第3章 细胞生物学研究方法-2016
第三章细胞生物学研究方法习题及答案
第三章细胞生物学研究方法习题一、选择题1 正常细胞培养的培养基中长需加入血清，主要是因为血清中含有（C ）A. 氨基酸B. 核酸C.生长因子D.维生素2 冷冻蚀刻技术主要用于（A ）。
A.电子显微镜B. 光学显微镜C.原子力显微镜D.激光共聚焦显微镜3 建立分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞是通过下列哪种技术构建的？（A ）A. 细胞融合B. 核移植C. 病毒转化D. 基因转移4 关于光镜的使用，下列哪项有误？（C ）A. 观察标本时，应双眼同时睁开、双手并用B. 按照从低倍镜到高倍镜到油镜的顺序进行操作C. 使用油镜时，需要在标本上滴上香柏油，将聚光器降至最低，光圈全部开放。
5 为了实现细胞内某种蛋白质的亚细胞精细定位，可对该蛋白进行标记，下面哪种标记可行（C）A. GFP标记B. 免疫荧光标记C. 免疫电镜技术D. 荧光染料直接染色6 为了提高雌性乳牛出生的比例，可在体外将携带X染色体和Y染色体的镜子分离开，进行人工授精。
最好的分离方法使（A ）A. 流式细胞分选术B. 离心技术C. 细胞电泳D. 层析7 为了观察病毒，可通过何种方法进行观察（B ）A. 相差显微镜观察B. 负染色后用电镜观察C. 激光共聚焦显微镜观察D.以上都错8 以下哪些技术一般不用于分离活细胞？（CD ）（可多选）A. 流式细胞技术B. 细胞电泳C. 超速离心D.差速离心9 某研究生为了研究一特定膜蛋白的胞质结构域的功能，需要制备和分离外翻的细胞膜泡，为了获得无污染的外翻膜泡，下列选项中，哪些是他在实验中有可能使用到的?（BD ）（可多选）A. SDSB. 凝集素C.流式细胞仪D. 柱层析10 绿色荧光蛋白GFP（Green Fluorescent Protein）基因与目的基因融合后，转入细胞后可以（ABD ）（可多选）A. 检测融合蛋白在细胞中的准确定位B. 检测目的基因所编码的蛋白在细胞中的含量C. 检测目的基因所编码的蛋白在细胞中的分子结构D. 检测目的蛋白质在细胞中的表达量E. 以上答案都不对二、填空题1 流式细胞仪可以定量测定细胞中的DNA，RNA或某种特异蛋白的含量及细胞群体中上述成分含量不同的细胞数量。
细胞生物学第三章细胞生物学研究方法知识讲解
利用放射性标记技术研究生物大分子 在细胞内的合成动态
步骤
– 适宜的放射性前体分子标记机体或细胞 – 常规制片 – 暗室敷乳胶(核子乳胶3-10m) – 暗盒暴光或自显影 – 显影、定影、观察
与显微自显影区别
敷胶要单层晶体 暴光时间长
定量细胞化学分析技术
细胞显微分光光度术(Microspectrophotometry) 利用细胞内某些物质对特异光谱的吸收， 测定这些物质(如核酸与蛋白质等)在细胞 内的含量 包括： 紫外光显微分光光度测定法 可见光显微分光光度测定法 BACK
0.2 m
电子显微镜技术(Electro microscopy)
0.2nm
扫描探针显微镜(Scanning Probe Microscope)
3nm, 0.7nm
扫描遂道显微镜 (scanning tunneling microscope)
（侧0.1-0.2，纵0.001nm）
BACK
光学显微镜技术
自发荧光(叶绿素)、诱发荧光(酸性品红、甲基 绿、吖啶橙)
优点：
– 多种成分定位 – 只有激发荧光可成像，敏感度高 – 染色简便 – 标本呈彩色图像 – 固定细胞和活细胞
数字成像显微技术
图像后期处理，提高信/噪比、放大信号 摄像机和计算机 原理：摄取同一区域多幅图像，信号经
计算机放大、假信号减弱或消除
BACK
扫描遂道显微镜原理
量子力学中的隧道效应，即在低电压下，二电 极之间具很大阻抗，阻止电流通过(势叠)
当二电极间近到一定距离时，电极间产生了电 流(隧道电流)，且Iexp(-2Kd)，d为针尖与样品 间距离，K为常数，d转化为I的函数而被测定
扫描探针与样品接触或达到很近距离时，即产 生彼此间相互作用力，并在计算机显示出来，从 而反映出样品表面形貌信息、电特性或磁特性等
细胞生物学笔记
第三章细胞生物学研究方法一. 名词解释：1.细胞株从原代培养物中接种出来的一群不均一的细胞群（染色体数目不变，不能无限长期传代、繁衍）。
2.细胞系细胞系一般都是转化细胞，可以无限传代长期繁衍下去，每种细胞系都具有特殊的遗传标志特征，3.接触抑制当贴壁生成单层细胞且细胞达到一定密度相互接触时，造成细胞表面许多反应受到遮蔽，从而细胞的生长和繁殖受到抑制。
4.电融合技术将悬浮细胞在低压交流电场中聚集成串珠状细胞群或相互接触的单层培养细胞，加高压电泳冲促使融合的技术。
5.密度梯度离心离心操作如果在一种连续密度梯度介质中进行，6.差速离心装有不均一粒子的离心管在离心机中高速旋转时，大小、密度不同的粒子将以各自的沉降速率移向离心管底部7.细胞克隆由单个细胞培养繁殖而成的一群遗传性状完全相同的细胞群体。
二. 简答题:1.透射电镜、扫描电镜、扫描隧道显微镜的原理2.细胞及细胞器分离提纯方法细胞：采用流式细胞术；细胞器：超速离心术，差速离心术，密度梯度离心术，蔗糖密度梯度离心术，氧化铯密度梯度离心。
3.动物细胞培养方法液体悬浮培养，平板培养，回转玻璃管培养。
4.单克隆抗体技术及优点单克隆抗体技术是细胞杂交技术的成功应用，正常的淋巴细胞具有分泌抗体的能力，但不能在体外长期培养，瘤细胞可以在体外长期培养，但不能分泌抗体，将两细胞融合成杂交瘤细胞这样既能合成抗体，又能在体外无限繁殖，优点：永久性产生，特异性强，5.如何利用细胞杂交技术由不纯的抗原制备纯的抗体6.免疫荧光技术及应用7.相差显微镜的原理其基本原理是吧透过标本的可见光的光程差变成振幅差，从而提高了各种结构中的对比度，使各种构造变得清晰可见。
第四章细胞质膜与细胞表面● 1. 成斑现象. 2. 成帽现象.● 3. 连接子. 4. 化学突触. 4.“多莉”克隆羊的问世对细胞生物学研究有何意义？1、首次证明了哺乳动物成体细胞的细胞核仍保持有细胞全能性；2、首次证明了哺乳动物特化细胞的发育潜能是有可能在人为条件下发生逆转的，；3、证明了动物克隆并不是100%的复制。
翟中和细胞生物学第三章 细胞生物学研究方法 (1)
差速离心
介质密度均一，速度由低到高，逐级离心(分离大 小悬殊的细胞和细胞器)
沉降顺序: 核-线粒体-溶酶体和过氧化物酶体-内质 网和高尔基体-核蛋白体
细胞成分的细胞化学显示方法
DNA: 福尔根反应(希夫试剂与脱氧核糖露出的醛 基反应 呈紫红色) 多糖: PAS反应 呈紫红色 脂滴: 四氧化锇，苏丹Ⅲ(橘红色)，苏丹Ⅳ(红色) 蛋白质: 米伦反应(氮汞试剂与Tyr反应形成红色沉 淀)，重氮反应(氢氧化重氮与Tyr,Trp,His形成有 色物)，双缩脲反应
优点:用混合性的异质抗原制备出针对某一单一性 抗原分子上特异决定簇的同质性单克隆抗体
Subtopic 1
双向凝胶电泳 色谱技术
质谱(MS):质荷比 蛋白质芯片 生物信息学
蛋白质组学技术(一组基因组所表达的 全部蛋白质)
大肠杆菌-操纵子学 豌豆与果蝇-遗传学定律 酵母与海胆-细胞周期调控机制 线虫-细胞调亡机制 小鼠-哺乳动物基因组学 斑马鱼，拟南芥
RNA水平: RNAi
DNA水平: 基因敲除
常用的模式生物 突变体制备技术
模式生物与功能基因组的研究
工作原理
荧光漂白恢复技术 (PFR)
活细胞中蛋白质分子是否存在直接的相互作用(纳 米距离＜10nm)
细胞内Ca离子的浓度变化
荧光共振能量转移技术 (FRET)
同位素标记的生物大分子前体的掺入和同位素所 在位置的显示
细胞及生物大分子的动态变化
DNA: 氚(3H)标记的胸腺嘧啶脱氧核苷(3H-TdR) RNA: 氚标记的尿嘧啶核苷(3H-U) 蛋白质: 35S标记的蛋氨酸和半胱氨酸
特异蛋白抗原的定位与定性
免疫荧光技术(直接，间接)
抗原-抗体(偶联荧光分子)特异性结合
第三章 细胞生物学研究方法(杨恬)
(Cell Biology Research Methods)
内容
一、细胞生物学研究方法的评价
二、细胞生物学的主要研究方法 及进展
细胞生物学研究方法
一、细胞生物学研究方法的评价
细胞生物学是一门重要的生命科学学科，生命科 学的理论建立在严密的科学实验的基础上，因此，细 胞生物学研究技术和方法的进步以及实验工具的革新， 尤其是具有突破意义的新技术新方法的建立，必然对 学科的发展起到巨大的推动作用。
激光扫描共聚焦显微镜图像及计算机三维重建图像
扫描隧道显微镜、X线衍射技术和原子力显微镜 等成像方法使研究者能在分子水平探索细胞的微细 结构及其功能。
血细胞经新型抗菌肽Phyllomelittin（猴树蛙）处理 后的表面变化。
（二）原位组分展示技术（displaying techniques in Situ）
主要期刊杂志
Cell Nature Science EMBO Annual Review of Cell Biology Trends in Cell Biology Cell Research 科学通报 中国科学
对细胞及组织的多种化学成分分进行定性、定 位和定量的研究。
原位组分展示技术
免疫细胞化学技术（immunocytochemistry，ICC）是 利用免疫学中抗原抗体特异性结合的原理来定性和定位研 究器官、组织和细胞中的生物活性大分子的技术。
免疫细胞化学技术
放射自显影术（autoradiography）以放射性核素标记生 物标本中的大分子或其前体物质，在显微和亚显微结构水 平显示组织和细胞内放射性核素标记的物质的位置和数量 及其变化。
免疫磁珠技术的特异性高并能保持分离细胞的活性
细胞生物学-第3章-细胞生物学研究方法(翟中和第四版)
基础上，添加 “环状光阑”和
“相差板”，将光程差或相位差， 转换成振幅差。 • 这是在构造上，相差显微镜不同于 普通光学显微镜两个特殊之处。
体外培养MDCK 细胞在普通（明视场）光学显微镜（A） 和相 差显微镜（B）下拍摄图像效果的比较
（二）相差显微镜和微分干涉显微镜
（一）普通复式光学显微镜——样品制备
甲醛
石蜡
5μm
（二）相差显微镜和微分干涉显微镜
相差显微镜
发明： 1934~1935 荷兰物理学家Zernike 设计和发明相差显微 镜，并获得诺贝尔奖。
原理：利用光线干涉的原理把透过标本的可见光的光程差变 成振幅差，表现为明与暗的对比，从而提高了各种结构之间 的对比度，使标本的各种结构变得更清晰。
（Байду номын сангаас）荧光显微镜——基本原理
特点： 1. 利用汞灯或氙灯作为荧光激 发光源，波长较短，分辨 率高于普通显微镜； 2 . 核心部件是滤光片系统及专 用物镜镜头； 3. 滤光片系统由激发滤光片和 阻断滤光片组成。 应用： 对细胞内生物大分子进行 定性、定位研究。
520~560nm的 绿色荧光透过
阻断滤光片
用超速离心技术分离细胞组分
组织匀浆
差速离心
密度梯度离心
分离出各组分
用途：于分离细胞器与生物大分子及其复合物 差速离心：分离密度不同的细胞组分
密度梯度离心：精细组分或生物大分子的分离
二、细胞成分的细胞化学显示方法
• 显色剂与细胞组分中特殊基团的结合 • 通过显色剂在细胞中的定位及颜色的深浅来判断蛋白质、 核酸、多糖和脂质在细胞中的分布和相对含量
福尔根反应 Feulgen stain
第三章细胞生物学的研究方法练习题及答案
第三章细胞生物学的研究方法练习题及答案第三章细胞生物学的研究方法名词解释1.分辨率( resolution)2.细胞培养( cell culture)3.原代培养( primary cult)4.传代培养( secondary culture)5.细胞系( cell lin)6.等电聚焦电泳( isoelectric focusing)7.cDNA克隆( CDNA cloning)8.非细胞体系( cell free system)9.蛋白质组学( proteomics)10.核酸原位杂交技术( in situ hybridization,ISH)11.放射性自显影技术( autoradiography)12.显微结构( microscopic structure)13.超微结构( ultramicroscopic structure)14.单细胞测序技术( single cell sequencing)15.转基因小鼠( (transgenic mouse)二、单项选择题1.离心法是分离细胞器及细胞组分的重要手段,下面描述错误的是A.差速离心法只能将大小显著不同的成分分开B.平衡沉降法分离取决于细胞成分的大小和形状C.利用免疫磁珠,无需高速离心,即可将膜性细胞器分离出来D.速度沉降可以使tRNA与其他成分分开E.超速离心法可以根据生物大分子的沉降系数较精确的测定其分子量2.检测特异DNA分子的方法是A.噬菌体展示B.ISHC. Western blotD. Southern blotE. ChlP3.苏丹染料可以显示的细胞中成分是A.蛋白质B. DNAC. RNAD.糖E.脂肪4.扫描隧道显微镜的侧分辨率约为A.2μmB.0.2μmC. 0.2nmD.2nmE.2?5.目前广泛应用的高效基因敲除技术是A.cDNA克隆B. RNAiC.CRISPR/Cas9D. ChIPE.转基因6.可得到完整的细胞三维结构图像的显微镜是A.透射电子显微镜B.荧光显微镜C.暗视野显微镜D.相差显微镜E.共聚焦激光扫描显微镜7.关于免疫沉淀技术的错误描述是A.用耦联在磁珠上的目的蛋白抗体将目的蛋白及其相互作用的蛋白沉淀出来B.可通过SDS=PAGE或生物质谱对沉淀出来的蛋白进行鉴定C.属于体内实验方法,能得到细胞内蛋白相互作用的动态结果D.细胞内本来没有相互作用的蛋白质在破碎细胞时可能发生凝聚,产生假阳性E.简便易行8.无需染色、标记,即可直接用于观察活细胞状态的显微镜是A.扫描电子显微镜B.透射电子显微镜C.普通光学显微镜D.倒置相差显微镜E.荧光显微镜9.关于RNAi的基本原理,错误的描述是A. Dicer酶将外源性双链RNA切割成短 SIRNAB. SIRNA参与形成RNA诱导沉默复合物C.每个RISC都包含一个 SIRNA和一个 DicerD.激活RISC需要依赖ATP将小分子RNA解双链E.激活的RISC通过碱基配对定位到同源mRNA转录本上10.制作透射电子显微镜超薄切片时,下列不必要的是A.固定B.包埋C.切片D.金属投影E.染色11.能够在溶液中对生物大分子进行高分辨率结构测定的技术是A.X射线晶体衍射技术B.核磁共振技术C.扫描电子显微镜D.冷冻电镜E.共聚焦激光扫描显微镜12.透射电子显微镜借助一定的技术手段可获取细胞亚显微结构的三维图像,下面手段不可行的是A.金属投影B.金属复型C.金属染色D.冰冻断裂E.冰冻蚀刻技术高13.与化学合成的SIRNA相比,利用慢病毒构建的短发卡shrna载体所具有的显著优势是A.更特异地阻断特定基因表达B.效率更高C.可以整合到受感染细胞的基因组,进行长时间的稳定表达D.操作更简便E.有正反互补的短干扰RNA序列14.关于冷冻电子显微镜技术的错误描述是A.对溶液中生物分子进行高分辨率结构测定B.需要比较大量的样品C.结构解析主要是指单颗粒三维重构技术D.不需要样品结晶E.快速冷冻可以使蛋白质保持其天然结构状态15.能够从组织切片中精确分离单一细胞的方法是A.免疫磁珠法B.荧光激活细胞分选仪C. Percoll精细密度梯度离心D.细胞克隆E.激光捕获显微切割技术16.有关原子力显微镜的错误描述是A.在扫描隧道显微镜基础之上发展起来的B.不需要所检测的样品具有导电性C.可对单个分子进行操控D.分辨率比扫描隧道显微镜高E.显示样品表面微细结构的三维特征17.用物理的方法裂解细胞产生的微粒体,主要来自的细胞器是A.过氧化物酶体B.高尔基复合体C.线粒体D.溶酶体E.内质网18.一般情况下,细胞裂解液中不能含有的成分是A.渗透压维持剂B.蛋白酶C.阴离子去垢剂SDSD.非离子型去垢剂 Triton X-100E.兼性离子型去垢剂 CHAPS19.生物医学研究中,最常用于个体水平基因操作特别是基因敲除的模式动物是A.小鼠B.果蝇C.秀丽隐杆线虫D.斑马鱼E.爪蟾20.操作简单、特异性强,能够在多细胞悬液中分离特定细胞的方法是A.免疫磁珠法B.荧光激活细胞分选仪C. Percoll精细密度梯度离心D.利用细胞贴壁生长和悬浮生长的特性进行细胞培养E.激光捕获显微切割技术21.细胞培养时所用的培养基中不包含A.血清B.氨基酸C.二氧化碳D.维生素E.微量元素22.考察细胞侵袭和转移能力变化的方法是A.嵌套小室( transwell法)B.软琼脂集落形成实验C.细胞生长曲线绘制D.流式细胞仪的DNA倍体分析E.细胞活力检测(MTT法)23.常用于细胞DNA和RNA抽提的试剂是A.渗透压维持剂B.蛋白酶抑制剂C.异硫氰酸胍D.阴离子去垢剂E.兼性离子型去垢剂24.将细胞匀浆以100000g超速离心,上清液部分含有A.线粒体B.溶酶体C.细胞核D. RNAE.微粒体25.超分辨显微技术可使光学显微镜的分辨率达到A.2μmB.50nmC.0.2nmD.2nmE.2?26.对体外非细胞体系进行蛋白翻译,不需要的成分或结构是A.已知序列的mRNAB. IRNAC.核糖体D. ATPE.RNA聚合酶I(PolⅡ)27.一般来说,分离纯化蛋白质最有效的方法是A.亲和层析B.阴离子交换层析C.阳离子交换D.凝胶滤过层析E.疏水性层析28.能揭示蛋白质精确三维结构的方法是A.扫描电子显微镜B.柱层析C.X射线晶体衍射技术D. SDS-PAGEE.共聚焦激光扫描显微镜29.用凝胶滤过层析分离蛋白,最先流出的蛋白的分子量为A 500kDa B.200k Da C.100kDaA.50kDa E.10kda030.从细胞中分离染色质,抽提液中不能含有A.DNA酶B.RNA酶C.异硫氰酸胍D.氯仿E.蛋白酶K31.二硫苏糖醇(DTT)在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中的作用是A.与蛋白质疏水区结合B.使蛋白质带负电荷C.使蛋白质中的二硫键断裂D.使蛋白质分子折叠E.控制凝胶孔的大小32.电子显微镜观察生物标本的分辨率约为A. 2μmB.0.2μmC.0.2nmD.2nmE.2?33.SDS在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中的作用是A.与蛋白质亲水区结合B.控制凝胶孔的大小C.使蛋白质中的二硫键断裂D.使蛋白质分子折叠E.使蛋白质带负电荷34.高通量测序技术可与其他基因组水平研究技术相联合,但不包括A.Protein-sepB. RNA-seqC. ChIP-seqD.CLIP-seqE.Methyl-seq35.关于核酸电泳的错误描述是A.是核酸分离鉴定的主要方法B.样品不需事先处理就可直接进行电泳C.核酸在碱性条件下向阳极移动D.可直接判定核酸的纯度、完整性及片段大小E.琼脂糖凝胶电泳分辨率高于丙烯酰胺凝胶电泳36.下列关于生物芯片技术的错误叙述是A.由生物学、微电子学、物理学和计算机科学等多学科交叉融合而成B.主要包括基因芯片和蛋白质芯片C.基因芯片中,荧光素直接标记待检测的mRNA分子D.可用于筛选候选基因E.可通过蛋白质-蛋白质间的相互作用对靶蛋白分子进行高通量检测37.关于免疫细胞化学技术,错误的描述是A.利用抗原抗体特异性结合的原理来研究细胞中生物大分子的定位B.利用荧光染料标记的抗体可以对细胞中的特定分子进行定位C.将荧光物质或酶类直接标记一级抗体可以提高检测灵敏度D.利用胶体金标记抗体,可在电镜下观察特定分子的分布情况E.可对器官、组织、细胞中的生物分子进行定性、定位研究38. Western blot不可以用于检测蛋白质的A.含量B.大小C.三维结构D.磷酸化E.泛素化39.放射性自显影技术是用放射性同位素标记生物样品中的大分子或其前体物质,下列属于强放射性同位素的是A.131IB.35SC.3HD.32PE.14C40.可用于观察细胞表面三维结构的显微镜是A.扫描电子显微镜B.透射电子显微镜C.暗视野显微镜D.相差显微镜E.荧光显微镜41.关于绿色荧光蛋白(GFP)的错误描述是A.是研究蛋白质亚细胞定位的报告分子B.是从水母中分离的一种构象很稳定的蛋白质C.在蓝色光源的激发下,可发射出绿色荧光D.GFP基因可以很容易地导入到多种类型的细胞中表达E.与目的基因融合后,所表达的融合蛋白的定位是由GFP决定的42.关于 Northern印迹分析的错误描述是A.可检测组织或细胞中特定的mRNAB.可使用放射性物质标记的寡核苷酸为探针C.不能有效地检测小 mirna分子D.能够定量检测mRNA的变化E.能够提供基因不同转录本的转录长度信息43.双向电泳显现的未知差异蛋白质条带或点,常常需要进一步鉴定,最精确的判定方法是A.免疫沉淀B.亲和层析C.质谱D.高压液相层析E.Western blot44.研究蛋白质与核酸相互作用的技术是A.酵母双杂交B.染色质免疫沉淀C.噬菌体展示D.基因芯片E.免疫沉淀45.使基因表达下调的常用技术是A.cDNA克隆B. RNAiC.同源重组D. ChlpE.转基因46.SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质的依据是A.疏水性B.分子量大小C.所带正电荷多少D.所带负电荷多少E.形状特点47.有关扫描电子显微镜的错误描述是A.可以直接观察标本表面的三维形态B.分辨率比透射电镜高C.通过电子束照射在标本后产生的二次电子成像D.样品需经固定、干燥并用重金属膜覆盖E.多用于细胞整体的观察48.将蛋白质进行分级分离并最终进行纯化,常需要综合运用多种分离手段才能够完成,但A.盐析B.有机溶剂沉淀C.亲和层析D.高压液相层析E.双向电泳49.能够将特定基因插入到基因组的技术是A.cDNA克隆B. RNAiC.酵母双杂交D.ChIPE.CRISPR/Cas950.最早制造出第一台显微镜并用它观察到细菌的科学家是A. L. HoekB.R. HookC. M. J SchleidenD.R.VirchowE.A.van Leeuwenhoek51.与普通PCR不同的是,荧光实时定量PCR在反应体系中需加入A.模板DNAB.耐热的DNA聚合酶C.dNTPD.荧光染料E.引物52.关于超分辨显微技术的错误叙述是A.利用380~740nm可见光B.具有非接触、无损伤的特点C.可观测细胞内部结构的特点D.难以进行内部深层三维结构成像E.可以观测活的组织或细胞53.以脂质体为载体,将外源性基因导入真核细胞的过程称A.转化B.转导C.转染D.感染E.转位54.检测特异蛋白质分子的方法是A. PCRB.FISHC. Southern blotD. Northern blotE. Western blot55.关于 CRISPR/Cas9基因编辑技术的错误描述是A.Cas有核酸酶活性B.Cas是 CRISPR连接蛋白C.CRISPR序列转录产生两个非编码RNA分子D.Cas蛋白能够将异二聚体RNA剪切加工成为成熟RNA分子E.Cas识别靶DNA位点的特异性完全由向导序列所决定56.细胞内离子有着重要的生理功能,其中能够起信号转导和促进膜融合作用的离子是A.钠B.钾C.钙D.铜E.铁57.高压液相层析的反向层析柱常常被用来分离小分子蛋白,其进行分离原理是根据蛋白的A.疏水性B.分子量大C.所带正电荷多少D.所带负电荷多少E.形状特点58.可用于研究DNA与蛋白质相互作用,并能捕捉基因表达调控的瞬时事件的方法是A. ChipB. EMSAC.酵母单杂交系统D. CLIPE.噬菌体展示59.单分子荧光成像是活细胞体系中单分子研究的核心技术,其在细胞生物学研究中的应用A.蛋白质结构的解析B.配体与受体的结合C.蛋白质的聚合和解聚D.mRNA的动力学行为E.病毒的示踪60.关于紫外交联免疫沉淀技术的错误叙述是A.能检测整个细胞内与特定RNA结合蛋白结合的RNA分子B.分辨率可达单个碱基水平C.常与高通量测序技术联合应用D.254nm紫外线照射交联对细胞没有损伤E.能够在全基因组水平揭示RNA与RNA结合蛋白相互作用多项选择题1.从实体组织中分离活细胞的第一步是制备游离的细胞悬液,关于常用的酶解方法的正确描述是A.EDTA和EGTA能够增加胰蛋白酶的活性B.胰蛋白酶、胶原酶消除细胞间的连接和细胞外基质C.分离体系所用的溶液必须是等渗的D.分离体系应保持低温,以降低细胞的代谢活动E.所用的试剂、器皿需要过滤除菌或高压灭菌2.关于染色质免疫沉淀技术的正确描述是A.是一种体内研究DNA与蛋白质相互作用的方法B.仅限于低通量的研究C.能够捕捉到发生在染色质上的基因表达调控的瞬时事件D.分离得到的DNA可直接测序获得基因序列信息E.比电泳迁移率变动分析更能反映基因表达调控的真实情况3.关于核酸抽提的正确叙述是A.异硫氰酸胍可使膜脂、蛋白变性B.氯仿可去除细胞内的脂类C.在纯化过程中加入对应的核酸酶可选择性地保留DNA或RNA 分子D.通过离心沉淀的方式可获得保留在水相中的核酸分子E.蛋白酶K能使DNA酶和RNA酶失活,不能添加在抽提液中4.酶细胞化学反应的基本原理是将酶与其底物共同孵育,使产物与显色剂反应,生成物一般包括A.荧光分子B.细胞色素C.有色沉淀D.高电子密度沉淀E.有色可溶性化合物5.单细胞测序技术取得突破的主要原因包括A.全基因组及转录组扩增的效率大幅度提高B.高通量测序技术的使用C.高效微流体技术分离单细胞技术的应用D.高精密的荧光活化细胞分选技术的应用E.激光显微切割技术的应用6.可用于活细胞内分子示踪的技术是A.离子探针技术B.绿色荧光蛋白示踪C.荧光共振能量转移D.单分子示踪E.印迹杂交7.基因芯片技术可应用于A.细胞的基因表达谱测定B.筛选与基因相互作用的蛋白质C.基因多态性分析D.基因突变分析E.筛选候选基因8.基因表达定量分析技术包括A.印迹杂交技术B.原位杂交技术C.嵌套小室( transwell法)D.荧光实时定量PCR技术E.基因克隆技术9.关于蛋白质组学的正确描述是A.是基因组学研究进入功能基因组时代的主要标志B.双向电泳和质谱技术是蛋白质组学研究的基本技术C.双向电泳能有效分离高分子量及微量蛋白D.质谱法能够实现高通量分析E.蛋白质的质谱测序通常借助串联质谱10.研究或利用蛋白质与蛋白质相互作用的技术包括A.酵母双杂交B.蛋白质芯C.噬菌体展示D.紫外交联免疫沉淀技术E.免疫沉淀参考答案名词解释1.分辨率(resolution):指显微镜或人眼能够区分相近两点的最小距离。
细胞生物学的研究方法
第三章细胞生物学的研究方法一、填空题1．透射电子显微镜由、、、三部分所组成。
2.在酵母人工染色体制备过程中，要用酶脱去酵母的细胞壁，使之成为、并且用进行观察和计数。
4.观察贴壁生长的培养动物细胞可用，而观察脱去细胞壁的植物细胞，则要用。
5. 物质在紫外光照射下发出的荧光可分为和两种，其中需要将被照射的物质进行染色。
6．用紫外光为光源照射物体比用可见光的分辨率要高，这是因为。
7．通过或形成的细胞叫细胞株。
9.灭活的仙台病毒之所以能够诱导细胞融合，是因为。
10. 相差显微镜与普通显微镜的不同是用替代可变光阑，用代替普通物镜，并带有一个合轴用的望远镜。
11．倒置显微镜与普通显微镜的不同在于其。
12．若用紫外光为光源，光学显微镜的最大分辨率为，透射电子显微镜的最大分辨率为，扫描电镜的分辨率为。
13. 显微镜的分辨本领是指能够能力，用来表示。
14．高压电镜的电压在120kV以上，优点是：、。
16. 细胞培养的突出特点是：可在。
18.贴壁生长的细胞有三个特点：①；②；③。
19. 用细胞培养法来研究生命活动规律的局限性是。
20．超薄切片染色常采用、染色。
21．免疫细胞化学技术是用来定位细胞中的物质。
22．电子显微镜使用的是透镜，而光学显微镜使用的是透镜。
23.电子染色是用来增强电子的散射能力。
24．在光学显微镜下见到的结构称为，在电子显微镜下见到的结构称为。
25．细菌质膜的多功能性主要表现在：具有的呼吸作用，具有的分泌作用，具有的信号传导作用。
27.在同位素追踪技术中，用于研究DNA的同位素标记的前体物是。
28．单克隆抗体技术是将与无限繁殖的肿瘤细胞杂交的技术。
29. 可用技术来研究质膜结构的不对称性。
31.动物细胞培养所用的合成培养基中除含多种、和外，一般还需加入。
32．用荧光显微镜观察细胞时，经吖啶橙染色的细胞中的DNA发荧光，而RNA发荧光。
33．适于观察活细胞的光学显微有、和等。
34．分辨率是指人的肉眼或显微镜在25cm处能够分辨到的相邻两个物体间最近距离的能力。
第三章 细胞生物学研究方法 - 测试题
1 第三章 细胞生物学研究方法 - 测试题 【选择题】（每题一分） 1、关于电子显微镜，下列哪项有误 （ ） A. 观察组织或细胞的结构均需超薄切片 B. 镜筒需要真空 C. 在荧光屏上成像 D. 利用电子束作为照明源 2、光学显微镜能够分辩出其详细结构的是 （ ） A. 细胞 B. 线粒体 C. 有被小泡 D. 叶绿体 3、要探知细胞内某一蛋白质的表达水平，可以通过（ ）技术实现。 A. Southern印迹 B. Northern 印迹 C. Western 印迹 D. 原位杂交 4、Feulgen反应可用来测定下列物质中的（ ） A. 蛋白质 B. 脂肪 C. 多糖 D. DNA 5、冷冻蚀刻技术主要用于 （ ） A. 光学显微镜 B. 电子显微镜 C. 原子力显微镜 D. 扫描隧道显微镜 6、研究表皮生长因子受体在细胞分布的部位可用（ ） A. 原位杂交技术 B. 显微操作技术 C. 免疫电镜技术 D. 细胞融合技术 7、已克隆了人的rDNA, 可用（ ）确定rDNA分布在人的哪几条染色体上。 A. 单克隆抗体技术 B. 免疫荧光技术 C. 免疫电镜技术 D. 原位杂交技术 8、建立分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞是通过（ ）技术构建的。 A. 细胞融合 B. 核移植 C. 病毒转化 D. 基因转移 9、高等动物克隆的产生涉及（ ）。 A. 超离心技术 2
B. 显微操作技术 C. 非细胞体系技术 D. 电镜技术 10、动物的正常细胞在体外培养条件下，（ ） A. 能无限增殖 B. 在有充分营养条件下，能无限增殖 C. 不能无限增殖，其增殖代数与物种和供体年龄有关 D. 不能增殖 【判断题】（每题一分） 11、亚显微结构就是超微结构。（ ） 12、提高显微镜的分辨率，可通过缩短波长，或给标本染色。（ ） 13、用带有标记的特定核酸分子作探针，测定与之互补的染色体DNA序列的位置，称为原位杂交技术。 （ ） 14、光学显微镜和电子显微镜的差别在于后者的放大倍数远远大于前者，所以能看到更小的细胞结构。（ ） 15、人工培养的细胞中，细胞系是丧失接触抑制的细胞。 （ ） 16、Western blotting 是体外分析RNA的技术。 （ ） 17、原代细胞经传代培养后即成细胞系。 （ ） 18、扫瞄电子显微镜由于具有原子尺度的分辨力，所以可观察DNA、RNA、蛋白质等生物大分子。（ ） 19、反求遗传分析指的是从表型到基因型的研究。 （ ） 20、由含有两个核的融合细胞通过同步有丝分裂产生一个异常核的单核子细胞称为杂交细胞。（ ） 【简答题】（每题一分） 21、生物学上常用的电镜技术包括____________________________、___________________________、冷冻蚀刻电镜技术及电镜三维重构技术等。 22、电镜可以分为___________________和__________________两种类型。 23、 光学显微镜是以______________为光源，而电子显微镜则以______________作为光源。 24、利用超速离心机对细胞组分进行分离的常用方法有____________和________________。 25、用________________________技术可在电镜下观察膜蛋白的不对称分布。 26、对染色体上特异RNA序列进行分析的方法是________________________。 27、用于研究DNA合成动态的同位素标记的前体物是_______________________________。 28、细胞融合的方式有_______________、化学融合和_______________。 29、产生单克隆抗体的杂交瘤细胞是______________细胞和_____________细胞融合而成的。 30、能够进行“光学切片”的显微镜是__________________________显微镜。 【参考答案】 1~5 ADCDB 6~10 CDABC 11~15 √×√×× 16~20 ××××× 21、树脂包埋超薄切片技术 负染色技术 28、病毒融合 电融合 22、透射电镜 扫描电镜 29、骨髓瘤 淋巴 23、可见光 电子束 30、激光扫描共焦 24、差速离心 密度梯度离心 25、冷冻蚀刻电镜 26、原位杂交技术 27、³H-胸腺嘧啶脱氧核苷
第三章、细胞生物学研究方法(下).pptx
2、单克隆抗体技术
•B淋巴细胞能分泌特异抗体，但不能长期培养， 瘤细胞可以在体外长期培养，但不分泌特异抗 体。于是Kohler和Milstein 1975将两种细胞杂 交而创立了单克隆抗体技术，获1984年诺贝尔 奖。
单克隆抗体技术
。2020年11月6日星期五下午2时38分38秒14:38:3820.11.6 15、会当凌绝顶，一览众山小。2020年11月下午2时38分20.11.614:38November 6, 2020 16、如果一个人不知道他要驶向哪头，那么任何风都不是顺风。2020年11月6日星期五2时38分38秒14:38:386 November 2020 17、一个人如果不到最高峰，他就没有片刻的安宁，他也就不会感到生命的恬静和光荣。下午2时38分38秒下午2时38分14:38:3820.11.6
• 细胞株（cell strain）：从培养细胞中筛选出的具 有特定性质或标志的细胞群。
原代培养(primary culture)
传代
传代培养(secondary culture)
成功ell strain）
表三、实验室中常用的几种细胞系
细胞系名称
3T3 HeLa BHK21 PtKl
（二）植物细胞培养
1. 单倍体培养：通过花药或花粉培养可获得单倍体 植株。
2. 原生质体培养：培养脱壁后的细胞，特点：
– ①比较容易摄取外来的遗传物质，如DNA； – ②便于进行细胞融合，形成杂交细胞； – ③适宜条件下可产生细胞壁，经诱导分化成完整植株。
二、细胞工程
1、细胞融合 2、单克隆抗体 3、显微操作
THE END
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