特殊染色

95%酒精分化、脱水、透明、封固。
试剂配制：
盐基性复红（碱性品红） 间苯二酚（雷锁辛） 蒸馏水 30%三氯化铁水溶液 95%酒精 浓盐酸
2g 4g 200ml 25ml 200ml 4ml

先将盐基性复红（碱性品红）溶于200ml的蒸馏水中， 加入4-5g间苯二酚，加温煮沸（不停搅拌），
二、学习特染技术应掌握的重点
（注意事项）
（1）染色方法的成败，应该在温度、浓度、时 间和PH值等方面找原因。 （2）注意特染的应用范围，如某种病变应用什 么方法染色才能达到目的，一般先在HE切片所 见的要求去选择适当的特染方法，一种或多种。
（3）必须掌握各种特殊染色的结果，避免 导致错误的结论或严重的误诊，如在网染时 把胶元纤维误以为网状纤维。 （4）尽量要阳性切片作对照，便于选择特 染方法，并与HE切片作对照。 （5）特染的组织，在其固定、脱水根据要 求选择。所用的器皿都必须化学清洗。
（四） 网状纤维染色的注意事项
（1）用新蒸馏水配制最好用双蒸水配制。 （2）所用玻璃器材及载玻片均要达到化学 洁净程度. （3）对已配制好的硝酸银液和氨银溶液， 要贮存冰箱中保存待用。
（4）在染色过程中，用染氨银染液或硝酸银液
的前后应用蒸馏水洗浸。 （5）氯化金调色和硫代硫酸钠固定的时间不应
太长，否则会引起网状纤维染色变淡。
然后加入25ml的30%三氯化铁水溶液，继续搅拌煮沸2-5
分钟，冷却后过滤倾去滤液，将滤纸及沉淀物置于温箱 中烘干。

而后将滤纸和干燥的沉淀物一并投入烧杯，加200ml 95%
酒精，小心隔水加热，徐徐搅拌使沉淀溶解，然后弃去 滤纸冷却后，补足因加热蒸发的酒精。 最后加入4ml的盐酸即可应用。（对苯二酚可代替间苯二 酚）。
（三）网状纤维纤维染色应用
判定病变组织支架的破坏情况，组织、 脏器网状支架的存在与塌陷、完整与破坏 、网状纤维的分布及走行，有多少、粗细 、疏密或有无断裂形态变化。
⑴ 用于显示和鉴别肿瘤的性质和来源 显示和区分癌与肉瘤 来源于上皮组织的恶
性肿瘤（癌）仅癌巢周围有网状纤维包绕，巢内癌 细胞之间则没有网状纤维分部。来源于间叶组织的 恶性肿瘤（肉瘤），瘤细胞之间往往可见较多的网 状纤存在。
Verhoeff氏弹力纤维染色法：
操作方法：

切片常规脱蜡。
Verhoeff染液15-60分钟。
以2%三氯化铁分化（镜下控制）。 水洗再以95%酒精洗去碘。 流水洗。 以HE或VG氏染液复染。
脱水、透明、封固。
【染色结果】
弹力纤维蓝黑色，其它组织视复染而定。
注意事项：
（3）媒染 多用2%硫酸铁氨（俗称铁明矾）。 这些试剂可增加网状纤维对银氨液的选择性。 （4）浸银 也称镀银，使银氨配位化合物与网 状纤维结合，带正电荷的二氨合银Ag（NH3）+2 被具有嗜银性物质的网状纤维吸附。 （5）还原 甲醛液是还原剂，能把与网状纤维结 合的银氨配位化合物还原成棕黑色的金属银。
癌组织发生，发展过程以及癌组织生长速度， 可通过网染进行观察和研究，如癌巢周围的网状纤 维包囊完整，说明癌组织生长较慢，恶性程度低；
再如子宫颈鳞状细胞癌巢周围网状纤维分解，说明
癌组织正在扩散，其恶性程度较高。
(5) 用于显示和研究肝组织病变
用网状纤维的染色法，观察肝脏病变处
的网状支架形态、分布特点及其破坏情况， 可以判定和研究其病变性质、程度及其发展 与转规。


标本用Zenker氏液，酒精或10%甲醛固定均可。
石蜡或冰冻切片。


脱蜡至水。
水洗后，加入Weigert氏染色液2-6小时或更长的
时间，一般依染色液的新旧而定 。
取出后，直接浸入1%盐酸酒精或酒精中进行分
化。
如需复染细胞核，可染于明矾苏木素溶液中10分
钟。
冲洗后，可再以V
G氏染液作对比染色1-2分钟。
（6）切片脱水后及时封片，不宜在空气中停留
时间过长，以免产生色素颗粒。
【 氨银液的配制】
1.取10%硝酸银水溶液5ml于三角烧瓶内，一滴一滴地滴加
氨水（氢氧化铵），并同时摇动容器 2.硝酸银遇到氨水立即产生沉淀，当其沉淀物被溶解时（ 不能完全溶解也可） 3.再加入3%氢氧化钠水溶液5ml。溶液重新产生沉淀 4.此时再滴加氨水。至其沉淀被溶解后，（为避免氨水加 入过量最好能有少许沉淀物为妥，以免脱片）最后加蒸馏水 稀释至50ml。 5.滤过，贮存于棕色瓶中存放入冰箱备用。临用前取出恢 复室温再用。
【染色步骤】
（1） 切片脱蜡至水洗。 （2） 0.25%高锰酸钾液氧化5’。 （3） 自来水洗2次。 （4） 2.5%草酸液漂白1-2’，水洗2’。 （5） 2%硫酸铁铵媒染（铁明矾）10’。 （6） 水洗，蒸馏水洗2次。 （7） 滴染氨银液1’左右。
（8） 蒸馏水洗2次。 （9） 10%中性早醛还原3′。 （10） 蒸馏水洗1—2次。 （11） 0.2% 的氯化金调色5′ 水洗。 （12） 5%硫代硫酸钠固定5′。 （13） 自来水冲洗，蒸馏水洗。 （14） 复染（对比染色）伊红、中性红、ＶＧ。 （15） 脱水、透明、封片。
呈鲜红色）
(9)2%亮绿液染2-5分钟（或用2%苯胺蓝水溶液
替代）
(10)水洗（快速） (11)常规脱水、透明、封片。
【染色结果】
胶原纤维绿色(亮绿)（或苯胺蓝,蓝色） 肌肉、纤维素红色，红细胞橘黄色，核蓝 黑色。
试剂配制：
1．丽春红-品红溶液

丽春红 酸性品红 冰醋酸 蒸馏水 冰醋酸 蒸馏水 亮绿 冰醋酸
意义： （1）特染能显示在常规染色切片中不明显的部 分，如革兰氏染色、细菌染色。 （2）区别HE染色中不能鉴别的组织病变，如 VG染色区别胶元纤维和平滑肌。 （3）显示某些常规染色中不能着色的物质，如 网染才能显示网状纤维，常规HE染色是染不出 来的。 因此，特殊染色也是制片染色中不可缺少的组 成部分，它在病理诊断常着辅助作用，也为科 研提供依据。
四、sson三色染色法
Masson三色染色法是由Mallory氏苯胺蓝 菊黄G发展改良而来，但对于固定液有一定的 选择性，虽然任何固定液固定后的组织可进行 染色，但最好是用Zenker氏固定液或Bouin氏 固定液固定组织。福尔马林固定的标本切片在 染色前以3%升汞作第二次固定一小时以上，则 可增强着色效果。
0.7g 0.3—0.5g 1ml 99ml 1ml 99ml 2.0g 2ml
2．1%冰醋酸水溶液

3．亮绿


蒸馏水
98ml
第二节 脂类染色法

脂肪和类脂（磷脂、糖脂、固醇脂等）统称为脂类。它是构成人 体组织的正常成分，不溶于水而易溶于酒精、乙醚、氯仿等脂溶 剂中。在化学组成上，脂类属于脂肪酸的酯或与这些酯有关的物 质。脂类的主要功能是氧化供能。脂肪主要存积于脂肪组织中， 并以油滴状的微粒存在脂肪细胞浆内。 在病理检验中，脂类染色法最常用以证明脂肪变性，脂肪栓子以 及肿瘤的鉴别。脂类染色使用最广泛的染料是苏丹染料，最常用 的有苏丹Ⅲ，苏丹Ⅳ，苏丹黑及油红O等。脂肪被染色，实际上 是苏丹染料被脂肪溶解吸附而呈现染料的颜色。经研究认为组织 中脂质在液态或半液态时，对苏丹染料着色效果最好。根据这一 原理，适当提高温度（37℃-60℃）对组织切片染色效果是有好处 的。
苦味酸—酸性品红法 1． VG 染液试剂配制 1%酸性品红 10ml 苦味酸饱和液 90ml 此液常分别配制临用时加以混合，不 能久用。
【染色步骤】
（1）组织固定于10%早醛液中，常规脱水包埋 （2）组织切片脱腊至水。 （3）V-G染液2-5’（酸性品红1：苦味酸饱和液9） （4）倾去染液，无水酒精急速脱水，用滤纸吸干 （5）二甲苯透明，中性树胶封片。
四、常用的特染
第一节 结缔组织染色
一、胶元纤维染色（VG 染色） ㈠ 胶元纤维的分部组成成分
胶原纤维是结缔组织中的三种纤维之 一，分布最为广泛，含量最多。主要分布 于真皮、腱、韧带、骨、透明软骨、动脉 、肠壁 、子宫和基底膜等。胶原纤维具有 韧性大，抗拉力强的特点。胶原纤维单位 主要由纤维母细胞合成。
【结果】 胶元纤维呈黄色，网状纤维成黑色。
【染色结果】 网状纤维染灰黑色，胶元纤维红色，基质 黄色。
三、弹力纤维染色法
弹力纤维较细，直径0.2-1微米，且坚 固，弹性大，容易伸展，纤维分枝连接成 网，HE染色与胶原纤维着色相似，若用弹
力纤维染色法，则可分辨的很清楚。
Weigert氏弹力纤维染色法：
这种染色法染液配制简单，但对微细弹 力纤维不如Weigert氏效果好。
试剂配制：
将1克苏木素加热溶于20ml的无水酒精， 冷却后，加1%三氯化铁水溶液8ml搅拌； 再加入
8ml的Lugoi碘液（碘1克，碘化钾
2克，蒸馏水100ml）搅拌混合而成。
染液仅可存放2-3周。
应用：
1.显示皮肤组织中弹力纤维的变化 2.显示鉴别心血管疾病 3.显示呼吸系统和肾脏疾病时弹力纤维的变化 4.对弹力纤维瘤的诊断有决定作用
⑵ 用于某些肿瘤的诊断
根据染色所显示的网状纤维多少、分布 及行走特点，可用于诊断下列肿瘤。
1）平滑肌肉 细胞之间见有大量平行分
布的网状纤维。
2）纤维肉瘤 可见大量网状纤维存在，
并且密集包绕细胞。
3）滑膜肉瘤 其梭形细胞也产生网状纤
维，但不如纤维肉瘤多。
⑶ 用于观察和研究癌组织的发生、发 展及其恶性程度
每次使用后的玻璃器皿都必须及时彻底 清洗干净，以供下次实验之用，如轻视这一 步骤，可用的玻璃器皿不够干净，则会影响 染色效果，甚至导致染色失败，特别在酶组 化和银离子反应操作过程中更有严格的要求 ，使用后的玻璃器皿在一般清洗后，还要求 用硫酸清洗液浸泡。