10 新机体免疫功能检测.ppt
食品免疫学第十章免疫食品课件
乳铁蛋白生物学功能
增强铁的传递和吸收； 广谱的抗菌性； 抗氧化作用； 抗病毒； 抑制肿瘤； 免疫调节等。
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3.牛初乳中细胞因子及其 它生物活性物质
细胞因子：IL-1、IL-6.INF、TNF等，抗感染、 抗肿瘤及免疫调节作用。
溶菌酶：抗菌、免疫调节作用。 过氧化物酶：抑菌作用。
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牛初乳乳商品
★牛初乳和人初乳的主要成分相
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牛初乳
牛初乳是奶牛正常分娩后1周内分泌的乳汁。 牛初乳中除含有常乳的成分外, 还含有较丰富 的免疫球蛋白、乳铁蛋白、细胞因子及其它生 物活性物质。
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1.牛初乳中免疫球蛋白
免疫球蛋白是牛初乳中最引人注目的免疫因 子, 含量为50-150 mg/ml, 牛常乳的50-150倍。 各种免疫球蛋白中, IgG含量最高, 占整个免 疫球蛋白的55%以上, 它能部分取代人类IgA 的功能。
IgG占75%, IgM占6%, IgA占 13%, 具有抗菌、抗病毒、抗毒素
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猪血
★猪血是营养价值很高 ★利用率有限 ★提取纯化猪血中的抗体
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第二节 疫苗食品
疫苗食品即含有某种抗原的食品, 食用该食 品后, 相当于接种了某种“疫苗”, 从而激发人 体免疫系统产生抗体。
疫苗食品生产技术是将微生物的有关蛋白质 抗原基因, 通过转基因技术导入某些植物或动 物受体细胞中, 并使其在受体细胞中得以表达, 从而使受体直接成为抵抗相关疾病的疫苗。
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黑木耳多糖(AA)
从黑木耳子实体中提取的多聚糖。
促进巨噬细胞的吞噬功能 促进淋巴细胞增殖
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人参多糖 刺激巨噬细胞的吞噬功能 促进补体作用和抗体形成
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双歧杆菌
天然免疫功能的检测实验报告
天然免疫功能的检测实验报告天然免疫是特异性免疫的基础，并参与和影响特异性免疫，因此检测机体天然免疫功能的状态，是评价机体免疫功能的重要组成部分。
一、中性粒细胞吞噬功能检测中性粒细胞吞噬细菌的现象称为小吞噬现象，可以通过体外实验观察其吞噬细菌的情况并测定吞噬功能。
【材料】白色葡萄球菌18小时肉汤培养物、抗凝人血、小试管、玻片、吸管、毛细吸管、瑞氏染色液。
【方法】1、用酒精棉球消毒耳垂后，取血4滴（约0。
2ml），收集于肝素（50u、ml）抗凝管中，混匀。
2、加入白色葡萄球菌18小时肉汤培养物2滴（约0。
1ml，12亿菌、ml）。
3、充分混匀，置37℃孵育10分钟后取出。
4、取—滴全血-白色葡萄球菌混合液置于洁净的载玻片上，推成薄血片，空气中自然干燥。
5、瑞氏染色：瑞氏染液数滴覆盖血膜，染1分钟，再加等量pH6。
8PBS与染液混合，染10～15分钟，注意勿使染液干涸。
用蒸馏水冲洗，冲洗时平持玻片，在一端加水，使染料“漂”走。
空气中自然干燥或滤纸印干。
6、油镜观察，可见中性粒细胞吞噬葡萄球菌。
如染色正确，可见细胞核及被吞噬细菌染成紫色，而中性粒细胞的细胞浆则为淡红色。
【结果】观察100个中性粒细胞，分别记录吞噬细菌的中性粒细胞数和每个中性粒细胞吞入的细菌数。
计算公式为：二、巨噬细胞吞噬功能检测巨噬细胞吞噬异物的现象又称为大吞噬现象。
此试验通过检测巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬作用，了解巨噬细胞的吞噬功能。
【材料】小白鼠、灭菌肉汤培养基、1%鸡红细胞悬液、Hank液、肝素、瑞氏染液。
【方法】1、试验前一天，于小白鼠腹腔内注射灭菌肉汤培养基1ml。
2、试验当天，小白鼠腹腔内注入1%鸡红细胞悬液1ml，轻揉腹部，使鸡红细胞分散。
3、30分钟后，腹腔内注入Hank液2ml，轻揉腹部，然后吸取腹腔液注入盛有1mlHank液（内含肝素10单位）试管中，37℃静置30分钟，1500转、分，离心10分钟。
4、取沉淀物作涂片，自然干燥，瑞氏染色，镜检。
再生障碍性贫血ppt(共10张PPT)
染色体核型分析
有助于诊断先天性再生障碍性贫血和后天获得性再生障碍性 贫血的鉴别诊断。
流式细胞术
可用于检测骨髓中异常细胞群体，辅助诊断再生障碍性贫血 的病因和发病机制。
03
治疗原则与方案选择
支持治疗
输血
根据患者贫血程度，定期 输注红细胞悬液，以维持 血红蛋白在正常水平。
如左旋咪唑等，可调节机体免疫功能， 促进造血恢复。
造血干细胞移植治疗
异基因造血干细胞移植
01
通过输入与患者人类白细胞抗原相匹配的异体造血干细胞，重
建患者正常的造血和免疫功能。
自体造血干细胞移植
02
采集患者自身的造血干细胞，经过体外扩增后回输给患者，以
恢复其造血功能。
脐带血造血干细胞移植
03
利用新生儿脐带血中的造血干细胞进行移植治疗，具有来源丰
起病缓慢，症状较轻
诊断标准与鉴别诊断
诊断标准 全血细胞减少，网织红细胞绝对值减少
一般无肝脾肿大
诊断标准与鉴别诊断
骨髓至少1个部位增生减低或重度减低，骨髓小粒非造血细胞增多 除外引起全血细胞减少的其他疾病
鉴别诊断
诊断标准与鉴别诊断
阵发性睡眠性血红蛋 白尿（PNH）
低增生性急性白血病 （HAL）
骨髓增生异常综合征 （MDS）
感染防治
应用广谱抗生素、抗真菌 药物等，以预防和治疗感 染。
止血
对于出血倾向明显的患者， 可给予止血药物、血小板 输注等支持治疗。
免疫抑制治疗
免疫抑制剂
如环孢素A、抗胸腺细胞球蛋白等， 可抑制T淋巴细胞功能，减少造血干 细胞的破坏。
免疫调节剂
其他药物
神经内分泌与免疫调节网络共90页.pptx
神经-内分泌-免疫调节网络的概念
神经内分泌系统通过其广泛的外周神经突触及其分泌的神经 信息物质共同调控着免疫系统的功能； 免疫系统则通过免疫细胞产生的多种细胞因子和激素样物质 （免疫信息物质）反馈作用于神经内分泌系统； 神经内分泌系统和免疫系统的细胞表面都有相关受体接受对 方传来的各种信息。这种双向的复杂作用使两个系统内或系 统之间得以相互交通和调节，共同维持着机体的稳态。
此概念的提出是当代生命科学研究的重大进展。
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二、神经内分泌免疫系统的特性和共性
神经、免疫及内分泌三大系统广泛分布于体内，共同调节 机体其余各系统的活动，参与机体防御及生长和发育调控。 1. 三大系统与种系发生和个体发育 三大系统的种系进化可能是不同步的，神经系统的个体形 成似晚于免疫和内分泌系统。 三者之间在组织胚胎发生学上的相互依存、相互影响。
（5）与性别和衰老的关系：性别差异主要是遗传因素和内分泌 系统中的性腺轴系造成的，从而对神经系统和免疫系统产生 明显的影响。人及各种实验动物的免疫机能均有明显的性别 差异，包括体液免疫和细胞免疫的诸方面。如血浆中Ig水平、 细胞免疫的各种参数，对自身免疫性疾病、感染性疾病及肿 瘤发生的易感性等。
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Vernon Riley的旋转应激实验： 实验方法：患乳腺癌的小白鼠被放在旋转台的顶部，以四
种速度进行旋转，每分钟转速分别为16、33、45或78， 这样就会使动物产生程度不同的旋转应激。 结果：每分钟转16转的小白鼠所患癌症的恶性程度比起每 分钟转 33 转的要小些，而每分钟转 33 转者其乳癌的恶 性程度比 45 转者又小些，每分钟 78 转的小白鼠肿瘤生 长得最快。 结论：起消极作用的生活事件，不管情况严重与否，都会 使机体的免疫能力受到抑制。
HPV的检测及其临床应用PPT课件
环境 因素
宫颈 癌变
自身免 疫因素
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HPV致宫颈癌机理
<30
>30
5--10years
HPV感染
持续HPV感染
免疫因素
细胞 分化异常CIN
高度 CIN
宫颈癌
辅助 — 致癌剂
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HPV E6癌蛋白与宫颈恶性病变的关系
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HPV E7癌蛋白的分子生物学特性
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宫颈癌的筛查
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筛查对象
• 21岁以上有性生活史或具有性生活三年以上的任 何妇女。
• 高危人群：有多个性伴侣、性生活过早、HIV / HPV感染、机体免疫功能低下、卫生条件差/性保 健知识缺乏。
• 某些情况无需进行筛查，如因良性疾病摘除子宫 的妇女。
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HPV
乳头瘤病毒科属小DNA病毒
乳头瘤病毒的基因组主要编码三组 基因
三个癌基因，包括E5、E6和E7， 负责调节癌细胞转化过程；
两个调节基因，包括E1和E2， 负责调节转录和病毒基因组的 复制；
两个结构蛋白基因，包括L1和
L2，组成病毒颗粒
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HPV感染
• 属于常见的性传播感染 • 直接的皮肤-皮肤接触是传播的最有效途径 • 病毒不通过血液或体液传播（例如精液）
• 2、连续2次HPV（-），细胞学检查（-） 可5～8年一次
• 3、高危人群：最好每年一次
（CIN及以上、特殊职业、30岁以上高危HPV感染者）
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根据《中国癌症预防与控制规划纲要（2004-2010）》推荐，一般可以选择下面两种筛查方案。
细胞免疫功能检测指标
细胞免疫功能检测指标细胞免疫功能检测是一种用于评估机体免疫系统功能状态的方法。
通过检测特定的指标，可以了解机体对疾病和外界侵袭的免疫应答能力。
下面将介绍几个常用的细胞免疫功能检测指标。
1. 淋巴细胞计数：淋巴细胞是免疫系统的重要组成部分，主要负责识别和消灭外来病原体。
淋巴细胞计数可以反映机体的免疫功能状态。
正常情况下，成年人的淋巴细胞计数在 1.0×10^9/L到4.0×10^9/L之间。
2. CD4+ T细胞计数：CD4+ T细胞是免疫系统中的重要细胞类型，主要负责调节和协调免疫应答。
CD4+ T细胞计数可以反映机体的细胞免疫功能状态，特别是对于HIV感染者和免疫缺陷患者来说更为重要。
3. CD8+ T细胞计数：CD8+ T细胞是细胞免疫应答的关键细胞类型，主要负责杀伤感染的细胞和肿瘤细胞。
CD8+ T细胞计数可以反映机体对病原体和肿瘤的抵抗能力。
4. 自然杀伤细胞活性：自然杀伤细胞是一种特殊的淋巴细胞亚群，主要负责杀伤病原体感染的细胞和肿瘤细胞。
自然杀伤细胞活性可以反映机体的细胞免疫功能状态。
5. 细胞因子水平：细胞因子是细胞间的信号分子，可以调节和协调免疫应答。
常见的细胞因子包括白细胞介素、干扰素和肿瘤坏死因子等。
检测细胞因子水平可以了解机体的免疫应答状态。
6. 免疫球蛋白水平：免疫球蛋白是免疫系统中的重要成分，可以中和病原体和毒素，保护机体免受感染。
检测免疫球蛋白水平可以了解机体的体液免疫功能状态。
7. T细胞亚群分布：T细胞亚群包括CD4+ T细胞、CD8+ T细胞、调节性T细胞等，不同亚群在免疫应答中起着不同的作用。
检测T 细胞亚群分布可以了解机体的细胞免疫功能状态。
细胞免疫功能检测指标的变化可以反映机体的免疫功能状态。
例如，淋巴细胞计数和CD4+ T细胞计数的下降可能表明机体的免疫功能受损，容易导致感染和肿瘤的发生。
而自然杀伤细胞活性的增加可能表明机体对病原体和肿瘤的抵抗能力提高。
医学免疫学实验六 淋巴细胞功能检测
性较差
同位素渗入法
根据淋巴细胞转化程度与DNA合成增加呈明显正相关 ，此时若加入用同位素标记的DNA前体物质胸腺嘧啶 核苷（3H-TdR），即可被转化的淋巴细胞摄取而渗入 到DNA分子中。培养结束，通过检测β射线来测定渗入 淋巴细胞内3H-TdR的量，能客观精确分析淋巴细胞的 转化程度。
。 ✓ CCK8细胞毒性非常低，因此加入CCK8显色后，可以在不同时间反
复用酶标仪读数从而找到最佳测定时间。 ✓ 如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加CCK8之前更换新鲜
培养基（除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培 养基），去掉药物影响。当然药物影响比较小的情况下，可以不更 换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。
淋巴细胞在体内外接受有丝分裂原刺激后，静止淋 巴细胞向母细胞转化。这种转化的细胞DNA合成增 加，细胞体积增大，胞质增多以及出现有丝分裂等 形态变化。
淋巴细胞体外检测方法---形态检测法
主要根据淋巴细胞在转化为淋巴母细胞的过 程中，细胞形态结构发生明显改变，经染色 镜检即可计算出淋巴细胞的转化率。
淋巴细胞功能检测
实验目的
掌握免疫细胞基本培养方法 掌握一到两种淋巴细胞功能检测技术 了解淋巴细胞体外检测的原理
基本概念
T细胞在体外培养时，如受到一定物质刺激 ，可出现体积增大转化为母细胞、代谢旺盛 、蛋白质和核酸合成增加等细胞转化现象， 所以通过淋巴细胞体外增殖反应实验，可了 解T细胞功能
CCK8（Cell Counting Kit-8）检测 细胞增殖
CCK-8溶液可以直接加入到细胞样品中,不需要预配各种成 分。CCK-8法是用于测定细胞增殖或细胞毒性试验中活细 胞数目的一种高灵敏度，无放射性的比色检测法。WST-8 法检测细胞增殖、细胞毒性实验的灵敏度比其它四唑盐如 MTT, XTT, MTS或WST-1高。由于CCK-8溶液相当稳定 ，并且对细胞没有毒性，因此可以长时间孵育。
医学免疫学实验小吞噬+大吞噬+E花环
操作步骤
3.弃上清，吸取白细胞层制片，自然干燥。 4.甲醇固定1~ 2min后，姬姆萨染色15~20min, 水洗，干燥。 5.油镜下计数200个淋巴细胞，观察淋巴细胞的 形态变化，计算淋巴细胞转化率。
结果判断
未转化的淋巴细胞
医学免疫学实验
实验内容
1.中性粒细胞吞噬功能测定试验 2.单核巨噬细胞吞噬功能试验（示教） 3.E花环形成试验（示教） 4.T淋巴细胞转化试验（示教）
吞噬细胞（phagocyte）：主要包括中性粒细 胞（neutrophil）和单核吞噬细胞 （mononuclear -phagocyte）两类。
3.水洗（勿先倒掉染液，应以流水冲去）。
4.吸水纸拍干水分，干燥。
（三）显微镜油镜镜检
五、注意事项
➢ 注射菌液时不要注射到皮下或腹腔脏器内，注 射后轻揉腹部，使液体在腹腔内分散均匀。
➢ 涂片应薄厚均匀适中，避免过薄或过厚。 ➢ 瑞氏染液染色时间不能过长以免染色过重。
A 红细胞 B 、H 淋巴细胞 C 、E、I 中性粒细胞 D 嗜酸性粒细胞 F 单核细胞 G 血小板 J 嗜碱性粒细胞
实验原理
植物血凝素(PHA)
T淋巴细胞
增殖分化 淋巴母细胞
体积变大 胞浆增多、空炮 核染色质疏松 核仁明显 有丝分裂
试剂与器材 ■1. RPMI1640 培养液。包含:小牛血清10%、 青霉素100u/m1 、链霉素100ug/m1,用无菌 的3% NaHCO3调pH 至7. 2~7.4。 ■2.植物血凝素(PHA)。用含10%小牛血清 的RPMI培养液稀释至500~ 1000ug/ml.
检测指标：
2.4免疫调节
抗原和抗体
1、抗原
概念：可使机体发生特异性免疫反应的物质。
如：病毒、细菌等病原体表面的蛋白质物质，癌细胞等特点⑴异物性：一般是进入人体的外来物质
⑵大分子性：相对分子质量大于一万 ⑶特异性：不同抗原的抗原决定簇不同
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2、抗体：
概念：机体受抗原刺激后由浆细胞产生的，并且能与该 抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。
分布：主要分布于血清中，也分布于组织液及外分泌液中
内的抗体而获得免疫。）
（如乳汁中，所以新生儿在一定时间内可由于获得母体乳
别称：抗毒素、免疫球蛋白
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免疫系统的第三道防线
特异性免疫
1.“作战部队”主要是淋巴细 胞 2.方式：
体液免疫: B细胞主要靠产生抗体作战 细胞免疫: T细胞直接接触靶细胞作战
记忆细胞
识别抗原，分化成相应的效应细胞
三个唯一：唯一能产生抗体的是浆细胞； 唯一没有抗原识别能力的是浆细胞； 除浆细胞外，唯一没有特异性识别能力的是吞噬细胞。
问题探讨：
前面讨论的主要是免疫系统 的防卫功能，人们通过这种防卫
功能，使机体能有效地防御病原
体，那么免疫系统的防卫功能是
不是越强越好呢？
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艾滋病
• 预防措施： 1）洁身自爱 2）不与他人共用牙刷和剃须刀 3）不用未经消毒的器械纹眉、穿耳等
4）注射器等医疗器械必须严格消毒
5）需要输入的血液和血液制品，必须经 过艾滋病病毒抗体检测。
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HIV侵入后HIV和T细胞浓度变化
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讨论
1、T细胞的多少和HIV浓度之间有什么关系？
由图中曲线可以看出，T细胞的多少与HIV 浓度之间成反比例关系。
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免疫试验
实验七淋巴细胞增殖试验一、目的要求：1. 掌握淋巴增殖试验的原理与用途；2. 熟悉淋巴细胞增殖试验常用的技术方法。
二、实验原理：1.淋巴细胞增殖试验又称淋巴细胞转化试验（Lymphocyte proliferation / transformation test）,是指淋巴细胞在体外培养时，受到特异性抗原或非特异性促有丝分裂原如植物血凝素（PHA）或刀豆蛋白A (ConA)刺激后，可出现蛋白质及核酸合成增加，细胞体积增大，胞质增加，出现空泡，核仁明显，染色质疏松，并能进行分裂的淋巴母细胞，此称为淋巴细胞增殖或淋巴细胞转化，其增殖能力或转化率的高低，可以反映机体的细胞免疫水平。
淋巴细胞增殖试验常用的方法有形态学方法、3H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入法，MTT 比色以及荧光染料流式细胞仪计数法等，可根据不同的试验条件及试验目的，选择不同的试验方法。
2.本试验目的是形态学方法，观察小鼠血液中的T淋巴细胞在体外培养过程中，当加入促有丝分裂原ConA(刀豆蛋白A)刺激后，可转化为体积较大的淋巴母细胞，胞浆增多而深染，核增大并可见核仁，把细胞制成涂片，在显微镜下可观察到细胞转化的典型形态。
为什么只考虑T淋巴细胞而不考虑B淋巴细胞？因为：促有丝分裂原小鼠T细胞小鼠B细胞ConA / PHA + _也就是说，ConA / PHA能刺激T细胞增殖，而不能刺激B细胞，而其他细胞如中性粒细胞在培养72h后，绝大部分衰变或死亡成碎片。
三、应用：该实验是细胞免疫学功能检测的一项基本技术，即可在临床上作为测定机体细胞免疫功能的指标之一，也可用于免疫药理学的研究，T细胞功能检测（新药开发，疫苗研制）。
四、实验材料1.动物：清洁级小鼠20只/班；2.试剂：肝素抗凝剂，RPMI-1640完全细胞培养基，NH4cl (8.5g/L),甲醇，吉姆萨-瑞士染液，ConA；3.耗材：无菌青霉素小瓶，离心管，吸管，载玻片；4.仪器：离心机，水浴锅，CO2培养箱，显微镜。