测定六堡茶中茶氨酸含量

（十）称量和测定
将茶氨酸晶体用分析天平称量其质量，并计算其含量。
(十一)提取工艺优化
1：用不同温度的水浸取，比较茶氨酸提取率的最适浸取温度
2：在最适浸取温度下，用不同水量浸取，比较最适提取剂的用量
离子交换法从茶叶中提取茶氨酸
（一）茶浸提液的制备与预处理
将100 g茶叶末加入到2 x 600 mL的80℃热水中，分别浸提30 min，过滤，滤液浓缩到120 mL。浓缩液用2 x 150 mL乙酸乙醋萃取出茶多酚等，水相脱除有机溶剂后制得茶浸提液，备用。
(五)沉淀
向盛有上述操作4的被静置18 h的上清溶液的大号烧杯中，加入约62 g碱式碳酸铜[Cu2(OH)2C03]，边搅拌边微热，使溶液中的茶氨酸与碱式碳酸铜充分反应。待冷却至室温时，将该烧杯中的混合液移至离心过滤器中过滤，并用蒸馏水洗涤沉淀物(茶氨酸铜)。
(六)溶解
将上述操作5的沉淀物（茶氨酸铜）移至盛有约480mL 1.2mol∕L硫酸溶液的大号烧杯中,搅拌,使沉淀物(茶氨酸铜)完全溶解(硫酸与茶氨酸铜反应生成硫酸铜和茶氨酸)
（二）离子交换树脂的预处理
用浓度为1mol/L、体积用量是离子交换树脂量3倍的盐酸溶液浸泡树脂4h,反复水洗至中
性;再用3倍体积、浓度为1mol/L氢氧化钠溶液浸泡树脂4h,反复水洗至中性后用与相同体积和浓度的盐酸将树脂转为氢型;水洗至中性,备用。
（三）茶氮酸的制备
将水相脱除有机溶剂后的茶浸提液,用盐酸调pH至3.5,加人含壳聚糖1%的溶液絮凝去掉
（二）茶氨酸性质
纯净的茶氨酸为白色针状晶体,具有焦糖香和类似于味精(谷氨酸钠)的鲜爽味,难溶于无水乙醇，乙醚和汽油等有机溶剂,极易溶于水，常压下熔点为490~491K（同时发生分解反应），
茶氨酸在水溶液中能够发生弱电解质行为,其水溶液显示弱酸性。
实验步骤
离子沉淀法提取六堡茶茶氨酸
（一）热水浸提：将500g的六堡茶叶研磨粉碎，用热水浸泡约3小时，使茶叶最大限度溶于水，然后进行粗过滤，收集滤液。
4絮凝温度：在8支试管中依次加入浸提液10 mL,分别在20,30,40,50,60,70,80℃加入壳聚糖絮凝剂:1 mL,加入后振摇,静置,测定透光率,观察絮凝效果
5pH：pH对絮凝除杂效果的影响有两方面:一是影:响溶液中欲去除杂质的表面带电情况;二是影响絮凝剂的电离程度和絮凝分子链伸展程度。在相同温度下考察不同pH浸提液的絮凝效果
(七)除Cu2+.
将上述操作6烧杯中(反应后)的溶液移至1 000 mL双口瓶中，并在双口瓶的两口上分别装上带有直角玻璃管的单孔胶塞[直角玻璃管的一端伸入双口瓶底部，但不与瓶底接触;另一(露出口)与H2S气体发生器导管相连]和带有“『”型玻璃管的单孔胶塞(『型玻璃管的长管末插入盛有NaOH溶液的烧杯中)。打开H2S气体发生器旋塞，向该双口瓶的溶液中通入H2S气体，使Cu2+与H2S充分反应(生成CuS沉淀)。然后，将该反应完毕的混合液置于离心过滤器
并在离心过滤器中过滤(去PbS04)，收集滤液。
(四)浓缩与萃取
将上述操作3的滤液置于不锈钢高效离心薄膜浓缩器中，使滤液浓缩至500 mL。向浓后的溶液中加入约350 mL氯仿(CHCl3)，并搅拌约6 min(萃取咖啡碱)。然后，将该混合液(分量、分阶段)置于大号分液漏斗中，待其中的液一液分界而相对清晰时，将下层溶有咖啡碱的液体弃去(重复操作至分离完毕)。收集被分离出的水层溶液，存放于冰箱中静置约18 h.
（四）称量和测定
将茶氨酸晶体用分析天平称量其质量，并计算其含量。
（五）工艺优化
1提取温度：将同一批茶末在不同温度下提取,比较溶液中茶氨酸浸出率
2提取时间：在相同温度下用水浸提,每隔1 h取样分析茶氨酸含量,比较提取率
3提取剂用量：取同一批茶叶10 g,用不同量的水于相同温度浸:提3 h，比较最适提取量
测定六堡茶中茶氨酸含量，提取工艺的对比和优化
前言：六堡茶产于广西苍梧县六堡乡，故称苍梧六堡茶。此茶已有200多年的产销历史，畅销东南亚各国，深受消费者欢迎。
茶氨酸是茶叶的主要呈味物质，能缓解茶叶的苦涩味．由于茶氨酸具有保护神经细胞、增强免疫能力、降血压、协助抗癌等一系列药理和保健作用，同时具有良好的安全性、稳定性，因而应用前景相当广阔，是近年来国内外天然药物、天然保健品、功能饮料领域最具潜力的功能成分之一．
（二）除茶多酚及蛋白质
滤液中加入约80g碱式醋酸铅，搅拌，使其中的多酚类物质和蛋白质发生变性而沉淀。
然后在离心过滤器中过滤，除去滤液中多酚类物质和蛋白质。
（三）脱铅
往上述滤液中入过量硫酸溶液，使Pb2+与SO42-充分反应(Pb2++ SO42-=PbS04↓)。然后用0.5 mol∕L氢氧化钠溶液中和硫酸(2Na0H+H2SO4=Na2S04+2H20)，调节溶液pH值至7.0,
中过滤，并收集滤液。
(七)除SO42-。
向上述操作7的滤液中加入约240 mL 2.4 mol∕LBaCI2溶液，与滤液中SO42-一发生反应(Ba2+SO42-=BaSO4↓)。待反应完毕时，在离心过滤器中过滤，收集滤液。然后，将该滤液浓缩、干燥，可得粗茶氨酸。
(九)精制
将上述操作8所得的粗茶氨酸置于盛有约200 mL蒸馏水的烧杯中，微热(约333 K)、搅拌，使粗茶氨酸溶解，并用无水乙醇进行重结晶。这样，按照“茶氨酸 热浓茶氨酸溶液} 结晶”的操作顺序.重复操作2~3次，可得到较纯净的茶氨酸针状晶体。
多糖等杂质,过滤,滤液用非极性大孔吸附树脂D101除去色素及大分子物质后得到清澈液体。
用732型强酸性离子交换树脂交换吸附茶氨酸,再用水将吸附后的离子交换树脂洗至中性,换用磷酸盐缓冲溶液洗脱,收集洗脱液。洗脱液减压浓缩,对浓缩液进行醇沉,离心分离后得到离心清液。离心清液减压浓缩至近干后,加人95%的乙醇溶解,冷却,重结晶,干燥后得到白色针状茶氨酸晶体。
因此研究六堡茶中茶氨酸的提取工艺和优化具有重要的前景和意义。
实验原理：
（一）茶氨酸的结构
茶氨酸又名“谷氨酰乙胺”。即“N-乙基-γ-L-谷氨酰胺”。为谷酰基与乙胺的结合体，茶树特有的酰胺化合物。白色针状体，易溶于水，熔点217～218℃(分解)，具醇和甜鲜味，阈值0.06%。分布于除子叶以外所有器官，冬季的吸收根与春季的新梢积聚最多，芽叶中高达干物重的2%，有时甚至达4%，干茶中含量以春茶最高，夏茶最低，秋茶居中，这与产品品质变异相吻合。生物合成在根部，生长季节不断转运到树冠叶部，为“顶端优势”生长提供氮源，也是优质鲜叶的物质基础。结构式如下：