菠菜中的色素提取

菠菜中的色素提取、分离及鉴定

一、取剂和展开剂的优缺点讨论

1、吸附剂的选择

展开剂的选择条件：①对的所需成分有良好的溶解性；②可使成分间分开；③待测组分的Rf在0.2~0.8之间，定量测定在0.3～0.5之间；④不与待测组分或吸附剂发生化学反应；⑤沸点适中，黏度较小；⑥展开后组分斑点圆且集中；⑦混合溶剂最好用新鲜配制。常用的吸附剂由氧化铝、硅胶。氧化镁、碳酸钙和活性炭。吸附剂的活性与吸水量有关，含水量越少，活性越高。此外硅胶和氧化铝的活性

①硅胶H一般用于硅胶层析，通常厚度为100-200目的硅胶H用于柱层析，更细的硅胶H用于薄层层析

②硅胶G透明或乳白色粒状固体。具有开放的多孔结构,吸附性强,能吸附多种物质。如吸收水分,吸湿量约达40%。如加入氯化钴,干燥时呈蓝色,吸水后呈红色。可再生反复使用。

因此用硅胶G作展开剂比较好。

薄层层析用的吸附剂与其选择原则和柱层析相同。主要区别在于薄层层析要求吸附剂（支持剂）的粒度更细，一般应小于250目，并要求粒度均匀。用于薄层层析的吸附剂或预制薄层一般活度不宜过高，以Ⅱ～Ⅲ级为宜。而展开距离则随薄层的粒度粗细而定，薄层粒度越细，展开距离相应缩短，一般不超过10厘米，否则可引起色谱扩散影响分离效果。

设计方案

一、实验目的

1.进一步熟悉和掌握薄层色谱的原理及应用

2.了解菠菜中主要色素的基本性质，通过菠菜色素的提取和分离，了解天然物质分离提纯方法及原理

二、实验原理

色谱法是一种物理的分离方法，其原理是利用混合物中各成分的物理化学性质的差异，当选择某一条件使混合物中各成分流过支持剂或吸附剂时，各成分可因其物理性质不同而分离。分离效果的好坏关键在于条件的选择。薄层色谱是在玻片上涂布固体吸附剂，利用样品对固体吸附剂的吸附能力不同，选择对样品溶解（解附）能力不同的溶剂，将混合物各成分按照极性大小不同随溶剂前进速度不同而分开的方法。

三、物理常数

四、实验仪器及试剂

试剂：石油醚、乙醇(95%)、菠菜叶、丙酮(化学纯)、乙酸乙酯(化学纯)、无水硫酸钠、硅胶G、中性氧化铝(150目～160目)

羧甲基纤维素钠（CMC）、载玻片、研钵、层析缸、点样毛细管、层析柱、滴管、分液漏斗

五、实验步骤

1、菠菜色素的提取

在研钵中放入20新鲜的菠菜叶，用剪刀剪碎，

加入20 mL3：2(体积比)石油醚—乙醇混合液，适当研磨(不要研成糊状，否则会给分离造成困难)，用倾析法将提取液转移到分液漏斗中，每次用10ml水洗涤两次,以除去萃取液中的乙醇。洗涤时要轻轻旋荡，以防乳化。弃去水乙醇层，石油醚层用无水硫酸钠干燥，干燥后滤入小圆底烧瓶，在水浴上蒸发浓缩至大约l m L。1.2.2 薄层层析取四块显微载玻片，硅胶G经0.5％羧甲基纤维素钠调制后制板，在室温下晾干后在110°C活化1h。选取效果最好的一块进行点样。展开剂：（1）石油醚—丙酮=8:2（体积比）（2）石油醚—乙酸乙酯=6:4（体积比）取活化后的层析板，点样，放入预先选定展开剂的广口瓶。瓶的内壁贴一张高5cm，绕周长4／5的滤纸，下部浸入展开剂中，盖上瓶盖。待展开剂上升至规定高度时，取出层析板，晾干，做出标记。分别用两种展开剂展开，比较不同展开剂的展开效果。观察斑点在板上的位置并排列出胡萝卜素、叶绿素和叶黄素的Rf值的大小。注意更换展开剂时，需干燥层析瓶，不允许前一种展开剂带入后一系统。 1.2.3 柱层析取少量脱脂棉在小烧杯中用石油醚浸润后，挤压除去气泡，放在层析柱底部。在层析柱中加15cm石油醚。加入中性氧化铝8克，打开柱下活塞，保持石油醚高度不变，氧化铝在柱子中堆积。装完后，打开下端活塞，放出溶剂，直到氧化铝表面剩下1—2mm高为止（不能使氧化铝表面露出液面）。将浓缩液用滴管加到柱顶部，打开下端活塞，让液面下降到柱面以下1mm,关闭活塞，加数滴石油醚，打开活塞，使液面下降，几次反复，使色素全部进入柱体。在柱顶加1.5cm洗脱剂——9：1（体积比）石油醚—丙酮。

打开活塞，用锥形瓶收集。当第一个有色成分即将滴出时，取另一锥形瓶收集，得橙黄色溶液，即胡萝卜素。