山东大学细胞生物学实验报告

山东大学细胞生物学实验报告

姓名：高超年级：2013级生科三班学号:201300140020 实验名称：苏丹Ⅲ染色观察小鼠脂肪同组者：樊晓航，王昊明，余敬洋一，实验目的：

1，了解小鼠膜的剪取方法，以及小鼠的内部结构。

2，掌握并了解苏丹三染色的原理及方法。

3，理解苏丹Ⅲ脂类染色的基本原理。

二，实验原理：

脂类细胞化学的主要目的是研究细胞中脂类物质的成分变化以及分布。

在动物细胞中，脂肪是动物体主要的储能物质，很多种细胞都含有脂肪。通常，细胞中的脂肪和类脂体混合物以游离的液滴状态悬浮在细胞质中，比如肝细胞。在脂肪含量很高的脂肪细胞中，游离的脂肪液滴可以聚集在一起，占据大部分细胞质空间，将细胞质、细胞核挤到细胞边缘。

脂类染色最常用的染料是苏丹系列染料，本实验即使用苏丹Ⅲ为脂肪显色。苏丹Ⅲ是一种橙红色偶氮染料，由于其在脂肪中的溶解度高于在乙醇中的溶解度，当用70%乙醇溶解的苏丹Ⅲ饱和溶液浸染脂肪细胞时，苏丹Ⅲ会从70%乙醇中脱离，溶解并集中在脂肪液滴中，使脂肪细胞着色（橘黄色）。以70%乙醇作为苏丹Ⅲ的溶剂可以减少乙醇对脂肪细胞中脂肪液滴的溶解，染色较大的脂肪块。染色的主要过程不涉及化学变化。

三，实验器材及材料

1，器材：镊子两把显微镜托盘一个剪刀一把滴管一支载玻片（盖玻片）

2，试剂：苏丹Ⅲ染液蒸馏水70%乙醇生理盐水甲醛钙溶液

四，实验步骤:

1、断头法处死小鼠，置于解剖盘中，剪开腹腔，用镊子提起小肠将盖玻片紧贴于肠系膜，用剪刀连同盖玻片和其上粘的肠系膜取下，反扣于已滴加甲醛钙的载玻片上，固定20min。

2、用吸管吸取蒸馏水滴入载玻片与盖玻片之间冲洗掉甲醛钙溶液。

3、用70%乙醇溶液代替蒸馏水重复步骤二的操作，冲洗。

4、滴加苏丹Ⅲ于盖玻片上，染色30min。

5、吸去载玻片上溢出的染液，擦净载玻片表面及周边，显微镜观察。五，实验结果及分析：

脂肪细胞呈圆球形，内充满橘黄色之类物质

由于肠系膜标本过厚，细胞染色效果起初不太明显，脂肪细胞渐渐变为橘黄色，可观察到清晰的脂肪细胞，但细胞分散程度较差，单细胞形态较为少见，细胞质较难观察的到。随着染色时间增长，基本可以分辨出脂肪滴与细胞质。六，实验总结：

1，制作肠系膜玻片时要注意去除血管组织，尽量将其压薄，便于后期染色，观察。

2，染色必要时可采取反扣盖玻片染色，以保证染色充分，均匀。

3，染色完后去除多余染液以便于观察。