全反式维甲酸诱导大鼠C6脑胶质瘤细胞凋亡的实验研究
全反式维甲酸诱导小鼠间充质干细胞C3H10T1 2表达碱性磷酸酶
全反式维甲酸诱导小鼠间充质干细胞C3H10T1 2表达碱性磷酸酶【摘要】目的分析全反式维甲酸对小鼠间充质干细胞C3H10T1/2表达碱性磷酸酶的影响。
方法全反式维甲酸(10-6M)、维甲酸核受体RAR的激动剂Ch55与MAPK信号通路的阻滞剂处理C3H10T1/2细胞,钙钴染色检测碱性磷酸酶活性,定量RT-PCR方法检测量效关系以及时相分布;采用萤光素酶报告基因检测碱性磷酸酶的启动子是否接受维甲酸的调控。
结果维甲酸处理C3H10T1/2细胞24 h 即能够明显上调ALP的活性,具有明显的剂量依赖特性,与RAR有关,无MAPK信号通路的参与,在其转录起始位点上游-512bp的范围内检测到核受体RAR的调控位点。
结论维甲酸能够通过核受体RAR直接上调碱性磷酸酶的转录水平。
【Abstract】Objective To investigate the effects of all trans retinoic acid (ATRA) on the transcription level of mouse embryonic mesenchymal stem cell C3H10T1/2.Methods C3H10T1/2 were treated with all trans retinoic acid(10-6M), retinoic acid receptor ( RAR) agonist Ch55 and MAPK signal pathway inhibitor, alkaline phosphatase(ALP)activity were monitored by ALP staining, ALP transcription level were analyzed by quantitative RT-PCR; Systemic promoter analysis based on Luciferase reporter assay was undertaken to search for ALP promoter region to which RAR binds.Results ATRA stimulates ALP activity significantly in 24 h, which is dosage dependent and relevant to RAR, and the potential RAR binding site exists in the -512bp region of ALP promoter.Conclusion ATRAupregulates ALP expression in C3H10T1/2 cells mediated by RAR.【Key words】All trans retinoic acid; Mesenchymal stem cell; Alkaline phosphatase; Promoter全反式维甲酸(all trans retinoic acid,ATRA)类物质是维生素A的衍生物,具有广泛的生物学活性。
卡莫司汀对C6胶质瘤细胞凋亡作用机制的研究
卡莫司汀对C6胶质瘤细胞凋亡作用机制的研究王鑫;杨智勇;王廷华【期刊名称】《中国微侵袭神经外科杂志》【年(卷),期】2008(013)007【摘要】目的研究卡莫司汀(BCNU)对胶质瘤凋亡的作用机制.方法取生长状态良好的C6胶质瘤细胞悬液,按1×107个细胞/25 μl.的密度接种于20只SD大鼠腹股沟区皮下,观察其生长情况.将16只成瘤大鼠随机等分为治疗组与非治疗组,前者按相同剂量隔日腹腔内注射BCNU.治疗2周后处死全部大鼠,取大鼠右侧腹股沟区皮下肿瘤行苏木精-伊红染色和免疫组织化学染色,检测胶质瘤的病理学特征及胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、bax和bcl-2蛋白的表达情况,观察瘤细胞凋亡情况.结果C6胶质瘤细胞皮下接种4～5 d后,大鼠腹股沟区皮下形成实体瘤;治疗2周,非治疗组和治疗组SD大鼠平均肿瘤质量差异有统计学意义(P<0.01),治疗组肿瘤抑制率为29.6%.肿瘤GFAP表达为阳性;BCNU治疗后bax基本无改变,bcl-2 下调明显(P<0.01),bax/bcl-2比值明显增加.结论 BCNU腹腔注射治疗大鼠神经胶质瘤导致胶质瘤细胞凋亡,其主要机制可能与下调凋亡蛋白bcl-2的表达和升高bax/bcl-2的比值有关.【总页数】3页(P318-320)【作者】王鑫;杨智勇;王廷华【作者单位】昆明医学院第一附属医院神经外科,云南,昆明,650032;昆明医学院第一附属医院神经外科,云南,昆明,650032;昆明医学院神经科学研究所,云南,昆明,650031【正文语种】中文【中图分类】R730.264【相关文献】1.超声联合载卡莫司汀脂质微泡诱导大鼠C6细胞凋亡 [J], 张雪华;李映良;全学模;程远;王荞2.卡莫司汀在体内分解成烷化剂后杀伤肿瘤细胞的作用机制分析 [J], 周琴3.卡莫司汀在体内分解成烷化剂后杀伤肿瘤细胞的作用机制分析 [J], 周琴4.RNA 干扰抑制 EZH2基因表达对人胶质瘤细胞凋亡及对卡莫司汀敏感性的影响[J], 周章明;楚胜华5.他莫昔芬诱导C6胶质瘤细胞凋亡及其作用机制 [J], 田芬;武慧姣;黄锦桃;李朝红;谢富康;;;;;;因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
RNA干扰沉默PDGFr-β基因对大鼠C6胶质瘤细胞增殖及放射敏感性的影响的开题报告
RNA干扰沉默PDGFr-β基因对大鼠C6胶质瘤细胞增殖及放射敏感性的影响的开题报告背景和研究问题：
PDGFr-β（Platelet-derived growth factor receptor beta）是一种受体型酪氨酸激酶，是多种实体瘤的上调表达，参与了瘤细胞增殖、迁移和放射性抗性。
RNA干扰技术可以有效的抑制基因的表达。
本研究旨在探究RNA干扰沉默PDGFr-β基因对大鼠C6胶质瘤细胞增殖及放射敏感性的影响，为C6胶质瘤的治疗探索新的思路。
研究方法：
1.构建siRNA干扰PDGFr-β表达质粒，通过荧光素酶报告基因筛选出最佳转染条件。
2.利用MTT法检测对细胞增殖的影响。
3.进行辐射敏感性实验，通过光镜下的形态学观察和Clonogenic生存实验评估放射敏感性的变化。
预期结果：
经siRNA干扰PDGFr-β表达后C6胶质瘤细胞的增殖能力将减弱，放射敏感性也将明显提高。
研究意义：
PDGFr-β的高表达与许多实体瘤的发生和发展密切相关，因此PDGFr-β抑制剂成为近年来研究的热点。
本研究通过RNA干扰技术抑制PDGFr-β表达，探讨其对C6胶质瘤细胞增殖及放射敏感性的影响，可为促进实体瘤的治疗提供新的思路和方法。
全反式维甲酸联合顺铂在诱导人头颈癌 TCA8113细胞凋亡中的作用
全反式维甲酸联合顺铂在诱导人头颈癌 TCA8113细胞凋亡中的作用孙强;邱峰;赵军方;方政;李新明;孙明磊【期刊名称】《肿瘤基础与临床》【年(卷),期】2016(029)004【摘要】目的：研究全反式维甲酸（ATRA）与顺铂对人头颈癌 TCA8113细胞凋亡的影响。
方法 ATRA 和顺铂单独及联合作用于 TCA8113细胞，采用 MTT 法检测细胞生长，并观察细胞形态变化；使用流式细胞仪检测细胞周期及凋亡；通过western blot 实验检测 caspase-3表达情况。
结果 ATRA 作用于 TCA8113细胞后，细胞生长明显受到抑制，细胞形态发生改变，细胞凋亡比例明显增加，caspase-3蛋白表达下调，ATRA 与顺铂联合作用于肿瘤细胞后，其抑癌作用加强。
结论 ATRA 联合顺铂对人头颈癌 TCA8113细胞具有协同抑癌作用。
%Objective To observe the effect of all-trans retinoic acid(ATRA)and cisplatin on the proliferation of human head and neck cancer TCA8113 cells. MethodsTCA8113 cells were treated with ATRA and(or)cispl-atin respectively. Cell proliferation was detected by the method of MTT. Cell cycle was detected by flow cytometry. Results The growth of the cells treated with ATRA was inhibited obviously and the morphology of the cells were changed. The apoptosis rate of TCA8113 cells was increased gradually and the effect was enhanced when combined ATRA with cisplatin. Conclusion ATRA could inhibit the proliferation of human head and neck cancer TCA8113 cells and the inhibitory effect was synergistic when ATRA combined with cisplatin.【总页数】3页(P281-283)【作者】孙强;邱峰;赵军方;方政;李新明;孙明磊【作者单位】郑州大学第一附属医院口腔颌面外科，河南郑州 450052; 河南省高等学校临床医学重点学科开放实验室，河南郑州 450052;郑州大学第一附属医院口腔颌面外科，河南郑州 450052;郑州大学第一附属医院口腔颌面外科，河南郑州 450052;郑州大学第一附属医院口腔颌面外科，河南郑州 450052;郑州大学第一附属医院口腔颌面外科，河南郑州 450052;郑州大学第一附属医院口腔颌面外科，河南郑州 450052【正文语种】中文【中图分类】R739.8;R730.23【相关文献】1.全反式维甲酸对人骨肉瘤细胞凋亡的诱导作用 [J], 袁林;郭风劲;陈安民2.全反式维甲酸与奥沙利铂在诱导人胃癌BGC-823细胞凋亡中的协同作用 [J], 邵应举;郑玉玲;樊青霞;赵培荣3.全反式维甲酸诱导人胆管癌细胞凋亡的作用 [J], 吴涛;窦科峰;李开宗4.全反式维甲酸诱导人膀胱癌EJ细胞凋亡的研究 [J], 岳丹;王勇5.全反式维甲酸诱导人膀胱癌EJ细胞凋亡的研究 [J], 岳丹;王勇因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
全反式维甲酸影响JAK2_STAT3信号通路抑制肺纤维化EMT
全反式维甲酸影响JAK2/STAT3信号通路抑制肺纤维化EMT发布时间：2021-09-02T10:31:02.507Z 来源：《中国结合医学杂志》2021年2期作者：贾闪闪侯婷婷娄晓月苗薇薇刘巨源[导读] 目的探讨全反式维甲酸贾闪闪侯婷婷娄晓月苗薇薇刘巨源新乡医学院三全学院，河南省新乡453003摘要：目的探讨全反式维甲酸（ATRA）对肺泡上皮细胞（AEC）向间质细胞转化（EMT）的影响及分子机制。
方法分离大鼠的AEC II进行原代细胞培养，取5~7代细胞分为正常对照组、5μg/L TGF-β1诱导组、10μmol/L ATRA组、5μg/L TGF-β1诱导+0.1μmol/L ATRA组、5μg/L TGF-β1诱导+1μmol/L ATRA组、5μg/L TGF-β1诱导+10 μmol/L ATRA组，37℃ 5% CO2条件下培养24h，RT-PCR方法检测细胞中Collagen III、α-SMA、JAK2、STAT3和SOCS3 mRNA水平，37℃ 5% CO2条件下培养72h，Western Blot检测细胞中α-SMA、JAK2、STAT3和SOCS3蛋白表达水平。
结果和空白组相比，TGF诱导组的α-SMA mRNA和蛋白表达水平均升高，Collagen III、JAK2、STAT3 mRNA水平显著升高，SOCS mRNA水平显著降低，JAK2、STAT3、pSTAT3蛋白水平均显著升高，差异有统计学意义（P<0.05）；和TGF诱导组相比，TGF-β1诱导+10 μmol/L ATRA组和TGF-β1诱导+1 μmol/L ATRA组的α-SMA mRNA和蛋白表达水平均降低，Collagen III、JAK、STAT3 mRNA水平显著降低，SOCS mRNA水平显著升高，JAK2、STAT3、pSTAT3蛋白水平显著降低，差异有统计学意义（P<0.05）。
【国家自然科学基金】_脑胶质瘤细胞_基金支持热词逐年推荐_【万方软件创新助手】_20140729
推荐指数 7 5 4 3 2 2 2 2 2 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
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科研热词 神经胶质瘤 凋亡 胶质瘤 增殖 脑胶质瘤 细胞凋亡 三乙基锡化合物 mtt法 c6胶质瘤细胞 鼠g422胶质瘤 顺铂:耐药 顺铂 靶向治疗 间质干细胞 载体构建 趋化作用 血清白蛋白 荧光素 荧光特征 苦参碱 芯片-基因组杂交 腺病毒 脑胶质瘤细胞 脑肿瘤,胶质瘤 脑干 胞嘧啶脱氨酶 细胞毒类药物 细胞标记 细胞杀伤 细胞凋亡、死亡 紫外吸收 神经母细胞瘤 神经干细胞 磁共振 甲基化特异性pcr 活化nk细胞:胶质瘤起始细胞/干细胞 氯化甲基汞 慢病毒载体 恶性脑胶质瘤细胞 巢蛋白 壳聚糖支载 塞来昔布 基质金属蛋白酶-2 基因载体 四氧化三铁纳米颗粒 吉非替尼 卡氮芥 化疗 动物模型 内皮细胞 全反式维甲酸 免疫组织化学
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基因表达 基因芯片 基因治疗 基因克隆 同载 分子靶标 信号转导 信号传导 侵袭性 侵袭 人类免疫缺陷病毒1型 三苯氧胺 β 连环素 wnt蛋白质类 wip1基因 u251人脑胶质瘤细胞株 rna干涉 pamam neurobeachin like 1(nbeal1) ndrg2 hmgai fas dna合成 claudin-5 caspase c6脑胶质瘤 as-mir-21 ardipusilloside ⅰ @尖吻蝮蛇小分子多肽 @u251细胞
抗Fas抗体诱导维甲酸分化后的髓母细胞瘤细胞凋亡
抗Fas抗体诱导维甲酸分化后的髓母细胞瘤细胞凋亡郭丽;刘佳;李俊伟;王敏;李宏;许一多【期刊名称】《中国免疫学杂志》【年(卷),期】2000(016)011【摘要】目的:观察全反式维甲酸(RA)诱导分化前后,人髓母细胞瘤细胞系Med-3对抗Fas抗体的反应特点并探讨其免疫治疗意义.方法:使用10 μmol/L的RA诱导Med-3细胞分化并在处理当时或第24、 48、72、 96 h,分别加入最终浓度为25,50,100,200和400 ng/ml的抗Fas抗体.结合各组细胞Fas表达形式,分析其形态学,细胞动力学,克隆形成能力和死亡特点.结果:正常培养的Med-3细胞表达30 kD的可溶型Fas(sFas).RA能促进 Med- 3分化和膜型Fas(mFas)表达,但不诱导凋亡.单纯抗Fas抗体处理对靶细胞无明显效应.RA 处理的同时或不同时期加入抗体能在不同程度上诱发细胞凋亡;其中,以RA处理后第48 h加入200 ng/ml 抗体的凋亡诱导效果最佳.结论:RA通过上调mFas表达提高髓母细胞瘤细胞系的凋亡易感性.因此 ,RA与Fas相关性凋亡促进剂配伍可能有助于改善髓母细胞瘤的临床免疫和/或药物治疗现状.【总页数】4页(P614-617)【作者】郭丽;刘佳;李俊伟;王敏;李宏;许一多【作者单位】沈阳医学院分子生物学研究室,沈阳110031;沈阳医学院分子生物学研究室,沈阳110031;沈阳医学院分子生物学研究室,沈阳110031;沈阳医学院分子生物学研究室,沈阳110031;沈阳医学院分子生物学研究室,沈阳110031;白求恩医科大学三院肿瘤内科,长春,130021【正文语种】中文【中图分类】R392.11;R739.41【相关文献】1.FasL、抗人DR5单克隆抗体诱导肿瘤细胞凋亡的研究 [J], 宋玉国;李文珠;李迎;陈彩霞;庄国洪2.抗Fas抗体诱导人肾小球系膜细胞凋亡 [J], 陈明;刘晓惠;黄颂敏;屈燧林;刘先蓉;许国章;刘聪3.水飞蓟素和Fas激动性抗体CH11共同作用诱导A375-S2细胞凋亡 [J], 杨小珂;李林昊;周蓓;吴立军;田代真一;小野寺敏;池岛乔4.Fas/FasL诱导细胞凋亡在大鼠抗GBM肾炎中的作用 [J], 张媛媛;苏海燕;秦苏萍;李小翠;曾令宇;汤仁仙5.Fas、FasL及Caspase-3在维甲酸诱导胃癌细胞凋亡中的作用 [J], 张红英;李锦毅;张建永因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
抗肿瘤药物的研究进展
中山大学研究生学刊(自然科学、医学版)第29卷第4期J O URNAL OF T HE GRAD UATES VOL129l42008S UN YAT2SEN UN I VER SIT Y(NAT URAL SC I ENCES、MEDI C I NE)2008抗肿瘤药物的研究进展*郑晓克(中山大学中山医学院,广州510080)摘要:综述分析了抗肿瘤药物近年来的新进展,包括细胞毒性抗肿瘤药物、以细胞信号传导分子为靶点的抗肿瘤药物、新生血管生成抑制剂、分化诱导剂、细胞周期依赖性蛋白激酶抑制剂等。
关键词:抗肿瘤药物癌症是严重威胁人类生命的常见病和多发病,其死亡率仅次于心血管病而位居第二。
随着分子肿瘤学的发展,人们发现细胞周期失控是癌变的重要原因。
细胞内促增殖系统成分的过度表达与抑增殖系统成分的缺失均可引起细胞增殖失控而导致癌变。
随着生命科学研究的飞速进展,恶性肿瘤细胞内的信号转导、细胞周期的调控、细胞凋亡的诱导、血管生成以及细胞与胞外基质的相互作用等各种基本过程正在被逐步阐明。
以一些与肿瘤细胞分化增殖相关的细胞信号转导通路的关键酶作为药物筛选靶点,发现选择性作用于特定靶点的高效、低毒、特异性强的新型抗癌药物已成为当今抗肿瘤药物研究开发的重要方向。
目前抗肿瘤药物研发的焦点正在从传统细胞毒类药物转移到针对肿瘤细胞内信号转导通路的新型抗肿瘤药物。
导致这一转变的本质根源在于:传统细胞毒类药物由于主要作用于D NA、RNA和微管蛋白等与细胞生死攸关的共有组分,致使其选择性低、毒性大。
相反,多种信号转导通路的关键组分在正常细胞与肿瘤细胞及不同类型肿瘤细胞之间存在巨大差异,这一差异的存在及阐明使高选择性、高效、低毒的新型抗肿瘤药物的研发面临历史性的重大机遇。
正是上述差异使肿瘤细胞区别于正常细胞,不同肿瘤相互区别。
靶向这些组分的抗肿瘤药物不但可望降低毒性,而且可实现个体化治疗,使治疗效益最大化。
*收稿日期:2008-10-08作者简介:郑晓克,女,1982年生,汉族,河南人,中山大学中山医学院2008级药理学博士研究生,主要研究方向为肿瘤细胞的细胞骨架研究,电子邮箱k i2 ki118576@sohu1co m。
丙戊酸钠对C6胶质瘤大鼠正常脑组织的放射保护作用的开题报告
丙戊酸钠对C6胶质瘤大鼠正常脑组织的放射保护作
用的开题报告
背景介绍：
C6胶质瘤是一种常见的恶性脑肿瘤，常导致病人死亡。
传统的治疗方法包括手术切除、放射治疗和化疗等。
而放射治疗是最常用的一种治疗方法。
然而，放射治疗虽然对恶性细胞有杀伤作用，但对正常组织也会造成一定的损害。
因此，研究放射保护方法具有重要的临床意义。
研究目的：
本研究旨在探究丙戊酸钠在C6胶质瘤大鼠放射治疗中是否存在对正常脑组织的放射保护作用，为放射治疗提供参考。
研究方法：
1. 建立C6胶质瘤大鼠模型，将大鼠分为四组，分别为正常对照组、放射治疗组、单独应用丙戊酸钠组、丙戊酸钠联合放射治疗组。
2. 对丙戊酸钠组和丙戊酸钠联合放射治疗组进行丙戊酸钠处理。
3. 对放射治疗组、单独应用丙戊酸钠组和丙戊酸钠联合放射治疗组进行放射治疗。
4. 在治疗后测量大鼠体重、食欲等基本生物指标，并采用免疫荧光法检测脑组织中的细胞凋亡情况，检测血清中的天然抗氧化物质含量，评估治疗效果和副作用。
研究意义：
研究丙戊酸钠对C6胶质瘤大鼠正常脑组织的放射保护作用，不仅可以为放射治疗提供参考，也有助于深入理解丙戊酸钠的抗氧化和抗炎作用机制，为临床应用提供科学依据。
全反式维甲酸对甲状腺癌细胞形态及凋亡的影响
全反式维甲酸对甲状腺癌细胞形态及凋亡的影响包建东;柳卫;张兰胜;王铁生;蔡刚明;谭成;俞惠新【期刊名称】《肿瘤防治杂志》【年(卷),期】2004(11)11【摘要】目的 :观察全反式维甲酸 (all trans retinoicacid ,ATRA)体外诱导甲状腺癌细胞株的形态学变化和细胞凋亡。
方法 :分别以终浓度为 0、10 -7、10 -6、10 -5、10 -4mol/L作用 3种甲状腺癌细胞株(FTC 13 3、K1、85 0 5C) ,在倒置显微镜下观察细胞生长情况及形态特征变化 ;利用Annexin VFITC/PI染色 ,荧光显微镜下观察细胞的凋亡。
结果 :ATRA作用后 ,FTC 13 3细胞与对照组比较 ,细胞排列较规整 ,呈梭形 ;对照组K1细胞成团生长 ,经维甲酸作用后细胞成团减少 ;85 0 5C细胞经ATRA处理后 ,形态未见明显变化 ,但ATRA浓度为 10 -4mol/L时可见细胞贴壁能力下降。
ATRA在 10-5、10 -4mol/L时 ,FTC 13 3细胞凋亡率分别为 ( 7 8± 2 6) %和( 11 6± 3 7) % ,K1细胞凋亡率分别为 ( 7 9±2 6) %和( 10 8± 33 ) %、ATRA在 10 -4mol/L时 ,85 0 5C细胞凋亡率为( 15 3±4 7) % ,与对照组[( 2 8± 0 7) %、( 3 1± 0 9) %、( 6 7± 2 2 ) % ]比较 ,差异均有统计学意义 ,P <0 0 5。
结论 :不同浓度的ATRA可诱导FTC 13 3、K1、85 0 5C细胞形态学变化和细胞凋亡。
【总页数】3页(P1144-1146)【关键词】维甲酸;甲状腺肿瘤;细胞死亡【作者】包建东;柳卫;张兰胜;王铁生;蔡刚明;谭成;俞惠新【作者单位】江苏省原子医学研究所内分泌室【正文语种】中文【中图分类】R736.1【相关文献】1.全反式维甲酸对人结肠癌细胞亚株SW480/M5增殖和凋亡的影响 [J], 吕会增;李玺;陈图峰;叶小勇;周如健2.全反式维甲酸对人胃腺癌细胞株SGC-7901凋亡的影响 [J], 魏翔;陈绍龙;贾宁;周青;李静静;张素梅;汪渊3.全反式维甲酸及其衍生物对乳腺癌细胞株MDA-MB-231凋亡的影响 [J], 周佳丽;颜蕴文;江巧玲;吴燕;周青;汪渊4.全反式维甲酸对甲状腺鳞癌细胞株SW579凋亡的影响 [J], 张秀梅;肖建英;孙靖靖;岳丹5.全反式维甲酸对人胃癌细胞增殖和凋亡的影响 [J], 高金波;田元;张景辉;柴新群因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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差 异具有 非 常显 著性 统计学 意 义 。
２ 结 果
取 对数 生长期 Ｃ ６细胞 ， ０２ ％胰蛋 白酶常 温 以 ． ５
消 化 ． 含 １％血 清 的 Ｄ Ｍ 培养 液 配成 ５ １ ４ｍ 用 ０ ＭＥ × Ｏ／ ｌ 的细胞 悬液 ， Ｌ１０ 接种 于 ９ Ｌ 每孑 ０ ￣１ ６孑 培养 板 。培 养
共 同孵 育 ２ 、８及 ７ ｈ Ｍ１ ４４ ２ ， Ｔ 检 测 药 物 对 细 胞 生 ｒ法 长 的影 响 （ １ 。 果 显示 Ａ Ｒ 图 ）结 Ｔ Ａ对 Ｃ ６细 胞 的抑 制
作 用具 有 时间 和浓度 依赖 性 ．处理 组 与对 照组之 间
１ ｔ ｏ Ｌ五 组 以及 培 养 液 对 照组 ． ６组 ． 组 设 ６ｚ ｌ ｍ ／ 共 每
Ｐ Ｓ混 均 ， Ｂ 吸人 ０５ ｌ Ｄ ｆ 中 ， 心 ， Ｐ Ｓ ．ｍ 的 ｏ 管 离 去 Ｂ 。将
１１ 细胞 培养 ．
大鼠Ｃ ６脑胶 质 瘤 细胞 株 购 自吉 林 大学 基 础 医
学 院病 理生 理教研 室 。细胞用 含 １％灭 活小 牛血 清 Ｏ 的 Ｄ Ｍ 培 养基 加 入 Ｎ Ｈ Ｏ ｇ Ｌ ＭＥ ａ Ｃ ３ ／ ，青霉 素 ４ ２ Ｏ万
１ － 主 要 试 剂 ２
脱 水 。浸 透 。包埋 聚 合 。定位 切 片 ：切 片厚 度 ６ ～ Ｏ
７ｎ ０ ｍ。 电镜观 察拍 照 。 １ Ｗｅｔ ｎｂｏ 法 检测 ｃｓ ａｅ ３蛋 白表达 变化 ． ６ ｓ ｒ ｌ ｅ ｔ ａｐ ｓ一 提 取 蛋 白 ，Ｄ Ｓ Ｓ电 泳 ， 膜 ， 闭 ， 抗 ４ 转 封 一 ℃过
对 Ｗｅｔｒ ｌｔ ｓ ｎｂｏ 结果 进行 灰度 扫 描 。 ｅ １ ． 统计学 分 析 ７
多 克 隆抗 体 、 Ｂ ａｔ 抗 — ｃ ｎ多克 隆抗 体 购 自 Ｓ ｎａＣ ｕ ｉ ａ ｔ ｒｚ 公 司 ；碱 性磷 酸酶 标记 的羊 抗兔 多克 隆抗 体 购 自博 士 德生物 技术 公 司。 ｏｌｄＣ Ｄ采 集 图像 ， Ｐ分 析 Ｃ ｏｅ Ｃ Ｉ Ｐ 软 件 为 日本 Ｏｙ ｕ 产 品 ；流 式 细 胞 仪 为 Ｃ Ｕ — ｌ ｍｐ ｓ Ｏ Ｌ Ｔ Ｒ公 司产 品 ； ＰＣ Ｅ Ｅ Ｉ Ｓ蛋 白电 泳及 转 膜仪 Ｊ ６ ０ 型 Ｙ ０＋
４个 复孑 。 Ｌ 各组 分别 于加 药后 ２ 、８ ７ ｈ进 行检 测 。 ４ ４ 、２ 检 测前 ， － ￣ ５ ／ 每 ｆ Ｊ ｇＬ的 ＭＴ Ｏ ， 续 培养 ４小 时 Ｌｉ ］ Ｙ２ ｌ继
及 对 照各 组之 间 的 Ｏ Ｄ值 和 抑制 率相 比有显 著性 差
异 （ ＜ ．１ ， Ｐ ００ ） 随药物 作 用 时 间 的延 长 ， 各组 的 Ｏ Ｄ值
２１ Ｍ Ｔ 法 检测 结果 ． １ｒ 将 Ｃ ６细 胞 分 别 与 １２ ４、 、６ｚ ｌＬ Ａ Ｒ 、 、 ８ １ｔ ／ Ｔ Ａ ｍｏ
板 置 于 ３ ℃含 有 ５ Ｏ 孵育 箱 中培 养 ２ ｈ后 加 入 ７ ％Ｃ ： ４
１ １不 同浓度 的全 反式 维 甲酸 。实验 时 Ｃ Ｏ ６细胞 分 组 如 下 ： 反 式维 甲酸 药 物终 浓 度 分别 为 １ ２ ４ ８ 全 、 、、 、
为 北京 。
１３ Ｍ１ｒ法 － Ｔ
所 有计 量 数 据 以均 数 ± 准 差 （ ） 示 ， 有 标 艇 表 所
数 据均 先经 方 差齐 性检 验 ． 采用 Ｓ Ｓ １ ． Ｐ Ｓ ００统计 软 件
包 进 行单 、双 因素方 差 分 析及 显 著 性 检 验 。 以 Ｐ ＜ ｌ
Ｏ ５表 示 差 异具 有显 著 性 统计 学 意 义 ． ＜ ．１ 示 ． Ｏ Ｐ ００ 表
四氮 甲基 唑蓝 （ ｒ 购 自美 国 Ｓｇ ＭＴ ） ｉ ｍａ公 司 ； 碘 化丙 啶 （ Ｉ Ｐ ）购 自 Ｓｇ ｉｍａ公 司 ； Ｔ Ａ 购 自 Ｆｕ ａ Ａ Ｒ ｌｋ 公 司 ：Ｖ Ｆ膜 购 自 Ａ ｒ ａ 公 司 ；ａｐ ｓ一 ＰＤ ｍｅｓ ｍ ｈ ｃ ｓａｅ ３兔 抗 鼠
夜， 二抗 ， 色 ， ｏｌ Ｃ 显 Ｃ ｏｅ Ｃ Ｄ采 集 图像 ， Ｐ分析 软件 ｄ Ｉ Ｐ
沉 淀 于试 管 底 的细 胞加 入 ４ ％戊 二醛 溶 液 中 ．℃ 固 ４
定 １ ｈ 戊 二醛 固定 液 ， Ｐ ｌｄ 缓 冲液 冲洗 ３ 。 ． 。 ５ 用 ａａ ｅ ｈ 在 ４ ℃下 １ ％锇酸 液 固定 １ ｈ 双 蒸水 冲洗 １ｍｉ。 度 ． 。 ５ ０ ｎ梯
Ｕ ｍｌ链 霉 素 ２ ／ ， Ｏ万 Ｕ ｍｌ置 于 ３ ℃ ，％Ｃ 箱 中 ／ ， ７ ５ ０孵 培养 ， 传代 时间 ３ ５ ， 代前用 培 养液 吹打 消化 。 ～ｄ传
和抑 制率相 比分别有 显 著性 差异 （＝ ）Ｐ ０ １ 。 ｎ ３ （ ＜ ． ） 当 ０
４ ｍｏ ＬＡ Ｒ ＆ ｌ Ｔ Ａ作 用 ４ ｈ后 对 Ｃ ／ ８ ６细胞 的生 长 有 明
后 ，吸净 每 孑 中液 体 ，再 加 入 ｌ ０ ｌ Ｄ Ｏ， Ｌ Ｏ ￣ 的 ＭＳ 在 ３ ℃的水 浴 摇床上 孵 育 １ｍｉ。待 ＭＴ ７ ０ ｎ Ｙ结 晶充分 溶 解 后 置酶 标 光 度 仪 测 定 各 孑 在 ５ ０ ｍ 波 长 处 吸 光 Ｌ ７ｎ 度的 Ｏ Ｄ值 。 以下 公式 计算 Ｃ 按 ６细胞 的生 长抑 制率 （ ｈｂｔ ｎｒｔ， ％） ｉ ｉｉｏ ａ Ｉ ｎ ｉ ｅ Ｒ ：生 长 抑 制率 ＝ １ 处 理组 Ｏ （一 Ｄ
１ 材 料 与 方 法
１ ． 透射 电镜 ５ 用 Ｄ Ｍ 培养 液将 Ｃ ＭＥ ６胶 质瘤 细 胞从 培 养瓶 上
吹打下 ，离 心 １ ０ Ｒ Ｍ，０ ｉ ，与 Ｐ Ｓ混合 清 ０ Ｐ １ ｍ ｎ后 ５ Ｂ
洗 ， 心 ， Ｐ Ｓ混 合 ， 离 心 ， 细 胞 团 用 ５ ０Ｊ 离 与 Ｂ 再 将 ０ ｐ
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２８ ０ 年第 ３ 卷第 １ ０ ５ 期
全反 式 维甲酸 诱导 大 鼠 Ｃ ６脑 胶 质 瘤 细 胞 凋 亡 的 实验全 反 式维 甲酸诱 导 Ｃ ６脑胶 质 瘤 凋亡 及 探 讨 其 分子 机制 的报道 。