实验2电泳技术
电泳工艺技术难点
电泳工艺技术难点电泳工艺技术是一种利用直流电场将带电颗粒悬浮于导电液体中，并在电场作用下使颗粒向电极移动的工艺。
它具有简单、高效、环保等优点，在涂装、镀铜、水处理等领域得到广泛应用。
然而，电泳工艺技术也存在着一些难点，下面就是一些典型的难点。
首先，电泳工艺技术中的颗粒分散性是一个难点。
颗粒分散性直接影响到电泳液中颗粒的悬浮稳定性和涂层的均匀性。
如果颗粒分散性差，会导致涂层中出现颗粒团聚或沉积现象，影响涂层质量。
为了解决这个问题，可以通过控制电泳液中颗粒的浓度、粒径分布和表面电荷等参数来调节颗粒的分散性。
其次，电泳工艺技术中的沉积机制是一个难点。
沉积机制包括颗粒在电场作用下的迁移、沉积和累积过程。
这个过程受到多种因素的影响，如电场强度、颗粒与液体之间的相互作用力等。
在实际应用中，需要根据不同的材料和要求来调节这些因素，以实现理想的沉积效果。
再次，电泳工艺技术中的涂层性能是一个难点。
涂层性能包括涂层的附着力、硬度、耐磨性等。
影响涂层性能的因素很多，如颗粒的形貌和大小、电泳液配方等。
提高涂层性能需要综合考虑这些因素，并进行合理的优化。
此外，电泳工艺技术中的电泳设备也是一个难点。
电泳设备需要具备稳定的电场生成能力和可调节电场参数的能力。
同时，还需要保证设备的安全性和可靠性，以防止发生事故。
在设计和制造电泳设备时，需要考虑这些因素，并进行充分的测试和验证。
总之，电泳工艺技术虽然有许多优点，但也存在一些技术难点。
通过研究和实践，可以不断解决这些难点，提高电泳工艺技术的应用水平。
相信随着科技的发展，电泳工艺技术将在更多领域展现出巨大的潜力和优势。
实验二 PCR产物的纯化
实验二 PCR产物的纯化PCR（聚合酶链反应）是生物学和分子生物学研究中常用的技术之一，可用于从体外扩增DNA序列。
PCR产物的纯化是PCR实验中非常重要的步骤之一，它可以去除混杂的DNA序列和其他污染物，同时增强PCR产品的纯度和质量。
本文将详细介绍PCR产物的纯化步骤及相关技术。
PCR是一种非常敏感的技术，任何微小的污染物或杂质都可能产生错误的结果。
在PCR 实验中，样品中的其他DNA序列或污染物可能会影响PCR反应，因此需要对PCR产物进行纯化。
通过纯化过程，可以去除PCR反应中的非目标DNA产品和其他杂质，从而确保PCR产物的纯度和质量，使其可以作为后续实验的可靠结果。
PCR产物的纯化有许多方法，包括凝胶切割、列柱法、磁珠法等。
以下将详细介绍这些方法的原理、步骤和注意事项。
1. 凝胶切割法凝胶切割法是一种传统的PCR产物纯化方法，其原理是将PCR反应产生的DNA样品通过凝胶电泳离子色谱分离，然后切割出相关的条带，并用酸性盐溶液将DNA溶解提取。
凝胶切割法的步骤如下：(1) 进行聚丙烯酰胺凝胶电泳：将PCR反应产生的DNA样品进行凝胶电泳，用紫外线检测条带。
(2) 切割DNA条带：使用专门的切割刀进行切割，将条带剪下来。
(3) DNA溶解：使用酸性盐溶液将DNA条带进行溶解。
优点：凝胶切割法的设备成本相对较低，样品可以进行双重检测以确保纯度，同时凝胶切割法适用于大多数DNA样品。
缺点：凝胶切割法需要较长的时间来完成，同时需要熟练的技能和实验室基础。
2. 列柱法列柱法是一种常用的PCR产物纯化方法，其原理是分子筛分离DNA分子和其他污染物，从而实现DNA纯化。
(1) 列制备：购买适合的DNA纯化柱。
对于小样本或小型柱，使用破碎柱或滴漏式柱，对于大样本或大型柱，使用压力筛柱。
(2) 制备酶解混合物：将PCR产物与酶切混合，加入公认的酶解混合物。
(3) 加样：将酶解混合物加入柱，按照柱的指南进行操作。
糖凝胶电泳
糖凝胶电泳糖凝胶电泳是一种常见的生物分子分离技术，主要用于分离和检测复杂的碳水化合物混合物。
本文将从以下几个方面进行详细介绍：1. 糖凝胶电泳的基本原理2. 糖凝胶电泳的步骤3. 糖凝胶电泳的应用4. 糖凝胶电泳的优缺点5. 糖凝胶电泳与其他分离技术的比较一、糖凝胶电泳的基本原理糖凝胶电泳是利用不同大小、形状和结构的碳水化合物在聚丙烯酰胺或琼脂糖基质中受到不同程度阻滞而进行分离的一种方法。
这种方法需要将样品先加入到聚丙烯酰胺或琼脂糖基质中，然后通过施加直流电场来推动带有荷负电荷的碎片向阳极移动，带有荷正电荷的碎片向阴极移动。
由于不同大小、形状和结构的碎片在基质中受到不同程度阻滞，因此它们会在电泳过程中被分离开来。
二、糖凝胶电泳的步骤糖凝胶电泳主要包括样品制备、基质制备、电泳和染色四个步骤。
1. 样品制备：样品可以是从细胞、组织或体液中提取的碳水化合物混合物。
样品需要经过一系列处理步骤，如加热、脱蛋白等，以去除干扰物质。
2. 基质制备：基质可以是聚丙烯酰胺或琼脂糖。
基质需要根据所要分离的碳水化合物的大小和形状进行调整。
3. 电泳：将样品加入到基质中后，在两端施加直流电场，使带有荷正电荷的碎片向阴极移动，带有荷负电荷的碎片向阳极移动。
根据不同大小、形状和结构的碎片在基质中受到不同程度阻滞，因此它们会在电泳过程中被分离开来。
4. 染色：为了更好地观察和检测分离出来的碳水化合物，需要对基质进行染色处理。
最常用的染色剂是银染剂和吖啶橙。
三、糖凝胶电泳的应用糖凝胶电泳在生物学、医学、食品科学等领域都有广泛的应用。
以下是一些常见的应用：1. 分离和鉴定复杂的碳水化合物混合物，如多糖、糖蛋白等。
2. 检测蛋白质与碳水化合物之间的结合关系，如酶联免疫吸附实验（ELISA）中检测抗原与抗体之间的结合关系。
3. 研究糖基化修饰对蛋白质功能和稳定性的影响。
4. 食品科学中检测食品中的多糖和其他碳水化合物成分。
5. 医学中检测肿瘤标志物等生物标志物。
电泳条件及不同胶浓度配制
试剂配制：（1）30%聚丙烯酰胺贮液：将聚丙烯酰胺（电泳级）150g，N,N′—甲叉双丙烯酰胺（电泳级）4g溶剂于400ml双蒸水中，补充双蒸水至500ml，滤纸过滤后，于棕色瓶中4℃避光保存。
（2）1.5mol/l Tris碱（pH8.8）：将90.75Tris碱溶解于400ml双蒸水中，用1mol/l HCl调至pH8.8，补充双蒸水定容至500ml，4℃冰箱保存。
（3）1.0mol/l Tris碱（pH6.8）：将12.1Tris碱溶解于80ml双蒸水中，用1mol/l HCl调至pH6.8，补充双蒸水定容至100ml，4℃冰箱保存。
（4）10%SDS：将10gSDS溶剂于100ml双蒸水中，混匀后，室温保存。
（5）10%过硫酸铵：将0.1过硫酸铵（电泳级）溶解于1ml双蒸水中（用时加水溶解），4℃冰箱保存。
（6）10倍电泳缓冲液（25mmolTris,192mmol甘氨酸，0.1%SDS，pH8.3）：在10L大玻璃管中加8L双蒸水，303gTris碱，1442g甘氨酸，100gSDS溶解后调pH8.3补水至10L，混匀后，室温保存。
（7）样品缓冲液：将1.6ml10%SDS，0.8ml甘油，1.0ml1.0mol/l Tris（pH6.8），加入到4.0ml 双蒸水中，加0.01%溴酚蓝，0.4ml巯基乙醇。
（8）染色液配制0.25%考马斯亮蓝（CCB）染色液：考马斯亮蓝R-250甲醇-醋酸混合液。
取1.25g考马斯亮蓝R-250，溶于227ml蒸馏水中，加甲醇227ml，再加入冰乙酸46ml（近似5:5:1）搅拌使其充分溶解，室温保存备用。
（9）脱色液配制：甲醇：水：醋酸=5:5:1混合备用。
或用20%乙醇水溶液。
实验步骤1待测蛋白样品制备（1）根据每种方法提取的蛋白，用含SDS的样品缓冲溶液溶解，充分溶解后沸水加入3-5min，1600r/min离心5min，取3上清液进行SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。
SDS-PAGE电泳注意事项
SDS-PAGE电泳的操作规程一、样品处理取适量体积的样品溶液（样品含约为0.5-5ug），加入5×样品缓冲液，用振荡器混匀，于95℃水浴中煮5分钟，并于离心机中12000r/min离心5分钟待上样用，煮完后室温冷却。
非还原不用煮。
二、配制凝胶溶液和灌胶A、预先计算好所需浓度胶的体积及配胶所需要的各种试剂的体积，按这些数据依次加入试剂并混匀，然后灌入预先装好并且用双蒸水试漏过的板层中（先是分离胶），在胶的上面加一小层水饱和的异丁醇，置于平整的桌面让其自然凝固。
B、待分离胶凝固后（以胶与异丁醇界面有折射为准），到掉上层的异丁醇，用双蒸水冲洗三次并用吸水纸吸干。
然后灌入预定浓度的、按步骤A配制的浓缩胶，插入加样梳（注意赶走气泡），平置于水平桌面，自然凝固。
C、待凝固后，放置1小时使胶充分交联凝固。
三、电泳1、拔掉梳子，用双蒸水冲洗加样孔，去除杂质及未凝固的胶溶液，然后装好电泳装置，加入电泳缓冲液（如阴阳极缓冲液不同，需要分别加入相应的缓冲液，另外，阴阳极电泳缓冲液不要混在一起）2、用20ul的微量加样枪上样。
3、电泳开始时，恒压模式下用80V的电压电泳，待指示剂溴酚蓝进入分离胶时，把电压提高到130-150V左右，直到溴酚蓝快走出分离胶时，终止电泳，切断电源，拆下凝胶分别切下上、下角标记胶的方向及区别是哪一块胶。
4、清洗胶架、玻璃及其他附件。
四、染色、脱色及结果的分析与保存1、把剥下的胶浸入染色液中，放在脱色摇床上摇1小时。
2、取出凝胶块，用蒸馏水冲洗干净，然后置于脱色液中脱色，摇荡脱色直到底色基本脱完。
3、脱完色的胶用凝胶成像系统照相并进行数据分析处理。
一、试剂的使用与管理1、30%的丙烯酰胺贮存液（棕色瓶中保存）、pH8.8的缓冲液、PH6.8的缓冲液、10%的AP、TEMED用完后请放回4℃冰箱。
2、2×上样缓冲液，用完后请存放于-20℃冰箱的指定位置。
3、中分子量marker请按照说明书配制，配制后于95℃水浴中煮5分钟，冷却后离心，分装到eppendorf管中，每管10 U L。
2022届高中生物新教材同步选择性必修第三册-第3章-实验突破二-DNA片段的扩增及电泳鉴定
一、实验原理1．DNA片段的扩增PCR利用了DNA的热变性原理，通过调节温度来控制DNA双链的解聚与结合。
2．琼脂糖凝胶电泳(1)带电粒子：DNA分子具有可解离的基团，在一定的pH下，这些基团可以带上正电荷或负电荷。
(2)迁移动力与方向：在电场的作用下，带电分子会向着与它所带电荷相反的电极移动，这个过程就是电泳。
(3)迁移速率：在凝胶中DNA分子的迁移速率与凝胶的浓度、DNA分子的大小和构象有关。
(4)检测：凝胶中的DNA分子通过染色，可以在波长为300 nm的紫外灯下被检测出来。
二、方法步骤1．移液：用微量移液器按照配方或PCR试剂盒的说明书，在微量离心管中依次加入各组分。
2．混合：待所有的组分都加入后，盖严离心管的盖子。
3．离心：将微量离心管放在离心机上，离心约10 s，使反应液集中在管的底部。
4．反应：将装有反应液的微量离心管放入PCR仪中，设置程序进行反应。
5．根据待分离的DNA片段的大小，用电泳缓冲液配制琼脂糖溶液，一般配制质量分数为0.8%～1.2%的琼脂糖溶液，并加入适量的核酸染料混匀。
6．将扩增得到的PCR产物与凝胶载样缓冲液(内含指示剂)混合，再用微量移液器将混合液缓慢注入凝胶的加样孔内。
7．接通电源，根据电泳槽阳极至阴极之间的距离来设定电压，一般为1～5 V/cm。
待指示剂前沿迁移接近凝胶边缘时，停止电泳。
8．电泳结束后，取出凝胶置于紫外灯下观察和照相。
三、操作提示1．为避免外源DNA等因素的污染，PCR实验中使用的微量离心管、枪头和蒸馏水等在使用前必须进行高压灭菌处理。
2．缓冲液和酶应分装成小份，并在－20 ℃储存。
使用前将所需试剂从冰箱拿出，放在冰块上缓慢融化。
3．在向微量离心管中添加反应组分时，每吸取一种试剂后，移液器上的枪头都必须更换。
4．在进行操作时，一定要戴好一次性手套。
四、关键点拨1．未出现扩增条带的主要原因(1)Taq DNA聚合酶失活。
(2)引物出现质量问题。
ED电泳
电泳electrophoresis简单说电泳就是把某些物质放在一个可以游泳的地方（某种基质），然后在这个泳池的两端加上电压，让这种物质在里面游起来，以达到某种实验或应用目的。
什么是电泳溶液中带电粒子（离子）在电场中移动的现象。
利用带电粒子在电场中移动速度不同而达到分离的技术称为电泳技术。
1937 年瑞典学者A.W.K.蒂塞利乌斯设计制造了移动界面电泳仪，分离了马血清白蛋白的3种球蛋白，创建了电泳技术。
在确定的条件下，带电粒子在单位电场强度作用下，单位时间内移动的距离（即迁移率）为常数，是该带电粒子的物化特征性常数。
不同带电粒子因所带电荷不同，或虽所带电荷相同但荷质比不同，在同一电场中电泳，经一定时间后，由于移动距离不同而相互分离。
分开的距离与外加电场的电压与电泳时间成正比。
在外加直流电源的作用下，胶体微粒在分散介质里向阴极或阳极作定向移动，这种现象叫做电泳。
利用电泳现象使物质分离，这种技术也叫做电泳。
胶体有电泳现象，证明胶体的微粒带有电荷。
各种胶体微粒的本质不同，它们吸附的离子不同，所以带有不同的电荷。
利用电泳可以确定胶体微粒的电性质，向阳极移动的胶粒带负电荷，向阴极移动的胶粒带正电荷。
一般来讲，金属氢氧化物、金属氧化物等胶体微粒吸附阳离子，带正电荷；非金属氧化物、非金属硫化物等胶体微粒吸附阴离子，带负电荷。
因此，在电泳实验中，氢氧化铁胶体微粒向阴极移动，三硫化二砷胶体微粒向阳极移动。
利用电泳可以分离带不同电荷的溶胶。
例如，陶瓷工业中用的粘土，往往带有氧化铁，要除去氧化铁，可以把粘土和水一起搅拌成悬浮液，由于粘土粒子带负电荷，氧化铁粒子带正电荷，通电后在阳极附近会聚集出很纯净的粘土。
工厂除尘也用到电泳。
利用电泳还可以检出被分离物，在生化和临床诊断方面发挥重要作用。
本世纪40年代末到50年代初相继发展利用支持物进行的电泳，如滤纸电泳，醋酸纤维素膜电泳、琼脂电泳；50年代末又出现淀粉凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳等。
免疫固定电泳操作规程
免疫固定电泳操作规程项目名称免疫固定电泳( HYDRAGEL IMMUNOFIXATION)检验方法名称琼脂糖凝胶免疫固定电泳方法学原理血清蛋白电泳中岀现的异常条带主要存在于B -球蛋白和丫 -球蛋白区域，通常疑为单克隆蛋白质并且提示丙球蛋白血症。
为鉴别异常条带，可运用免疫固定技术。
免疫固定电泳是一种简单的技术，电泳后的蛋白质与相应抗体形成复合物和被固定在相应的位置上，通过下列四个步骤： 1．蛋白质在琼脂糖凝胶内进行电泳分离。
2．电泳后已分离的蛋白质被固定并产生免疫沉淀：应用固定剂和抗血清加于凝胶表面的泳道上，并让固定剂和抗血清在凝胶内渗透扩散。
3．使用吸水纸和清洗将未沉淀的蛋白质去除，已被沉淀的蛋白质贮留在凝胶内。
4．将蛋白质染色，并将这些免疫沉淀区带的位置与蛋白质经电泳后观察到的异常蛋白区带进行比较。
为了精确识别单克隆区带，样品同时在六条泳道上进行测试。
经电泳后，ELP作为参考泳道以显示电泳后的蛋白质。
其余五条泳道用于鉴定单克隆成分。
通过它(们)与抗血清，丫(IgG)、a (IgA)、卩(IgM)重链和K、入轻链(游离和非游离)反应与否进行鉴别。
该技术简单、快速、图象清晰，易于解释结果。
方法学溯源自 1930 年由 Tiselius 发现了移界电泳( moving boundary eectrophoresis )，而后，这种技术的各种局限性已逐渐被区带电泳( zone elecrrophoresis )所克服，区带电泳的条件和支持介质的选择是电泳成败的关键。
通过免疫化学手段观察其电泳特性及抗原特性是鉴定某一蛋白成分最好的方法，免疫固定电泳技术是目前应用最广泛的方法之一。
仪器型号： SEBIA HYDRASYS (PN1210)分析和计算参数：处理量：约 18 个样本 / 小时所需样本量： 10ul检验时间：约 55 分钟重复性：有良好的批内和批间重复性电泳参数：电压 0 — 300V (可选至 3000V)电流 0－ 500mA功率 0— 100W试剂及配套品试剂HYDRAGEL 1 IF式剂盒HYDRAGEL 2 IF式剂盒HYDRAGEL 4 IF式剂盒HYDRAGEL 9 IF式剂盒商标：SEBIA包装规格：10测试/20测试/40测试/90测试货号：PN4301/ PN4302/ PN4304/PN4309脱色液(1)商标：SEBIA(2)包装规格：Pack for 10 x 100ml(3)货号：PN4540(4)成分：柠檬酸3 •洗涤液商标：SEBIA包装规格：Pack for 10 x 80ml货号：PN4541成分：叠氮钠4 .稀释剂商标：SEBIA包装规格：Pack for 1 x 5ml货号：PN4587配套品：IF试剂抗体(1) 商标：SEBIA(2 ) 包装规格：Pack for 5 x 1ml(3) PN4315操作步骤㈠开机，启动电泳仪。
二次电泳工艺介绍
二次电泳工艺介绍赵志英;王建辉;曹晓根【摘要】对于已建成或投入使用的连续式及步进式生产线,为解决因时间不够造成的电泳漆膜厚不足问题,通过实验探讨了二次电泳工艺所得漆膜的外观及性能,并说明了工艺控制要点.该工艺解决了电泳漆膜增厚的问题,适用于要求相对稍低的汽车零部件、日用品、玩具等的涂装.【期刊名称】《电镀与涂饰》【年(卷),期】2015(034)014【总页数】4页(P804-807)【关键词】二次电泳;膜厚;产品性能;控制要点【作者】赵志英;王建辉;曹晓根【作者单位】长城汽车股份有限公司技术中心,河北省汽车工程技术研究中心,河北保定071000;长城汽车股份有限公司技术中心,河北省汽车工程技术研究中心,河北保定071000;长城汽车股份有限公司技术中心,河北省汽车工程技术研究中心,河北保定071000【正文语种】中文【中图分类】TQ639.2【涂装】First-author’s address:Technical Center of Great Wall Motor Co., Ltd., Hebei Automobile Engineering Technology Research Center, Baoding071000, China带电颗粒在电场作用下向与其电性相反的电极移动称为电泳。
20世纪60年代，福特汽车公司最先将电泳漆应用于汽车底漆。
电泳漆具有防腐能力好、排放低、利用率高、容易涂覆外形复杂及表面积小的工件等优点。
对于前处理和电泳生产线而言，其品质和生产能力的高低往往受膜厚和烘烤时间的影响。
自2000年以来，涂料公司升级了电泳涂料，排放、烘烤时间和温度大幅降低，如PPG公司的ED7000电泳漆能在160 °C × 15 min (达到160 °C后保持15 min)的条件下固化，立邦公司的POWERNICS 301电泳漆可在160 °C × 10 min的条件下固化。
中国药典中测蛋白质的方法
中国药典中测蛋白质的方法在生物医药领域，蛋白质的测定是实验室常规检测的重要项目之一。
中国药典中收录了多种测蛋白质的方法，主要包括总蛋白质检测法、尿化学分析法和电泳法。
本文将详细介绍这三种方法的应用范围、实验原理、实验步骤及注意事项。
1. 总蛋白质检测法总蛋白质检测法是一种常用的实验室方法，可用于检测生物样品中总蛋白质的含量。
该方法基于双缩脲反应原理，通过测定反应后溶液的颜色变化，计算出样品中总蛋白质的浓度。
总蛋白质检测法具有操作简便、反应灵敏、重复性好等优点，适用于生物医药领域中的蛋白质含量测定。
实验步骤：(1) 准备试剂：包括双缩脲试剂A液和B液，分别储存于棕色瓶中。
(2) 制备样品：将待测样品用生理盐水或去离子水稀释至适当浓度。
(3) 加样：取适量样品加入到试管中，加入双缩脲试剂A液2mL，摇匀。
(4) 孵育：将试管置于37℃水浴中孵育15分钟。
(5) 加试剂B：取出试管，加入双缩脲试剂B液4滴，摇匀。
(6) 测定吸光度：用紫外可见分光光度计在540nm波长处测定吸光度值。
(7) 计算：根据标准曲线或回归方程计算样品中总蛋白质的浓度。
注意事项：(1) 双缩脲试剂应储存于棕色瓶中，防止见光分解。
(2) 实验过程中应保持温度适宜，以利于反应进行。
(3) 注意吸光度的测量范围，避免超出仪器的测量范围而导致误差。
2. 尿化学分析法尿化学分析法是一种用于检测尿液中蛋白质的方法。
该方法通过测定尿液在特定波长下的吸光度值，来判断尿液中蛋白质的含量。
尿化学分析法具有操作简便、快速、灵敏度高等优点，适用于临床诊断及生物医药研究中的蛋白质含量测定。
实验步骤：(1) 收集尿液：采集受试者的尿液样本。
(2) 加样：将试纸浸入尿液中，轻轻搅拌数次后取出。
(3) 读数：将试纸放置在尿液干化学分析仪中，读取吸光度值及相关指标。
如果仪器具有半自动或全自动功能，可以直接打印出结果。
(4) 结果判断：根据试纸上的颜色变化及仪器测得的吸光度值，判断尿液中蛋白质的含量是否正常。