临床化学常用分析方法

临床化学常用分析技术

临床化学常用分析方法

一、光谱分析（分光光度技术）

利用各种化学物质所具有的发射、吸收或散射光谱谱系的特征，来确定其性质、结构或含量的技术, 称为光谱分析技术。具有灵敏、快速、简便等特点，是生物化学分析中最常用的分析技术。

发射光谱分析：荧光分析法和火焰光度法

吸收光谱分析：可见及紫外光分光光度法、原子吸收分光光度法

散射光谱分析：比浊法

二、电泳分析

在直流电场中，带电粒子向带符号相反的电极移动的现象称为电泳。

酹酸纤维素薄膜电泳

’凝胶电泳：緊丙烯酿腰德胶电泳、琼脂穗谨胶电泳

"等电聚焦电泳：分篱等电点不同的蛋白质

J毛细管电泳

三、离心技术

离心技术分为制备离心技术和分析离心技术。制备离心技术主要用于物质的分离、纯化，而分析离心技术主要用来分析样品的组成。

「平衡离心法；可用来分离细胞、细胞膜或细胞碎片.

I差遠离心法：分辨率不高，常用于定性分离手段之前的粗制品提取.

［密度梯度离心法’具有很高的分辨率.

•分析性超速离心；研究生物大分子的沉障特性和结构。

四、层析技术

层析法是利用不同物质理化性质的差异而建立起来的技术。所有的层析系统都由固定相和流动相组成。

广凝胶层析：又称分子帰过滤•常用葡聚糖統胶.

离子交换层析；分离离子型化合物，

高效液相层析：分离能力强、测宦灵敏度高、可在室温下进行.亲和层析：利用待分离物质＜和它的特异性配体间具有特异的紊和力，从而诙到分离的目的.

五、电化学分析技术

利用物质的电化学性质，测定化学电池的电位、电流或电量的变化进行分析的方法称为电化学分析法。包括电位法、电导法、电容量分析法。

离子选择电极法：离子选择电极（ISE）能对某特定离子产生响应，在一定范围内，其电位与溶液中特定离子活度的对数呈线性关系，因此可用离子选择电极来定量分析某些离子的活度或浓度。

例题

用于分离不同分子大小蛋白质的方法是

A. 琼脂糖凝胶电泳

B. 凝胶层析

C. 密度梯度离心法

D. 免疫比浊法

E. 电化学分析法

f>[答疑编号 700812140101]

【正确答案】B

血清酶催化活性浓度和代谢物浓度检测技术

一、酶反应动力学原理

酶反应动力学主要研究酶催化反应的过程与速率，以及各种影响酶催化速率的因素，定量时的观察对 象是总单位时间内底物的减少或产物增加的量。

当底物[S] >> Km 时，公式可近似为 V = Vmax 从理论上说只有测定的是酶 Vmax 反应速度才和酶量成 正比。

二、酶活性的定义及单位 在实验规定的条件下（温度、最适 pH 、最适底物浓度时），在 1分钟内催化1卩mol 底物发生反应所需

的酶量作为1个酶活力国际单位（U ）o

习惯用U / L 来表示体液中酶活性浓度。 三、测定酶活性浓度的两大类方法

（一） 固定时间法（取样法）

（二） 连续监测法：酶耦联法（指示酶、辅助酶）

A Ex Ea Ei A ---------- >

B ------------- >

C ----------- D

CK

矚酸All 駿+ ADP * -------- >肌酸"TP

HK

ATPHfi 酸糖 -------- ►计硯険葡萄槽+ADF

"诸酸葡蔔植垃氢醉

（三）影响酶活性测定的因素

1. 底物浓度的影响：底物的种类和浓度。多种底物中， Km 最小的底物往往是此酶的生理底物。

米氏方程：v= Vmax tS] K E + [S]

Ei

2.反应体系的最适pH、缓冲液的种类和浓度。

3.温度的控制：37C。

四、代谢物浓度酶法测定

（一）代谢物酶促终点法测定

1.一步法：最简单的底物法测定。

2.酶促耦联法：工具酶（指示酶、辅助酶）

在临床生化测定中，最常用的耦联指示系统有两个：一个是脱氢酶系统，另一个为氧化酶系统。

脱氢酶系统：测定NAt J或NADP在340nm处的吸光度增高或下降来计算被测物的浓度。但会受到内源性脱氢酶及其底物如乳酸脱氢酶和乳酸/丙酮酸的干扰。

（二）动力学法测定：实际操作中，测定两个固定时间的吸光度差值，只要此期间待测物消耗v 5%就可以采用标准浓度对照法计算样本浓度，所以动力学法有时又称为固定时间法。

与终点法相比，动态法测定中待测物无须完全转化，故工具酶的用量较少。

产物的堆积和样品色原对动态法影响较小，而对终点测定法影响较大。如碰到乳糜或溶血，在做终点法测定时，有时需设样本空白。