紫外分光光度法标准操作规程 313-248
紫外分光光度法检测要求
紫外分光光度法检测规程目的:5.程序：5.1. 定义：紫外分光光度法是通过被测物质在紫外光区或可见光区的特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析的方法，本法在药品检验中主要用于药品的鉴别、检查和含量测定。
5.1.1. 定量分析通常选择在物质的最大吸收波长处测出吸收度，然后用对照品或百分吸收系数求算出被测物质的含量，多用于制剂的含量测定。
5.1.2. 对已知物质定性可用吸收峰波长或吸收度比值作为鉴别方法；若化合物本身在紫外光区无吸收，而杂质在紫外光区有相当强度的吸收，或在杂质的吸收峰处化合物无吸收，则可用本法作杂质检查。
5.2. 原理：物质对紫外辐射的吸收是由于分子中原子的外层电子跃迁所产生的，因此，紫外吸收主要决定于分子的电子结构，故紫外光谱又称电子光谱。
有机化合物分子结构中如含有共轭体系、芳香环或发色基团，均可在近紫外区(200-400nm)或可见光区(400-85Onm)产生吸收。
通常使用的紫外分光光度计的工作波长范围为190—900nm,因此又称紫外一可见分光光度计。
紫外吸收光谱为物质对紫外区辐射的能量吸收图。
朗伯•比耳(lambert—Beer)定律为光的吸收定律，它是紫外分光光度法定量分析的依据，其数学表达式为：1A=lg — =ECL式中：A为吸收度T为透光率E为吸收系数C为溶液浓度L为光路长度如溶液的浓度(C)为1% (g/ml )，光路长度(L)为1cm，相应的吸收系数为百分吸收系数，以E；］表示。
若溶液的浓度(C)为摩尔浓度(mol/L)，光路长度为1cm时，则相应吸收系数为摩尔吸收系数，以£来表示。
5.3. 仪器：5.3.1. 紫外分光光度计主要由光源、单色器、样品室、检测器、记录仪、显示系统和数据处理系统等部分组成。
5.3.2. 为了满足紫外—可见光区全波长范围的测定，仪器备有二种光源，即氘灯和碘钨灯，前者用于紫外区，后者用于可见光区。
5.3.3. 单色器通常由进光狭缝、出光狭缝、平行光装置、色散元件、聚焦透镜或反射镜等组成，色散元件有棱镜和光栅二种，棱镜多用天然石英或熔融硅石制成，对200—400nm 波长光的色散能力很强，对600nm 以上波长的光色散能力较差，棱镜色散所得的光谱为非匀排光谱。
紫外分光光度法的使用流程
紫外分光光度法的使用流程概述紫外分光光度法是一种常用的分析测试方法，常用于测量物质在紫外光区域的吸光度。
本文档介绍了紫外分光光度法的使用流程，包括仪器准备、样品处理、操作步骤和结果分析等方面的内容。
仪器准备在使用紫外分光光度法之前，需要准备以下仪器：•紫外分光光度计：用于测量样品在紫外光区域的吸光度。
•常规实验室用具：如移液器、容量瓶、比色皿等。
样品处理在进行紫外分光光度法实验前，需要对样品进行处理：1.样品制备：根据实验要求，准备需要测量吸光度的样品。
样品可以是溶液、药物片剂或悬浮液等。
2.样品处理：根据实验需求，对样品进行必要的处理。
例如，可以使用溶解剂将药物片剂溶解成溶液。
操作步骤在进行紫外分光光度法实验时，需要按照以下步骤进行：1.打开紫外分光光度计：按照仪器说明书的操作步骤，正确打开紫外分光光度计。
2.设置实验条件：根据实验要求，设置紫外分光光度计的参数，例如波长范围、光强度等。
3.校准仪器：根据实验要求，进行仪器的校准操作，以确保测量结果的准确性。
4.测量基线：使用纯溶剂进行基线测量，以排除仪器和溶剂的吸光度对测量结果的影响。
5.测量样品：将处理好的样品放入比色皿中，将比色皿放入光度计中进行测量。
记录下样品的吸光度值。
6.处理数据：将测得的吸光度值进行计算和处理，得出最终的测试结果。
7.清洗仪器：实验结束后，将仪器清洗干净，以保证下次使用的准确性。
结果分析在紫外分光光度法实验结束后，需要对结果进行分析和解读：1.利用标准曲线：根据实验所采用的标准品，制作标准曲线。
通过比较样品的吸光度值和标准曲线上的对应值，可以计算出样品中目标物质的含量。
2.数据处理：根据实验要求，对测得的吸光度值进行计算和处理，例如计算吸光度差、相对浓度等。
3.结果解读：根据实验目的和需求，对结果进行解读和分析。
小结紫外分光光度法是一种重要的分析测试方法，可用于测量物质在紫外光区域的吸光度。
本文档介绍了紫外分光光度法的使用流程，包括仪器准备、样品处理、操作步骤和结果分析等方面的内容。
紫外分光光度计使用方法
紫外分光光度计使用方法
紫外分光光度计是一种用于测量样品紫外吸收特性的仪器。
以下是使用紫外分光光度计的步骤：
1. 准备工作：将紫外分光光度计放置在平稳的台面上，确保仪器平衡。
检查光度计的光源和检测器是否处于正常工作状态。
2. 校准：使用标准溶液校准光度计。
选择适当的标准溶液，并按照仪器使用说明书中的步骤进行校准。
3. 准备样品：根据需要，将待测样品制备成溶液或固体。
确保样品处于透明状态，以便紫外光可以透过。
4. 装载样品：打开仪器的样品室，将样品放置在适当的位置上，并关闭样品室。
确保样品与光束的路径在同一直线上。
5. 设定参数：根据样品的特性和所需的测量范围，设置光度计的相关参数。
例如，选择适当的波长范围、光程长度和检测器灵敏度等。
6. 开始测量：启动光度计，开始测量。
仪器将通过发射紫外光并测量透射或吸收的光强，得到样品的光谱图或吸光度值。
7. 记录和分析数据：根据测量结果，记录并分析数据。
可以使用仪器自带的软件或其他外部软件进行数据处理和分析。
8. 清洁和保养：测量完成后，及时清洁样品室和其他附件。
定
期进行仪器的维护和保养，以确保其正常工作。
请注意，具体使用方法和步骤可能会因不同的紫外分光光度计型号而有所不同。
建议在使用前详细阅读仪器的操作手册，并按照其指示进行操作。
紫外分光光度法检测规程
紫外分光光度法检测规程目的：建立用紫外分光光度法检测药品质量的标准操作规程，保证标准操作。
2.依据：《中华人民共和国药典》（2000年版二部）附录。
3.范围：本标准适用于用紫外分光光度法进行的检测。
4.职责：QC检验员对本标准的实施负责。
5.程序：5.1.定义：紫外分光光度法是通过被测物质在紫外光区的特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析的方法，本法在药品检验中主要用于药品的鉴别、检查和含量测定。
5.1.1.定量分析通常选择在物质的最大吸收波长处测出吸收度，然后用对照品或百分吸收系数求算出被测物质的含量，多用于制剂的含量测定。
5.1.2.对已知物质定性可用吸收峰波长或吸收度比值作为鉴别方法；若化合物本身在紫外光区无吸收，而杂质在紫外光区有相当强度的吸收，或在杂质的吸收峰处化合物无吸收，则可用本法作杂质检查。
5.2.原理：物质对紫外辐射的吸收，是由于分子中原子的外层电子跃迁所产生的，因此，紫外吸收主要决定于分子的电子结构，故紫外光谱又称电子光谱。
有机化合物分子结构中如含有共轭体系、芳香环或发色基团，均可在近紫外区（200-400nm）或可见光区（400-850nm）产生吸收。
通常使用的紫外分光光度计的工作波长范围为190—900nm，因此又称紫外—可见分光光度计。
紫外吸收光谱为物质对紫外区辐射的能量吸收图。
朗伯·比耳（lambert—Beer）定律为光的吸收定律，它是紫外分光光度法定量分析的依据，其数学表达式为：1A=lg=ECLT式中：A为吸收度T为透光率E为吸收系数C为溶液浓度L为光路长度若溶液的浓度（C）为1%（g/ml），光路长度（L）为1cm，相应的吸收系数为百分吸收１％系数，以E１表示。
若溶液的浓度（C）为摩尔浓度（mol/L），光路长度为1cm时，则相应ｃｍ吸收系数为摩尔吸收系数，以ε来表示。
5.3.仪器：5.3.1.紫外分光光度计主要由光源、单色器、样品室、检测器、记录仪、显示系统和数据处理系统等部分组成。
紫外分光光度计的操作流程以及环境要求
紫外分光光度计的操作流程以及环境要求下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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紫外分光操作规程
紫外分光操作规程
《紫外分光操作规程》
一、目的
本操作规程旨在规范紫外分光操作流程，确保实验数据的准确性和可靠性。
二、仪器准备
1. 打开紫外分光仪电源，保证仪器处于工作状态。
2. 检查仪器光路和光源是否正常，如有异常情况及时进行维护和调整。
三、样品准备
1. 根据实验要求准备样品溶液，确保溶液浓度适当。
2. 过滤样品溶液，避免杂质影响测量结果。
四、操作步骤
1. 将样品溶液注入样品池中，确保样品池干净并无气泡。
2. 选择合适的波长范围和扫描速度，进行基线调整。
3. 点击开始测量，记录实验数据。
五、实验数据处理
1. 绘制样品吸光度曲线，分析吸光峰和波长。
2. 根据实验要求计算样品的吸光度和浓度。
六、仪器维护
1. 实验结束后，清洗样品池和光路，保持仪器清洁。
2. 关闭仪器电源，注意安全操作。
七、注意事项
1. 避免直接接触紫外光线，使用紫外透明眼镜和手套。
2. 严格按照操作规程进行操作，避免误操作导致仪器损坏或实验数据失真。
通过严格按照《紫外分光操作规程》进行操作，可以确保紫外分光实验的顺利进行，得到准确可靠的实验数据。
紫外分光光度法检测规程
紫外分光光度法检测规程目的：建立用紫外分光光度法检测药品质量的标准操作规程，保证标准操作。
2.依据：《中华人民共和国药典》（2000年版二部）附录。
3.范围：本标准适用于用紫外分光光度法进行的检测。
4.职责：QC检验员对本标准的实施负责。
5.程序：5.1.定义：紫外分光光度法是通过被测物质在紫外光区的特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析的方法，本法在药品检验中主要用于药品的鉴别、检查和含量测定。
5.1.1.定量分析通常选择在物质的最大吸收波长处测出吸收度，然后用对照品或百分吸收系数求算出被测物质的含量，多用于制剂的含量测定。
5.1.2.对已知物质定性可用吸收峰波长或吸收度比值作为鉴别方法；若化合物本身在紫外光区无吸收，而杂质在紫外光区有相当强度的吸收，或在杂质的吸收峰处化合物无吸收，则可用本法作杂质检查。
5.2.原理：物质对紫外辐射的吸收，是由于分子中原子的外层电子跃迁所产生的，因此，紫外吸收主要决定于分子的电子结构，故紫外光谱又称电子光谱。
有机化合物分子结构中如含有共轭体系、芳香环或发色基团，均可在近紫外区（200-400nm）或可见光区（400-850nm）产生吸收。
通常使用的紫外分光光度计的工作波长范围为190—900nm，因此又称紫外—可见分光光度计。
紫外吸收光谱为物质对紫外区辐射的能量吸收图。
朗伯·比耳（lambert—Beer）定律为光的吸收定律，它是紫外分光光度法定量分析的依据，其数学表达式为：1A=lg=ECLT式中：A为吸收度T为透光率E为吸收系数C为溶液浓度L为光路长度若溶液的浓度（C）为1%（g/ml），光路长度（L）为1cm，相应的吸收系数为百分吸收１％系数，以E１表示。
若溶液的浓度（C）为摩尔浓度（mol/L），光路长度为1cm时，则相应ｃｍ吸收系数为摩尔吸收系数，以ε来表示。
5.3.仪器：5.3.1.紫外分光光度计主要由光源、单色器、样品室、检测器、记录仪、显示系统和数据处理系统等部分组成。
紫外-可见分光光度法标准操作程序
紫外分光光度法标准操作程序1．目的：建立紫外分光光度法标准操作程序，使紫外分光光度法操作规范化、标准化。
2．范围：适用于紫外分光光度法的检查或含量测定。
3．职责：质量管理部QC负责本规程的实施；质量管理部负责人负责本规程实施情况的监督。
4．规程4．1原理：通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内的光吸收度，对该物质进行鉴别检查或含量测定。
4．2仪器和设备：UV-1800型紫外可见分光光度计、干燥箱、电子天平（感量0.0001g）。
4．3 试液与试剂：基准重铬酸钾、0.005mol/L硫酸溶液。
4．4 仪器的校正和检定：4．4．1由于温度的变化对机械部分的影响，仪器的波长经常会略有变动，因此除应定期对所用的仪器进行全面校正检定外，还应于测定前校正测定波长。
常用汞灯中的较强谱线237.83nm，253.65nm，275.28nm，296.73nm,313.16nm，334.15nm，4．4．2 365.02nm，404.66nm，435.83 nm，546.07 nm，与576.96nm或用仪器中的氘灯的486.02 nm与656.10nm谱线进行校正，钬玻璃在279.4nm，287.5nm 333.7nm，306.9nm，418.5nm，460.0nm，484.5nm，536.2nm与637.5nm波长处有尖锐吸收峰,也可作波长校正用，但因来源不同会有微小的差，别，使用时应注意。
4．4．3吸收度的准确度可用重铬酸钾的硫酸溶液检定。
取在120℃干燥至恒重的基准重铬酸钾约60mg，精密称定，用0.005mol/L硫酸溶液溶解至1000ml,在规定的波长处测定并计算其吸收系数，并与规定的吸收系数比较，如下表，相对偏差应在±1%以内。
杂散光的检查可按下表的试剂和浓度，配制成水溶液，置1cm石英吸收池中，在规定的波长处测定透光率。
4．5对溶剂的要求：测定供试品前，应先检查所用的溶剂在供试品所用的波长附近是否符合要求，吸收盛溶剂，以空气为空白（即空白光路中不置任何物质）测定吸收度。
紫外可见分光光度计的基本操作
紫外可见分光光度法分类
目视比色法
光电比色法
紫外分光光度法
分光光度法
紫外可见分光光度法
可见分光光度法
比色分析法：利用比较待测溶液本身的颜色或加入试剂后呈现的颜色深浅来 测定溶液中待测物质的浓度的方法
按检测器不同分为目视比色法和光电比色法。 以人的眼睛来检测颜色深浅的方法称目视比色法； 以光电转换器为检测器来区别颜色深浅的方法称光电比色法； 根据物质对不同波长的单色光的吸收程度不同而对物质进行定性和定量分析的 方法称为分光光度法。
透射比正确度的检验
WK2Cr2O7 0.006000 % 的溶液的透射比
波长 /nm
235
257
313
350
温度 /℃
25
18.2
13.7
51.3
22.9
以0.001mol.L-1HClO4为参比，以1cm的石英比色皿做吸收 池，分别在235、257、313、350波长处测定相应溶液的透 射比。
单色器主要由狭缝、色散元件 和透镜系统组成。 ➢ 色散元件是棱镜和反射光栅的组合 ➢ 狭缝和透镜系统控制光的方向 棱镜单色器 ➢ 利用不同波长的光在棱镜内折射 率不同将复合光色散为单色光。
光栅单色器 ➢ 一系列等宽、等距离的平行狭缝 ➢ 以光的衍射现象和干涉现象为基础（平面反射光栅和平面凹面光栅）
朗伯定律
光的吸收程度与光程长的关系？
比尔定律
光的吸收程度与浓度的关系？
光吸收定律（定量分析）
光吸收定律 ：
A lg 0 lg 1 Kbc
tr
几个概念：
入射光通量、透射光通量、透射比、吸光度、比例常数
成立的条件： ➢ 一是必须使用单色光 ➢ 二是吸收发生在均匀的介质 ➢ 三是吸收过程中，吸收物质互相不发生作用
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标准操作规程
文件名称：紫外分光光度法标准操作规程 起草： 文件编号：
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颁发部门：中心化验室 批准： 审核日期： 年 月 日
变更原因及内容： 标准更新版本 复印号： 共3页 批准日期： 年 月 日
版本：2 第1页 修订日期： 年 月 日
校对： 执行日期： 年 月 日 发布日期： 年 月 日
内容：紫外分光光度法
仪器的校正和检定
1.波长 由于环境因素对机械部分的影响，仪器的波长经常会略有变动，因此
除应定期对所用的仪器进行全面校正检定外，还应于测定前校正测定波长。常用汞
灯中的较强谱线237.83nm，253.65nm，275.28nm，296.73nm，313.16nm，
334.15nm，365.02nm，404.66nm，435.83nm，546.07nm 与576.96nm；或用仪
器中氘灯的486.02nm 与656.10nm 谱线进行校正；钬玻璃在波长279.4nm，
287.5nm，333.7nm，360.9nm，418.5nm，460.0nm，484.5nm，536.2nm 与637.5nm
处有尖锐吸收峰，也可作波长校正用，但因来源不同或随着时间的推移会有微小的
变化，使用时应注意；近年来，常使用高氯酸钬溶液校正双光束仪器，以10％的高
氯酸为溶剂，配制含4％氧化钬（Ho2O3）的溶液，该溶液的吸收峰波长为241.13nm，
278.10nm，287.18nm，333.44nm，345.47nm，361.31nm，416.28nm，451.30nm，
485.29nm，536.64nm 和640.52nm。
仪器波长的允许误差为：紫外区±1nm，500nm 处±2nm，700nm 处±4.8nm。
2.吸光度的准确度 可用重铬酸钾的硫酸溶液检定。取在120℃干燥至恒重的基
准重铬酸钾约60mg，精密称定，用0.005mol/L 硫酸溶液溶解并稀释至1000ml，在
规定的波长处测定并计算其吸收系数，并与规定的吸收系数比较，应符合表中的规
定。
波长/nm 235（最小） 257（最大） 313（最小） 350（最大）
吸收系数（
1%
1cm
）的规定值
124.5 144.0 48.6 106.6
吸收系数（
1%
1cm
）的许可范围
123.0～126.0 142. 8～146.2 47.0～50.3 105.5～108.5
司
标准操作规程
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3.杂散光的检查 可按下表所列的试剂和浓度，配制成水溶液，置1cm 石英吸
收池中，在规定的波长处测定透光率，应符合表中的规定。
试剂 浓度/%（g/ml） 测定用波长/nm 透光率/%
碘化钠 1.00 220 ＜0.8
亚硝酸钠 5.00 340 ＜0.8
对溶剂的要求
含有杂原子的有机溶剂，通常均具有很强的末端吸收。因此，当作溶剂使用时，
它们的使用范围均不能小于截止使用波长。例如甲醇、乙醇的截止使用波长为
205nm。另外，当溶剂不纯时，也可能增加干扰吸收。因此，在测定供试品前，应
先检查所用的溶剂在供试品所用的波长附近是否符合要求，即将溶剂置1cm 石英
吸收池中，以空气为空白（即空白光路中不置任何物质）测定其吸光度。溶剂和吸
收池的吸光度，在220～240nm 范围内不得超过0.40，在241～250nm 范围内不得
超过0.20，在251～300nm 范围内不得超过0.10，在300nm 以上时不得超过0.05。
测定法
测定时，除另有规定外，应以配制供试品溶液的同批溶剂为空白对照，采用1cm
的石英吸收池，在规定的吸收峰波长±2nm 以内测试几个点的吸光度，或由仪器
在规定波长附近自动扫描测定，以核对供试品的吸收峰波长位置是否正确。除另有
规定外，吸收峰波长应在该品种项下规定的波长±2nm 以内，并以吸光度最大的
波长作为测定波长。一般供试品溶液的吸光度读数，以在0.3～0.7 之间为宜。仪
器的狭缝波带宽度应小于供试品吸收带的半高宽度的十分之一，否则测得的吸光度
会偏低；狭缝宽度的选择，应以减小狭缝宽度时供试品的吸光度不再增大为准。由
于吸收池和溶剂本身可能有空白吸收，因此测定供试品的吸光度后应减去空白读
数，或由仪器自动扣除空白读数后再计算含量。
当溶液的 pH 值对测定结果有影响时，应将供试品溶液的pH 值和对照品溶液
的pH值调成一致。
1.鉴别和检查 分别按各品种项下规定的方法进行。
2.含量测定 一般有以下几种方法。
（1）对照品比较法 按各品种项下的方法，分别配制供试品溶液和对照品溶液，
司
标准操作规程
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对照品溶液中所含被测成分的量应为供试品溶液中被测成分规定量的100%±
10％，所用溶剂也应完全一致，在规定的波长处测定供试品溶液和对照品溶液的吸
光度后，按下式计算供试品中被测溶液的浓度：
cX=（AX／AR）cR
式中 cX 为供试品溶液的浓度；
AX 为供试品溶液的吸光度；调成一致。
cR 为对照品溶液的浓度；
AR 为对照品溶液的吸光度。
（2）吸收系数法按各品种项下的方法配制供试品溶液，在规定的波长处测定其
吸光度，再以该品种在规定条件下的吸收系数计算含量。用本法测定时，吸收系数
通常应大于100，并注意仪器的校正和检定。
（3）计算分光光度法计算分光光度法有多种，使用时均应按各品种项下规定的
方法进行。当吸光度处在吸收曲线的陡然上升或下降的部位测定时，波长的微小变
化可能对测定结果造成显著影响，故对照品和供试品的测试条件应尽可能一致。计
算分光光度法一般不宜用作含量测定。
（4）比色法供试品本身在紫外-可见区没有强吸收，或在紫外区虽有吸收但为
了避免干扰或提高灵敏度，可加入适当的显色剂显色后测定，这种方法为比色法。
用比色法测定时，由于显色时影响显色深浅的因素较多，应取供试品与对照品或标
准品同时操作。除另有规定外，比色法所用的空白系指用同体积的溶剂代替对照品
或供试品溶液，然后依次加入等量的相应试剂，并用同样方法处理。在规定的波长
处测定对照品和供试品溶液的吸光度后，按上述（1）法计算供试品浓度。当吸光
度和浓度关系不呈良好线性时，应取数份梯度量的对照品溶液，用溶剂补充至同一
体积，显色后测定各份溶液的吸光度，然后以吸光度与相应的浓度绘制标准曲线，
再根据供试品的吸光度在标准曲线上查得其相应的浓度，并求出其含量。