产生物表面活性剂石油降解菌的筛选及高效降解菌群的构建
高温产生物表面活性剂菌种的筛选及性能评价
高温产生物表面活性剂菌种的筛选及性能评价李彩风;高光军;张绍东;吴晓玲;汪卫东【摘要】从胜利油田油井产出液及含油污水等样品中分离出16株能利用原油的菌株.通过原油平板涂布和液体发酵培养,筛选出1株能在高温(60℃)、高压(10 MPa)下以原油为唯一碳源生长且能有效产出生物表面活性剂的菌株CH2.原油作用实验结果表明其对胜利油田东辛原油降粘率可达48.5％,原油含蜡量降低12.6％,原油凝固点降低3.0℃；红外光谱分析显示该菌株产生的生物表面活性剂为糖脂类,经分子生物学初步鉴定菌株CH2为蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus).物理模拟驱油实验显示聚合物驱油后,注入CH2菌液60℃培养21 d时可提高原油采收率8.6％.【期刊名称】《湖南师范大学自然科学学报》【年(卷),期】2013(036)002【总页数】5页(P73-77)【关键词】高温微生物;生物表面活性剂;筛选;原油平板法;物模驱油【作者】李彩风;高光军;张绍东;吴晓玲;汪卫东【作者单位】胜利油田分公司采油工艺研究院,中国东营257000;胜利油田分公司采油工艺研究院,中国东营257000;胜利油田分公司科技处,中国东营257000;胜利油田分公司采油工艺研究院,中国东营257000;胜利油田分公司采油工艺研究院,中国东营257000【正文语种】中文【中图分类】X131.2微生物提高原油采收率技术是一项利用微生物自身的有益活动及其代谢产物来提高原油采收率的技术［1-2］.微生物的代谢产物有多种，其中生物表面活性剂产物是集亲水基和憎水基结构于一身的两亲化合物，可降低水溶液和烃混合物的表面张力及界面张力，促进原油的乳化和分散［3-4］.与化学合成表面活性剂相比，生物表面活性剂具有选择性好、用量少、无毒、能够被生物降解、不会对环境造成污染、可用微生物引入化学方法难以合成的新化学基团等优点，因而在提高原油采收率方面可以起到重要的作用［5-6］.产出表面活性剂的菌种有较多筛选方法［7-9］，应用快速、有效而直接的检测手段将使大量菌种的筛选工作取得事半功倍的效果.笔者尝试利用一种新的原油平板涂布方法，从多种来源的油田样品中选育出了一株高效产糖脂类生物表面活性剂且能以原油为唯一碳源的耐高温高压的菌种.该发现对在高温高压的极端油藏环境下实施微生物采油技术具有重要意义.1 实验1.1 菌种来源筛选分离自胜利油田的油井产出液、石化炼厂污水及原油污染土壤等样品.1.2 培养基无机盐培养基:NH4Cl 1 g，K2HPO4·3H2O 1 g，KH2PO41 g，MgSO40.2 g，FeSO4·7H2O 0.2 g，NaCl 5 g，CaCl20.2 g，蒸馏水 1 000 mL，调整pH 值至7.2～7.4，添加2 g/L的原油作为唯一碳源，121℃灭菌20 min.LB 培养基:胰蛋白胨 10 g，酵母浸出粉 5 g，NaCl 5 g，蒸馏水 1 000 mL，调整pH 值至7.2～7.4，121 ℃灭菌20 min.原油平板:NH4NO30.15 g，KH2PO40.1 g，K2HPO40.1 g，MgSO40.02 g，CaCl20.02 g，NaCl 0.5 g，琼脂20 g，蒸馏水1 000 mL，调整pH值至7.0～7.2，121℃灭菌20 min，取出倒平板，待平板凝固后，加入少量灭菌原油，用涂布棒涂布均匀即可.1.3 筛选方法1.3.1 以原油为唯一碳源菌株的富集分离将样品接入无机盐培养基中，分别于60℃、150 r/min下振荡培养.每隔7 d以5%的富集液接种至新鲜的原油液体培养基中.连续转接3次后将富集液进行梯度稀释并涂布于LB平板，60℃恒温培养，挑取单菌落保存备用.1.3.2 高温产表面活性剂菌株初筛将分离得到的高温菌株接种于原油平板中，然后于60℃下恒温培养2 d后，观察扩油圈大小.只有产生表面活性剂能够乳化碳氢化合物的菌株才能吸收利用原油形成扩油圈，故挑选有扩油圈的菌落作进一步研究. 1.3.3 高温产表面活性剂菌株复筛将上述分离得到的高温菌株接到以原油为唯一碳源的无机盐培养基中，60℃，160 r/min下振荡培养7 d，然后取菌液进行表面张力的测定.1.4 菌株性质评价1.4.1 与原油相互作用将筛选到的高温产表面活性剂菌株接种于LB斜面上培养7 d，用无菌水制成菌悬液，然后接种于原油液体培养基中，置于60℃、160 r/min 的摇床培养2 d，离心收集油相.用数字粘度计测量原油的粘度;用玻璃套管法测凝固点.1.4.2 高温、高压实验将上述筛选得到的产生物表面活性剂的高温菌接种于原油平板上，然后置于压力容器中，充入气体至压力10 MPa(VO2∶VN2=0.2∶9.8)、60℃下恒温培养3 d后，观察扩油圈大小.1.4.3 红外光谱分析压片法:将1～2 mg生物表面活性剂的提取产品与200 mg纯KBr研细均匀，置于模具中，用(5～10)×107Pa压力在油压机上压成透明薄片，即可用于测定.试样和KBr都应经干燥处理，研磨到粒度小于2 μm，以免散射光影响，然后进行红外光谱的测定.1.4.4 菌株分子生物学鉴定将筛选得到的高温菌株进行基因组DNA的提取后，利用细菌16S rDNA基因通用引物:P11:5'-AGAGTTTGATCATGGCTCAG-3'(对应于E.coli 8～27)和 P12:5'-TACGGTTACCTTGTTACGACTT-3'(对应于E.coli 1 492～1 510)来扩增16S rDNA基因序列.引物由大连宝生物工程公司合成.100 μL PCR反应体系，反应条件:94℃预变性5 min;94℃变性1 min，55℃退火1 min，72℃延伸1 min，30个循环;72℃延伸10 min.扩增产物经电泳检测后测序.序列在GenBank中用BLASTN比较.1.5 物理模拟驱油实验采用具有不同渗透率的双管岩芯模型模拟中一区Ng3区块聚合物驱油后微生物驱油的情况.实验步骤:装填岩心→岩心抽真空，加中一区Ng3区块地层水至饱和→测孔隙度和渗透率参数→加油至饱和并计算原始含油饱和度→1次水驱至岩心产出液含水96%→注入聚合物0.3 PV，后续水驱至出口含水96%时→注营养体系(或营养体系+菌液)60℃培养一段时间→3次水驱至实验结束.2 结果与讨论2.1 菌株的富集分离结果从样品中富集分离出16株能够在60℃条件下以原油为唯一碳源生长的菌株，有9株细菌的表面张力在40 mN·m－1以下.其中，菌株CH2的表面张力最低为35.6 mN·m－1.具体结果如表1所示.表1 以原油为唯一碳源菌株的表面张力情况Tab.1 The surface tension of the strains utilizing oil as only carbon source编号名称表面张力/(mN·m－1)编号名称表面张力/(mN·m－1)1 ZJ-3 37.6 9 RBD 42.1 2 AP-1 41.1 10 WJ-4 41.2 3 WD-2 39.6 11 MA-2 40.7 4 Ш 38.0 12 WJ-2 41.1 5 CH2 35.6 13 WJ-11 40.3 6 WJ-12 39.9 14 SE 45.8 7 WJ-6-1 37.3 15 1-2 38.2 WF-B 38.6 16 ZJ-5 38.58将上述分离得到的16株高温菌接种于原油平板，60℃下恒温培养2 d后，其情况如下图1所示，其中菌株Ⅲ、CH2、ZJ-3、WJ-6-1、WF-B、1-2及ZJ-5能产生明显的扩油圈，表明这7株细菌高温下生长代谢，产生了生物表面活性剂，将原油从平板剥开.2.2 高温高压实验将上述这7株明显产出生物表面活性剂的高温菌进行高压、高温下产生表面活性剂实验，产生扩油圈的情况如图2所示.从中可以清楚地看到菌株CH2产生的扩油圈直径最大.由此，可以定性判断CH2产生表面活性剂的能力相对最强，与上述菌液表面张力测定结果相一致.图1 常压高温下以原油为唯一碳源菌株的扩油圈Fig.1 The extending oil ring of the strains under the constant pressure and high temperature of oil as only carbon source图2 高压高温下以原油为唯一碳源菌株的扩油圈Fig.2 The extending oil ring of the strains under the high pressure and high temperature of oil as only carbon source2.3 菌株CH2对原油性质影响测试了菌株CH2对原油的降粘、降蜡和降凝作用，结果如表2所示.表2 CH2对原油的降粘、降蜡和降凝效果Tab.2 The effects of CH2 on viscosity，wax content and solidifying point of oil粘度含蜡量凝固点实验前/(mPa·s)实验后/(mPa·s)降粘率降低率降低/%实验前/%实验后/%/%实验前/℃实验后/℃/℃1 080 556 48.5 23.10 20.18 12.6 15.0 12.0 3.0从表2可以看出菌株CH2作用后的原油粘度由实验前的1 080 mPa·s降低至556 mPa·s，原油降粘率达48.5%;菌株作用后的原油蜡含量也发生了显著降低，降低率为12.6%;凝固点由实验前的15℃降低至12℃.2.4 红外光谱分析提取菌株CH2发酵产生的生物表面活性物质进行红外光谱分析.如图3所示，3 440～3 300 cm－1的强吸收峰为O—H的伸缩振动吸收峰;2 980～2 850 cm－1和1 400～1 200 cm－1是C—H的伸缩振动峰;1 900～1 600 cm－1之间的吸收峰是 ==C O的伸缩振动引起的.这几组是糖类的特征吸收峰.判断该菌株产生的生物表面活性剂为糖脂类生物表面活性剂.图3 CH2菌株产生的生物表面活性剂红外吸收光谱图Fig.3 IR spectrum of the biosurfactant from strain CH22.5 菌株鉴定登陆，将测序结果用BLSAT与GenBank中的16S rDNA序列进行同源性比较，比对结果如表3所示.菌株CH2鉴定为蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus).表3 菌株16S rDNA序列BLAST结果Tab.3 BLAST of the strain＇s 16S rDNA sequence菌株名称鉴定结果 Genbank 登录号相似度CH2 Bacillus cereusAM062677 98%3 物理模拟驱油效果双管模拟岩芯的参数及一次注入水的驱油效率和注入聚合物的驱油效率情况见表4，采用合注分采的驱替方式进行.表4 岩芯参数及一次水驱和注入聚合物驱油效率Tab.4 Core parameter and the oil recovery efficiency of once water flooding and polymer flooding岩心序号孔隙度/% 渗透率/μm2 一次水驱驱油效率/% 聚合物驱油效率/%A1 40 5.2 A2 37 1.842.8 14.6 B1 39 4.7 B2 37 1.6 41.6 14.1 C1 39 4.9 C2 36 1.744.3 13.7各岩芯在聚合物驱油后注入CH2菌液在60℃下进行培养，然后进行3次水驱，驱油效率见表5.结果显示外源菌株提高原油采收率明显，其中空白岩芯仅提高原油采收率0.3%，而注入菌液的岩心培养10 d和21 d后分别提高原油采收率4.7%和8.6%.表5 聚合物驱油后微生物驱油效率Tab.5 The efficiency of microbial enhanced oil recovery after the polymer flooding岩心序号驱油介质培养时间/d 提高驱油效率/%A1 A2 空白(营养体系)21 0.3 B1 B2 0.2PV营养体系+菌液CH2 10 4.7 C1 C2 0.2PV营养体系+菌液CH2 21 8.64 结论目前，大部分产出生物表面活性剂微生物的要求温度为30～37℃［10］，以原油为唯一碳源且在高温(60℃以上)条件下产出表面活性剂微生物的研究报道较少.夏文杰［11］等从大庆油田地层水中分离得到一株地芽胞杆菌，能以原油为唯一碳源高温下生长并合成生物表面活性剂，发酵液表面张力可降低至29.58 mN·m－1，表面活性较强，但是没有研究高压对菌株产出生物表面活性剂的影响.Zheng Cheng-gang等以原油为唯一碳源60℃条件下从甘肃玉门油田分离到2株乳化能力较强的菌株，其中发酵液表面张力均在40 mN·m －1以上［12］.本实验通过富集分离得到16株能在60℃高温环境下以原油为唯一碳源生长的菌株.通过原油平板产扩油圈实验筛选得到1株能在高温(60℃)、高压(10 MPa)复合极端条件下高效产出表面活性剂且以原油为唯一碳源生长的菌株CH2，表面张力可降低至35.6 mN·m－1.原油作用实验发现经菌株CH2作用后，原油物性得到改善.模拟高温聚合物驱油后油藏物模驱油实验，结果显示注入菌液CH2后培养21d后提高原油采收率8.6%.以上发现对于该菌株在高温、高压的实际油藏环境下开展微生物采油具有重要意义.参考文献:［1］王惠，卢渊，伊向艺.国内外微生物采油技术综述［J］.大庆石油地质，2003，22(5):49-52.［2］宋永亭.嗜热解烃基因工程菌SL-2的构建［J］.油气地质与采收率，2010，17(1):80-82.［3］宋智勇，张君，马继业，等.微生物菌液的界面特性［J］.油气地质与采收率，2008，15(3):73-75..［4］郭辽原，郭省学，宋智勇，等.一株产表面活性剂的菌株的筛选及现场试验研究［J］.西安石油大学学报:自然科学版，2010，25(2):58-60.［5］潘冰峰，徐国梁，施邑屏，等.生物表面活性剂产生菌的筛选［J］.微生物学报，1999，39(3):264-267［6］余跃惠，张凡，周玲革，等.大港油田产生物表面活性剂本源菌研究［J］.石油天然气学报，2005，27(1):88-90.［7］MULLIGAN C N，COOPER D G，NEUFELD R J，et al.Selection of microbes producing biosurfactants in media without hydrocarbons［J］.Ferment Technol，1984，62(4):311-314.［8］刘晔，刘庆军.一株产生物表面活性剂菌株的筛选［J］.生物技术，2004，14(3):34-35.［9］NOHA H Y，KATHLEEN E，DAVID P N，et parison of methods to detect biosurfactant production by diverse microorganisms［J］.J Microbiol Methods，2004，56(3):339-341.［10］伏亚萍，李鱼，王健，等.稠油降解菌的筛选及其生物表面活性剂的特性［J］.吉林大学学报:理学版，2007，45(1):148-152.［11］夏文杰，董汉平，俞理，等.一株耐温耐盐烃降解菌Geobacillus sp.XDF-4性能［J］.化工学报，2010，61(11):2951-2959.［12］ZHENG C G，HE J L，WANG Y L，et al.Hydrocarbon degradation and bioemulsier production by thermophilic Geobacillus pallidus strains［J］.Bioresour Technol，2011，102(19):9155-9161.。
石油降解菌的研究进展
在石油的开采 、 运输 、 储存 、 加工 和应用 过程 中常 伴随有石油 的泄漏 而造成环境污染。泄漏 的石 油若进
入 土壤 中难 于去除 ， 留时问长 … ， 残 破坏 土壤结 构 ， 从 而影 响土壤 的疏松 程度 和通气 状况 ， 降低 了土壤 生产
葡萄球 菌属 （ ｔ ｈ ｌ ｏｃ ） 微 球 菌属 （ ｃ ｃｃ ｓ 、 Ｓａ ｙ ｃｃｕ 、 ｐ ｏ ｓ Ｍｉｏｏｃ ） ｒ ｕ
展。 ．
目前 ， 一般认 为微 生物细胞 摄 取石 油烃 存在 三种
模式 ： ①微生 物细胞摄取溶 解在水相 中的烃类 ； ②微生
物 细胞与 比其大得 多 的烃 类颗 粒直接 接触摄取 ； ③微 生物 细胞 与比其小得 多 的假溶 、 拟溶 或被包 裹 的烃类 颗粒作用并将其摄取 。烃类在水 中以水包 油乳 浊液 的 形式存在 时 ， 的体 积 小 且 分散 ， 以增 大 了接触 面 油 所 积 ， 同体积下油 的表 面积增 大 ， 即相 促进生物降解 Ｅ 。 ６ Ｊ 微生物可 降解 的石油组分 ， 易程度 为 ： 其难 短链正 构烷烃 ＞长链正构 烷烃 ＞异构 烷烃 ＞环状烷 烃 ＞低分 子量芳烃 ＞ 高分子量芳烃 ＞杂环烃 。同种类 型烃类 中 分子量越大 降解越 慢 。不 同烃类 化合 物 ， 生物代 谢 微 途径 和降解机理不 同。微 生物降解烷烃的关键步骤是
乳杆 菌属（ ａｔｂｃ ｌ ） Ｌｃ ａｉｕ 和诺 卡 氏菌 属 （ ｏ ｒｉ） ｏ ｌ ｓ Ｎ ｃ ｄ 等。 ａ ａ
其中， 最常见的是假单 胞菌类的细菌 ， 细菌对 短链 这类 及 长链 烷 烃 、 烃 均 能 降 解 ， 且 能 使 烷 烃 彻 底 降 芳 而 解 ｊ 。能够降解 石油 烃 的酵母 菌种 类 涉及假 丝 酵母
石油降解菌的筛选及降解性能研究
２００８年 １０月
污
染
防
治
技
术
Ｖｏ ． Ｉ２１． ． Ｎｏ ５
０ｃ ．２０ ０ ８ ｔ．
ＰＯＬＬ ＵＴ１ ０Ｎ ＣＯＮＴＲ０Ｌ ＴＥＣＨ ＮＯＬＯＧＹ
石 油 降 解 茵 的 筛 选 及 降解 性 能 研 究
李 海花 ， 单爱 琴 ， 周海 霞
ｏｌｄ ｇ ａ ａｉｎ ｒ ｔ． Ｔｗｉ８ ａ ｎｈｂｉ ｒ ｆｅ ｔ ｎ ｏｌｄ ｇ ａ ａｉｎ． ｉ ｅ ｒ ｄ ｔｏ ａｅ ｎ ０ ｈ ｄ ｉ ｉ ｔ ｙ ｅｆ ｃｓｏ ｉ ｅ ｒ ｄ ｔ ｏ ｏ Ｋｅ ｙ ｗｏｒ ｄｓ： ｔｏｅ ｍ ； ｉ ｄ ｇ ａ ｔ ｎ；ｄ ｇ ａ ｉ ｇ ｂ ｃ ｅｉ ｐｅｒｌ ｕ ｂ ｏ ｅ ｒｄａｉ ｏ ｅ ｒ ｄ ｎ ａ ｔｒａ；ｄ ｇ ａ ａｉ ｎ ｒ ｔ ｅ ｒ ｄ ｔｏ ａｅ
处理 石油污 染作 了初探 。
５ｇ 琼脂 ２ ， ， ０ ｇ 蒸馏 水 １ ０ Ｌ，Ｈ为绘 学院 ，江 苏 徐 州 ２ １０ ） ２ ０ ８
摘 要 ： 石 油 污 染 的 土壤 中分 离驯 化 ， 到 特 征 明显 的石 油 降 解 菌 ， 究 了 不 同 时 间 、 油 浓 度 、 种 量 、Ｈ值 、 质 从 得 研 石 接 ｐ 基
及添加物等条件对 降解菌 降解石油 的影响。结果 表明 ： 在实验条件下 ， 降解菌接种量越 多 ， 降解 效果越好 ； 石油降解效率随
ｐ Ｈ ｖ ｌ ｅ，ｇ ｒ ｉｕ ｅ ａ ｄ Ｓ ｎ． Ｔｈｅ ｒ ｓ ｌｓ ｓ ｏ ｄ ｈａ ｄ ｒ ｔｅ ｅ ｔｃ ｎ ｔｏ ｓ，ｔ ｅ ａｕ ａ ｎｔ ｒ ｎ Ｏ ｏ ｅ ｕ ｔ ｈ ｗｅ ｔ ｔｕｎ ｅ ｈ ｔｓ ｏ ｄｉｉｎ ｈ ｍｏｅ ｄ ｓ ｓ ｗｅｅ ｄ ｅ ｒ ｏ ｅ ｒ ａ ｄ ｄ，ｔ ｅ ｈ ｍｏｅ ｅｆｃｅ ｔ ｒ ｆｉｉｎ
用于石油污染土壤降解的高效降解菌的筛选
第8卷第3期环境工程学报Vol ．8，No ．32014年3月Chinese Journal of Environmental EngineeringMar ．2014用于石油污染土壤降解的高效降解菌的筛选及其降解条件优化武海杰张秀霞*白雪晶郭云霞（中国石油大学环境与安全工程系，青岛266580）摘要经过富集、分离优选出高效石油降解菌L-1，根据形态观察和生理生化特征初步鉴定为琼氏不动杆菌；采用单因素花盆实验模拟微生物原位修复并对其降解条件进行优化。
结果表明，将高效石油降解菌应用于修复石油污染土壤，适宜接种量、表面活性剂浓度、CNP 比、翻耕频率分别为15%、0．1%、100ʒ10ʒ1和1d 1次；在该降解条件下修复28d ，可达到16．80%的石油降解率，远远高于土著微生物6．92%的降解率。
关键词石油降解菌筛选降解条件土壤修复中图分类号X53文献标识码A文章编号1673-9108（2014）03-1229-06Isolation and optimization degradation conditions of highly efficientdegrading bacteria for oil-contaminated soilWu HaijieZhang XiuxiaBai XuejingGuo Yunxia（Department of Environmental and Safety Engineering ，China University of Petroleum ，Qingdao 266580，China ）Abstract Highly efficient petroleum-degrading bacteria L-1was isolated by enrichment and separation ，andwas preliminarily identified as Acinetobacter junii by morphology observation ，and its physiological and biochemi-cal characteristics．Single factor flowerpot experiments were used to simulate microorganism in-situ remediation and optimize its degradation conditions．Ｒesults showed that highly efficient petroleum-degrading bacteria was ap-plied to oil-contaminated soil ，the optimum inoculation amount ，content of surfactant ，ratio of CNP ，plowing fre-quency were 15%，0．1%，100ʒ10ʒ1and once a day ，respectively．Ｒemedying 28days under these conditions ，oil degradation rate reached 16．80%，much higher than 6．92%of indigenous microorganism．Key words petroleum-degrading bacteria ；isolation ；degradation condition ；soil remediation 基金项目：中国石油科技创新基金（2009D-5006-07-01）；中央高校基本科研业务费专项基金（27Ｒ1104052A ）；青岛市科技计划项目（KJZD-12-65-jch ）；中国石油大学（华东）研究生创新工程（CX-1219，CX2013035）收稿日期：2012－12－30；修订日期：2013－03－13作者简介：武海杰（1988 ），女，硕士研究生，主要从事固体废物及其资源化利用技术研究。
产表面活性剂石油烃降解菌降解机制研究的开题报告
产表面活性剂石油烃降解菌降解机制研究的开题报告一、课题背景和研究意义表面活性剂石油烃降解菌是一类能够利用石油烃类化合物作为生长基质进行自身生长繁殖，同时能够将石油烃类化合物降解成无害的碳水化合物和水的微生物。
表面活性剂在石油烃降解过程中起到重要作用，可以提高石油烃的生物利用率，促进石油烃的降解和去除。
目前，随着油田资源的日益枯竭和环境污染日益严峻，表面活性剂石油烃降解菌的研究和应用具有重要的现实意义和科学价值。
因此，本研究旨在探究表面活性剂石油烃降解菌降解石油污染物的机制，为石油污染治理和环保提供技术支持和理论指导。
二、研究内容和思路本研究将采用实验室培养的方法，初步筛选出具有较强石油烃降解能力的表面活性剂石油烃降解菌，并通过分子生物学技术对其进行鉴定和分析。
接着，将构建石油污染物降解静态实验系统，探究表面活性剂石油烃降解菌降解石油污染物的机理和途径。
在实验过程中，将对石油污染物的降解速率、代谢产物、微生物活性等参数进行测定和分析，加深对表面活性剂石油烃降解菌的降解机理的认识。
最后，将探究表面活性剂石油烃降解菌在石油污染治理方面的应用前景，为石油污染治理和环保提供科学依据和技术支撑。
三、研究目标和预期成果本研究的主要目标是探究表面活性剂石油烃降解菌降解石油污染物的机制和途径，为石油污染治理和环保提供理论和技术支持。
具体预期成果如下：1. 筛选出具有较强石油烃降解能力的表面活性剂石油烃降解菌；2. 探究表面活性剂石油烃降解菌降解石油污染物的机理和途径，深入了解表面活性剂对石油烃降解的促进作用；3. 构建石油污染物降解静态实验系统，测定表面活性剂石油烃降解菌的降解速率、代谢产物和微生物活性等参数；4. 研究表面活性剂石油烃降解菌在石油污染治理方面的应用前景。
四、研究方法和技术路线本研究将采取以下方法和技术路线：1. 建立石油烃降解微生物的筛选和鉴定方法，通过宏基因组学、16S rRNA测序等技术鉴定表面活性剂石油烃降解菌，并进行其功能和代谢特征分析。
石油降解菌
从海水样品中分离筛选石油降解菌的方案姓名：撒楠专业：生物工程班级：093学号：15海洋石油降解菌1、2、技术路线：⑴在被污染的海水中采集样品。
⑵筛选分离。
⑶培养纯化。
⑷进行菌株的相关检测。
3、4、样品采集：从石油污染水体中分离石油降解菌（原因：被石油污染的的水体含有的石油降解菌量比较数量多、种类也比较丰富、便于分离出比较纯的菌落。
）5、6、培养基成分：①人工海水培养基( MMC) [ 6] ：NaCl 24 g, KCl 0.7g，MgSO4 •7 H2O 0.7 g，NH4NO3 1 g，KH2PO4 2 g，Na2HPO4•12H2O 3 g，蒸馏水1 L，pH 7.4，121 ℃湿热灭菌20 min。
然后补加经0.22μm 滤膜过滤除菌的微量元素混合液2% ( 体积分数) ，并补加经0.45 μm滤膜过滤除菌的石油，使石油占总培养液体积的1.0%[即ψ( 石油) 为1.0%]，并以此作为唯一碳源.配制固体培养基加20 g 琼脂。
②海水培养基:NH4NO3 1 g，K2HPO4 •3H2O 1 g，陈海水1 L，ψ( 石油)1.0%，自然pH。
③基础无机盐培养基: NaCl 5 g，MgSO4 0.1 g，NaNO3 2 g，(NH4 ) 2SO4 1 g，KH2PO4 4 g，K2HPO4 •3H2O10 g，蒸馏水1 L，pH 7.0~ 7.2。
④微量元素液:MgSO4 •7H2O 4 g，CuSO4•5H2O 1 g，MnSO4 •H2O 1 g，FeSO4 •7H2O 1 g，CaCl2 1 g，蒸馏水1 L。
7、8、培养条件：以人工海水培养基( MMC) 为基础, 改变N 源[NH4NO3, ( NH4 ) 2SO4 , CO( NH2 ) 2和KNO3 ]，氮磷比[固定ρ( P) 为110 mg∕L, 改变ρ( N) ，使其分别为110、220、350、440 和660 mg∕L]，摇床转速( 90、120、150、180、200 和220 r∕min ) 及培养基中石油浓度[ψ( 石油) 分别为0.5%、1.0% 、1.5%、2.0% 和3.0%]，控制温度28 ℃，在恒温摇床上进行振荡培养，连续培养一定时间。
石油降解菌的分离
引言随着经济技术的迅速发展，石油日渐成为我过的主要能源，且需求量日益增大。
研究表明，石油生产和运输环节会对土壤造成严重污染，且污染面积不断扩大。
目前，我国石油行业每年产生的含油污泥多大八十万吨。
由于石油的粘度大、粘滞性强，会再短时间内形成小范围的高浓度污染，长期的石油污染还会影响土壤的通透性，减少土壤肥力，阻碍植物生长。
同时，石油中所含的多环芳香烃具有“三致”效应，一些挥发组分能引起人体麻醉、窒息和化学性肺炎等疾病。
因此，石油污染对土壤生态系统的平衡和人体健康都有很大的危害。
目前，针对石油污染治理的方法主要包括：物理方法、化学方法以及生物修复法，但物理方法修复费用较高，耗材较多：化学方法会使用大量化学淋洗剂，很容易造成二次污染。
相较而言，微生物修复技术由于生产费用低、不产生二次污染等特点而被视为一项最具有应用前景的修复技术。
而且随着分子生物学的发展，无论是DNA文库的建立，还是多态性分析方法的进步，都为污染物的生物修复提供了全新的技术支持。
既然生物修复法有诸多优点，那么就应该充分发挥其特性。
本文则是着眼于环境样品，分离筛选其中的石油降解菌，以扩大培养进行更大规模的石油降解。
摘要在长期被石油污染的土壤中，微生物可逐渐改变自身的代谢条件以适应环境。
即以石油烃为碳源进行生长、繁殖，同时将石油烃降解。
因此在这种土壤中存在着可降解石油烃的微生物，但石油烃降解菌的筛选、分离是生物法处理石油污染的关键。
从这个角度考虑，以长期石油污染的土壤中微生物为菌源，从中筛选、分离出高效的石油烃降解菌。
要降解哪里的石油就用哪里的土壤培养石油降解菌。
目前，国内对极端条件下石油降解微生物研究较少，尤其是对低温、耐盐的石油降解菌，中国北方的大部分湿地，盐碱程度比较高，成年气温较低。
无论是来源于海上还是来源于石油化工的污染都比较严重。
本文针对大连开发区因石油泄露而被污染的白石湾，就地选取材料进行石油降解菌的筛选以及分离研究。
一、技术路线生物修复是指利用生物的代谢活动催化降解偶记污染物，从而去除或消除环境污染的一个受控或自动进行的过程。
生物表面活性剂产生菌的筛选及表面活性剂稳定性研究_牛明芬
生物表面活性剂产生菌的筛选及表面活性剂稳定性研究*牛明芬1,2李凤梅2韩晓日1郭书海2**牛之欣2 冷延慧2 张春桂2(1沈阳农业大学土地与环境学院,沈阳110161;2中国科学院沈阳应用生态研究所,沈阳110016)摘 要 大庆油田油泥样品经富集培养,平板分离,获得52株菌。
排油性实验和表面张力测定表明,菌株B 22、B 24、B 25产生的表面活性剂表面活性稳定,表面张力较低。
温度、pH 和N aCl 浓度实验证实,细菌B 22产生的生物表面活性剂可耐受120 高温,另2种生物表面活性剂可耐受80 ;3种细菌生物表面活性剂对pH 有广泛适应性,B 22pH 适应范围为4 0~13 0,B 24、B 25的pH 适应范围为2 0~13 0;Na Cl 浓度对表面活性剂的生物活性影响不大。
将3株菌的生物表面活性剂用于室内油泥处理实验,72h 石油去除率达70%以上。
关键词 表面张力,生物表面活性剂,油泥处理中图分类号 Q935 文献标识码 A 文章编号 1000-4890(2005)06-0631-04Isolation of biosurfactant producing microorganisms and their stability.N IU M ingfen 1,2,L I Feng mei 2,HAN X iaori 1,G UO Shuhai 2,N IU Zhix in 2,L EN G Yanhui 2,ZHAN G Chungui 2((1College of L and and Env ir on ment,S heny ang A gricultural U niver sity ,Shenyang 110016,China;2I nstitute of A p plied Ecology ,Chinese A cademy of Sciences ,Shenyang 110016,China).Chinese Jour nal of Ecology ,2005,24(6):631~634.52biosurfactant producing microo rganisms were isolated with the methods of enrichment culture and plate cultivation fro m o il sludge of Daqing Oil Field.Experiments of oil displacement activity and surface tension show ed that the three strains (including B 22,B 24and B 25)had high surface activity and lo w surface tension.T he analysis of physico chemical properties indicated that the biosurfactant produced by B 22could bear high temperatur e up to 120 ,while the ot her two could bear 80 .T he three biosur factants had a wide adapt ability to pH.B 22had a w ide adaptable pH rang e of 4.0~13.0,while that o f B 24and B 25was 2.0~13.0.Na Cl co ncentration had no obv ious effect on the biological activ ity of the biosurfactants.Employing the 3strains biosurfactants to treat oil sludge,more than 70%of the oil was removed after 72h.Key words sur face tension,biosur factants,oil sludg e.*国家重点基础研究发展规划项目(2004CB418500)、国家高技术研究发展计划前沿探索课题(2004AA649060)和中国科学院沈阳应用生态研究所知识创新工程资助项目(SLYQY0401)。
高效智能石油降解菌剂的研制及产业化项目
高效智能石油降解菌剂的研制及产业化项目一、引言石油污染是当前全球环境面临的重要问题之一，传统的石油污染处理方法效率低下且成本较高。
为了解决这一问题，研发高效智能石油降解菌剂成为一种重要的技术手段。
本文将介绍高效智能石油降解菌剂的研制及产业化项目的相关内容。
二、研制目标高效智能石油降解菌剂的研制目标是开发一种能够高效分解石油污染物的微生物菌剂，具备以下特点：具有高降解效率、广泛适应性、快速生长繁殖能力以及对环境友好等特点。
三、研发过程1. 菌株筛选：通过采集不同环境中的样品，利用分子生物学技术和生理生化方法筛选出具有高石油降解能力的菌株。
2. 菌株培养：对筛选出的菌株进行培养，优化培养条件，提高菌株的生长速度和繁殖能力。
3. 遗传改良：通过遗传工程技术对菌株进行改良，提高其石油降解效率和抗逆能力。
4. 菌剂制备：将优化后的菌株进行大规模培养和提取，制备成石油降解菌剂。
5. 降解效果评估：利用室内和野外模拟实验评估石油降解菌剂的降解效果和稳定性。
6. 安全性评估：对石油降解菌剂进行安全性评估，确保其在使用过程中不对环境和人体造成危害。
7. 产业化推广：将研发的高效智能石油降解菌剂进行产业化推广，建立生产线并进行市场推广。
四、研发关键技术1. 菌株筛选技术：利用分子生物学技术和生理生化方法筛选具有高石油降解能力的菌株。
2. 培养优化技术：通过调节培养基组成、培养条件等因素，提高菌株的生长速度和繁殖能力。
3. 遗传改良技术：利用遗传工程技术对菌株进行改良，提高石油降解效率和抗逆能力。
4. 菌剂制备技术：将优化后的菌株进行大规模培养和提取，制备成石油降解菌剂。
5. 降解效果评估技术：利用室内和野外模拟实验评估石油降解菌剂的降解效果和稳定性。
6. 安全性评估技术：对石油降解菌剂进行安全性评估，确保其在使用过程中不对环境和人体造成危害。
7. 产业化推广技术：建立生产线并进行市场推广，实现研发成果的产业化。
五、项目应用前景高效智能石油降解菌剂的研制及产业化项目具有广阔的应用前景。
含油废水处理中石油降解菌的筛选及其降解条件优化
含油废水处理中石油降解菌的筛选及其降解条件优化郭倩瑜;张建民;李蓉蓉【摘要】为筛选出高效含油废水降油菌,更好地利用生化法治理含油废水,从咸阳市中国石油长庆石化公司污水处理站采取水样,经过菌种的驯化、分离纯化得到17株石油降解菌,其中细菌13株,其余为放线菌或霉菌.经过30℃、180±2r/min恒温摇床振荡培养7d后筛选出2株优势石油降解菌:GA-4菌为芽孢杆菌属(Bacillus sp.)、GA-6菌为不动杆菌属(Acinetobacter sp.).在油浓度为2g/L时降油效果最好,GA-4菌与GA-6菌的降油率分别为41.18％,34.82％.GA-4菌与GA-6菌的最优降解条件分别为:30℃,pH为8.0,接种量为5％;28℃,pH为7.5,接种量为5％.【期刊名称】《纺织高校基础科学学报》【年(卷),期】2016(029)002【总页数】6页(P269-274)【关键词】石油化工废水;降油菌;降油率;生化处理【作者】郭倩瑜;张建民;李蓉蓉【作者单位】西安工程大学环境与化学工程学院,陕西西安710048;西安工程大学环境与化学工程学院,陕西西安710048;西安工程大学环境与化学工程学院,陕西西安710048【正文语种】中文【中图分类】X172众所周知,石油是当今现代化工业生产中最重要的自然资源之一,且在未来几十年内依然是最主要的能源以及化工原料[1].近些年,石油的大量开采及其化工产品的生产应用,给人类带来了严重的环境污染和生态破坏.目前，石化废水的处理方法主要有物理法(吸附法、气浮法、膜滤法)、化学法(电絮凝、湿式氧化法、电解氧化法、臭氧催化氧化法)及生物法(好氧法、厌氧法)[2].而生物法具有降解效果好、人力物力投入小、无二次污染等优点，且处理费用明显低于物化法，目前普遍应用于石化废水处理[3].早在1978年,中国科学院对石油污染区域的降油微生物就进行了研究,并分离得到126株细菌和71株真菌,其中60%的细菌菌株和89%的真菌菌株具有脂酶活性[4].目前已发现约有100余属200多种微生物可以降解石油烃类,包括细菌、真菌、放线菌及藻类,其中细菌、真菌对石油的降解效果较好.由于降油细菌的数量庞大,在实际应用中主要以细菌类为主[5-7].如何提高菌株的降油率已成为生化法治理石油废水的研究热点.黄敏刚等[8]分别从新疆油田、大庆油田含油污水中分离得到2株高效石油降解菌,并对混合菌的降解效果及影响因素进行了探讨.梁生康等[9]分析了单菌株和混合菌株的降油率情况以及不同含油量对其降油率的影响，并通过模拟实验考察混合降油菌对胜利油田孤岛采油废水处理效果.史利荣等[10]对石油化工废水处理中活性污泥的微生物菌群及其降解效果进行了研究，结果表明不动杆菌属为活性污泥中的最优势菌属，芽孢杆菌属次之，且均具有较好的降解效果.本文从中国石油长庆石化公司污水处理站采集水样，对菌种进行驯化、分离纯化，筛选出优势菌种并对菌种鉴定到属.通过研究培养时间、含油量、pH、接种量及温度对降油率的影响，得出优势菌种的最优降解条件.咸阳市中国石油长庆石化公司污水处理站的处理能力为370m3/h,废水来源为工业废水和厂区内生活污水.根据《水和废水监测分析方法》(第四版)中水样的采集与保存方法采集水样，原油由该站提供，菌种取自该站曝气池及隔油池,用500mL的清洁无菌玻璃瓶采集活性污泥泥水混合液及污水水样[11].1.1 培养基(1) 无机盐培养基(原油为唯一碳源) 原油,K2HPO4 2.0g,KH2PO41.5g,NH4NO32.0g,无水Na2SO4 0.5g,微量元素液10mL,蒸馏水1 000mL,pH值7.0～7.4,121℃高压蒸汽灭菌20min备用;固体培养基再加入15～18g琼脂.其中，微量元素液组分为MgSO4·7H2O 2g,无水CaCl2 1g,FeSO4·7H2O 1g,ZnSO4·7H2O0.5g,CuSO4·5H2O 0.1g,蒸馏水1 000mL．(2) 富集、纯化培养基NaCl 5g,牛肉膏3g,蛋白胨10g,蒸馏水1 000mL, pH值7.0～7.4,121℃高压蒸汽灭菌20min备用;固体培养基再加入15～18g琼脂.1.2 菌种的驯化、分离纯化和鉴定取2mL泥水混合液/污水水样于100mL灭菌原油无机盐培养基(原油质量浓度为1g/L)中,30℃，180±2r/min摇床振荡培养8d后取2mL上述培养液于新鲜的原油培养基(原油质量浓度逐次增加为:2，3，4g/L)中再次培养8d,如此驯化4次.通过不断提高初始含油量来强化菌株的降解性能.取每次驯化后的菌悬液1mL在无基盐固体培养基上做稀释平板,30℃培养箱中培养3～5d后从上述培养皿中挑取生长良好的不同的单菌落,在纯化培养基上反复划线,直到得到单一菌种为止.最终分离得到2株优势石油降解细菌.通过查阅《常见细菌系统鉴定手册》[12]并利用16S rDNA基因序列法鉴定菌种，得到GA-4为芽孢杆菌属(Bacillus sp.),GA-6为不动杆菌属(Acinetobacter sp.). 2.1 确定石油醚溶液标准曲线方程将原油配制成70mg/L的石油醚溶液,以溶剂石油醚为空白样进行光谱扫描,绘制扫描光谱曲线如图1.由图1可知原油溶液有两个吸收峰:224nm和242nm.由于在波长224nm处溶剂对吸光度有一定的干扰,吸光值无法趋于稳定,而在波长242nm处吸光值保持稳定,所以最适测定波长选为242nm.采用紫外分光光度法测定降油率[13],以石油醚为溶剂将原油配成质量浓度分别为0，10，20，30，40，50，60，70mg/L的溶液，以石油醚为空白对照，在波长242nm处测定各溶液的吸光度值分别为0，0.179,0.344,0.52,0.681,0.853,1.022,1.227.得出油含量-吸光度值曲线方程:y=0.017 3x-0.000 6,R2=0.999 4.2.2 制备菌悬液将纯化好的各菌种挑取一环分别接种到35mL灭菌富集培养基中,30℃，180±2r/min摇床振荡培养,根据菌种的生长曲线来确定菌剂的培养时间,一般选用对数期末期作为菌剂培养时间,此时细菌的菌体量趋于最大且代谢活力较强[14]. 将菌悬液离心分离后得到菌体,在无菌条件下用无机盐培养液将菌体调为同一吸光度值的种子菌液.2.3 菌种降油率的测定取种子菌液1.5mL加入到50mL原油无机盐培养基中,以不加菌的摇瓶做为空白对照,30℃，180±2r/min摇床振荡培养7d.之后加入石油醚对残余石油进行萃取，每次加入量为10mL,共萃取3次，随后将萃取液混合.采用高速离心法将萃取液在5 000r/min条件下将石油醚溶液和水分离,以去除萃取液中残余水分.用石油醚将各组萃取液调为同一容量体积,取1mL萃取液加入到50mL比色管中,加石油醚到刻度线并充分摇匀.以石油醚作为对照,在波长242nm下测定吸光度，对照标准曲线求出各菌株的石油降解率.计算公式为式中，η为降油率(%),c0为空白摇瓶中剩余石油含量(g/L),cx为各摇瓶中剩余石油含量(g/L).3.1 菌株的生长曲线在富集培养基中分别接种一环GA-4菌、GA-6菌,30℃、180±2r/min摇床振荡培养,每隔一段时间测定菌剂的OD600值(溶液在600nm波长处的吸光值),利用菌体的吸光度来反应细菌培养液的浓度,见图2.由图2可知GA-4菌、GA-6菌分别在45h,15h达到对数期末期,所以分别选取此时作为种子菌液的培养时间.3.2 培养时间和含油量对降油率的影响经过7d摇床振荡培养后，测定不同培养时间和不同含油量条件下的降油率.由图3可知,随着培养时间的延长菌体对原油的降油率也在不断增加,同时GA-4菌、GA-6菌的降油速度随时间延长而逐渐减慢.当初始含油量为2g/L时,GA-4菌、GA-6菌的降油效果最好,7d的降油率分别为41.18%,34.82%;而当初始含油量≥2g/L时，GA-4菌、GA-6菌的降油率则随着油浓度的增加而降低:说明当初始含油率浓度大于2g/L时，随初始含油率浓度的增加，菌体的降油率不断减小.可见高浓度的石油烃对微生物的代谢生长有抑制作用,而少量的石油污染物反而会刺激降油微生物的生长[15].3.3 降解液pH对降油率的影响微生物对石油废水处理的最适pH值通常为中性7.0左右,也有相关文献报道很多石油烃降解菌的最适pH值偏弱碱性,略大于7.0[16].调节无机盐培养基(含油量为2g/L)的pH值分别为6.0,7.0,8.0,9.0,摇床振荡培养7d后测定不同pH值下的降油率.由图4可知,GA-4菌、GA-6菌的最适pH值分别为8.0，7.5.此时的降油效果最好,降油率分别为44.3%，36.8%.当pH值过高或过低时,溶液中H+或OH-浓度过高,引起微生物原生质膜的电荷变化,从而降低了微生物酶的催化反应和对营养物质的吸收,最终抑制了菌体的生长繁殖,使降解率变低[17].3.4 菌体接种量对降油率的影响将体积浓度分别为1%,2%,3%,4%,5%,6%的GA-4菌与GA-6菌加入无机盐培养基(含油量为2g/L)中,摇床振荡培养后测定不同接种量条件下的降油率.由图5可知当接种量小于5%时,随着菌体接种量的增加降油率也在不断增加;当GA-4菌、GA-6菌的接种量大于5%时,菌体的降油率随着接种量的增加开始降低,所以GA-4菌、GA-6菌的最优接种量为5%.3.5 降解温度对降油率的影响一般情况下,微生物的合适降解温度在20℃～30℃之间,在此范围内对石油烃的降解效果随着温度的提高而增大.温度过高或过低均会降低降解效果.合适的环境温度可以促进微生物体内酶促反应的快速运行,同时,温度决定了石油的物理状态,从而影响到微生物与石油碳氧化合物分子之间的相互作用,进而影响了生物降解速率.将GA-4菌、GA-6菌加入无机盐培养基(含油量为2g/L)中.摇床振荡培养7d,温度条件为15℃,20℃,25℃,30℃,35℃,测定其降油率.从图6可知GA-4菌、GA-6菌的最适降解温度分别为30℃，28℃.当温度小于30℃时,降油率随温度的升高增大;当温度大于30℃时,降油率随温度的升高有所减小.可能是因为随着温度的升高,水中溶解氧浓度降低,从而抑制了菌体的新陈代谢,使降油率变低.3.6 降解前后对照以不加菌的原油无机盐培养基摇瓶为对照样.对比可以看出，GA-4菌、GA-6菌摇瓶中菌液由原来的无色透明液体变为乳黄色,说明摇瓶中的菌体浓度增大;摇瓶中的原油量减少,已无油颗粒存在,乳化效果很好,原油降解效果明显.(1) 通过菌种的初筛、复筛分离得到2株优势降油菌,经初步鉴定GA-4菌为芽孢杆菌属(Bacillus sp.),GA-6菌为不动杆菌属(Acinetobacter sp.).(2) 对GA-4菌、GA-6菌进行降解条件优化,GA-4菌、GA-6菌的最优化降解条件分别为:30℃,pH为8.0,接种量为5%;28℃,pH为7.5,接种量为5%.(3) 与不加菌的摇瓶对照比较,GA-4菌、GA-6菌摇瓶中菌液由无色透明液体变为了乳黄色,摇瓶中的原油量明显减少,已无油颗粒存在,原油降解效果明显.【相关文献】[1] ZHANG Shujing.On problems in rare earth exports of China and counter measures[J].International Business and Management,2013,6(1):21-25.[2] 朱亦仁.环境污染治理技术[M].北京:中国环境科学出版社,1996: 76-90.ZHU Yiren.Environmental pollution treatment technology[M].Beijing:China Environmental 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Ｔ ｅ ｃ ｈ ｎ ｉ ｃ ａ ｌ Ｃｏ ｌ ｌ ｅ ｇ ｅ ，
Ｐ ｕ ｙ ａ ｎ ｇ ，
Ｈｅ ｎ ａ ｎ
唯 一碳 源 ， 经富集培养 ， 从 石油污 染土壤 中分 离到 １ ２ 株 茵； 通 过测定 茵株 的溶血 活性、 排油
石 油 又称 原 油 ，对石油 烃的
ａ ｃ ｔ ｉ ｖ ｉ ｔ ｙ ， ｅ ｍｕ ｌ ｓ ｉ ｏ ｎ ｉ ｎ ｄ ｅ ｘ ａ ｎ ｄ ｓ ｕ ｒ ｆ ａ ｃ ｅ ｔ ｅ ｎ — ｓ ｉ ｏ ｎ ，ａ ｎ ｄ ｔ ｈｅ ｙ ｗｅ ｒｅ ｉ ｄ ｅ ｎ ｔ ｉ ｉｅ ｆ ｄ ｂ ａ ｓ ｅ ｄ ｏ ｎ ｈｅ ｔ ｉ ｒ ｍｏ ｒ ｐ ｈ ｏ ｌ ｏ ｇ ｉ ｃ ａ ｌ ，ｐ ｈ ｙ ｓ ｉ ｏ ｌ ｏ ｇ ｉ ｃ ａ ｌ ａ ｎ ｄ ｂ ｉ ｏ ｃ ｈ ｅ ｍｉ ｃ ａ ｌ ｃ ｈ ａ ｒ ａ ｃ ｔ ｅ ｉｓ ｒ ｔ ｉ ｃ ｓ ．Ｆ ｉ ｎ ａ ｌ ｌ ｙ ．ｔ ｈｅ
中图分 类号 Ｓ １ ８ １ ． ３
ｄ ｕ ｃ ｅ ｂ ｉ ｏ ｓ ｕ ｒ ｆ ａ ｃ ｔ ａ ｎ ｔ ａ ｎ ｄ ｅ ｍｕ ｌ ｓ ｉ ｆ ｙ ｔ ｈ ｅ ｃ ｒ ｕ ｄ ｅ ｏ ｉ ｌ ｗｅ ｒ ｅ ｓ ｃ ｒ ｅ ｅ ｎ ｅ ｄ ａ ｃ ｃ ｏ ｒ ｄ ｉ ｎ ｇ ｔ ｏ ｔ ｈ ｅ ｉ ｒ ｈ ｅ ｍｏ ｌ ｙ ｔ ｉ ｃ ａ ｃ ｔ ｉ ｖ ｉ ｔ ｙ ． ｏ ｉ ｌ ｄ ｉ ｓ ｐ ｌ ａ ｃ ｅ ｍｅ ｎ ｔ
活性 、 乳化指数 和表 面张力 ， 筛选 出具有较 强的表 面活性剂 产生能力和 乳化 原油能 力的 菌
株， 并对其形态特征和 生理生化特性进行研 究 ； 再将这 几株 茵按不 同比例组合 构建茵群 ， 研
４ ５ ７ ０ ０ ０）
Ａ ｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ［ Ｏ ｂ ｊ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ ］ Ｔ ｈ ｅ ｓ ｔ ｕ ｄ ｙ ａ ｉ ｍｅ ｄ
农 业 灾 害研 究 ２ ０ １ ３。 ３ （ ０ ６） ： ４ ９ — ５ １
ｒ ｅ ｅ ｎ ｉ ｎ ｇ ｏ ｆ Ｐ ｅ ｔ ｒ ｏ ｌ ｅ ｕｍ － 产 生物 表面 活性 剂石 油 降解 菌 的筛 选及 高效 Ｓｃ ｄｅ ｇ ｒ ａ ｄ ｉ ｎｇ Ｂａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ａ Ｐ ｒ ｏ － 降解菌群 的构建
群 ６降解 效果最佳 ， 石 油降解率 高达 ７ ８ ． １ ６ ％， 该 茵群 在石 油污染土壤 的生物修 复 中具有一
定的开发潜力 。［ 结论】 该研究为石油污染土壤的生物修复提供 了理论基础 。 关键词 生物表面活性剂 ； 石油 降解 茵； 筛选 与鉴 定； 茵群构 建 文献标识码 Ａ 文章编号 ２ ０ ９ ５ — ３ ３ ０ ５ （ ２ ０ １ ３） ０ ６ — ０ ４ ９ — ０ ３
８为 芽孢杆 菌属（ Ｂ ａ ｃ ｉ ｌ ｌ ｕ ｓ ｓ ｐ ． ） ； 菌株 Ｂ Ｓ 一 ２ 、 Ｂ Ｓ 一 ５ 、 Ｂ Ｓ 一 ８ 、 Ｂ Ｓ 一 １ ２以 ２ ： ３ ： ３ ： ２比例 组合构 建的菌
ｃ ｏ ｍｍｕ ｎ ｉ ｔ ｙ ｃ ｏ ｎ ｓ ｔ ｒ ｕ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ＿ 【 Ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ］ Ｗｉ ｔ ｈ
ｄｕ ｃ ｉ ｎｇ Ｂｉ ｏ ｓ ｕ ｒ ｆ ａ ｃ ｔ ａ ｎ ｔ ａ ｎ ｄ Ｃｏｍ ｍ ｕ ｎｉ ｔ ｙ Ｃｏｎ ｓ ｔ ｒ ｕ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ
Ｘ Ｉ Ａ Ｔ ｉ ｅ － ｑ ｉ ｅ ｔ ａ ｌ （ Ｄｅ ｐ ａ ｒ ｔ ｍｅ ｎ ｔ ｏ ｆ Ｂ ｉ ｏ ｌ ｏ ｇ －
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究其石 油降解能力。ｆ 结果］ 茵株 Ｂ ｓ 一 ２ 、 Ｂ ｓ 一 ５ 、 Ｂ Ｓ 一 ８ 、 Ｂ Ｓ 一 １ ２具有较 强的表 面活性剂产生能 力 和乳化原 油能力 ， 初步确 定 Ｂ Ｓ 一 ２和 Ｂ Ｓ 一 １ ２ 为假 单胞茵属（ Ｐ ｓ ｅ ｕ ｄ ｏ ｍ ｏ ｎ ａ ｓ ｓ ｐ ． ） ， Ｂ ｓ 一 ５和 Ｂ ｓ 一
ｃ ｒ ｕ ｄ ｅ ｏ ｉ ｌ ｆ ｒ ｏ ｍ Ｚ ｈ ｏ ｎ ｇ ｙ ｕ ａ ｎ Ｏｉ ｌ ｉｅ ｆ ｌ ｄ ａ ｓ ｔ ｈ ｅ ｓ ｏ ｌ ｅ ｃ ａ ｒ ｂ ｏ ｎ ｓ ｏ ｕ ｒ ｃ ｅ ，１ ２ ｓ ｔ ｒ ａ ｉ ｎ ｓ ｗｅ ｒ ｅ ｉ Ｓ Ｏ － ｌ ａ ｔ ｅ ｄ ｆ ｒ ｏ ｍ ｔ ｈ ｅ ｐ ｅ ｒｏ ｔ ｌ ｅ ｕ ｍ— ｃ ｏ ｎ ｔ ａ ｍｉ ｎ ａ ｔ ｅ ｄ
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夏铁骑 ， 常 慧萍 ， 张建清 。
１ ． 濮阳职业技 术学院 生物 工程 系， 河南濮 阳 ４ ５ ７ ０ ０ ０ ； ２ ． 河 南教 育学院生命 科学 系， 河南郑 州 ４ ５ ０ ０ ４ ６ ； ３ ． 罗山县第二 高级 中学， 河 南罗山 ４ ６ ４ ２ ０ ０