高效液相色谱(HPLC)概述和流程
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• 因 分 析 速 度 快 而 又 称 为 高 速 液 相 色 谱 法 (High Speed Liquid Chromatography，HSLP)。也称 现代液相色谱。
– HPLC 是一种区别于经典液相色谱,基于仪器方 法的高效能分离手段
➢ 高性能色谱柱,高精度输液泵,高灵敏度检测 器…
➢ 广泛应用于各个领域:医药,环保,石化,生命科 学,食品工业,农业…
体积排除色谱(Size Exclusion Chromatography) 利用多孔性物质对不同大小的分子的排阻作用进行 分离的方法
GPC (Gel Permeation Chromatography) 固定相是疏水性凝胶,流动相是有机溶剂
GFC (Gel Filtration Chromatography) 固定相是亲水性凝胶,流动相是水溶液
亲和色谱
利用生物大分子和固定相表面存在的某种特异 性亲和力，进行选择性分离。
(2) 按流动相的物态分: – 气相色谱 (Gas Chromatography, GC) 用气体作为流动相(又叫载气) – 液相色谱 (Liquid Chromatography, LC) 用液体作为流动相(又叫洗脱剂)
(3) 按固定相的形态分: – 平面色谱 • 纸色谱 • 薄层色谱 – 柱色谱
色谱法分类示意图
色谱
液相色谱
气相色谱
柱色谱 纸色谱 薄层色谱
高效液相色谱 HPLC
二、高效液相色谱(HPLC)
HPLC 的产生 HPLC 的固定相 HPLC 的流动相
1. HPLC的产生
• 液相色谱法开始阶段是用大直径的玻璃管 柱在室温和常压下用液位差输送流动相， 称为经典液相色谱法
述他的实验方法，即现在的Chromatography (色谱法)
3.色谱法的发展
▪ 色谱法是一种现代的分离方法
▪ 1906年正式命名 ▪ 20世纪30年代开始广泛研究和应用 ▪ 高效液相色谱法的广泛应用始于20世纪
70年代
4.色谱法原理
▪ 色谱法的原理
– 利用混合物中各组份在不同的两相(流动相、固定相） 中溶解,分配,吸附等化学作用性能的差异,当流动相中所 携带的混合物流过固定相时，就会和固定相发生作用 (力的作用)。
硬胶 主要用于离子交换和尺寸排阻色谱中，它 由聚苯乙烯与二乙烯苯基交联而成。可承受压 力上限为3.5108 Pa。
(2) 固定相按孔隙深度分类，可分为表面多孔型和全 多孔型两类。
• 表面多孔型固定相 它的基体是实心玻璃球，在 玻璃球外面覆盖一层多孔活性材料，如硅胶、氧 化硅、离子交换剂、分子筛、聚酰胺等。
➢ 多孔层厚度小、孔浅，相对死体积小，出峰迅速、柱 效高；
➢ 颗粒较大，渗透性好，装柱容易，梯度淋洗时能迅速 达到平衡，较适合做常规分析。
➢ 由于多孔层厚度薄，最大允许量受到限制。
• 全多孔型固定相 由直径为10nm的硅胶微粒凝聚 而成。这类固定相由于颗粒细(5～10m)，孔仍 然较浅，传递速率快，易实现高效、高速。特别 适合复杂混合物分离及衡量分析。
淋洗液
色谱分离
Temporal course
5.色谱法的分类
(1)按分离过程的机理分: – 吸附色谱(Absorption Chromatography) • 根据样品组分对活性固定相表面吸附亲和力 的不同实现分离 – 分配色谱(Partition Chromatography) • 分离基于样品组分在固定相和流动相中的溶 解度(分配系数)不同 – 离 子 交 换 色 谱 (Ion Exchange Chromatography) • 根据样品组份离子交换亲和力的差异分离,简 称离子色谱(IC)
➢ 无论在技术上,理论上,还是在应用上仍有较大 的发展空间
2.高效液相色谱的固定相
(1) 固定相以承受高压能力来分类，可分为刚性固体 和硬胶两大类。
刚性固体 以二氧化硅为基质，可承受7.0108～ 1.0109 Pa 的高压，可制成直径、形状、孔隙度 不同的颗粒。如果在二氧化硅表面键合各种官 能团，可扩大应用范围，它是目前最广泛使用 的一种固定相。
高效液相色谱 (HPLC)
概述和பைடு நூலகம்程
一、色谱概述 二、高效液相色谱(HPLC) 三、几种主要的HPLC 四、HPLC特点、流程及主要部件
一、色谱概述
1.什么是色谱?
▪ 色谱是色谱法的简称(又叫色层法,层析法),其本 质是一种分离分析方法
▪ 常见的分离方法 – 蒸馏 – 离心 – 电泳 – 过滤 – 色谱(目前最有效的分离方法)
• 柱效低、时间长(常有几个小时)。
• 高 效 液 相 色 谱 法 (High performance Liquid Chromatography，HPLC) 是在经典液相色谱法 的基础上,于60年代后期引入了气相色谱理论而 迅速发展起来的。
• 与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀, 小颗粒具有高柱效,但会引起高阻力,需用高压输 送流动相,故又称高压液相色谱法(High Pressure Liquid Chromatography，HPLC).
相(Phase):
物理化学术语,特指在某一系统中,具有相同成 分及相同物理、化学性质的均匀物质部分。各 相之间有明显可分的界面。
分离 分离是一个物理过程。
固定相 (Stationary Phase) 流动相 (Mobile Phase) 进样 (Injection) 洗脱 (Elution) 相互作用 (Interaction)
2.色谱法简介
▪ 色谱法(Chromatography)溯源
– 100多年前俄国植物学家Tswett分离植物色素
时采用的实验方法
– 他将植物色素的石油醚提取液倒入装有碳酸
钙的直立玻璃管,再加入石油醚使其自由流下, 结果色素中各组份互相分离形成各种不同颜 色的谱带
– Tswett用希腊语chroma(色)和graphos(谱)描
– 由于混合物中各组分在性质和结构上有差异，与固定相 发生作用的大小也有差异。因此，在同一推动力作用下， 不同组分在固定相中的滞留时间有长有短，从而按先后 不同的次序从固定相中流出。
– 两 相 中 有 一 相 是 固 定 的 , 叫 作 固 定 相 (Stationary Phase),有一相是流动的,称为流动相(Mobile Phase), 流动相又叫洗脱剂,溶剂
– HPLC 是一种区别于经典液相色谱,基于仪器方 法的高效能分离手段
➢ 高性能色谱柱,高精度输液泵,高灵敏度检测 器…
➢ 广泛应用于各个领域:医药,环保,石化,生命科 学,食品工业,农业…
体积排除色谱(Size Exclusion Chromatography) 利用多孔性物质对不同大小的分子的排阻作用进行 分离的方法
GPC (Gel Permeation Chromatography) 固定相是疏水性凝胶,流动相是有机溶剂
GFC (Gel Filtration Chromatography) 固定相是亲水性凝胶,流动相是水溶液
亲和色谱
利用生物大分子和固定相表面存在的某种特异 性亲和力，进行选择性分离。
(2) 按流动相的物态分: – 气相色谱 (Gas Chromatography, GC) 用气体作为流动相(又叫载气) – 液相色谱 (Liquid Chromatography, LC) 用液体作为流动相(又叫洗脱剂)
(3) 按固定相的形态分: – 平面色谱 • 纸色谱 • 薄层色谱 – 柱色谱
色谱法分类示意图
色谱
液相色谱
气相色谱
柱色谱 纸色谱 薄层色谱
高效液相色谱 HPLC
二、高效液相色谱(HPLC)
HPLC 的产生 HPLC 的固定相 HPLC 的流动相
1. HPLC的产生
• 液相色谱法开始阶段是用大直径的玻璃管 柱在室温和常压下用液位差输送流动相， 称为经典液相色谱法
述他的实验方法，即现在的Chromatography (色谱法)
3.色谱法的发展
▪ 色谱法是一种现代的分离方法
▪ 1906年正式命名 ▪ 20世纪30年代开始广泛研究和应用 ▪ 高效液相色谱法的广泛应用始于20世纪
70年代
4.色谱法原理
▪ 色谱法的原理
– 利用混合物中各组份在不同的两相(流动相、固定相） 中溶解,分配,吸附等化学作用性能的差异,当流动相中所 携带的混合物流过固定相时，就会和固定相发生作用 (力的作用)。
硬胶 主要用于离子交换和尺寸排阻色谱中，它 由聚苯乙烯与二乙烯苯基交联而成。可承受压 力上限为3.5108 Pa。
(2) 固定相按孔隙深度分类，可分为表面多孔型和全 多孔型两类。
• 表面多孔型固定相 它的基体是实心玻璃球，在 玻璃球外面覆盖一层多孔活性材料，如硅胶、氧 化硅、离子交换剂、分子筛、聚酰胺等。
➢ 多孔层厚度小、孔浅，相对死体积小，出峰迅速、柱 效高；
➢ 颗粒较大，渗透性好，装柱容易，梯度淋洗时能迅速 达到平衡，较适合做常规分析。
➢ 由于多孔层厚度薄，最大允许量受到限制。
• 全多孔型固定相 由直径为10nm的硅胶微粒凝聚 而成。这类固定相由于颗粒细(5～10m)，孔仍 然较浅，传递速率快，易实现高效、高速。特别 适合复杂混合物分离及衡量分析。
淋洗液
色谱分离
Temporal course
5.色谱法的分类
(1)按分离过程的机理分: – 吸附色谱(Absorption Chromatography) • 根据样品组分对活性固定相表面吸附亲和力 的不同实现分离 – 分配色谱(Partition Chromatography) • 分离基于样品组分在固定相和流动相中的溶 解度(分配系数)不同 – 离 子 交 换 色 谱 (Ion Exchange Chromatography) • 根据样品组份离子交换亲和力的差异分离,简 称离子色谱(IC)
➢ 无论在技术上,理论上,还是在应用上仍有较大 的发展空间
2.高效液相色谱的固定相
(1) 固定相以承受高压能力来分类，可分为刚性固体 和硬胶两大类。
刚性固体 以二氧化硅为基质，可承受7.0108～ 1.0109 Pa 的高压，可制成直径、形状、孔隙度 不同的颗粒。如果在二氧化硅表面键合各种官 能团，可扩大应用范围，它是目前最广泛使用 的一种固定相。
高效液相色谱 (HPLC)
概述和பைடு நூலகம்程
一、色谱概述 二、高效液相色谱(HPLC) 三、几种主要的HPLC 四、HPLC特点、流程及主要部件
一、色谱概述
1.什么是色谱?
▪ 色谱是色谱法的简称(又叫色层法,层析法),其本 质是一种分离分析方法
▪ 常见的分离方法 – 蒸馏 – 离心 – 电泳 – 过滤 – 色谱(目前最有效的分离方法)
• 柱效低、时间长(常有几个小时)。
• 高 效 液 相 色 谱 法 (High performance Liquid Chromatography，HPLC) 是在经典液相色谱法 的基础上,于60年代后期引入了气相色谱理论而 迅速发展起来的。
• 与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀, 小颗粒具有高柱效,但会引起高阻力,需用高压输 送流动相,故又称高压液相色谱法(High Pressure Liquid Chromatography，HPLC).
相(Phase):
物理化学术语,特指在某一系统中,具有相同成 分及相同物理、化学性质的均匀物质部分。各 相之间有明显可分的界面。
分离 分离是一个物理过程。
固定相 (Stationary Phase) 流动相 (Mobile Phase) 进样 (Injection) 洗脱 (Elution) 相互作用 (Interaction)
2.色谱法简介
▪ 色谱法(Chromatography)溯源
– 100多年前俄国植物学家Tswett分离植物色素
时采用的实验方法
– 他将植物色素的石油醚提取液倒入装有碳酸
钙的直立玻璃管,再加入石油醚使其自由流下, 结果色素中各组份互相分离形成各种不同颜 色的谱带
– Tswett用希腊语chroma(色)和graphos(谱)描
– 由于混合物中各组分在性质和结构上有差异，与固定相 发生作用的大小也有差异。因此，在同一推动力作用下， 不同组分在固定相中的滞留时间有长有短，从而按先后 不同的次序从固定相中流出。
– 两 相 中 有 一 相 是 固 定 的 , 叫 作 固 定 相 (Stationary Phase),有一相是流动的,称为流动相(Mobile Phase), 流动相又叫洗脱剂,溶剂