Asr基因家族的研究进展_杨晔
植物花青素合成酶ANS基因的研究进展
植物生理学报 Plant Physiology Journal 2016, 52 (6): 817–827 doi: 10.13592/ki.ppj.2016.0162817收稿 2016-04-14 修定 2016-05-28资助 贵州省高层次创新型人才培养计划(黔科合人才[2015]4031号)和贵州省研究生教育创新基地建设(黔教研合CXJD 字[2014]001)项目。
* 通讯作者(E-mail: mshzhang@)。
植物花青素合成酶ANS 基因的研究进展李小兰, 张明生*, 吕享贵州大学生命科学学院, 山地植物资源保护与种质创新省部共建教育部重点实验室, 贵阳550025摘要: 花青素合成酶ANS 是植物花青素生物合成途径末端的关键酶, 催化无色花色素转变为有色花青素。
本文通过对ANS 基因结构和功能进行综述, 旨在为更多植物ANS 基因的克隆及功能分析、花青素合成分子调控机制探索、花青素的开发利用等提供参考资料。
关键词: 花青素合成酶; 基因功能; 表达调控; 花青素; 逆境胁迫花青素是植物次生代谢产物, 属于黄酮类水溶性天然色素, 主要以糖苷形式存在于表皮细胞的液泡中, 使植物的花、果实、种皮等器官呈现红、蓝、紫等颜色(顾林等2007; 张彬2011)。
花青素具有多种生理功能, 对植物自身方面, 能吸引昆虫传粉、防止植物受紫外辐射、保护DNA 不受破坏、使细胞分化、抵御低温、防止病害以及使生命过程正常进行等; 对人类健康方面, 具有抗氧化、抗突变、预防心脑血管疾病、保护肝脏、抑制肿瘤细胞发生等多种生理功能(张彬2011)。
无色花青素双加氧酶/花青素合成酶(leucoanthocyanidin dioxygenase/anthocyanidin synthase, LDOX/ANS)是植物花青素生物合成途径末端的关键酶, 催化无色花色素到有色花色素的转变(亓希武等2013; Jaakola 2013; Nakajima 等2001)。
ERF转录因子研究进展
ERF转录因子研究进展高浩;竺锡武【摘要】ERF(Ethylene-responsive factor)转录因子是AP2/ERF大家族中的一个大的亚家族,仅含1个AP2/ERF结构域,每个成员都含有1个由大约60个氨基酸组成的非常保守的DNA结合域.有研究表明,每种植物有100种以上ERF转录因子,其功能各不相同,分别具有调节植物生长发育、抗生物胁迫和非生物胁迫的作用等.本文就ERF转录因子的研究现状及发展趋势进行分析,以期为ERF转录因子的应用提供参考.【期刊名称】《现代农业科技》【年(卷),期】2017(000)008【总页数】3页(P130-131,134)【关键词】ERF转录因子;功能;作用机理【作者】高浩;竺锡武【作者单位】湖南人文科技学院,湖南娄底 417000;湖南人文科技学院,湖南娄底417000【正文语种】中文【中图分类】Q943随着环境条件的恶化，植物在生长发育过程中受到的非生物因素和生物因素影响会更多，如高温、低温、干旱、盐碱、病虫害等。
在不断适应环境和进化过程中，植物形成了复杂有效的逆境胁迫应答体系，可以调节植物使其能够适应新的生长环境。
其中，在转录水平的调控过程中转录因子发挥了非常重要的作用[1]。
转录因子又称反式作用因子，是一群能与真核基因启动子区域中的顺式作用元件发生特异性结合，从而保证目的基因以特定的强度、在特定的时间与空间表达的蛋白质分子[2]。
AP2/ERF家族转录因子对植物非常重要，可以调控植物整个生命周期的生长发育和逆境[3-7]。
根据AP2结构域的数目和结构特点，AP2/ERF家族转录因子可分为4个亚族（ERF、DREB、AP2、RAV）和单独成员（Soloist）[4-5，8]。
ERF（Ethylene-responsive factor）转录因子是 AP2/ERF大家族中的一个大的亚家族，仅含1个AP2/ERF结构域，在结构域序列的第14位和第19位分别是丙氨酸和天冬氨酸。
FXYD5 基因的研究进展
Research Progress of FXYD5 Gene
KISS1R基因调控哺乳动物繁殖性能的研究进展
dohl0.3969/j.issn.2095-3887.2021.03.009KISS1R 基因调控哺乳动物繁殖性能的研究进展李华振，储明星(中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，农业农村部动物遗传育种与繁殖重E 实验室，北京100193)摘要:青春期的长短和机体发育水平对动物的生产力有很大影响。
缩短青春期、提高初情期繁殖轴器官发育水平以及优化幼畜出生日期等对提高动物的繁殖效率具有重要意义。
KISSIR 基因及其配体能刺激下丘脑释放GnRH ，继而调控雌性动物的卵巢发育和卵巢颗粒细胞的增殖，从而影响动物的 繁殖性能。
文章总结了目前关于KISS1R 基因在动物发情周期、性早熟、性晚熟和青春期发育等繁殖 性能中的作用，以期为后续研究提供借鉴。
关键词:哺乳动物;KISS1R ;繁殖性能中图分类号:S814.8文献标识码:A文章编号:2095-3887(2021 )03-0048-06Research Progress on the Reproductive Performance Regulation of K ISSIR in MammalsLI Huazhen , CHU Mingxing(Key Laboratory of Animal Genetics , Breeding and Reproduction of Ministry of Agriculture and Rural Affairs ,Inst i t u te of Animal Science , Chinese Academy of Agricultural Sciences , Beijing 100193, China )Abstract : The time of adolescence and the level of development had a great influence on animal productivity.Shortening puberty , improving the development level of reproductive axis organs in the first estrus and optimizing the date of birth would improve re productive efficiency in animals.Research in recent years has shown that KISS1R plays an important role in regulating animal go nad development and reproduction .Many past studies haverevealed that KISS1R was important in animal reproduction and youth development.KISS1R was expressed at different levels in the hypothalamic-pituitary-gonad (HPG ) axis tis sues of seasonal estrus animals.This article summarized the收稿日期：2021-01-13基金项目：国家自然科学基金项目⑶861143012)；国家肉羊产业技术体系专项(CARS-38)；中国农业科学院科技创新工程(ASTIP-IAS13)作者简介:李华振(1992-),男，硕士,主要从事绵羊分子育种研究工作通信作者:储明星,研究员,博士，博士生导师,主要从事羊优异繁殖性状分子 机理研究工作[7]张晨，李静，王云鹏，等•全收粪法与不同内源指示剂法测定山羊 饲粮中养分消化率的比较[]•动物营养学报,2020,32(7)： 3274-3281.[8 ]王文奇，侯广田，罗永明，等•不同精粗比全混合颗粒饲粮对母羊营养物质表观消化率、氮代谢和能量代谢的影响[]•动物营养学报,2014,26(11)：3316-3324.[9] 李 ， ，王 ，等. 不同精粗 对9烷排放与生长性能及营养物质消化率的影响[J ]-饲料工业， 2019，40(11) 12-18.[ 10] ， 国， ，等. 精粗 对分率和尿瞟吟衍生物排出量的影响[]•饲料研究,2015(19)： 40-44.[11]石蕊•不同精粗比日粮对奶山羊养分消化及瘤胃、肝脏脂肪酸代谢的影响[D ]•南京:南京农业大学,2013:41-42.[12].不同精粗 与 生指标变化的研究[D ] •银川：宁夏大学,2019： 64-65-[13] 崔树和，李香子,高青山，等•不同精粗比膨化玉米秸秆饲料对延生产性 生 指 [ J ] . 研究, 2016( 4)21-26.[14] ,王振 , 同 ,等.不同精粗对 机体内定性[ J ].学 , 2008( 4)455-459.[15] 施力光，赵春萍，曹婷，等•不同日粮精粗比对海南黑山羊抗氧化性能的影响[J ]-中国草食动物科学,2015,35(1)： 29-31.[16] 张帆，崔凯，毕研亮,等•妊娠后期母羊饲粮精料比例对羔羊生长性能、消化性能及血清抗氧化指标的影响[J ].动物营养学报， 2017,29(10) 3583-3591.current role of KISS1R in animal estrus cycle+precocious puberty+late puberty+puberty development+hoping to provide a reference for follow-up research.Keywords:mammals;KISS1R;reproductive performanceKISS1受体(KISSI receptor,KISS1R)又名GPR54,是KISS1基因编码的神经肽Kisspeptin在动物体内的受体。
绵羊骨骼肌生长发育调控基因研究进展
中国畜牧兽医㊀２０１９,４６(５):１４２９Ｇ１４３８C h i n aA n i m a lH u s b a n d r y &V e t e r i n a r y Me d i c i n e 绵羊骨骼肌生长发育调控基因研究进展孙燕勇１,付绍印１,２,３,祁云霞２,何小龙２,孙德欣２,方勤圆２,陈㊀欣２,刘永斌２∗,张文广１∗(１．内蒙古农业大学动物科学学院,内蒙古自治区动物遗传育种与繁殖重点实验室,呼和浩特０１００１８;２．内蒙古农牧业科学院,呼和浩特０１００３１;３．内蒙古A T C G 生物信息研究所,呼和浩特０１００２０)摘㊀要:骨骼肌发育是一个复杂的过程,其中包括肌细胞的形成与增殖㊁肌管和肌纤维的形成及最后的成熟过程.骨骼肌生长发育直接影响到绵羊的生产性能.随着测序技术的发展,更多人尝试从基因层面来阐述骨骼肌发育过程中系统的调控网络,挖掘与肉品质㊁产肉性能等重要功能性状相关的分子标记.肌细胞增强因子２(M E F ２)是控制肌肉基因表达的保守且功能显著的转录因子,在调节肌肉生成㊁神经发育与分化等方面起作用.成肌细胞决定因子(m y o g e n i c d i f f e r e n t i a t i o n ,M y o D )基因家族调控肌细胞分化和骨骼肌系统的发育成熟.为了更深入地认识与绵羊骨骼肌生长发育相关的调控基因的功能,作者从骨骼肌的结构特点入手,重点介绍M E F ２与M y o D 基因家族的结构与功能,以及非编码R N A 对骨骼肌中基因表达的调控作用.关键词:绵羊;骨骼肌;M E F ２基因;M y o D 基因;生长发育中图分类号:S ８１３．３文献标识码:AD o i :１０．１６４３１/j．c n k i ．１６７１Ｇ７２３６．２０１９．０５．０２１㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀开放科学(资源服务)标识码(O S I D ):修回日期:２０１８Ｇ１１Ｇ２０基金项目:国家自然科学基因(３１５６０６２２㊁３１７６０６５８);国家肉羊产业技术体系建设项目(C A R S Ｇ３８)作者简介:孙燕勇(１９８８Ｇ),女,河北张家口人,博士生,研究方向:动物遗传育种与繁殖,E Ｇm a i l :t u r e _f a i t h ６＠１６３．c o m ∗通信作者:刘永斌(１９７７Ｇ),男,研究员,硕士生导师,研究方向:动物遗传育种与繁殖,E Ｇm a i l :yb l i u １１７＠１２６．c o m 张文广(１９７３Ｇ),男,教授,博士生导师,研究方向:数量基因组学暨性状遗传机理,E Ｇm a i l :a c t g n m b i ＠a l i yu n ．c o m R e s e a r c hA d v a n c e s o nR e gu l a t i o nG e n e s o fG r o w t ha n d D e v e l o p m e n t o f S k e l e t a lM u s c l e i nS h e e pS U N Y a n y o n g １,F US h a o y i n １,２,３,Q IY u n x i a ２,H EX i a o l o n g ２,SU N D e x i n ２,F A N G Q i n y u a n ２,C H E N X i n ２,L I U Y o n g b i n ２∗,Z H A N G W e n g u a n g１∗(１．K e y L a b o r a t o r y o f A n i m a lG e n e t i c s ,B r e e d i n g a n dR e p r o d u c t i o no f t h e I n n e rM o n go l i a A u t o n o m o u s R e g i o n ,C o l l e g e o f A n i m a lS c i e n c e a n dT e c h n o l o g y ,I n n e rM o n go l i a A g r i c u l t u r a l U n i v e r s i t y ,H o h h o t ０１００１８,C h i n a ;２．I n n e rM o n g o l i aA c a d e m y o f A g r i c u l t u r a l&A n i m a lH u s b a n d r y Sc i e n c e s ,H o h h o t ０１００３１,C h i n a ;３．I n s t i t u t e o f A T C G ,N e iM o n g o l i aB i o ＧI n fo r m a t i o n ,H o h h o t ０１００２０,C h i n a )A b s t r a c t :S k e l e t a lm u s c l e d e v e l o p m e n t i s a c o m p l e x p r o c e s s i n v o l v i n gt h e f o r m a t i o n a n d p r o l i f e r a Ｇt i o no fm u s c l ec e l l s ,t h ef o r m a t i o no fm u s c l ed u c t sa n d m u s c l ef i b e r s ,a n dt h ef i n a lm a t u r a t i o n p r o c e s s ．T h e g r o w t ha n dd e v e l o p m e n t o f s k e l e t a lm u s c l ed i r e c t l y af f e c t s t h e p r o d u c t i o n p e r f o r m Ｇa n c e i n s h e e p ．W i t h t h e d e v e l o p m e n t o f s e q u e n c i ng t e ch n o l o g y ,m o r e a n dm o r e p e o p l e a r e t r yi n gt o e l u c i d a t e t h e s y s t e m a t i c r e g u l a t o r y n e t w o r ko f s k e l e t a lm u s c l e d e v e l o pm e n t f r o mt h e g e n e t i c l e v Ｇe l ,a n de x p l o r e t h em o l e c u l a rm a r k e r s r e l a t e d t o t h e i m p o r t a n t f u n c t i o n a l t r a i t s s u c h a sm e a t qu a l i Ｇt y an dm e a t p r o d u c t i o n p e r f o r m a n c e ．C e l l e n h a n c e m e n t f a c t o r ２(M E F ２)i s a c o n s e r v e d a n d f u n c Ｇt i o n a l t r a n s c r i p t i o n f a c t o r t h a t c o n t r o l s t h e e x p r e s s i o no fm u s c l e g e n e s a n d p l a y s a r o l e i n r e gu l a Ｇ中㊀国㊀畜㊀牧㊀兽㊀医４６卷㊀t i n g m u s c l e g e n e r a t i o n,n e u r a l d e v e l o p m e n t a n dd i f f e r e n t i a t i o n．M y o g e n i cd i f f e r e n t i a t i o n(M y o D) g e n e f a m i l y r e g u l a t e s t h ed i f f e r e n t i a t i o no fm y o c y t e sa n dt h em a t u r a t i o no f s k e l e t a lm u s c l es y sＧt e m．I no r d e r t o f u r t h e r u n d e r s t a n d t h e f u n c t i o no f s h e e p s k e l e t a lm u s c l e a n d i t s g r o w t ha n dd eＧv e l o p m e n t r e g u l a t o r yg e n e s,s t a r t i n g f r o mt h e s t r u c t u r a l f e a t u r e s o f s k e l e t a lm u s c l e,t h i s p a p e r f oＧc u s e s o n t h e s t r u c t u r e a n d f u n c t i o no f M E F２a n d M y o D g e n e s f a m i l y a n d t h e r e g u l a t i o no f n o nＧc o d i n gg e n e o n g e n e e x p r e s s i o n i ns k e l e t a lm u s c l e．K e y w o r d s:s h e e p;s k e l e t a lm u s c l e;M E F２g e n e;M y o D g e n e;g r o w t ha n dd e v e l o p m e n t㊀㊀多年来绵羊骨骼肌生长发育机制的研究备受关注[１],骨骼肌不仅为哺乳动物的运动系统提供保障,同时也为周围组织的葡萄糖氧化和脂肪酸氧化提供重要场所.骨骼肌生长发育是一个渐进的过程,优质的遗传背景是基础,内源性的基因调控作用也是影响因素之一.基因通常不能独立发挥作用,基因之间的相互调节及作用构成了其复杂生物功能.目前已知的转录因子调控网络可以调控肌肉生长㊁形态变化与肌肉分化过程相关基因的表达水平[２].胎儿期是骨骼肌发育的关键时期,大多数肌纤维是在胚胎期形成的.成肌细胞中未分化成熟的细胞融合成长为圆柱形多核细胞,形成肌纤维,该过程主要由肌细胞增强因子２(M E F２)家族[３]和肌肉调节因子调控[４],成肌细胞决定因子(M y o D)家族启动和调控胚胎中肌原性发育的不同区域分化过程.而出生后几周内,肌纤维内部结构的成熟使基因行使更复杂的功能[５].成年绵羊肌肉已经完全成熟,不同的肌纤维类型则成为决定其功能的关键因素.M E F２A活性的增加可以促进快速成肌细胞中肌球蛋白的表达,M E F２结合位点在表达慢肌球蛋白克隆的肌管中发挥作用.此外,非编码R N A(n o nＧc o d i n g R N A,n c R N A)作为一种内源性非蛋白编码转录本,在动物肌肉发育和基因表达中发挥了复杂而精确的调节功能[６].H o r a k等[７]研究发现,微小R N A (m i RＧ１３３㊁m i RＧ２０６和m i RＧ１等)与环形R N A(c i rＧc u l a rR N A s,c i r c R N A s)也能参与调控骨骼肌的生长和发育.鉴于此,笔者从骨骼肌的结构入手,详细阐述了绵羊骨骼肌生长发育中相关基因的调控功能.１㊀骨骼肌的结构１．１㊀骨骼肌概述骨骼肌由骨骼肌纤维构成,包括肌原纤维㊁横小管和肌浆网(图１).肌原纤维是直径约为１μm的长蛋白质束,在光镜下观察肌原纤维由明暗相间的带组成,分别为Ⅰ带和A带,其中明带中央的暗线称为Z线(间线).虽然肌纤维没有光滑的内质网池,但它包含肌浆网.肌浆网包裹着肌原纤维,为肌肉收缩提供钙离子储备,同时周期性地扩张终池.这些肌纤维在两个终池之间形成管状内折,称为横向小管(T细管).骨骼肌的发育比较复杂,包括肌细胞的形成㊁增殖[９],肌管和肌纤维的形成,以及最后成熟过程[１０].在脊椎动物胚胎期,多功能干细胞开始分化成肌肉始祖细胞,再次分化成为肌细胞,随后在一定内环境条件下融合成肌管,最终形成肌纤维[１１].肌纤维是肌肉的基本单位,由于肌纤维的异质性造成动物出生后发育过程中存在不同特性和功能的肌肉组织.１．２㊀骨骼肌肌纤维的分类与特性骨骼肌纤维类型有不同的分类方法:第一类是依据骨骼肌生理形态的物理分类方法,即按照肌肉颜色不同分为红肌与白肌;第二类则根据化学反应分类,即在肌球蛋白A T P酶(A T P a s e)与湖泊酸脱氢酶(S D H)化学染色的条件下,根据肌球蛋白A T P 酶在不同酸碱环境的活性差异,可以将骨骼肌纤维分为Ⅰ型㊁Ⅱa型㊁Ⅱb型[１２],在肌球蛋白A T P酶㊁αＧ磷酸甘油脱氢酶或琥珀酸脱氢酶染色下,依据骨骼肌纤维收缩的差异将肌纤维分为快收缩酵解型(F G)㊁快收缩氧化酵解型(F O G)和慢收缩氧化型(S O)[１３];第三类是根据肌纤维的氧化和收缩的性质,并结合肌球蛋白重链M y H C(m y o s i nh e a v y c h a i n s)异构体的表达特性进行分类,采用免疫组化方法对肌纤维类型鉴定,根据骨骼肌肌球蛋白重链同功型差异将肌纤维分为４个亚型:快速酵解型(Ⅱb型)㊁中间型(Ⅱx型)㊁慢速氧化型肌纤维(Ⅰ型)和快速氧化型(Ⅱa型)[２].肌纤维的数量在出生后基本恒定,但是肌纤维的大小与肌纤维类型转化会随着畜禽的生长发育而改变,即经历一个肌纤维成熟的过程.这种相互转化一般是依照Ⅰ型ѳңⅡa型ѳңⅡx型ѳңⅡb 型之间不断变化的[１４](图２).０３４１㊀５期孙燕勇等:绵羊骨骼肌生长发育调控基因研究进展M y o f i b r i l ,肌原纤维;B a s a l l a m i n a ,基膜;G l y c o ge n ,糖原;C e l lm e m b r a n e ,细胞膜;F i l a m e n t of a c t i n ,丝状肌动蛋白;F i l a m e n t o f t i t i n ,丝状肌;S a r c o p l a s m i c r e t i c u l u m ,肌浆网;Ab a n d ,A 带;H b a n d ,H 带;Ml i n e ,M 线;M i t o c h o n d r i a ,线粒体;Ⅰb a n d ,Ⅰ带;T e r m i n a l c i s t e r n ,终池;Z l i n e ,Z 线;G i r d l e o f d e s m i n ,结蛋白束带;F i l a m e n t o fm y o s i n ,肌球蛋白长丝;Tt u b u l e ,T 管图１㊀骨骼肌纤维结构[８]F i g．１㊀T h e s t r u c t u r e o fm u s c l e f i b e r [８]图２㊀M E F ２结构与功能的对齐[１５]F i g ．２㊀A l i gn m e n t o f s t r u c t u r e a n d f u n c t i o n s o fM E F ２[１５]㊀㊀除此之外,激素㊁点刺激㊁神经刺激及强烈运动㊁不同的生理状态等都可能引起不同程度的骨骼肌肌纤维类型的转变[１６],而肌肉的生长主要通过肌肉细胞的肥大来实现,这种肥大是指肌纤维的直径增大,伴随着蛋白质合成的增加,以及部分D N A 数量的增加.研究发现,肌纤维内D N A 的数量随着出生后或负荷运动的出现而增加,而肌细胞核则没有复制D N A 的能力,所以可能是肌纤维之外的地方提供新积蓄的D N A .而关于跨物种比较,绵羊与啮齿类动物有明显的差异,但是绵羊肌肉的纤维类型比小鼠的更接近于人类.因此,绵羊可能是研究骨骼肌更适合的模式动物[１７].２㊀编码基因对绵羊骨骼肌生长发育的调控骨骼肌生长发育研究最多的主要有M E F ２和M yo D 基因家族,在体外细胞培养过程中,M E F ２与M yo D 基因家族成员在基因表达的激活和成纤维细胞向成肌细胞转化中协同作用,在体内,M E F ２是哺乳动物肌肉再生所必需的,它们在多种组织中具有重叠的表达模式,下面主要介绍M E F ２与M y o D 基因家族对骨骼肌生长发育的调控作用.１３４１中㊀国㊀畜㊀牧㊀兽㊀医４６卷㊀２．１㊀M E F２基因家族对骨骼肌发育的调控M E F２基因家族由M E F２A㊁M E F２B㊁M E F２C 和M E F２D４个基因组成[１８],在调节肌肉生成㊁神经发育与分化等方面起作用.此外,M E F２也是控制肌肉基因表达的保守且功能显著的转录因子.２．１．１㊀M E F２基因的结构与表达㊀㊀M E F２高度保守(图２),如在果蝇㊁秀丽隐杆线虫和海胆中都存在M E F２基因.在脊椎动物基因组中,M E F２A㊁M E F２B㊁M E F２C和M E F２D４个基因密切相关,通过可变剪切的形式产生不同的转录产物.它们编码的蛋白质与含共有序列C T A(A/T)４T A G的D N A 结合,形成同源和异源二聚体.不同M E F２的同种型是否与M E F２共有序列的变体结合尚不清楚[１９]. M E F２的关键功能域包括N末端MA D S盒和相邻的M E F２结构域,它们对于D N A结合和二聚化是必不可少的,且这些区域在来自不同物种的所有M E F２蛋白上表现出广泛的序列相似性.C末端区域为转录激活提供保障[２０],但该区域序列在不同的M E F２蛋白中有很大差异.M E F２蛋白可以结合D N A,这种强亲和力的结合使D N A发生弯曲[２０],此过程中MA D S盒决定D N A结合的特异性, M E F２结构域能够调节D N A结合亲和力.近期已经确定了与D N A结合的M E F２A的同源二聚体高度保守的MA D S/M E F２结构域的晶体和溶液结构[２１],但是M E F２结构/功能关系仍有待分析.研究M E F２在肌肉分化中的可能作用,首先是确定其在胚胎发育过程中的表达模式.此外,明确单个基因的表达模式及每个基因的最终同种型,这些可以解释表型与个体基因产物作用的关系.骨骼肌中的M E F２与骨骼肌特异性M R F相反,M E F２s 在心脏和平滑肌等许多组织中表达并起作用[２２].已知绵羊肌肉中M E F２C与Ⅱ型肌球蛋白重链基因表达呈正相关[２３],而在具有单独的M E F２A㊁M E F２B㊁M E F２C和M E F２D基因的哺乳动物中情况更为复杂.２．１．２㊀M E F２在肌肉中的作用㊀㊀M E F２在肌肉分化领域中的突出地位源于早期哺乳动物细胞培养和果蝇发育期间的两个发现,以及后来在各种模型系统中的工作.这些研究中第一次揭示了M E F２蛋白和M R F之间的功能性相互作用[２４].M R F最明显的特征是其可以将成纤维细胞转化为成肌细胞.当M R F与M E F２共转染时,这种能力大大增强[２４].具体而言,是M y o D与M E F２A㊁M E F２C和M E F２D,以及肌细胞生成素与M E F２C的协同作用,这种功能性配合需要M E F２和M R F的D N A结合结构域之间的直接物理相互作用.研究表明, M E F２与M R F这两种蛋白可以通过两种方式激活基因表达:①通过结合分离的D N A位点;②通过M E F２与M R F物理交互的单一位点.虽然肌肉基因C R M s通常包含这两种方式的结合位点[２５],但第二种激活方式的发现意味着M E F２与M R F也可以通过另一个结合位点激活转录,这为M R F如何通过不含有M R F结合位点的D N A序列诱导肌肉基因表达提供了解释.MR F的突变分析显示,D N A结合域中的丙氨酸和苏氨酸与肌肉基因激活密切相关[２６].然而,这些氨基酸不是D N A结合所必需的,因此它们可能是与肌肉基因激活所需的共调节因子相互作用所必需的.值得关注的是,M E F２和MR F s在成纤维细胞的肌原性转化和基因表达方面的相互协同作用需要这两种特异性氨基酸,这表明M E F２因子是M R F s的共调节因子[２６],然而仍然缺乏这种直接相互作用的确切体内证据.有研究通过功能丧失模型,即 显性/阴性 M E F２细胞来证明M R F对成纤维细胞的肌源性转化需要M E F２家族协同,相同的模型也抑制C２C１２成肌细胞形成肌管[２７].最近,该实验室使用M E F２特异性s h R N A敲除M E F２A表达的方法也发现其损害了C２C１２肌管的形成[２８].这些细胞培养研究一起指出了M E F２的有趣功能,但对M E F２在动物发育中肌肉分化过程的基因表达进行探究也是未来研究的关键.然而,对脊椎动物的这种分析由于上述４种密切相关的M E F２基因而变得复杂,它们在多种组织中具有重叠的表达模式.马晓萌[２９]对３４３只乌珠穆沁绵羊M E F２B 基因多态性与生长性状进行了关联分析,结果发现, M E F２B基因下游调控区GңA(r s４１７０１４７４５A＞G)的突变位点与４月龄乌珠穆沁羊胸围和体重呈极显著相关,与６月龄体重呈显著相关㊁与６月龄胸围呈极显著相关.张春兰[３０]研究比较了小尾寒羊与杜泊羊臂二头肌转录组,试图筛选肌肉生长和发育相关的基因,结果发现绵羊肌球蛋白轻链家族成员M Y L１㊁M Y L２㊁M Y L３和M Y L４基因均包括５个外显子,它们的起始密码子上游５ᶄ侧翼序列中含有大量M E F２㊁M y o D和M y o G转录因子的结合位点,肌球蛋白是较粗较长的肌纤维的主要成分,对于肌肉生长与收缩具有重要意义[３１].张莉等[３２]利用全基因组关联分析挖掘绵羊体重性状的遗传标记和功能基因,结果有１０个S N P s位点在全基因水平上与２３４１㊀５期孙燕勇等:绵羊骨骼肌生长发育调控基因研究进展产奶后日增重相关,且部分位点落在绵羊注释基因M E F２B上.２．２㊀M y o D基因家族对骨骼肌发育的调控生肌调节因子(M R F s)也称为肌决定因子家族(M D F s),在骨骼肌中表达的生肌调节因子称为M y o D基因家族,M y o D家族成员至少有４个: M y o D１㊁肌细胞生成素(M y o G)㊁生肌因子５(m y fＧ５)和生肌因子６(m y fＧ６/M R F４),该家族主要调控肌细胞分化和骨骼肌系统的发育成熟[３３].２．２．１㊀M y o D基因的结构与功能㊀㊀M y o D是肌原性碱性螺旋－环－螺旋(bＧH L H)转录因子(包括M y f５㊁M R F４和M y o G)的一部分,由６８个氨基酸残基组成.bＧH L H的结构高度保守,与靶位点ＧC A N N T G结合后可以激活肌肉生长基因的表达. M y o D基因家族序列同源性很高,都含有丰富的精氨酸和赖氨酸的碱性区域,此区域内的几个氨基酸与D N A结合后可以激活肌肉基因进行转录[３４].家族内成员共同起作用以启动和执行哺乳动物胚胎中肌原性发育的不同区域分化程序.激活M y o D㊁M y f５或M R F４对于确定骨骼肌祖细胞很有必要,且这些上游肌肉调节因子诱导M y o G的表达,进而驱动成肌细胞的终末分化[３５].２．２．２㊀M y o D基因在肌肉中的作用㊀㊀１９８７年, D a v i s首次发现了M y o D基因调控肌肉发育过程[３６],M y o D及其家族成员M y o G㊁M y f５和M y f６被定位到人１１与１２号染色体上[３７].M y o D与M y f５在家族中最先表达[３８](图３),可以调控㊁启动成肌细胞的融合与分化.成肌细胞是肌细胞发育的基础,也是最终形成肌肉的原材料.M y o D在bＧH L H E蛋白二聚体伴侣和同源框蛋白P b x[３９]的背景下起作用,以结合增殖的成肌细胞和分化的肌管中的相关靶基因.此外,M y o D激活其他肌肉调节因子(如M E F２㊁M y o G㊁l n c R N A和m i c r o R N A)的表达,这些肌肉调节因子联合起来诱导骨骼肌分化过程[４０].M y o D可以重建肌肉基因增强子结合位点的染色质,并激活先前沉默位点的转录.研究发现,M y o D募集组蛋白乙酰转移酶和染色质重塑复合物[４１]以使基因组区域(接近其结合位点)可被其他转录因子结合.被称为 先驱 的转录因子能够在转录惰性染色质中获得它们的结合位点,而其他转录因子只能在基因组已经转录活跃的区域中进入它们的结合位点[４２],如M y o D能够充当 先驱 转录因子;A s c l１(与M y o D一样是bＧH L H蛋白)与其他转录因子B r n２和M y t１l共同作用,通过充当 先驱 转录因子将成纤维细胞重编码为神经元身份[４３],在这种情况下,A s c l１可以占据成纤维细胞中大多数同源基因组位点.相比之下,B r n２和M y t１l 本身不能进入成纤维细胞染色质,但需要A s c l１来指定它们的结合位点. 先驱 转录因子与 跟随者 转录因子的区别在于前者对核小体表面部分D N A 结合基序的靶向能力.有趣的是,M y o D还需要指导以正确获取其一些关键转录目标,M y o D与同源框蛋白P b x１的相互作用对于M y o D与肌原蛋白启动子的初始相互作用至关重要.B u c k i n g h a m等[４４]比较了乾华美利奴羊与小尾寒羊的背最长肌的转录组数据,结果筛选出４０５个可能与肌肉生长发育㊁骨骼肌组织发育有关的差异基因,并参与肌细胞发育的生物过程.与小尾寒羊相比,乾华美利奴羊背最长肌中M y o G㊁M y o D显著上调,M y f６显著下调,由于M y o G和M y f６主要参与成肌细胞的融合与分化,M y o D是骨骼肌卫星细胞增殖的标记基因[４５],所以这可能为乾华美利奴羊与小尾寒羊肉品质差异提供了理论指导.项露颉[４６]分析了不同品种绵羊背最长肌㊁胸肌与半腱肌中M y o D基因的表达水平,结果发现,M y o D基因蛋白在３个部位中均有表达,且表达量依次为:乾华美利奴羊＞乾寒杂交羊＞小尾寒羊,这暗示不同品种绵羊肌肉分化存在差异.P e n a g a r i c a n o等[４７]对不同母体营养水平下胎儿背最长肌的转录组进行了测序,结果发现,显著差异基因基本都与骨骼肌发育相关.R e h f e k d t等[４８]报道,饲喂低蛋白日粮的妊娠母猪与饲喂相同能量但高蛋白日粮的母猪相比,其新生仔猪的肌肉分化与肌纤维数量均受到影响,且仔猪更胖,但是高淀粉母体日粮并不会影响绵羊后代的肌肉重量,但可能会影响到肌肉的形态和组织学[４９].丝裂原活化蛋白激酶(m i t o g e nＧa c t i v a t e d p r o t e i nk i n a s e,MA P K)信号通路作为一类促进肌肉发育的转录因子,该通路上的基因从成肌细胞发育到肌管形成过程中持续表达[５０].丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶１(MA P K p h o s p h a t a s eＧ１,MK PＧ１)可以抑制MA P K的功能,过表达MK PＧ１后长期维持细胞分化状态从而无法形成肌管.研究证明MA P K信号通路的抑制因子同样会对M R F s与M E F２有效,可降低M R F s与M E F２的活性,所以推测MR F s和M E F２正向调控MA P K通路,维持肌肉分化状态(图３).３３４１中㊀国㊀畜㊀牧㊀兽㊀医４６卷㊀M y o D,成肌细胞决定因子;M y f５,生肌调节因子５;M y o G,肌细胞生成素;M E F２,肌细胞增强因子２;MA P K,丝裂原活化蛋白激酶;MK PＧ１,丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶１M y o D,M y o g e n i cd i f f e r e n t i a t i o n;M y f５,M y o g e n i cf a c t o r５;M y o G,M y o g e n i n;M E F２,M y o c y t ee n h a n c e rf a c t o r２; MA P K,M i t o g e nＧa c t i v a t e d p r o t e i nk i n a s e;MK PＧ１,MA P K p h o s p h a t a s eＧ１图３㊀肌肉发育的基本过程[３８]F i g．３㊀T h e b a s i c p r o c e s s o fm u s c l e d e v e l o p m e n t[３８]３㊀非编码R N A在骨骼肌发育中的作用在哺乳动物全基因组中,编码蛋白的基因仅占１．２％.由于转录是哺乳动物的普遍现象,大多数基因组的转录产物会产生许多非编码R N A.非编码R N A是指不编码蛋白质的R N A,包括t R N A㊁s n R N A㊁l n c R N A㊁c i r c R N A与m i c r o R N A等,其中l n c R N A是一类长度超过２００n t的非编码R N A分子.哺乳动物中４％~９％的基因组序列为l n c R N A[５１].l nＧc R N A广泛参与组织细胞的增殖㊁分化㊁凋亡㊁自噬等,尤其参与发育过程.３．１㊀l n c R N A s对绵羊骨骼肌的调控作用越来越多的研究表明,一些功能性l n c R N A s在肌肉生物学方面起调控作用[５２].在肌生成过程中, l n cＧM D１是最早发现的l n c R N A s之一,它通过与m i c r o R N A s(如m i RＧ１３５㊁m i RＧ１３３)竞争性结合,上调M E F２C与MAM L１(m a s t e r m i n dＧl i k e t r a n s c r i pＧt i o n a l c o a c t i v a t o r１)基因的表达,从而激活肌肉晚期分化[５３].另一种已知的l n c R N A,发育多能性相关因子２(d e v e l o p m e n t a l p l u r i p o t e n c yＧa s s o c i a t e d ２,D p p a２)上游结合肌肉l n c R N A,通过相互作用沉默其邻近基因并将多个D N A乙基转移酶募集至其启动子区域来发挥功能[５４].在成年绵羊快型肌纤维形成过程中,l i n cＧMY H在快肌型肌纤维的细胞核中特异性表达,阻止了慢肌基因的表达[５５].l n c R N A可能编码隐藏的功能性多肽,参与肌肉性能的调节[５６].此外,l i n cＧR AM[５７]与l n cＧm g[５８]是两个新发现的l n c R N A s,已经载入到肌肉分化与再生的功能性l n c R N A数据库中.有报道发现,M E G３在神经发育期间表达,这表明该基因可能涉及肌肉性能的调节[５９].L i等[６０]通过R N AＧS e q比较１１０d胚胎与２~３岁成年绵羊背最长肌,共获得１５６６个l n c R N A s,且在两者中差异表达的有４０４个,这些差异基因主要富集到W n t信号通路[６１]㊁钙调信号通路[６２]㊁间隙连接[６３]㊁甲状腺激素的合成[６４]等通路上.多个l n c R N A可能靶向同一个基因,如M e f２(l n c_０００３１７㊁l n c_００００８６㊁l n c_０００８４４),m y o D(L n c_０００８１９㊁l n c_０００３１７),V d r(l n c_０００７０２)和c h a r g e s (l n c_０００８３６㊁l n c_０００６６１㊁l n c_０００９０４㊁E N S O AＧR T００００００２７２０４)[５９].３．２㊀c i r c R N A s对绵羊骨骼肌的调控作用c i r c u l a rR N A s(c i r c R N A s)是非编码R N A的一种环状结构,最早从植物病毒与乙肝病毒中发现[６５].研究发现,c i r c R N A s参与调控不同年龄的猴子骨骼肌[６６]与鸡胚骨骼肌[６７]的生长发育.S u n 等[６８]比较了长白猪与蓝塘猪背最长肌转录组,结果筛选出５５６６个差异表达l n c R N A s与４３６０个差异表达c i r c R N A s,并指出l n c R N A对猪骨骼肌发育有潜在的转录后调控作用.L i等[６９]使用R N AＧS e q分析了产前(胚胎)㊁产后(成年)哈萨克绵羊肌肉中４３４１㊀５期孙燕勇等:绵羊骨骼肌生长发育调控基因研究进展c i r c R N A s的表达情况,获得５０８６个差异表达c i r c R N A s,且许多c i r c R N A s与大量肌肉相关的m i R N A s(m i RＧ１４３㊁m i RＧ１３３㊁m i RＧ２３等)存在互作效应.更有趣的是,一些c i r c R N A s同时包含不同m i R N A s的目标位点,如o a r_c i r c_０００１４１３同时包含多种m i R N A s目标位点,这些m i R N A s分别为m i RＧ１３３㊁m i RＧ１２５㊁m i RＧ１３４㊁m i RＧ１０３㊁m i RＧ１０７㊁m i RＧ１１８５㊁m i RＧ１８１㊁m i RＧ２１８㊁m i RＧ３２９,c i r c R N A (c i r c H I P K３)通过结合到９个m i R N A s的１８号结合位点来发挥调控细胞生长的功能.因此, c e R N A㊁c i r c R N A s能够与多种m i R N A s互作,进而在肌肉生长发育中起到广泛的内源性调控作用.３．３㊀m i c r o R N A s对绵羊骨骼肌的调控作用m i c r o R N A s(m i R N A s)是内源性的长度较小的一类非编码R N A s(约２２n t),它可以对靶m R N A s 进行反向调节[７０].至少有上百种m i R N A s能够调控大多数的转录组,并广泛调节动物发育的生物过程[７１].据报道,m i RＧ１和胰岛素样生长因子１(i n s uＧl i nＧl i k e g r o w t h f a c t o r１,I G FＧ１)互相调节,以调控肌肉细胞的生长与分化[７２],在骨骼肌卫星细胞分化过程中,m i RＧ１和m i RＧ２０６急剧上升,抑制成对盒转录因子P a x７的表达,限制卫星细胞的增殖潜能,导致卫星细胞的分化,最终影响肌肉生长与发育[７３].骨骼肌细胞外基质(e x t r a c e l l u l a rm a t r i x,E C M)在肌肉纤维的传输㊁维护和修复上起着重要的作用.在受伤和患病状态下,E C M可以明显地适应这种异常状态,这是一种具有临床表现和改变肌肉功能的特性.细胞外结缔组织为肌肉提供强化效果,增强肌肉的抵抗拉伸能力,这表明细胞外基质结构成分可以影响肌肉发育㊁维持肌肉结构.另外,作为m i RＧ１２５a的旁系同源基因,m i RＧ１２５b通过调节胰岛素样生长因子２(i n s u l i nＧl i k e g r o w t hf a c t o r２,I G FＧ２)来调节骨骼肌肌细胞生成与肌肉再生[７４].R o b e r t s 等[７５]基于芯片试验认为m i RＧ６７５是肌肉发育不良的分子标记物.m i RＧ６７５Ｇ３p㊁m i RＧ３７８和m i RＧ１２５aＧ５p可能涉及调节肌肉生长的环节[７６].肌肉是全身代谢的主要参与者,生长激素在肌肉生长和肌肉群中起着至关重要的作用[７７].P E R１受肌肉中生长激素的调控[７８].C A４属于碳酸酐(C A),老鼠骨骼肌纤维细胞膜外层上C A能运输乳酸[７９],因此,C A可能与肌肉p H有关,这是影响肉品质的一个重要因素[８０].可见,对相关m i R N A s的了解将有助于更好地认识与肌肉生长和发育的调控机制.４㊀小㊀结研究基因对骨骼肌生长发育的影响,不仅可以绘制出调控肌肉发育的基因网络系统,而且可以将筛选出的关键调控基因用于指导生产.以往对绵羊骨骼肌l c r o R N A㊁l n c R N A和m i R N A的整合分析较少,且多集中于从家畜表型入手寻找差异基因,这对于发育机制的整体描述仍然存在不足.今后利用不同组学及不同物种的比较组学分析等展开对骨骼肌差异的研究,将为研究骨骼肌生长发育提供新的方向.参考文献(R e f e r e n c e s):[１]㊀C HA R G ESB,R U D N I C K IM A．C e l l u l a r a n dm o l e cＧu l a r r e g u l a t i o no fm u s c l e r e g e n e r a t i o n[J]．P h y s i o l o gＧi c a l R e v i e w s,２００４,８４(１):２０９Ｇ２３８．[２]㊀Y I N H,L ID,WA N G Y,e ta l．M y o g e n i cr e g u l a t o r yf a c t o r(M R F)e x p r e s s i o n i s a f f c t e d b y e x e r c i s e i n p o s t n aＧt a l c h i c k e ns k e l e t a lm u s c l e s[J]．G e n e,２０１５,５６１(２):２９２Ｇ２９９．[３]㊀E D MO N D S O N D G,L Y O N S G E,MA R T I N J F,e t a l．M e f２g e n eＧe x p r e s s i o n m a r k st h ec a r d i a ca n ds k e l e t a lＧm u s c l e l i n e a g e s d u r i n g m o u s e e m b r y o g e n e s i s[J]．D e v e l o p m e n t,１９９４,１２０(５):１２５１Ｇ１２６３．[４]㊀Y O K O Y AMAS,A S A HA R A H．T h em y o g e n i c t r a nＧs c r i p t i o n a l n e t w o r k[J]．C e l l a n d M o l e c u l a rL i f eS c iＧe n c e s,２０１１,６８(１１):１８４３Ｇ１８４９．[５]㊀G I U D I C EJ,L O E H RJA,R O D N E Y G G,e ta l．A lＧt e r n a t i v es p l i c i n g o ff o u rt r a f f i c k i n gg e n e sr e g u l a t e sm y o f i b e r s t r u c t u r ea n ds k e l e t a lm u s c l e p h y s i o l o g y[J]．C e l l R e p o r t s,２０１６,１７(８):１９２３Ｇ１９３３．[６]㊀G O N GC,L IZ,R AMA N U J A N K,e t a l．Al o n g n o nＧc od i n g R N A,l n c M y o D,re g u l a t e ss k e l e t a lm u s c l ed i fＧf e r e n t i a t i o nb y b l o c k i ng I M P２Ｇm e d i a t e dm R N At r a n sＧl a t i o n[J]．D e v e l o p m e n t a l C e l l,２０１５,３４(２):１８１Ｇ１９１．[７]㊀H O R A K M,N O V A KJ,B I E N E R T O V AＧV A S K U J．M u s c l eＧs p e c i f i cm i c r o R N A s i ns k e l e t a lm u s c l ed e v e lＧo p m e n t[J]．D e v e l o p m e n t a lB i o l o g y,２０１６,４１０(１):１Ｇ１３．[８]㊀L I E B E RRL．S k e l e t a lm u s c l e s t r u c t u r e a n d f u n c t i o n,& p l a s t i c t i t y:T h e p h y s i o l o g i c a l b a s i so f r e h a b i l i t a t i o n[M]．L i p p i n c o t tW i l l i a m s&W i k i n s,２００２．[９]㊀Z HA O X,MOD,L IA,e t a l．C o m p a r a t i v e a n a l y s e s b y s e q u e n c i n g o ft r a n s c r i p t o m e sd u r i n g s k e l e t a l m u s c l ed e v e l o p m e n tb e t w e e n p i g b r e e d sd i f f e r i n g i n m u s c l eg r o w t hr a t ea n df a t n e s s[J]．P L o SO n e,２０１１,６(５):e１９７７４．[１０]㊀X U Y,Q I A N H,F A N GX,e t a l．D i f f e r e n t i a l p r o t e o m ea n d t r a n s c r i p t o m ea n a l y s i so f p o r c i n es k e l e t a lm u s c l e５３４１中㊀国㊀畜㊀牧㊀兽㊀医４６卷㊀d u r i n g de v e l o p m e n t[J]．J o u r n a l of P r o t e o m i c s,２０１２,７５(７):２０９３Ｇ２１０８．[１１]㊀B U C K I N G HA N M,R E L A I X F．T h e r o l e o f p a xg e n e s i n t h ed e v e l o p m e n t o f t i s s u e sa n do r g a n s:p a x３a n d p a x７r e g u l a t e m u s c l e p r o g e n i t o rc e l l f u n c t i o n s[J]．A n n u a l R e v i e w o f C e l l D e v e l o p m e n t a lB i o l o g y,２００７,２３(２３):６４５Ｇ６７３．[１２]㊀C H O IY M,N AM K W,C H O EJH,e t a l．G r o w t h,c a r c a s s,f i b e r t y p e,a n dm e a t q u a l i t y c h a r a c t e r i s t i c s i nL a r g e W h i t e p i g s w i t h d i f f e r e n tl i v e w e i g h t s[J]．L i v e s t o c k S c i e n c e,２０１３,１５５(１):１２３Ｇ１２９．[１３]㊀P E T E RJB,B AMA R DRJ,E D G E R T O N VR．M e t aＧb o l ic p r o f i l e s o f t h r e e f i b e r t y p e s o f s k e l e t a lm u s c l e i ng u i n e a p i g s a n d r a b b i t s[J]．B i o c h e m i s t r y,１９７２,１１(１４):２６２７Ｇ２６３３．[１４]㊀A U S O N I S,G O R Z A L,S C H I A F F I N O S,e ta l．E e pＧr e s s i o no fm y o s i nh e a v y c h a i n i s o f o r m s i ns t i m u l a t e df a s ta n ds l o w r a t m u s c l e s[J]．J o u r n a lo f N e u r oＧs c i e n c e t h eO f f i c i a l J o u r n a l o f t h eS o c i e t yf o rN e uＧr o s c i e n c e,１９９０,１０(１):１５３Ｇ１６０．[１５]㊀M I C HA E L V,T A Y L O R,S I MO N M,e t a l．M e f２a n d t h e s k e l e t a lm u s c l ed i f f e r e n t i a t i o n p r o g r a m[J]．S e m iＧn a r s i nC e l l&D e v e l o p m e n t a lB i o l o g y,２０１７,７２:３３Ｇ４４．[１６]㊀S C H I A F F I N OS,S A N D R IM,MU R G I A M．A c t i v i t yＧd e p e n d e n t s i g n a l i n gp a t h w a y sc o n t r o l l i n g m u s c l ed iＧv e r s i t y a n d p l a s t i c i t y[J]．P g y s i o l o g y,２００７,２２(４):２６９Ｇ２７８．[１７]㊀H E MM I N G SK M,D A N I E LZCTR,B U T T E R YPJ,e t a l．D if f e r e n t i a l e f f e c t so fs h o r tＧt e r mβag o n i s ta n dg r o w t hh o r m o n e t r e a t m e n t so ne x p r e s s i o no fm y o s i nh e a v y c h a i nI I B a n d a s s o c i a t e d m e t a b o l i c g e n e si ns h e e p m u s c l e[J]．A n i m a l,２０１５,９(２):２８５Ｇ２９４．[１８]㊀B L A C KBL,O L S O N E N．T r a n s c r i p t i o n a l c o n t r o l o f m u s c l e d e v e l o p m e n t b y m y o c y t e e n h a n c e rf a c t o rＧ２(M E F２)p r o t e i n s[J]．A n n u a lR e v i e w o f C e l la n dD e v e l o p m e n t a lB i o l o g y,１９９８,１４(１):１６７Ｇ１９６．[１９]㊀DE S J A R D I N SC A,N A Y A FJ．T h e f u n c t i o no f t h e M E F２f a m i l y o g t r a n s c r i p t i o n f a c t o r s i n c a r d i a c d e v e lＧo p m e n t,c a r d i o g e n o m i c s,a n dd i r e c tr e p r o g r a m m i n g[J]．J o u r n a lo f C a r d i o v a s c u l a r D e v e l o p m e n ta n d D i sＧe a s e,２０１６,３(３):２６．[２０]㊀M E I E R HA N S D,S I E B E R M,A L L E MA N N R K．H i g h a f f i n i t y b i n d i n g o f M E RＧ２C c o r r e l a t e s w i t hD N Ab e n d i n g[J]．N e c l e i c A c i d sR e s e a r c h,１９９７,２５(２２):４５３７Ｇ４５４４．[２１]㊀WU Y,D E Y R,HA N A,e ta l．S t r u c t u r e o ft h e MA D SＧb o x/M E F２d o m a i no fM E F２Ab o u n d t oD N Aa n di t si m p l i c a t i o nf o r m y o c a r d i n r e c r u i t m e n t[J]．J o u r n a l o f M o l e c u l a rB i o l o g y,２０１０,３９７(２):５２０Ｇ５３３．[２２]㊀P O T T H O F F M J,O L S O N E N．M E F２:A c e n t r a lr e g u l a t o r o fd i v e r s ed e v e l o p m e n t a l p r o g r a m s[J]．D eＧv e l o p m e n t,２００７,１３４(２３):４１３１Ｇ４１４０．[２３]㊀王㊀乐．F o x O１与其调控肌纤维类型相关的研究及对羊肌肉的影响[M]．呼和浩特:内蒙古农业大学,２０１６．WA N GL．T h e s t u d y o f F o x O１a n d g e n e o fm u s c l e f iＧb e rs p ec i f i c a t i o n a n di t s e f f e c to n m e a t q u a l i t y i ns h e e p[D]．H o h h o t:I n n e rM o n g o l i aA g r i c u l t u r a lU n iＧv e r s i t y,２０１６．(i nC h i n e s e)[２４]㊀MO L K E N T I NJD,B L A C KBL,MA R T I NJ F,e t a l．C o o p e r a t i v ea c t i v a t i o no f m u s c l e g e n ee x p r e s s i o nb yM E F２a n d m y o g e n i cb H L H p r o t e i n[J]．C e l l,１９５５,８３(７):１１２５Ｇ１１３６．[２５]㊀KWO N A T,C H O U A Y,A R E N I L L A SDJ,e ta l．V a l i d a t i o n o fs k e l e t a l m u s c l ec i sＧr e g u l a t o r y m o d u l ep r e s i c t i o n s r e v e a l sn u c e o t i d e c o m p o s i t o nb i a s i n f u n cＧt i o n a l e n h a n c e r s[J]．P L o SC o m p u t a t i o n a lB i o l o g y,２０１１,７(１２):e１００２２５６．[２６]㊀B R E N N A N TJ,C HA K R A B O R T Y T,O L S O N E N．M u t a g e n e s i so ft h e m y o g e n i nb a s i cr e g i o ni d e n t i f i e sa na n c i e n t p r o t e i nm o t i f c r i t i c a l f o r a c t i v a t i o no fm y oＧg e n e s i s[J]．P r o c e e d i n g s o f t h eN a t i o n a lA c a d e m y o fS c i e n c e s o f t h eU n i t e dS t a t e s o f A m e r i c a,１９９１,８８(１３):５６７５Ｇ５６７９．[２７]㊀O R N A T S K Y OJ,A N D R E U C C I J J,M C D E R M O T TJC．A d o m i n a tＧn e g a t i v e f o r m o f t r a n s c r i p t i o n f a c t o rM E F２i n h i b i t s m y o g e n e s i s[J]．T h eJ o u r n a lo f B i oＧl o g i c a lC h e m i s t r y,１９９７,２７２(５２):３３２７１Ｇ３３２７８．[２８]㊀S N Y D E RC M,R I C E A L,E S T R E L L A N L,e ta l．M E F２A r e g u l a t e st h e G t l２ＧD i o３m u c r o R N A m e g aＧc l u s t e r t om od u l a t eWN Ts i g n a l i n g i n s ke l e t a lm u s c l er e g e n e r a t i o n[J]．D e v e l o p m e n t,２０１３,１４０(１):３１Ｇ４２．[２９]㊀马晓萌．乌珠穆沁绵羊M E F２B㊁R I P K２㊁C AMKM T 基因多态性与生长性状的关联分析[D]．北京:中国农业科学院,２０１６．M A X M．S i n g l en u c l e o t i d e p o l y m o r p h i s m o f M E F２B,R I P K２,C AMKM T g e n e s a n d a s s o c i a t i o n s w i t hg r o w t ht r a i t s i n U j u m q i ns h e e p[D]．B e i j i n g:C h i n e s eA c a d e m y o fA g r i c u l t u r a l S c i e n c e s,２０１６．(i nC h i n e s e) [３０]㊀张春兰．小尾寒羊和杜泊羊臂二头肌转录组及肌球蛋白轻链基因家族结构特征分析[D]．泰安:山东农业大学,２０１４．Z HA N GC L．T r a n s c r i p t o m ea n a l y s i so fS m a l lＧt a i l e dH a n s h e e p a n dD o r p e r sb i c e p sb r a c h i i a n ds t r u c t u r ec h a r a c t e r i s t i c so fm y o s i nl i g h tc h a i n g e n ef a m i l i e s[D]．T a i a n:S h a n d o n g A g r i c u l t u r a lU n i v e r s i t y,２０１４．(i nC h i n e s e)[３１]㊀Z HA N GSZ,X U Y,X I EH Q,e t a l．T h e p o s s i b l e r o l e o fm y o s i n l i g h t c h a i n i nm y o b l a s t p r o l i f e r a t i o n[J]．B iＧo l o g i c a l R e s e a r c h,２００９,４２(１):１２１Ｇ１３２．[３２]㊀张㊀莉,刘佳森,徐凌洋,等．绵羊体重性状全基因组６３４１。
水稻eui基因研究进展
V ol.30,N o.7pp.729-734 July ,2004作 物 学 报ACT A AG RONOMICA SI NICA第30卷第7期2004年7月 729～734页综述水稻eui 基因研究进展张书标 杨仁崔Ξ(福建农林大学作物遗传育种研究所,福建福州350002)摘 要 概述了eui 基因的发现、遗传、作用机理、定位和育种应用,及e 2杂交稻育种技术体系,并展望了eui 基因的应用研究。
关键词 水稻;eui 基因;e 2杂交稻中图分类号:S511Advances in Rice eui G ene StudiesZH ANG Shu 2Biao ,Y ANG Ren 2Cui(Institute o f G enetics &Crop Breeding ,Fujian Agriculture and Forestry Univer sity ,Fuzhou 350002,Fujian ,China )Abstract The studies on the discovery ,genetics ,action mechanism ,mapping and breeding application of eui gene ,as well as the establishment of breeding technology system of eui 2hybrids were reviewed.Prospects of the utilization of eui 2stock in hybrid rice breeding were also discussed.K ey w ords Rice ;eui gene ;eui 2hybrids 纵观水稻育种的历程,每一次新的技术突破都离不开新遗传种质资源的发现和利用。
由于半矮秆基因的发现与利用,矮化育种的成功,水稻产量提高了20%～30%。
内皮PAS1蛋白(EPAS1)基因的研究进展
内皮PAS1蛋白(EPAS1)基因的研究进展王雪艳;苟潇;李继中【摘要】内皮PAS1蛋白(EPAS1/HIF-2)是细胞应对缺氧时关键的转录因子,在生物体生理及病理过程中有重要作用.文中对EPAS1的结构、分布、表达调控及在病理过程中的作用、高原低氧适应性方面进行了综述,为今后进一步研究EPAS1提供了参考和借鉴.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2013(041)008【总页数】4页(P3316-3318,3376)【关键词】EPAS1;缺氧诱导因子-2;肿瘤发生;低氧适应【作者】王雪艳;苟潇;李继中【作者单位】云南农业大学动物科学技术学院,云南昆明650201;云南农业大学动物科学技术学院,云南昆明650201;云南迪庆州动物疾病防治中心,云南迪庆674400【正文语种】中文【中图分类】S188氧是大部分生物不可或缺的生存基础，当在低氧环境中运动或进行长时间的高强度训练时，有机体内环境会发生改变而使氧平衡状态遭到破坏，细胞就会处于缺氧状态。
低氧会使机体及细胞的生理功能发生改变，严重时可引起一系列损伤和疾病。
因此，生物有机体形成了一套完整的氧感受机制及在不同氧环境下的基因表达调控机制，以适应低氧环境。
在多种调控机制中，低氧诱导因子(hypoxia-inducible factor，HIF)是最主要的转录因子家族，它能感受细胞内氧气浓度的变化而对多种基因进行调控，与生物体的生长、发育及一些疾病的发病机理都存在着密切关系。
HIF最先是由Semenza等［1］于1992年在Hep3细胞中发现的。
HIF是由活性调节亚单位α和结构性表达亚单位β组成的具有转录活性的异源二聚体［2］，它同时结合着一个缺氧反应元件(hypoxia response element，HRE)。
在有氧条件下，HIF会被转录后羟基化的特定氨基酸残基α亚单位控制而失去活性。
目前认为α亚单位存在3种类型，分别为HIF-1α、HIF-2α和HIF-3α，这3种α亚单位虽然功能不同，但结构相似，而且三者均受到氧气调节，其中HIF-1α与HIF-2α氨基酸序列的同源性性达48%［3］。
Ser_Thr蛋白磷酸酶PPP家族结构研究新进展
中国科学 C 辑:生命科学 2008年 第38卷 第7期: 591 ~ 598 www. scichina. com life. scichina. com591《中国科学》杂志社SCIENCE IN CHINA PRESSSer/Thr 蛋白磷酸酶PPP 家族结构研究新进展王柏婧①②, 魏群①*① 北京师范大学生物化学及分子生物学系, 北京市重点实验室, 北京 100875; ② 长春师范学院生命科学学院, 长春 130032 * 联系人, E-mail: weiq@收稿日期: 2007-09-26; 接受日期: 2008-02-05国家重点基础研究计划(批准号: 2004CB719906)和国家自然科学基金(批准号: 30470393)资助项目摘要 PP1, PP2A 以及PP2B 同属于丝/苏氨酸蛋白磷酸酶的PPP 家族, 在体内参与调节多种重要的生理功能, 包括细胞周期、细胞生长及分化等过程. 它们之间的同源性相对较高, 空间结构更为保守. PP1和PP2B 的结构解析研究进展较快, 但是由于PP2A 结构的复杂性以及调节亚基的多样性而相对进展较慢. 最近发现PP2A 是由结构亚基、催化亚基先组成二聚体的核心酶结构然后再与调节亚基组成三聚体全酶. 主要对丝/苏氨酸蛋白磷酸酶的亚基组成和结构异同等方面进行综述.关键词丝/苏氨酸蛋白磷酸酶 亚基组成 晶体结构可逆的蛋白质磷酸化是细胞生命活动的调控中心, 它几乎调节着生命活动的所有过程包括细胞的增殖、发育与分化、肌肉收缩、新陈代谢、基因调控等, 该过程受蛋白磷酸激酶(磷酸化)及蛋白磷酸酶(脱磷酸化)的严格控制.蛋白磷酸酶按照不同的分类依据有不同的分类方式. 根据底物的特异性不同可以分为三类: 包括磷酸化的Ser/Thr 蛋白磷酸酶(PSPase)、磷酸化的Tyr 蛋白磷酸酶(PTPase)、磷酸化的双特异性蛋白磷酸酶.根据氨基酸序列的同源性、结构特征和催化机制 的不同可以将其分为: PPP 基因家族、PPM 基因家族、 PTPs 基因家族. 其中PPP 和PPM 基因家族又属于Ser/Thr 蛋白磷酸酶; 而PTPs 基因家族大部分属于Tyr 蛋白磷酸酶, 其中有一个亚家族所编码的蛋白磷酸酶则又具有双特异性蛋白磷酸酶功能.Ser/Thr 蛋白磷酸酶依据抑制因子的影响和催化底物特异性的不同, 又可以具体分为PP1和PP2两类, PP1能被热稳定的蛋白抑制剂I-1和I-2所抑制, 特异地催化磷酸化酶激酶的β亚基脱磷酸化, 而PP2不被I-1和I-2抑制, 特异地催化磷酸化酶激酶的α亚基脱磷酸化. PP2又依据其对二价金属离子依赖性的不同进一步分为PP2A, PP2B 和PP2C. 另外PP1, PP2A 和PP2C 的底物作用范围较宽, 而PP2B 则相对较窄.PP1, PP2A, PP2B 都属于蛋白磷酸酶PPP 家族, 以后又陆续发现了PP4, PP5, PP6和PP7, 它们都是体内重要的Ser/Thr 蛋白磷酸酶组成成分, 它们在体内调控多种生命过程, 包括肌肉收缩、细胞周期、细胞生长等过程[1~3]. 虽然在对二价金属离子的依赖性,抑制剂的敏感程度和底物特异性方面存在差异, 但同属于PPP 家族的PP1, PP2A, PP2B 之间存在着同源的氨基酸序列和进化相关性. 本文主要对PPP 家族磷酸酶的亚基组成、结构解析等方面的研究进展作简要综述.1 蛋白磷酸酶PP1, PP2A 和PP2B 的亚基组成1.1 PP1的亚基组成从亚基组成上看, PP1是由一个固定不变的催化王柏婧等: Ser/Thr 蛋白磷酸酶PPP 家族结构研究新进展592亚基和几十种不同的调节亚基之一组成的异二聚体全酶. 这些不同的调节亚基将催化亚基定位到细胞的不同部位, 从而催化不同的细胞生物过程[4]. PP1的底物特异性和广泛性主要是由调节亚基决定; PP1的催化亚基在真核生物体内共有五种异构体, 分别为: α1, α2, α, γ1 和γ2. 这些异构体在一级结构氨基酸序列上有高达90%的同源性[5].1.2 PP2A 的亚基组成PP2A 的全酶由一个二聚体的核心酶和一个可变化的调节亚基B 组成. 核心酶又包括催化亚基C 和结构亚基A /PR56[6]. PP2A 核心酶与一个可变的调节亚基B 形成全酶结构. 可变的调节亚基B 有四个亚家族: B(PR55), B ′(B56或PR61), B ″(PR72) 和B ′″(PR93/ PR110). 这四个亚家族序列同源性较低, 表达水平依细胞类型及组织不同而不同. 调节亚基B 决定了PP2A 的底物特异性及功能[7].1.3 PP2B 的亚基组成PP2B 又被称为钙调蛋白磷酸酶(Calcineurin, CN), 它是至今发现的唯一一种活性受Ca 2+/钙调素(Calmodulin, CaM)调控的Ser/Thr 蛋白磷酸酶. PP2B 也是一种异二聚体蛋白, 由A, B 两个亚基组成, A 亚基是催化亚基, B 亚基是调节亚基.PP2B 的催化亚基A 按照结构域可以分成五个部分, 分别是: (i) N-端区域; (ii) 催化结构域; (iii) B 亚基结合结构域(B-binding helix, BBH); (iv)钙调素结合结构域(calmodulin binding domain, CBD); (v)自抑制区(auto-inhibitory domain, AI). 调节亚基B 是Ca 2+ 结合蛋白“EF-hand ”家族成员之一, 和钙调素一样B 亚基分子上也有4个Ca 2+ 结合位点. 在B 亚基中除了Ca 2+ 结合位点外, 最重要的活性区域就是与催化亚基上的BBH 结合的疏水凹槽, 凭借这个区域, B 亚基与A 亚基紧密地结合形成二聚体[8].2 蛋白磷酸酶PP1, PP2A 和PP2B 的结构在蛋白质的一级结构即氨基酸序列上, PPP 家族与PPM 家族没有相似性; PPP 家族内PP1/PP2A/PP2B 亚家族与PP5/rdgC 等亚家族亲缘性也相差较大, 唯有PP1, PP2A 和PP2B 的同源性较高, 它们的催化结构域中约有280个氨基酸高度同源(PP1与PP2A 具有49% 的同源性, PP1与PP2B 具有40%的同源性), 三者的主要差别在于它们的非催化性的N-, C-末端不同, 以及它们结合的调节亚基不同以形成不同的全酶(图1).一直以来, 有关PP2B 以及PP1的空间结构研究开展的比较早, 而PP2A 由于全酶结构相对复杂, 一直呈滞后状态. PPP 家族磷酸酶的催化亚基除了具有较高的序列同源性, 金属离子结合位点和底物识别位点完全相同, 并且它们在二级结构与三级结构上也非常相似(图2). 它们催化亚基的二级结构都包含10个α螺旋和14个β折叠. 三维结构都各由两个β片层(sheet1和sheet2)形成为类似“β-三明治”样的λ形结构, 这两个β片层构成了催化核心, 其中的“βαβαβ”构成双金属离子结合的位点及底物结合位点. β12与β13折叠链之间各连接一个由12个氨基酸组成的环状结构, 称为β12~β13环(PP2B 也称为loop7).PP1, PP2A 和PP2B 同为金属蛋白磷酸酶, 即催图1 PPP 家族的同源序列比较图中国科学 C 辑: 生命科学 2008年 第38卷 第7期593图2 PP1, PP2A 和PP2B 催化亚基的三级结构对比图(PP1为黑色; PP2B 为深灰色; PP2A 为浅灰色)[9]化活性中心各结合两个金属离子, PP1的活性中心据推测结合的是Fe 2+和Mn 2+, PP2A 结合的是两个Mn 2+, PP2B 则是Fe 2+和Zn 2+. 此外, 催化核心中参与金属离子配位以及参与催化作用的氨基酸残基也是保守的. 这些金属离子与氨基酸侧链之间都是以配位键(或络合键)形式相结合, 这些活性中心的金属配合物都是六配位的, 在空间结构上是八面体型.虽然PPP 家族的蛋白磷酸酶空间结构相似, 但是不同的蛋白磷酸酶催化亚基还各自有着自己结构上的特点[9].2.1 PP1的结构1995年, Egloff 等人[10]和Goldberg 等人[11]分别报道了PP1的晶体结构, 以后其他研究小组陆续解出PP1与冈田酸(OA)等其他抑制剂的空间结构[12], 但是由于N, C 末端呈无序状态, 所以这些结构只展示了7~299位氨基酸残基的空间构象. 直到2004年, Terrak 等人[4]通过把PP1与肌球蛋白磷酸酶目标亚基(MYPT1)共结晶得到了二者的复合物结构, 进而又解出了C 端10个氨基酸的结构(图3(a)). 但是目前为止N, C 末端仍有部分氨基酸空间结构未知.PP1分子结构的最明显特点是从催化活性中心向三个方向发出三条凹槽, 分别为: 酸性凹槽(acidic groove)、疏水凹槽(hydrophobic groove)和C 端凹槽(C-terminal groove) (图3(b)). 这三个凹槽从上面看呈Y 字型结构, 在Y 字型的上面两个臂之间夹着一个非常重要的结构区段为β12~β13 loop 环, 该环是同族Ser/Thr 蛋白磷酸酶共有的结构, 但是序列上保守性较差[13], 本实验室通过实验证明了该结构在活力及抑制剂的结合方面均有重要作用[14].许多天然毒素都是PP1和PP2A 的强有效抑制剂, 包括冈田酸(OA), 花萼素A (Calyculin A)、互变霉素(Tautomycin)以及微囊藻毒素(MCLR). 最近, 又解析出了PP1与另外一种毒素Motuporin 和Dihydromicro- cystin-LA 复合物的晶体结构[15]. 从结构上看, 这类毒素都有着相似的化学结构, 通常包括三个结构特征: 带有羧基基团、长的疏水尾部、大的环状结构. 它们以相似的方式与PP1结合, 通常环状结构占据了活性中心的大部分区域, 疏水尾部则占据了疏水凹槽,图3 PP1与MYPT1复合物的缎带模型及分子表面结构示意图(a) 缎带模型, 深灰色为PP1, 浅灰色为MYPT1[4]; (b) 分子表面模型(三个凹槽及β12~β13 loop 环的位置被注明)[12]王柏婧等: Ser/Thr 蛋白磷酸酶PPP 家族结构研究新进展594羧基基团则间接通过水分子与酶的活性中心的金属离子相结合, 它们之间的不同之处在于与酶分子结合的作用力有所差异.2.2 PP2A 的结构PP2A 由于结构复杂、调节亚基多样, 所以关于它的晶体结构的解析研究进展缓慢. 只是在1999年Groves 等人[17]提出PP2A 结构亚基A/PR65的晶体结构, 该结构是由15个重复的HEAT 模体(motif)组成. 这15个HEAT 完全相同, 每个HEAT 由一对反平行α螺旋组成, 最后形成为字母“C ”型结构[16]. 2006年,有三篇文章先后报道了PP2A 的核心酶及全酶的晶体结构, 从而使Ser/Thr 家族中结构最复杂的一个成员的结构得以清晰呈现[9,17,18]. PP2A 全酶为三聚体结构, 由结构亚基A(scaffolding subunit)、催化亚基 C (catalytic subunit)和一个多样性的调节亚基B(regulatory subunit)所组成, 其中A 亚基与C 亚基之间首先形成了一个稳定的二聚体核心酶结构, 之后再与B 亚基共同作用形成有催化功能的三聚体全酶(图4).图4 PP2A 的全酶结构示意图 [17]PP2A 的结构亚基A 为包含15个纵列排布的重复结构, 每一个结构均由保守的39个氨基酸残基组成, 称为HEAT 序列, 每一个HEAT 序列由一对反平行的α螺旋组成. 这15个HEAT 重复结构组成一个可伸展的马蹄形的分子, 该结构与以前报道的结果相一致. 通过对比单独的以及全酶中A 亚基的构象发现, A 亚基的构象从扭曲的状态向一种相对封闭的状态转变, 这种构象柔性对于其与调节亚基结合进而发挥PP2A 的催化功能是至关重要的.PP2A 的催化亚基C 在不同物种之间高度保守, 为典型PPP 磷酸酶家族的α/β折叠结构, 与PP1, PP2B 等相关的蛋白磷酸酶空间结构比较相似, 特别是与PP1相似性更高, 从活性中心向外也有3条凹槽, 分别为: 酸性凹槽、疏水凹槽和C 端凹槽, 并且这3个凹槽也呈Y 字型结构, Y 型的两个臂之间夹着一个β12~β13 loop 环状结构, 活性中心包含两个Mn 2+. 虽然PP2A 催化亚基与其他蛋白磷酸酶结构相似, 但仍然存在着局部差异, 主要是和溶剂相接触的分子表面loop 结构, 这些局部结构差异决定了PP2A 以及其他相关的磷酸酶的功能多样性.PP2A 的催化亚基与结构亚基之间存在着较强的特异性作用. 尽管PP2A 催化亚基与其他相关的几种磷酸酶之间存在着较高的序列同源性, 但PP2A 的结构亚基只识别自身的催化亚基. 分析发现这种特异性识别是由HEAT11~15重复子与催化亚基之间所形成15个分子间氢键以及范德华力提供的, 从而使二者形成比较稳定的二聚体核心酶结构. OA 与MCLR 毒素同样也是PP2A 的有效抑制剂, 尽管 OA 与MCLR 有着不同的化学结构, 二者却结合在PP2A 催化亚基相同的表面口袋中[9]. 虽然PP1与PP2A 有大约50%序列同源性, 但是OA 却更倾向于与PP2A 结合, 主要是由于PP2A 存在着一个疏水口袋可以把OA 完全包裹在内, 而PP1的疏水口袋则不能把OA 的疏水尾部容纳进去, 因而使得PP2A 对OA 的敏感度更高.PP2A 的调节亚基B 决定了酶与底物的特异性,虽然B 亚基家族的序列同源性较低, 但是该家族中所有亚基在与结构亚基结合区的序列却有着高度的同源性. 由于调节亚基的多样性特点, 不同的调节亚基结构并不相同, 以B56/B ’为例介绍调节亚基与结构亚基A 与催化亚基C 的结合特点. B56γ1包括8个双螺旋组成的螺线管结构, 空间结构与A 亚基中的HEAT 重复子的序列比较相似, 但二者的序列同源性中国科学 C 辑: 生命科学 2008年 第38卷 第7期595并不高. 调节亚基以其凸起的表面结构与结构亚基A 的2-7位的HEAT 重复子结构相互作用, 但二者相作用的表面相对比较疏松, 所以二者之间不能形成稳定的结构, 直到甲基化的催化亚基的加入, 三者之间才形成稳定的三聚体结构, 从而行使PP2A 的催化 功能.PP2A 在体内受多种蛋白质的调节, 其中包括受一种独特的Leu 羧甲基转移酶(PMT)作用, 该酶的作用就是在PP2A 催化亚基C 末端的Leu309羧基基团上发生甲基化反应, 研究发现通过C 末端的甲基化作用使催化亚基C 末端的羧基基团与调节亚基的酸性序列之间的斥力减弱, 有利于形成稳定的结构, 从而也促进B 亚基与AC 二聚体核心酶之间的稳定结合(图5).2.3 PP2B 的结构自1995年以来, 先后不断有文章报道有关PP2B (CN)的晶体结构, 1995年分别发表在Cell 和Nature 上的两篇论文, 都报道了关于CNA-FKBP- FK506复合物的结构[19,20]; 此外, PNAS 和BBRC 上也发表了关于CNA-CNB-CyPA-CsA 和CNA-CNB-FKBP12- FK506四元复合物的晶体结构的文章, 并对两种晶体结构进行了比较[21~23]; 2007年Structure 杂志发表关于PP2B 结构的报道 [24]. 从几种复合物的晶体结构对比中可以看出, PP2B 本身的晶体结构, 特别是催化结构域的空间结构基本是一致的, 并且免疫抑制剂FK506和CsA 在PP2B 分子上的结合部位也基本一致. 但是在所有关于CN 晶体结构的解析报道中, 大约有100多个氨基酸片段(包括CaM 结合区CBD 及其两端连接的部分)均未能解析出来(图6).PP2B 的催化亚基除了具有与PP1和PP2A 相似的催化结构域外, 还有一段位于C-末端约185个氨基酸的调节片段(或叫自调节区域), 这一段多肽 链上又包含了三个结构域: B 亚基结合结构域(BBH)、CaM 结合结构域(CBD)和自抑制区(AI). BBH 是含有5圈螺旋的双亲结构, 上半部分非极性的疏水凹槽恰好与B 亚基结构互补, 两者结合的表面被认为是底物识别以及抑制剂的结合部位[23]. 另外, 结构分析也证明催化亚基上除了BBH 区域还包括N 末端区域使B 亚基与催化亚基结合, 我们实验室进一步验证了催化亚基上的Glu35与CNB 中的Lys134之间的盐桥在二聚体结构的稳定中也起到非常重要的作用[25]. CBD 也有一个双亲性的α-螺旋, 负责与CaM 分子上的疏水部位结合; 但由于CBD 及其两端的连接肽段没有在晶体结构中检测到, 因此这一段的结构与功能还有待于进一步研究. 另外, 根据已有的晶体结构, AI 中也有一段α-螺旋, 并且其位置非常接近催化活性中心和loop7结构(β12与β13之间), 据报道, AI 结构域介导了CaM 和B 亚基对PP2B 的激活作用.图5 催化亚基C 末端的甲基化对三聚体A-B56-C 复合物形成的调节模式图(C 亚基末端Leu309的羧基端未被甲基化时, 由于同种电荷的相斥作用, 调节亚基B56不能与AC 核心酶紧密结合不能形成稳定结构; 当C 亚基C 末端的羧基被PMT 甲基化之后, 同种电荷的斥力消失, 调节亚基B56可以与AC 核心酶形成稳定的构象)[9]王柏婧等: Ser/Thr 蛋白磷酸酶PPP 家族结构研究新进展596图6 无配体结合的PP2B(CN)晶体的缎带模型(黑色的为A 亚基; 灰色的为B 亚基; 自抑制区被标注)[20]晶体结构和体外实验表明, 在没有B 亚基和CaM 存在时, 这个调节片段就象个帽子一样覆盖在活性中心, 尤其是AI 结构域, 靠近催化活性中心, 从而抑制了PP2B 的酶活性; 当有B 亚基或者CaM 两者都存在的情况下, 由于CNB 与BBH 的结合或/和CaM 与CBD 的结合使得调节片段尤其是AI 结构域离开了反应活性部位, 使得底物容易进入活性中心, 从而提高了酶的活性[26].本实验室利用钙调素融合表达的方法对CBD 肽段进行了融合表达, 并解析出了钙调素结合的CBD 全酶结构. 该结构展示为一个二聚体全酶, 两个单体结构完全相同. 八个钙离子结合到四对EF-hand 上. 两个钙调素头尾相接, 成延展构象, 形成X 形的二聚体, 两个V 形部分各形成一个CBD 结合位点. 每个结合位点均由一个钙调素的氨基端结构域和另一个钙调素的羧基端结构域构成(图7). 这是一种新的CaM 与靶肽的结合方式, 尽管我们还无法说明这种结合方式是否与CaM 对PP2B 的调节有关, 但是这是目前得到的唯一的关于CNA 的CBD 结构信息. 从图8可以具体看出CBD 折叠成一个双亲的α螺旋, 埋入钙调素组成的疏水沟槽中[27]. 其中Ile396, Ile400, Ile403和V al409形成了疏水锚定氨基酸指向了二聚体疏水沟槽的一侧, 此外Met406, Ala407和Phe410也与疏水沟槽的表面距离很近, 同样也参与了与钙调素的作用.图7 CaM 与CBD 二聚体结构图(深灰色和浅灰色为两个伸展的CaM 分子; 黑色为CBD 分子) [27]图8 CBD 与CaM 的相互作用(中间注明的为CBD 分子, CaM 为透明的缎带模型, CBD 上的疏水氨基酸用深灰色球棍模型显示; CaM 的甲硫氨酸用黑色而球棍模型显示, 其余的疏水残基为深灰色)[27]3 展望蛋白磷酸酶作为体内一系列重要生理活动的调节者越来越引起大家的关注, 由于PPP 家族蛋白磷酸酶的空间催化结构域相似, 它们在糖原代谢、细胞周中国科学 C 辑: 生命科学 2008年 第38卷 第7期597期、细胞凋亡以及基因转录等方面都有着相似的功能; 但是由于其调节亚基的多样, 使其在细胞中的定位有所差异, 同时也有着许多特有的功能, 即使催化相同的反应, 脱磷酸的位点也会有所不同. 研究也发现, 除了可以单独的调节细胞的活性之外, 蛋白磷酸酶之间还可以相互调节从而间接的调节蛋白质的活性, 如PP2B 还能够通过调节PP1的磷酸酶活性来间接地调节一系列蛋白质的性质[28]. 在沟回神经元中, PP2B 可以通过使抑制剂DARPP-32和I-1脱磷酸化来激活PP1[29,30]. 因为磷酸化状态的DARPP-32和I-1能与PP1结合并抑制PP1的磷酸化酶活性, 当它们被PP2B 脱磷酸化后, 就与PP1分离, 从而使PP1的磷酸化酶活性表现出来[31].然而由于研究方法的局限, 同时也由于调节亚基的多样化及复杂性, 蛋白磷酸酶结构的解析受到了一定限制, 也影响了对其功能的深入研究, 随着研究手段的进一步深入, 相信不久的将来蛋白磷酸酶将会以更清晰的面貌呈现在大家面前.参考文献1 Toole B J, Cohen P T. 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Alpha-and beta-forms of the 65-kDa subunit of protein phosphatase2A have a similar 39 amino acid repeating structure. Biochemistry, 1990, 29(13): 3166—31737 Janssens V, Goris J. Protein phosphatase2A: A highly regulated family of serine/threonine phosphatases implicated in cell growth and signaling. Biochem J , 2001, 353(3): 417—4398 Rusnak F, Mertz P. Calcineurin: form and function. Physiol Rev, 2000, 80(4): 1483—15219 Xu Y H, Xing Y N, Chen Y, et al. Structure of the protein phosphatase2A holoenzyme. Cell, 2006,127 (15): 1239—1251 10 Cho U S, Xu W Q. Crystal structure of a protein phosphatase 2A heterotrimeric holoenzyme. Nature, 2006, 1—511 Egloff M P, Cohen P T W, Reinemer P, et al. Crystal structure of the catalytic subunit of human protein phosphatase 1 and its com-plex with tungstate. J Mol Biol, 1995, 254 (5): 942—95912 Goldberg J, Huang H B, Kwon Y G, et al. Three dimensional structure of the catalytic subunit of protein serine/threonine phos-phatase-1. 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［41 ］ ［34 ］
， 香蕉
。葡萄 ASＲ 能够形成异蛋白复合物与另 ， 与番茄中
19］ （ PF02496 ） ［12 ， ， 有些 ASＲ 蛋 白 还 含 有 一 个 锌 指 20 － 21］ DNA 绑定蛋白［11 ， ， 且其既以单体又以复合体 ［5］ 的形式绑定 DNA ， 其准确的功能结构域至今尚
1
Asr 基因的发现与克隆鉴定
ASＲ （ abscisic acid ， stress， ripening ） 蛋白作为一
［18 ］ ［24 ］
还有报道称 ASＲ 蛋 白 存 在 于 不 同 细 胞 类 型 的 细 胞核中
［9 ， 20 ， 24 － 26］
， 推测可 能 作 为 一 个 转 录 因 子 起 。
着调控作用
［4 ， 24 ， 27］
2
Asr 基因的功能及其响应蛋白的作用
Asr 基因的全称即已说明该基因与 ABA、 胁迫
2+
Lp3 作为 Asr 基因家族成员， 在火炬松 （ 松树 ）
中被发 现。 Padmanabhan 等
［19 ］
浓度变化， 改变蛋白构
在火炬松幼苗时期
Asr 基因对植物花发育及 象来应答逆境胁迫。同时， 花期调控方面也有一定影响。 2. 1 Asr 基因在植物非生物胁迫下的应答 非生物胁迫会导致植物细胞蛋白质变性， 为了 防止蛋白质失活， 植物自身会启动相应的保护机制 ， 在这种保护机制下会在响应组织的细胞内生成分子 伴侣蛋白、 类似分子伴侣蛋白和低分子量的有机分 来作为渗透调节剂或者补偿溶质 ， 达到抵抗或适 子， 应胁迫环境。如果这些保护措施失效， 将导致蛋白 不可逆的损伤， 甚至降解。Asr 基因家族中大部分成 员在非生物胁迫中起着关键的作用 。 2. 1. 1 Asr 基因在植物水分胁迫和盐胁迫 下 的 应答 AmitaiZeigerson 等［29］ 在水培番茄植株的根系和 地上部分检测到 Asr1 mＲNA 和蛋白在盐胁迫和水 分胁迫下均上调表达。 Asr1 mＲNA 和蛋白质之间
。
LLA23 是 Asr 基因家族中的一个成员， 在百合
用花椰菜花叶病毒 35S 启动子 使转 LLA23 基因的拟南芥种子对 ABA 的敏感性降 低， 但转 35S ： ： LLA23 拟南芥种子仍可以在水分胁 迫和盐胁迫的不利条件下发芽， 证明了拟南芥体内 并使植株 的 LLA23 可以介导 ABA 信号的胁迫应答， 表现出很强的抗干旱和抗盐能力 。
等， 而且 不 同 物 种 的 Asr 基 因 家 族 数 目 不 尽
相同 。
［14］ 水稻中已知有 6 个家族成员 ， 番茄中有 4
个
［4 ， 7， 15］
［16］ ， 松树中也有 4 个 ， 在香蕉中至 少 包 含
4 个成员［17］， 而在玉米中数目则高达 9 个 （ 目前为
［1］ 葡萄中只有 1 个 。 但 止发现数目最多的物种 ） ， ［3 ， 18］ 。比 较 不 同 物 在拟南芥 中 却 不 存 在 Asr 基 因
［33 ］
。
Asr 基因家族成员调控水分 以上几个例子说明， 胁迫和盐胁迫的方式分为受 ABA 响应调控和不受 ABA 响应调控。 Asr 基因家族成员在水分胁迫和盐胁迫表达中 如 玉 米 中 抗 旱 基 因 Zm-Asr1 还有很 多，
［35 ］
Asr1 基因在马铃薯块茎中研究表明， 转录水平降低
喷施外源 ABA， 经 Northern Blot 分析证明， 在水分胁 迫下 松 树 根 系 中 的 Lp3 的 表 达 部 分 受 ABA 的 PCＲ 试 验 说 明 ， 并 用 Southern 和 ＲT介导调控。
Lp3 基因属于一个由至少 4 个成员组成的小型多基
因家族， 基因家族中的各成员在水分胁迫过程中具 有不同的表达模式。 MpAsr 是 Asr 基因家族的一员， 在香蕉中 被 发 现。转 MpAsr 基因的拟南芥在低温胁迫下， 亲水性 MpASＲ 蛋白可以保护 LLDH） ， 乳酸脱氢酶（ L从而 提高植株耐冷性。Dai 等
。 ASＲ 蛋 白 存 在 于 细 胞 质 中 ， 推测其可
［24］
能有着 稳 定 其 他 蛋 白 防 止 变 性 的 作 用
， 另外 7
2013. 3
作物杂志
Crops 转录和稳态水平以依赖 ABA 的方式受盐分和水分 胁迫诱导。 SIASＲ1 的非结构化形式具有分子伴侣 并可以稳定一些由高温和冻融循环引 一样的活性， SIASＲ1 与渗透调 起的蛋白质变性。在胁迫条件下， 节物质甘氨酸 － 甜菜碱协同行使保护功能 中发现。 Yang 等
种的 Asr 基因序列发现 ， 同一物种的 Asr 家族成员
［3 ， 14］ ， 的联系要比不同物种间的 Asr 基因更为紧密
这说明每个家族成员的亚功能可能存在种间特异 性
［14 ， 17］
。
目前 ， 在各物种中克隆的 Asr 基因的氨基酸序 列有许多共同特征 ， 如高亲水性 ； 氨基酸序列富含 组氨酸 、 谷 氨 酸、 丙 氨 酸 和 赖 氨 酸， 缺少半胱氨酸 和色氨酸 ； 具有两个高度保守的区域 ， 第一个区域 是短的 N 端区 ， 大约有 18 ～ 21 个 氨 基 酸 残 基 ； 第 二个区 域 是 较 长 的 C 端 区 ， 大 约 80 个 氨 基 酸 残 基， 这个区 域 高 度 保 守 ， 共 同 存 在 一 个 ABA / WDS （ abscisic acid / water deficit stress ） 的氨基酸结构域
［34 ］
Crops
2013. 3
期 VvMSA 的表达量开始减少， 在果实成熟后期表达 量又少量增加。果实成熟过程中， 离不开糖的转运 与贮藏。酵母杂交试验表明， 一个葡萄 Asr 基因与 己 糖 转 运 蛋 白 基 因 的 启 动 子 （ VvHT1 ） 相 结 合。
。叶片中的 Ci21 受干旱胁迫的影响
［30 ］
发现， 在胁迫条件下， 转
MpAsr 基因的拟南芥种子比野生型种子具有较高的 转 MpAsr 基因拟南芥表现 发芽率。在渗透胁迫下， 出可溶性糖增加， 细胞膜损伤降低。 表明 MpASＲ 蛋白可以作为一种植物体内渗透保护剂或保水分 减少细胞由于渗透胁迫所导致的水分亏缺 。 子， 海蓬子 SbASＲ1 在盐胁迫条件下， 转录水平上 调。 转 SbASＲ1 烟 草 在 盐 胁 迫 下， 叶片最内组织
Asr3 ， ABA 诱 导 基 因 中 渗 透 胁 迫 诱 导 基 因 Asr1 、 Asr4
［9］ ［13］ ［4］ ［8］ ， 包括甜瓜 、 百 ［1］ ［10］ ［11］ ［12］ 、 葡萄 、 银杏 、 马铃薯 、 水稻 和柚
因 ) 是 近年来 从植 物中发 现 的一 类 基 因 ， 随着 越来 Asr 基 因 家 族 成 越多 的 这类 基 因被 发 现 并被克隆 ， 员 在 不断壮大 。 对 Asr 基 因 家 族 的 克 隆 鉴 定 ， 冷、 渗透 、 脱落 酸 胁 迫 应 答 ， 糖 代 谢， 果实成熟及其他 功能 进 行 了 较 全 面 的 综述 。 关键词 成熟 Asr 基因是近年来从植物中发现的一类基因 ， 该基因的 表 达 受 干 旱 、 冷 害、 盐 碱、 脱落酸等胁迫 诱导 ， 在果 实 成 熟 过 程 中 也 可 被 诱 导 表 达 。 现 已 在香蕉 、 番茄 、 马铃薯 、 水稻 、 玉米 、 松树 、 百合和葡 Asr 基因越 萄等植物中发现了该类基因 。 近年来 ， 并 进 行 了 深 入 研 究。 本 文 来越多的 功 能 被 开 发 ， 就 Asr 基因的胁迫应答 、 糖代谢 、 果实成 熟 及 其 他 功能进行了 综 合 阐 述 ， 以期对这类基因在植物应 答胁迫中的功能和机制有较为全面的了解 。 Asr 基 因 ; 非 生物 胁迫 ; 糖 代 谢 ; 果实
［7］ ［6］
未研究透彻 。 这些 ASＲ 蛋白的二级结构主要是 α 螺旋 ， 具有核定位信号
［15］
。 之后陆续在番茄中发
。 同时 ， Asr 基因家族 不
现了其 他 的 ASＲ 蛋 白 ， 从而得到了这个基因家 。 Asr 基 因 主 要 存 在 于 高 等 植 物 体 内 ， 迄今为
同成员所表达的 ASＲ 蛋白也有许多不同之处 ， 这 些蛋白的 分 子 质 量 （ 70 ～ 230 个 氨 基 酸 ） 、 等电点 （ 从碱性到酸性 ） 、 组织和器官特异性 、 表达的时期 和 模 式 均 不 同， 在 Asr 多 基 因 家 族 的 垂 直 同 源 物 和水 平 同 源 物 中 也 并 不 都 具 有 核 定 位 信 号
及成熟有关。 不同来源的 ASＲ 蛋白具有高度保守 的 C 端核定位信号肽。 但不同植物中的 ASＲ 蛋白 的亚细胞定位不同， 暗示 ASＲ 蛋白可能具有多种功 具有 能和作 用。 有 些 ASＲ 蛋 白 是 核 定 位 蛋 白， DNABinding 活性
［28 ］
， 起着类似真核生物非组蛋白
染色体蛋白的作用， 在逆境胁迫时保护核 DNA 的稳 定性； 有些 ASＲ 蛋白定位于细胞质中， 通过感知逆 境胁迫引起的细胞质内 Zn
个植物应答一系列胁迫反应 （ 包括渗透胁迫 ） 的潜 在关 键 调 控 子 ， 逐渐开始被人们所关注
［1 － 5］
。
1993 年 ， 库进行差异筛选 分离了番茄 Asr1 ， 并验证该基因是以番茄的涝害 / ABA 感应蛋白形式存在 族
［31 ］ Na + 和脯氨酸含量显著降低， 抗盐性提高 。
Asr1 基因的调控主 的这种胁迫响应的相似性表明，