤刺激性试验步骤
3.4.1 试验前将实验动物背部脊柱两侧被毛剪掉，去毛范围各为3cm×3cm，涂抹面积
2.5cm×2.5cm。
3.4.2 取受试物约0.5mL（g）涂抹在一侧皮肤上，当受试物使用无刺激性溶剂配制时，另一侧涂溶剂作为对照，每天涂抹1 次，连续涂抹14d。
从第二天开始，每次涂抹前应剪毛，用水或无刺激性溶剂清除残留受试物。
一小时后观察结果，按表1 评分，对照区和试验区同样处理。
3.4.3 结果评价：按下列公式计算每天每只动物平均积分，以表2 判定皮肤刺激强度。
表1 皮肤刺激反应评分
皮肤反应评分
红斑和焦痂形成无红斑0轻微红斑1明显红斑2中等程度到重度程度红斑3严重红斑（紫红色）至轻微焦痂形成4
水肿形成无水肿0微水肿（勉强可见）1
轻度水肿（皮肤隆起轮廓清晰）2
中度水肿（皮肤隆起约1mm）3
重度水肿（皮肤隆超过1mm，范围扩大）4
最高积分8分 8
4 试验报告
试验报告应以表格形式总结，包括如下内容：
（1）受试物名称、理化性状、配制方法和用量。
必要时说明受试物的pH 值；
（2）实验动物的种属、品系、性别、体重和来源（注明合格证号和动物级别）；
（3）实验动物饲养环境，包括饲料来源、室温、相对湿度、实验动物房合格证号；
（4）每个动物在每一观察时点的皮肤刺激反应积分；
（5）具体描述除刺激性以外的其它毒性作用；
（6）结论。
5 试验结果的解释
急性皮肤刺激试验结果从动物外推到人的可靠性很有限。
白色家兔在大多数情况下对有刺激性或腐蚀性的物质较人类敏感。
若用其它品系动物进行试验时也得到类似结果，则会增加从动物外推到人的可靠性。
试验中使用封闭式接触是一种超常的实验室条件下的试验，在人类实际使用化妆品过程中很少存在这种接触方式。
表2 皮肤刺激强度分级
积分均值强度分级
0～﹤0.5无刺激性
0.5～﹤2.0轻度刺激性
2.0～﹤6.0中等刺激性
6.0～﹤8.0强刺激性
表3__________ 对家兔急性皮肤刺激性试验结果
动物编号性
别
体
重
k
g
1h 24h 48h 72h 样品对照样品对照样品对照样品对照红
斑
水
肿
总
分
红
斑
水
肿
总
分
红
斑
水
肿
总
分
红
斑
水
肿
总
分
红
斑
水
肿
总
分
红
斑
水
肿
总
分
红
斑
水
肿
总
分
红
斑
水
肿
总
分
1
2
3
4
总积分均值
刺激强度分级
表4______________对家兔多次皮肤刺激性试验结果
涂抹天数动物数（只）刺激反应积分
样品对照
红斑水肿总分红斑水肿总分14
24
34
44
54
64
74
84
94
104
114
124
134
144
14天每只动物积分均值
每天每只动物积分均值
. .。