吲哚乙酸氧化酶活性的测定PPT课件
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HT的介绍(课堂PPT)
5-羟色胺
5-Hydroxytryptamine, 5-HT
.
1
概述
5-羟色胺：
(5-hydroxytryptamine,5-HT或serotonin） 5-HT 衍生于称之为吲哚的芳香族化合物
5-羟色胺在化学上属吲哚胺类化合物
吲哚 构成5-HT
乙胺
.
2
具有吲哚胺（indolakylamine,IA） 结构的化合物广泛存在于自然界
可由载体转运，易于通过BBB
.
13
某些药物:水杨酸钠、吲哚美辛 与色氨酸竟争血浆蛋白结合位点 游离型色氨酸 转运入脑的色氨酸量 5－HT合成？
血浆中某些中性L-氨基酸:苯丙氨酸、丝氨酸
与色氨酸竞争BBB上的载体
阻止色氨酸入脑
.
5－HT合成？ 14
胰岛素 可使血浆中性L-氨基酸含量减少 9％～54％ 利于色氨酸入脑
.
29
5-HT5-HT氮位乙酰转移酶 （5-HTNAT） N-乙酰基-5-甲基5-HT
HIOMT
(褪黑素， melatonin)
褪黑素能抑制垂体促性腺激素的分泌
可防止性早熟
- TPH特异性高，只存在5-HT神经元内
-含量少，活性低 5-HT合成的限速酶
-脑内TPH未被饱和 色氨酸浓度 5-HT合成
.
16
5-羟色氨酸脱羧酶 (5-HTPDC)
(5-hydroxytryptophan decarboxylase) - 需磷酸吡哆醛作为辅助因子 - 含量多，活性高，特异性差 - 普遍存在于神经系统
例：菠萝、香蕉等果品内 蟾蜍的皮肤、蛇的毒液 发现有大量IA
.
3
人体内，首先从血清中发现5－HT 血管某处发生破损 形成血栓或血凝块
5-Hydroxytryptamine, 5-HT
.
1
概述
5-羟色胺：
(5-hydroxytryptamine,5-HT或serotonin） 5-HT 衍生于称之为吲哚的芳香族化合物
5-羟色胺在化学上属吲哚胺类化合物
吲哚 构成5-HT
乙胺
.
2
具有吲哚胺（indolakylamine,IA） 结构的化合物广泛存在于自然界
可由载体转运，易于通过BBB
.
13
某些药物:水杨酸钠、吲哚美辛 与色氨酸竟争血浆蛋白结合位点 游离型色氨酸 转运入脑的色氨酸量 5－HT合成？
血浆中某些中性L-氨基酸:苯丙氨酸、丝氨酸
与色氨酸竞争BBB上的载体
阻止色氨酸入脑
.
5－HT合成？ 14
胰岛素 可使血浆中性L-氨基酸含量减少 9％～54％ 利于色氨酸入脑
.
29
5-HT5-HT氮位乙酰转移酶 （5-HTNAT） N-乙酰基-5-甲基5-HT
HIOMT
(褪黑素， melatonin)
褪黑素能抑制垂体促性腺激素的分泌
可防止性早熟
- TPH特异性高，只存在5-HT神经元内
-含量少，活性低 5-HT合成的限速酶
-脑内TPH未被饱和 色氨酸浓度 5-HT合成
.
16
5-羟色氨酸脱羧酶 (5-HTPDC)
(5-hydroxytryptophan decarboxylase) - 需磷酸吡哆醛作为辅助因子 - 含量多，活性高，特异性差 - 普遍存在于神经系统
例：菠萝、香蕉等果品内 蟾蜍的皮肤、蛇的毒液 发现有大量IA
.
3
人体内，首先从血清中发现5－HT 血管某处发生破损 形成血栓或血凝块
人教版高中生物必修一第5章第1节降低化学反应活化能的酶---探究影响酶活性的条件教学课件(共14张PPT)
4
实验步骤设计
❖ 请同学们讨论实验步骤的设计，注意滴 加试剂的顺序
5
实验步骤填写
步骤 项目
试管1 试管2 试管3 淀
1 滴加淀粉酶 1滴
1滴
1滴 粉
2 3
改变pH
1mL盐酸 1mL清水 1mLNaOH 酶
滴加淀粉溶液 1mL
1mL
实 1mL 验
4 滴加碘液
1滴
1滴
1滴
注意摇匀
步骤 项目
试管1
1 滴加肝脏研磨液 1滴
2 改变pH
1mL盐酸
3 滴加过氧化氢溶液 1mL
4 观察气泡量
试管2 试管3 过
1滴
1滴
氧 化
1mL清水 1mLNaOH 氢
1mL
1mL
酶 实
6
验
实验分析—淀粉酶组
为什么用碘液鉴定淀粉时，添加氢氧化钠的试 管中不会变蓝？
补充知识：碘与氢氧化钠会发生反应，从而把 碘消耗了。
所以淀粉酶不适于用来探究pH对酶的影响
❖ 我们将要通过实验来验证所做的假设是否 成立，接下来，我们将要开始设计实验。
3
实验设计中的变量
淀粉酶
❖ 碘淀液粉检测+H2O
麦芽糖
斐林试剂检测
过氧化氢酶
H2O2
H2O+O2
检测气泡
探究pH对酶活性的影响
自变量
因变量
请讨论：1、本实验中的自变量、因变量分别是什么？
2、如何测定因变量？
3、如何控制本实验中的无关变量？
示范操作
10
进一步探究：如何找到酶的最适pH值
步骤
操作项目
1 水槽中的量筒装满水，倒置，胶管连接量筒。 大试管中滴加1滴肝脏研磨液
酶学分析技术PPT课件
第17页/共44页
(四)Km和Vmax的测定 1．Linweaver-Burk作图法,又称为双倒数作图法
1 Km +〔S〕 Km 1
1
—— = ————— = ——— · —— + ———
v Vmax〔S〕 Vmax 〔S〕 Vmax
第18页/共44页
2．Cornish-Bowden作图法 又称为直线线性作图法。
分光光度法测定的公式：
（A测定 – A对照）·V总·106 每单位规定的保温时间
酶单位/升 = —————————×————————
·L·V标
实际保温时间
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四、酶促反应进程
酶促反应进程曲线
第8页/共44页
酶量的测定：
通过酶活性测定间接测得酶的含量，因此，要准确测定酶量，应使酶浓度 （〔E〕）与酶促反应速度成正比，即〔E〕∝-d〔S〕/dt或〔E〕∝d〔P〕/dt。 能够真正代表酶活性大小的是线性期的酶促反应速度，即酶促反应初速度。
乳酸脱氢酶 己糖激酶
-半乳糖苷酶 碳酸酐酶 过氧化氢酶 蔗糖酶 糜蛋白酶
丙酮酸 D-葡萄糖 D-果糖 D-乳糖
H2CO3
H2O2 蔗糖 甘氨酰酪氨酰甘氨酸
0.017 0.05 1.5 4.0 9.0 25 28 108
第14页/共44页
2.反映酶与底物的亲合力
Km值越大，酶与底物亲合力越小， Km值越小，酶与底物亲合力越大。
第28页/共44页
（一）酶偶联反应的原理
在应用酶偶联法测定时，关键在于确定恒态期，因为只有 恒态期才能代表酶活性。如酶促反应底物动力学所述，恒态期 可以通过测定指示酶的Km和Vmax等动力学因数加以计算确定。
第29页/共44页
(四)Km和Vmax的测定 1．Linweaver-Burk作图法,又称为双倒数作图法
1 Km +〔S〕 Km 1
1
—— = ————— = ——— · —— + ———
v Vmax〔S〕 Vmax 〔S〕 Vmax
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2．Cornish-Bowden作图法 又称为直线线性作图法。
分光光度法测定的公式：
（A测定 – A对照）·V总·106 每单位规定的保温时间
酶单位/升 = —————————×————————
·L·V标
实际保温时间
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四、酶促反应进程
酶促反应进程曲线
第8页/共44页
酶量的测定：
通过酶活性测定间接测得酶的含量，因此，要准确测定酶量，应使酶浓度 （〔E〕）与酶促反应速度成正比，即〔E〕∝-d〔S〕/dt或〔E〕∝d〔P〕/dt。 能够真正代表酶活性大小的是线性期的酶促反应速度，即酶促反应初速度。
乳酸脱氢酶 己糖激酶
-半乳糖苷酶 碳酸酐酶 过氧化氢酶 蔗糖酶 糜蛋白酶
丙酮酸 D-葡萄糖 D-果糖 D-乳糖
H2CO3
H2O2 蔗糖 甘氨酰酪氨酰甘氨酸
0.017 0.05 1.5 4.0 9.0 25 28 108
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2.反映酶与底物的亲合力
Km值越大，酶与底物亲合力越小， Km值越小，酶与底物亲合力越大。
第28页/共44页
（一）酶偶联反应的原理
在应用酶偶联法测定时，关键在于确定恒态期，因为只有 恒态期才能代表酶活性。如酶促反应底物动力学所述，恒态期 可以通过测定指示酶的Km和Vmax等动力学因数加以计算确定。
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5-HT的介绍 ppt课件
5-羟色胺
5-Hydroxytryptamine, 5-HT
PPT课件
1
概述
5-羟色胺：
(5-hydroxytryptamine,5-HT或serotonin） 5-HT 衍生于称之为吲哚的芳香族化合物
5-羟色胺在化学上属吲哚胺类化合物
吲哚 构成5-HT
乙胺
PPT课件
2
精品资料
• 你怎么称呼老师？
选择性损毁5-HT能神经末梢
PPT课件
36
例：大鼠脑室注射5,6-双羟色胺75ug,可使 脊髓5－HT含量降低85％以上 持续 6个月尚未恢复
●中脑、下丘脑、隔核和前脑受损轻,5－HT 含量降低40～60％ 持续2～4周恢复 ●纹状体和延桥脑只降低30％左右。 ●同时对大鼠脑内CAs含量也有一定影响; 注射后一天,DA含量降低30％,5天后开始恢复 注射后10天,NA含量降低50％ 再逐渐复原
结合型
游离型
与血小板内5－HT结合 具有生物活性，在
蛋白(serotonectin) 外周起着局部激素
结合 储存血小板内 的作用
无活性
PPT课件
22
失活
5－HT释放后,主要通过 膜转运体重摄取 酶解
重摄取: 5－HT膜转运体属Na+/CI-依赖型转运体 5－HT被膜转运体摄入胞浆 再经囊泡 单胺类转运体 进入囊泡内储存
PPT课件
27
●芳香烃胺氮位甲基移位酶(AANMT) 5-HT AANMT N-甲基- 5-HT
AANMT在神经末梢附近含量较高,但不含于突 触体内,可能分布于突触体的周围. 它的活性变化 会对受体附近的5-HT浓度 发生一定影响 进而影响突触的传递功能
PPT课件
28
5-Hydroxytryptamine, 5-HT
PPT课件
1
概述
5-羟色胺：
(5-hydroxytryptamine,5-HT或serotonin） 5-HT 衍生于称之为吲哚的芳香族化合物
5-羟色胺在化学上属吲哚胺类化合物
吲哚 构成5-HT
乙胺
PPT课件
2
精品资料
• 你怎么称呼老师？
选择性损毁5-HT能神经末梢
PPT课件
36
例：大鼠脑室注射5,6-双羟色胺75ug,可使 脊髓5－HT含量降低85％以上 持续 6个月尚未恢复
●中脑、下丘脑、隔核和前脑受损轻,5－HT 含量降低40～60％ 持续2～4周恢复 ●纹状体和延桥脑只降低30％左右。 ●同时对大鼠脑内CAs含量也有一定影响; 注射后一天,DA含量降低30％,5天后开始恢复 注射后10天,NA含量降低50％ 再逐渐复原
结合型
游离型
与血小板内5－HT结合 具有生物活性，在
蛋白(serotonectin) 外周起着局部激素
结合 储存血小板内 的作用
无活性
PPT课件
22
失活
5－HT释放后,主要通过 膜转运体重摄取 酶解
重摄取: 5－HT膜转运体属Na+/CI-依赖型转运体 5－HT被膜转运体摄入胞浆 再经囊泡 单胺类转运体 进入囊泡内储存
PPT课件
27
●芳香烃胺氮位甲基移位酶(AANMT) 5-HT AANMT N-甲基- 5-HT
AANMT在神经末梢附近含量较高,但不含于突 触体内,可能分布于突触体的周围. 它的活性变化 会对受体附近的5-HT浓度 发生一定影响 进而影响突触的传递功能
PPT课件
28
实验四 乙醇酸氧化酶的测定
五、实验步骤
称取新鲜菠菜叶和油菜叶各1g，加入10ml磷酸缓 冲液，研磨后用脱脂棉过滤。
1
2
4
5
3
取滤液4ml加入0.5ml乙醇酸，28℃保温30min。 加入0.5ml三氯乙酸，2000转/min离心5min。 取上清液2.5ml加入0.5ml苯肼，放置5min，加入 盐酸2ml，铁氰化钾0.5ml。 500nm波长下读出OD值。
实验四 乙醇酸氧化酶活性的测定
一、实验目的
熟悉测定乙醇酸氧化酶活性的方法。
二、实验原理
乙醛酸＋苯肼→乙醛酸苯腙
盐酸＋苯肼＋铁氰化钾→重氮盐
乙醛酸苯腙＋重氮盐→偶氮化合物（红色） 通过测定偶氮化合物的OD值检测乙醇酸氧化酶的 活性。
三、实验材料
菠菜、油菜
四、试剂与仪器设备
苯肼，铁氰化钾，磷酸缓冲液，乙醇酸， 三氯乙酸； 分光光度计，离心机，研钵，移液管， 烧杯，脱脂棉，天平，试管架，漏斗， 试管。
六、实验结果
比较菠菜和油菜的OD值。 说明C3 植物与C4植物酶活性的差异，解释原
因。
说明乙醇酸氧化酶在光呼吸作用中的意义。
七、注意事项
苯肼和铁氰化钾有剧毒，使用时应切忌弄到皮 肤上。
测光时对照用蒸馏水即可。
5HT的介绍优秀课件
选择性损毁5-HT能神经末梢
例：大鼠脑室注射5,6-双羟色胺75ug,可使 脊髓5－HT含量降低85％以上 连续 6个月还未恢复
●中脑、下丘脑、隔核和前脑受损轻,5－HT 含量降低40～60％ 连续2～4周恢复 ●纹状体和延桥脑只降低30％左右。 ●同步对大鼠脑内CAs含量也有一定影响; 注射后一天,DA含量降低30％,5天后开始恢复 注射后10天,NA含量降低50％ 再逐渐复原
95％ 90% 10%
胃肠道 肠嗜铬细胞 肠道各层旳神经丛中
5
Physiologic Distribution of Serotonin
(5-Hydroxytryptamine, 5-HT)
5% CNS
95% GI tract 90% ECs 10% Neurons
OH NH2
NH
5-Hydroxytryptamine
⑤、介导中枢升压机制 ⑥、增进β-内啡肽、皮质酮、促黄体生成素
和催乳素释放
5-HT2B 功能尚不很清楚，有资料以为可使 大鼠胃底血管收缩
5-HT2C ①、行为活动 ②、克制摄食,5-HT2C 受体基因敲除小鼠
出现肌阵孪性发作，贪食和体重增长 ③、克制脑脊液生成 ④、克制肾上腺皮质激素释放
5-HT4受体 参加许多胃肠道功能旳调整:运动,感觉,分泌 参加学习记忆、认知评价、疼痛、焦急、运动
逐渐萎缩,松果体内生成褪黑素旳速度决定 于HIOMT ,5-HTNAT两种酶旳活性
5-HTNAT含量黑夜时比白昼要多15～70倍, HIOMT在黑夜时比白昼高出10倍 夜间褪黑 素生成加速;白昼则降低
夏季时节,昼长夜短 褪黑素生成降低, 减弱了对垂体旳克制 动物性腺成熟快,繁殖 能力增强,冬季正相反
酶解:
例：大鼠脑室注射5,6-双羟色胺75ug,可使 脊髓5－HT含量降低85％以上 连续 6个月还未恢复
●中脑、下丘脑、隔核和前脑受损轻,5－HT 含量降低40～60％ 连续2～4周恢复 ●纹状体和延桥脑只降低30％左右。 ●同步对大鼠脑内CAs含量也有一定影响; 注射后一天,DA含量降低30％,5天后开始恢复 注射后10天,NA含量降低50％ 再逐渐复原
95％ 90% 10%
胃肠道 肠嗜铬细胞 肠道各层旳神经丛中
5
Physiologic Distribution of Serotonin
(5-Hydroxytryptamine, 5-HT)
5% CNS
95% GI tract 90% ECs 10% Neurons
OH NH2
NH
5-Hydroxytryptamine
⑤、介导中枢升压机制 ⑥、增进β-内啡肽、皮质酮、促黄体生成素
和催乳素释放
5-HT2B 功能尚不很清楚，有资料以为可使 大鼠胃底血管收缩
5-HT2C ①、行为活动 ②、克制摄食,5-HT2C 受体基因敲除小鼠
出现肌阵孪性发作，贪食和体重增长 ③、克制脑脊液生成 ④、克制肾上腺皮质激素释放
5-HT4受体 参加许多胃肠道功能旳调整:运动,感觉,分泌 参加学习记忆、认知评价、疼痛、焦急、运动
逐渐萎缩,松果体内生成褪黑素旳速度决定 于HIOMT ,5-HTNAT两种酶旳活性
5-HTNAT含量黑夜时比白昼要多15～70倍, HIOMT在黑夜时比白昼高出10倍 夜间褪黑 素生成加速;白昼则降低
夏季时节,昼长夜短 褪黑素生成降低, 减弱了对垂体旳克制 动物性腺成熟快,繁殖 能力增强,冬季正相反
酶解:
植物生理学实验2
五. 实验课内容和具体安排
实验理论。（书面作业：谈谈小液流法和质壁分离法测定植 物组织水势的区别，并就小液流法测定植物组织水势写一份 实验报告）（第1周） 2. 植物组织培养，研究植物细胞脱分化、再分化与激素的关 系。如果自定植物材料，培养基配制要自己提出方案，并有 切实可行的参考文献为依据，并且自己准备实验材料。从愈 伤组织诱导到最后组培苗生根移栽要有详细记录、照片为重 要依据，最后（约2个月）提供完整实验报告（第2、3周） 3. 乙烯对植物生长效应的观察（三重反应，用拟南芥和绿豆） （第3周） 4. 叶绿体色素的提取、分离和理化性质分析；（要求自己采集 实验材料） （第5周） 5. 现代农业设施参观（孙桥），考察后从植物生理的某个角度 写一观后考察报告。（时间待定） 6. 探究性实验 1.
三. 植物生理学研究的基本思路
1. 根据研究的目标确定研究内容，根据内 容选择研究方法； 2. 多数生物学问题的研究包括：形态，生 理生化水平变化，内源调节物变化，基 因表达和蛋白质调控水平变化； 3. 要注意研究内容（或所选择的研究指 标）和研究目标的相关性
四. 实验课的开展形式植物生理学
1. 以书面作业，自学方式理解和掌握实验原理； 2. 教师讲解，学生动手操作 3. 以学生为主体，以组为单位选择研究目标，设计 研究方案，在教师指导下完成
3. 光合作用
光合作用是植物生理学中的核心知识，从知识结构上包括两部分， 一是光合作用的机理，二是环境条件和光合作用效率的关系，前者 是后者的基础。反应光合作用效率大小的常用指标包括： ①光合器官的结构和光合色素：叶绿体的超微结构、片层结构往往 反应其功能（C3, C4超微结构的不同）； 色素是光能吸收、传导和 转化的重要物质基础，色素的含量、比例变化往往和光合效率、环 境条件有着一定的对应关系，往往是分析的重要指标； ②光合作用强度：底物CO2的消耗或产物O2的增加，或光合碳同化 产物的变化多种方法，其中红外线CO2测定是相对较准确的方法； ③反映光合磷酸化能力的 叶绿体偶联因子腺苷三磷酸酶(ATPase)活 力； ④碳同化过程中的酶活力等。
吲哚乙酸
产品名称：吲哚乙酸、indole-3-acetic acid、IAA、Auxin其他名称：吲哚-3-乙酸、氮茚基乙酸、杂茁长素、生长素化学名称：3-吲哚乙酸分子式：C10H9NO2分子量：175.19熔点：165—169℃闪点：171℃CAS：87-51-4毒性：微毒，对人畜无害。
小鼠经皮>LD50 1000mg/kg。
按规定剂量使用，对蜜蜂无毒。
理化性质：纯品是无色叶状晶体或结晶性粉末。
遇光后变成淡黄色或玫瑰色。
易溶于无水乙醇、醋酸乙酯、二氯乙烷。
可溶于乙醚和丙酮。
不溶于苯、甲苯、汽油、水及氯仿。
不溶于水，其水溶液能被紫外光分解。
但对可见光稳定。
作用和功效：可由茎、叶和根系吸收，使用浓度不同，既可起促进作用，也可起抑制作用。
见光易分解。
1.影响细胞分裂、细胞伸长和分化。
2.影响营养器官和生殖器官的伸长、成熟和衰老。
3.用于组织培养中，诱导愈伤组织和根的形成。
使用技术：1、诱导番茄单性结实和坐果，在盛花期以3000毫克/升药液浸泡花，形成无籽番茄果，提高坐果率；2、促进插枝生要是它应用最早的一个方面。
以100~1000毫克/升药液浸泡插枝的基部，可促进茶树、胶树、柞树、水杉、胡椒等作物不定根的形成，加快营养繁殖速度。
1~10毫克/升吲哚乙酸和10毫克/开恶霉灵混用，促进水稻秧苗生根。
3、调节花期。
菊花用25-400毫克/升药液喷洒一次菊花（在9小时光周期下），可抑制花芽的出现，延迟开花。
4、生长在长日照下揪海棠以10负5次方摩尔/升浓度喷洒一次，可增加雌花。
处理甜菜种子可促进发芽，增加块根产量和含糖量。
5、作为扦插生根，木质插条，浸在0.02%～0.025%浓度溶液中18～24小时；6、半木质插条，浸在0.015%～0.02%浓度溶液中8～12小时；7、草木插枝，浸在0.005%～0.0075%浓度溶液中6～8小时。
用途：本品是一种植物生长物质，在所有的植物中均有存在，亦发现存在于细菌、真菌和酵母体内。
植物激素课件ppt
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生长素的合成
生长素主要在植物的幼嫩组织中合成 ，特别是叶原基、嫩叶和发育中的种 子。合成原料主要是色氨酸，参与合 成的酶是吲哚乙酸合成酶。
生长素的分布
生长素在植物体内的分布广泛，但相 对集中在生长旺盛的部分，如胚芽鞘 、芽和根顶端的分生组织、形成层和 发育中的种子等。
生长素的生理作用
促进生长
生长素最显著的生理作用是促进植物 生长，表现为促进细胞伸长和扩大， 从而使植物体整体生长加快。
药用应用
03
在药用植物中，可以使用脱落酸来促进药用成分的合成和积累
，提高药材的药效。
06
其他植物激素
油菜素内酯
总结词
油菜素内酯是一种植物激素，具有调节植物生长和发育的作用。
详细描述
油菜素内酯是由油菜素内酯合成酶催化合成的一类植物激素，主要参与植物的生长发育调节。它能促进细胞伸长 和分裂，增加叶绿素含量，提高光合作用效率，从而促进植物生长和发育。此外，油菜素内酯还能提高植物的抗 逆性，如抗旱、抗寒、抗病等。
细胞分裂素可用于促进植物生长，提高产量和品 质。
园艺
细胞分裂素可用于花卉、树木等园艺植物的繁殖 和生长调节。
药用植物
细胞分裂素可用于药用植物的快速繁殖和生长调 节。
05
脱落酸
脱落酸的合成与分布
合成
脱落酸主要在植物叶片中的气孔、茎和果实等部位合成。合成过程中需要经过一 系列酶的催化反应，包括甲羟戊酸途径和类异戊二烯途径等。
赤霉素的生理作用
01
02
03
04
促进细胞伸长
赤霉素最显著的生理作用是促 进植物细胞伸长，从而使植物
增高。
促进种子萌发