大豆种皮过氧化物酶在酚类废水处理中的应用
植物过氧化物酶实验报告

一、实验目的1. 了解过氧化物酶在植物生理过程中的作用。
2. 掌握愈创木酚法测定过氧化物酶活性的原理和方法。
3. 通过实验,提高学生运用实验方法分析植物生理问题的能力。
二、实验原理过氧化物酶(POD)是一种广泛存在于植物体内的酶,催化H2O2分解产生O2和H2O。
愈创木酚法是一种测定POD活性的常用方法,其原理是POD催化H2O2将愈创木酚氧化成茶褐色产物,该产物在470 nm处有最大光吸收值。
通过测定该波长下的吸光度变化,可以计算出POD的活性。
三、实验材料与仪器1. 实验材料:马铃薯块茎2. 仪器:分光光度计、离心机、研钵、容量瓶、量筒、试管、吸管3. 试剂:100 mmol/L的磷酸缓冲液(pH 6.0)、愈创木酚溶液、30% H2O2、20 mmol/L KH2PO4四、实验步骤1. 制备酶提取液:取马铃薯块茎约0.5 g,加入5 mL磷酸缓冲液(pH 6.0),研磨均匀,过滤,收集滤液,4℃下保存备用。
2. 测定酶活性:a. 设置酶活性测定体系:取2 mL酶提取液,加入1 mL 30% H2O2和1 mL愈创木酚溶液,混匀,立即放入分光光度计中,于470 nm处测定吸光度。
b. 设置对照体系:取2 mL酶提取液,加入1 mL磷酸缓冲液(pH 6.0)和1 mL愈创木酚溶液,混匀,立即放入分光光度计中,于470 nm处测定吸光度。
3. 计算酶活性:a. 酶活性 = [(A1 - A2) / (t2 - t1)] × 0.01 × (1.977 - 0.874) / 10 × 0.01 × 250.027575b. 其中,A1为酶活性测定体系的吸光度,A2为对照体系的吸光度,t1为酶活性测定体系测定时间,t2为对照体系测定时间。
五、实验结果与分析1. 实验结果:通过实验,得到马铃薯块茎中POD的活性为0.027575 U/g。
2. 结果分析:a. 从实验结果可以看出,马铃薯块茎中含有一定量的POD,且活性较高。
酶及酶技术在茶叶深加工中的应用

酶及酶技术在茶叶深加工中的应用茶叶作为我国的传统经济作物,已经在国内和国际市场上占有着很高的比重。
茶叶市场竞争激烈,深加工技术作为提高茶叶附加值的重要手段,具有广泛的发展前景。
酶及酶技术可被广泛应用于茶叶深加工工艺中,能够使茶叶产生更好的品质特征和提高茶叶的商品价值。
本文将探讨酶及酶技术在茶叶深加工中的应用。
一、酶及酶技术在茶叶深加工中的基本原理酶是一种特殊的生物催化剂,它能够促进生物体内的化学反应进程,降低反应活化能,加速反应速率。
茶叶深加工中,茶叶中的多种酶类活性具有重要的作用,包括多酚氧化酶、过氧化物酶、多酚酶、脱氢酶等。
这些酶类活性会受到茶叶加工方式的影响而发生变化,以此改变茶叶的口感和色泽。
酶及酶技术就是运用酶类促进并控制茶叶加工过程中发生的化学变化。
基本原理是将经过采摘清洗、茶青材料经过杀青工艺后,开展发酵过程,即将茶青材料在适宜温度、湿度等条件下辅以天然植物酶类进行微生物发酵,使之产生一系列化学变化,从而得到各种口感的茶叶。
发酵过程中需要适宜的酶的参与,这些酶在茶叶中天然存在,影响茶叶的发酵特性和品质特点,而利用酶提高茶叶品质和附加值,成为了当前茶叶深加工中非常重要的工艺手段。
二、酶及酶技术在茶叶深加工中的应用1. 杀青阶段茶叶生产中,杀青是一个很重要的步骤。
杀青的目的是抑制酶类活性的继续发展,并通过此过程来锁定茶叶的气味、色泽、口感等特征。
在杀青阶段,经常使用的酶类有过氧化物酶和多酚氧化酶。
过氧化物酶能够促进杀青过程中的化学反应,保证抑制茶叶中的多酚氧化酶并最大限度地保留茶叶的天然香气。
多酚氧化酶可以使茶叶提前发生氧化,使茶叶表面的酚类物质更容易溶解,茶叶中的多酚得到释放,增加了茶叶的苦涩味和麦芽气味。
2. 发酵阶段发酵是茶叶深加工中最重要的工艺步骤。
不同种类的茶叶需要具有不同特定的酶活性,以使其在发酵过程中产生所需的化学反应和改变。
茶叶发酵过程中酶类的代表有多酚氧化酶、过氧化物酶、多酚酶和脱氢酶等。
大豆蛋白废水处理

大豆蛋白废水处理
大豆蛋白废水处理
随着经济和人口的增长,对废水的污染愈来愈受到人类的重视,莱特莱德公司设计出废水回收设备,其设备采用先进工艺和生产制造技术,是以玻璃钢、不锈钢为主要原料的废水回用设备。
经该设备处理后达到用户要求的排放标准。
大豆蛋白废水处理优势
(1)、能有效地进行废水回收,分离生物单元中的悬浮物,胶体物质和微生物菌群。
操作过程简单,占地面积小,出水水质好。
(2)、生物质处理单元中的生物量可以保持在高浓度,从而大大提高了体积负荷,高效率大大缩短了处理单元的水力停留时间,并且生物反应器相应减少。
(3)、一些难以降解有机物质的大分子的停留时间变长,有利于它们的分解。
大豆蛋白废水处理使用注意事项
1、膜生物反应器在整个过程中采用自动控制系统,大大降低了操作和管理成本。
2、当生物反应器中的水达到高水位时,提升泵停止运行,当水位下降到低水位时,提升泵自动打开。
3、循环泵根据中水储液器的水位自动打开和关闭。
4、自动打开和关闭计量泵,可根据需要调整剂量。
5、自动操作膜清洁和消毒程序。
6、电机配有过流和过载保护。
大豆蛋白废水处理应用领域
适用于酒店、机场、商场、疗养院、景点、车站、码头、医院、学校、工厂和矿山。
生活污水和一些工业有机废水排放点。
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多酚氧化酶

简介
多酚氧化酶(polyphenol oxidase, 简称PPO)是一类广泛存在于植 物体内的含铜金属酶类.由于其与 果蔬加工、品质等密切相关,人们 很早就开始对它进行深入细致的 研究.
• 铜是酶的活性中心,从蛋白质中除 去一部分或全部铜,将引起酶活性 下降或完全失活,若添加铜的话, 酶活又能恢复。不同果蔬中的PPO铜 辅基的数量会有所不同,如蘑菇中 PPO含4个铜原子,而扁豆的PPO含1 个铜原子。
琼酯糖凝胶
已装柱好的苯基琼脂糖 PenlysepharoseCL4B柱,用高盐缓冲 液A预平衡, 酶液借助梯级蠕动泵加 在柱上,洗脱液以一定流速,从高盐缓 冲液A减弱至低盐缓冲液B,最后以 50%的乙二醇进行洗脱 。由紫外监 控器(280nm)监控,调节分级收集器 流速收集。
酶活性测定 测定波长视底物而定,测定 温度为25℃,反应液由pH4的柠檬 磷酸缓冲液、测定底物和酶液组 成,一个酶活力单位为测定条件下, 每分钟引起光密度改变0.001所需 的酶量。
葡聚糖凝胶
文献报道植物组织中PPO分子量一般 介于40-70K之间,根据葡聚糖凝胶分离大 分子的原理,葡聚糖凝胶分离PPO与杂蛋白。 不同型号凝胶的分离范围是根据球形蛋白 理论模型确定的,而实际分离蛋白的结构 与理论模型常有较大差异,因此在纯化PPO 时,采用不同型号的葡聚糖凝胶进 行分离效果的比较。
包括Sepharose和Bio-gel A等。 Sepharose与2,3二溴丙醇反应,形Sepharose CL型凝胶(CL-2B ~4B),分离特性基本没变,
琼脂糖是从琼提高,可以在更
广泛的pH范围内应用。
琼脂糖凝胶稳定性要超过一般的葡聚糖 凝胶和聚丙烯酰胺凝胶。琼脂糖凝胶对样 品的吸附作用很小。琼脂糖凝胶的机械强 度和孔穴的稳定性都很好,一般好于前两 种凝胶,使用琼脂糖凝胶时洗脱速度可以 比较快。 琼脂糖凝胶的排阻极限很大,分离范 围很广,适合于分离大分子物质,但分辨 率较低。琼脂糖凝胶不耐高温。
实验过氧化物酶活性的测定

对未来研究的展望与建议
展望
随着生物技术的不断发展,过氧化物酶的研究和应用将更加广泛。未来可以进一步研究过氧化物酶的 分子结构和催化机制,以提高其活性和稳定性。同时,可以探索过氧化物酶在其他领域的应用,如环 境保护、能源转化等。
建议
为了更好地推动过氧化物酶的研究和应用,建议加强跨学科合作,结合生物学、化学、物理学等多学 科知识进行研究。同时,注重实验技术的创新和改进,以提高实验的准确性和可靠性。此外,加强过 氧化物酶应用方面的研究,为推动其在各个领域的应用提供有力支持。
实验结果的分析与解释
结果分析
根据实验数据,分析过氧化物酶的活性变化,判断酶活性的 高低。
结果解释
结合实验结果,解释过氧化物酶活性变化的原因,分析可能 的影响因素。
05
实验误差来源与控制措施
实验误差来源的分析
操作误差
环境误差
实验过程中,由于操作不当或技能不 熟练导致的误差。
实验环境温度、湿度、光照等因素对 实验结果的影响。
实验结果的解释与应用
解释
过氧化物酶是一种重要的生物催化剂,在许多生物化学反应中发挥着关键作用。实验结果表明,该酶具有较高的 活性,这为其在生物医学、农业和工业等领域的应用提供了重要依据。
应用
过氧化物酶可用于治疗某些疾病、催化有机合成反应以及作为生物传感器等。此外,在农业方面,过氧化物酶还 可用于提高作物的抗逆性和产量。
评估生物体的生理状态
过氧化物酶的活性与生物体的生理状态密切相关,因此测定其活性 有助于评估生物体的健康状况。
指导农业生产
了解过氧化物酶的活性可以帮助农业工作者了解作物的生长状况, 从而指导农业生产。
过氧化物酶在生物体内的功能
01
09 多酚氧化酶及其在食品工业中的应用-11

作用底物: 作用底物:
果蔬中四类: 果蔬中四类: 四类 ① 儿茶素 ② 3,4-二羟基肉桂酸酯 3,4-二羟基肉桂酸酯 3,4-二羟基苯丙氨酸 ③ 3,4-二羟基苯丙氨酸 ④ 酪氨酸
特点: 特点:
PPO的最佳底物并非和酶同时存在于同一植物中 的最佳底物并非 存在于同一植物中。 ① PPO的最佳底物并非和酶同时存在于同一植物中。 PPO只能催化在对位上有一个大于或是 只能催化在对位上有一个大于或是- ② PPO只能催化在对位上有一个大于或是-CH3的取代 一元酚羟基化 羟基化, PPO对底物具有特异性要求 具有特异性要求。 基的一元酚羟基化,即PPO对底物具有特异性要求。 不同的品种果蔬,同一品种不同部位中PPO PPO具有不同 ③ 不同的品种果蔬,同一品种不同部位中PPO具有不同 的底物特性。 的底物特性。 多酚氧化酶在植株幼嫩阶段及生长旺盛期活性最高 幼嫩阶段及生长旺盛期活性最高。 ④ 多酚氧化酶在植株幼嫩阶段及生长旺盛期活性最高。
顺,顺-1,4-戊二烯的直链脂肪酸。 戊二烯的直链脂肪酸 的直链脂肪
主要内容: 主要内容: 一、食品的褐变及其防止 二、多酚氧化酶的分类与主要性质
三、多酚氧化酶在食品加工中的应用
一、食品的褐变及其防止
我国在食品内源酶的方面研究,集中在氧 我国在食品内源酶的方面研究,集中在氧 食品内源酶的方面研究 化还原酶上 其它内源酶的研究较少。 化还原酶上,其它内源酶的研究较少。 多酚+O 多酚+O2 酶褐变: 酶褐变: 多酚氧化酶、 酶:多酚氧化酶、过氧化物酶 酪氨酸等含酚羟基 酚羟基的化合物在 酪氨酸等含酚羟基的化合物在 非酶褐变: 非酶褐变: 没有酶的作用下,氧化变色。 没有酶的作用下,氧化变色。
5、温度对多酚氧化酶活力的影响
典型的酶促褐变是酚类物质在多酚氧化酶的作用下与氧作用
杀菌时使细菌减 少至某一数值 (10-n)所需时间
在一定温度下,杀 灭一定浓度的微 生物所需要的时 间
TRT4=30 F232=15
细菌被杀灭至初 菌数的万分之一 需要30min
111 ℃(232 ℉)15min全部杀 灭
加热致死时间变 为1/10时,相对应 的加热温度的变 化
Z=20
加热温度上升20 ℃,细菌减少至
活菌浓度 在某一特定温度下加热灭菌时,活菌浓度越高则 达到一定的杀菌效果所需的时间越长。因而,在 食品厂里应把原料容器、机械等仔细清洗,加工 上注意卫生,以减少细菌的侵入。
细菌的履历 形成芽孢的环境条件—温度、培养菌、水分、PH 等也影响细菌的耐热性。以好气性细菌芽孢为例, 在天然条件下形成的芽孢比在实验室人工培养下 形成的芽孢的耐热性强,在热处理过的培养基内 形成的芽孢的耐热性比在生的培养基内形成的芽 孢的耐热性强。
1.微生物的耐热性
引起食品腐败的微生物有细菌、酵母和霉菌(丝 状菌)。水分多的食品,细菌引起的腐败占绝大 部分。
酵母的大部分营养细胞在50-58℃下10-15min, 孢子细胞在60℃下10-15min,即会死亡,若加热 到100℃,所有酵母均在数分钟内死亡。因此, 用酵母制作的酿造物如清酒、啤酒、酱油等可用 简单的加热,低温杀菌(巴氏杀菌)来保藏。
(二)温度
微生物生存的温度范围较广,图5-10表示多种微 生物的繁殖温度范围。根据适宜繁殖的温度范围 微生物可分:嗜冷细菌(0℃以下)、嗜温性细菌 (0~55℃)和嗜热性细菌(55℃以上)。
食品在贮存、运输和销售过程中所处的环境温度 一般在55 ℃以下,处在嗜温性和嗜冷性细菌繁殖 生长的温度区间,故需加以重视。
也能控制微生物的生长和繁殖。
漆酶的固定化及其在造纸废水处理中的应用
用。酶的固定化技术是实现酶连续使用和改善酶
稳定 性 的有效 手段 _ 。漆 酶 的 固定 化是 指将 水 溶 7 ] 性漆 酶 以物理 或化 学方 法 固定 在 有机 或无 机 的载 体 上 , 成 不 溶 于水 的 具 有 酶 活 性 的酶 衍 生 物 。 形 基 本方 法可 粗分 为 5种 : 即吸 附 、 价结 合 、 埋 、 共 包 微 囊化 和交 联 l 。 L 8 ]
漆酶的固定化及其在造纸废水处理 中的应用
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论文 与综述 ・
漆酶 的固定化 及其在 造纸废 水处理中的应用
潘 洪艳 , 张安 龙 , 张 佳
( 陕西科技 大学 , 陕西 西安 70 2 ) 10 1
[ 摘 要] 漆酶( 二酚 : 对一 双氧氧化还原酶) 多铜氧化酶 中的一种含铜的糖蛋 白氧化酶。参与木 是 素 的降 解或聚合 , 具有氧 化木 素 的能 力 。固定化 漆酶 能 够延 长漆 酶的使 用 寿命 , 高漆 酶 的稳 定性及 其 提
的生 物 酶 , 有 催 化 氧化 木 素 的能 力 。漆 酶 能 选 具
择性地催化木质素降解 , 不会产生有毒物质 , 并且
生产 在 常温 、 常压 的温 和条件 下进 行 , 节约 设备 和 能耗 。因此漆 酶在 造纸 工业 废水 等方 面有 着非 常 巨大 的应 用前 景 。 游离 酶存 活 时间短 、 活性 不稳 定 、 以 回收利 难
对环 境 的耐 受性 , 因此 它具 有 比游 离漆 酶更 好 的使 用性 质 。综 述 了近 年 来漆 酶 的 固定化 方 法及 其在 造
纸废 水 处理 中的应 用与研 究现状 。
.
[ 关键词] 漆酶; 固定化 ; 造纸废水处理
漆 酶是 一种 结合 多 个 铜 原 子 的 蛋 白质 , 于 属 异性 作用 力 的结果 。物理 吸 附的优点 在 于其 固定
高级氧化技术在水处理中的应用
高级氧化技术——臭氧氧化技术在水处理中的应用摘要:高级氧化技术(Advanced Oxidation Processes,简称AOP):运用电、光辐射、催化剂,有时还与氧化剂结合,在反应中产生活性极强的自由基(·OH) ,再通过自由基与有机化合物之间的加合、取代、电子转移、断键等,使水体中的大分子难降解有机物氧化降解为低毒或无毒的小分子物质,甚至直接降解成为CO2 和H2O,接近完全矿化。
关键词:水污染高级氧化技术臭氧氧化随着现代化学工业的不断发展,通过各种途径进入水体中的化学合成有机物的数量和种类急剧增加,对水环境造成了严重污染。
在水处理工程中,含此类物质的废水通常难以采用生物法处理,而常规的物理、化学方法也难以在技术和经济上满足净化处理的要求。
近年来,高级氧化技术用于处理小流量、高浊度、难降解的有机废水取得了较好的应用实例和应用前景,已成为业界的研究热点。
1)反应过程中产生大量氢氧自由基·OH。
2)反应速度快,多数有机物在此过程中的氧化速率常数可达106 ~109 L/(mol.s)。
3)适用范围广,较高的氧化电位使得·OH几乎可将所有有机物氧化直至矿化,不会产生二次污染。
4)可诱发链反应,由于·OH的电子亲和能为569. 3 kJ ,可将饱和烃中的H原子拉出来,形成有机物的自身氧化,从而使有机物得以降解,这是各类氧化剂单独使用时所不能做到的5)可与其他处理技术连用,特别是可作为生物处理过程的预处理手段,对于难以通过生物降解的有机物,在经过高级氧化过程处理后,其可生化性大多可以提高,从而有利于生物法的进一步降解;6)该技术采用物理—化学处理方法,其操作简单,易于控制和管理。
臭氧之所以表现出强氧化性,是因为臭氧分子中的氧原子具有强烈的亲电子或亲质子性,臭氧分解产生的新生态氧原子,和在水中形成具有强氧化作用的羟基自由基·OH,它们的高度活性在水处理中被用于杀菌消毒、破坏有机物结构等等,其副产物无毒,基本无二次污染,有着许多别的氧化剂无法比拟的优点,不仅可以消毒杀菌,还可以氧化分解水中污染物。
过氧化物酶活性的测定-愈创木酚法
过氧化物酶活性的测定 愈创木酚法目的意义 过氧化物酶是植物体内重要的呼吸酶类,其活性高低与酚类物质代谢、物 抗性密切相关。
通过实验掌握提取POD 和测定其活性的方法及其原理。
过氧化物酶催化H 202氧化酚类,生成醌类化合物,此化合物进一步缩合或与其他分子 缩合,产生颜色较深的产物。
本实验以愈创木酚为底物,过氧化物酶催化H 202将愈创木酚 氧化生成茶褐色产物,此产物在470nm 波长处有最大吸收峰,故可通过测定470nm 波长下 的吸光度变化得知过氧化物酶的活性。
三、材料、设备和试剂1.材料 植物叶片。
2.设备 UVI1240型分光光度计、离心机、秒表(或手表)、天平、研钵、磁力搅拌器。
3.试剂 愈创木酚、30%过氧化氢、20mmol/L KH 2PO 4、100mmol/L 磷酸缓冲液(pH6.0)。
反应混合液配制 取100mmol/L 磷酸缓冲液(pH6.0)50ml 于烧杯中,加入愈创木酚28µl, 于磁力搅拌器上加热搅拌,直至愈创木酚完全溶解,待溶液冷却后,加入30%过氧化氢19µl 以,混合均匀,保存于冰箱中。
三、操作方法1.酶液制备称取植物材料0.5g ,加入20mmol/L KH 2PO 4溶液5m1,于研钵中研磨成匀浆,在5000r/min 下离心10min ,上清液备用。
2.比色测定取光径1cm 比色杯2只,于1只中加入已混匀的反应混合液3m1,KH 2PO 4溶液1ml ,作 为参比液;另一只中加入反应混合液3ml ,酶液1m1(如酶活性过高可稀释之),立即记时并 置于分光光度计中。
在470nm 下测定光密度,每隔30s 读数一次,连续测1min 。
四、实验结果1.以时间为横坐标,光密度为纵坐标作图。
反应前期过氧化氢酶活性随反应时间直线上升,升到最大值后,其相关曲线出现转折点,转折出现的早晚取决于温度。
在曲线的前期部分找到一段近似直线的部分,和直线起点时间t 1和光密度A 1、直线终点时间t 2和光密度A 2。
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(. 1 中国农业 科学院 农产品加工研究所 , 北京 l09 ;. 0 0 4 2 中国科学院 生态环境研究中心 , 北京 10 8 ) 0 0 5
[ 要 ]介绍 了大豆种皮过氧化物酶 ( B ) 摘 S P 的特性 、 除酚原理及用 S P处理 酚类废水 的研究进展 , S P除酚 的 B 对 B 主要技术参数进行 了详细 阐述 , 并对现存问题和解决途径进行 了探讨 。S P的性质优 异 、 源丰富 、 B 酶 价格低廉 。直 接用大 豆种皮处 理废水 的经济指标 已基本达到实用水平 , 但导致废水 中可溶 性 固形 物的含 量增加 , 解决 的途径是 选育 酶活性 高 、 稳定性好的大豆品种 。 [ 关键词 ]酚 ; 过氧化物酶 ; 大豆 ; 种皮 ; 废水处理 [ 中图分类号 ]X 8 73 [ 文献标识 码]A [ 文章编号 ]10 0 6—17 ( 06 0 0 8 0 8 8 2 0 )5— 3 2— 4
s b tn e T e in l u sa c . h f a me n t s l e h i p obe i o r e c lia s a s o o v t s r lm s t b e d u t r wih hih v t g SBP a t iy n d c i t a v
s b lt a t iiy.
Ke wor y ds: h no ; e o i a e;o be n;e d c a ; se trte t n p e l p r x d s s y a s e o t wa t wae r a me t
随 酚 类化 合 物 生 产 规 模 和 应 用 范 围 的 不 断 扩 大 , 类废 水 的排 放 量 日益 增 加 , 人 类及 生 态 环 酚 对 境 危 害很 大 。 处 理 酚 类 废 水 的 方 法 有 物 理 法 、 化
Ab t a t T e p o e t s p e o — mo i g me h n s a d r s ac r g e s s o o b a e d c a s r c : h r p r e , h n lr i e v n c a im n e e r h p o r se f s y e s e o t n
2 R sac e t r c — vrn etl cecsC ie ae fS i csBe i 0 0 5,hn ) . eerhC ne f oe i m na S i e , hns Acd myo c ne , in 10 8 C ia ro E n o n e e jg
Ap ia i n o o b a e d Co tPe o i s n Tr a m e f pl to fS y e n S e a r xda e i e t nto c
Phe o - o t i n a t wa e n lc n a ni g W s e t r
1 S P简介 B
S P存 在于 大 豆种 皮 中 , B 由一 条肽 链 和一 个 卟
学 法 和生 化 法 等 … , 酶 处 理 酚 类 废 水 的研 究 始 用 于2 纪 8 0世 0年 代 。 18 9 0年 Kiao l nv等 b 首 先 将 辣根 过 氧 化 物 酶 ( R ) 于 处 理 酚类 和苯 胺 类 H P用
维普资讯
化
・
工 Βιβλιοθήκη 环 保 32・ 8
E VR N N A R T C I NO  ̄ N I O ME T L P O E T O F C
C US R L ND T Y A I
20 0 6年第 2 6卷第 5期
大 豆 种 皮 过 氧化 物 酶在 酚 类 废水 处理 中的应 用
prxd s ( B )nt et n f h n l o t nn at t r t d cd T ema c n a eo iae S P i et a h r met e o— na igw s wa r eir u e . i t h i l op c i e e we n o h ne c
p a e e s f rr m o a fph no swe e e a r t d. e p o lm s a d t er s l i nswe e d s u s d a r a m tr o e v lo e l r lbo ae T r b e h n i out h o r ic s e s we 1 S l. BP se c l n r p ris a d i v l b e i b n a c i o c s. sn o b a e d c a ha x e l tp o e e n s a a a l n a u d n e w t l w o t U ig s y e n s e o t e t i h dr cl o te tw a t wae s e o o ia , u e u t n t e nce s f t e o tn f s l b e oi ie ty t a se tr i c n m c l b t r s ls i h i r a e o h c ne t o o u l s l r d
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