单克隆抗体和抗体工程
人工制备抗体
人工制备抗体
人工抗体主要包括：
中被清除，从而影响到达肿 瘤局部的抗体浓度。
小分子抗体的类型：
（1）Fcb片段， （2）单域抗体， （3）Fv片段， （4）单链抗体（ScFc）， （5）最小识别单位（MRU）， （6）双价小分子抗体 （diabody）， （7）双特异性小分子抗体， （8）微抗体（minibody）。
（二）噬菌体抗体
2.改型抗体或人源化抗体
概念：指利用基因工程技术，将
鼠单抗V区中互补性决定区（CDR）
序列取代人源抗体CDR序列，重
构成既具有鼠源性单抗的特异性
又保持人抗体亲和力的CDR移植
抗体。
改型抗体或人源化抗体的特点：
保留亲本鼠单克隆抗体的亲 和力和特异性，又降低了其
异源性，有利应用于人体。
3.小分子抗体
三、基因工程抗体
概念：又称重组抗体，利
用基因工程技术制备抗体 分子，这是分子水平的抗 体。
基因工程抗体的优势：
去除或减少无关结构，保留 或增加天然抗体特异性和生
物学活性。
基因工程抗体包括：
（一）改造鼠源性抗体
（二）噬菌体抗体 （三）胞内抗体
（一）改造鼠源性抗体
1.人-鼠嵌合抗体
2.改型抗体或人源化抗体 3.小分子抗体
多克隆抗体 单克隆抗体
基因工程抗体
一、多克隆抗体
概念：以相应抗原免疫动物 获得抗血清，通过接种动物 所获得的免疫血清或抗血清 是多种抗体的混合物，简称 多抗。
单克隆抗体
单克隆抗体生物技术制药之单克隆抗体【摘要】杂交瘤技术使鼠源单克隆抗体被广泛用于人类疾病的诊断和研究，建立了治疗性抗体的第一个里程碑。
随着生物学技术的发展和抗体基因结构的阐明，应用ＤＮＡ重组技术和抗体库技术对鼠单抗进行人源化改造，先后出现了嵌合抗体、人源化抗体和全人抗体，它们从不同角度克服了鼠单抗临床应用的不足，使抗体制备技术进入了一个全新的时代。
【关键词】单克隆抗体、分类、制备、纯化、应用【前言】1975年Koehler和Milstein创立了体外杂交瘤技术(Koehler等,1975)，得到了鼠源性单克隆抗体，开始了多克隆抗体走向单克隆抗体的新时代。
与多克隆抗体相比，单克隆抗体具有无可比拟的优越性，它具有特异性高、效价高、纯度高、理化性状均一、重复性强、成本低并可大量生产等优点。
鼠源性单抗应用于人类有较强的免疫原性，但主要缺陷是诱发人抗鼠抗体（human anti－mouse antibody，HAMA）反应，其次是鼠单抗不能有效地激活人体的生物效应功能，因此限制了其临床应用(Dhar等，2004)。
减少或避免HAMA反应并提高疗效的主要途径是鼠源性单抗人源化，随着对各类抗体结构和氨基酸序列及其变异的种属和功能之间关系的深入了解，而能够利用抗体工程技术对抗体结构进行改造。
抗体的应用经历了非人源抗体、人鼠嵌合抗体、人源化抗体，最终到制备全人源单抗的转基因小鼠和噬菌体展示文库等不同的阶段。
1、单克隆抗体定义抗体主要是由B淋巴细胞合成，每个B淋巴细胞有合成一种抗体的遗传基因。
动物脾脏有上百万种不同的B淋巴细胞系，含遗传基因不同的B淋巴细胞合成不同的抗体。
当机体受抗原刺激时，抗原分子上的许多决定簇分别激活各个具有不同基因的B细胞，被激活的B细胞分裂增殖形成该细胞的子孙，即克隆由许多个被激活B细胞的分裂增殖形成多克隆，并合成多种抗体。
如果能选出一个制造一种专一抗体的细胞进行培养，就可得到由单细胞经分裂制增殖而形成细胞群，即单克隆。
抗体工程概述
它是在PCR技术和Phage Display的基础上实现的。
抗体种类
鼠单抗 鼠单抗 人-鼠嵌合Fab 人源化抗体 人-鼠嵌合抗体 人-鼠嵌合抗体 人-鼠嵌合抗体 人源化抗体 人源化抗体 兔多抗 人源化抗体化 疗药物交联物 人源化抗体
靶向抗原
CD3 17-1A 血小板受体 ⅡbⅢa CD25 CD20 CD25 TNF-α HER-2 RSV F蛋白 CD33
3 小分子抗体
小分子抗体包括Fab、Fv或ScFv、单域抗体及最 小识别单位等几种。 小分子抗体有很多优点:
可以用细菌发酵生产，成本低; 分子小，穿透力强; 不含Fc，没有Fc带来的效应; 在体内循环的半衰期短，易清除，利于解毒排出; 易于与毒素或酶基因连接，便于直接获得免疫毒素或 酶标抗体等。
Fab
适应症
移植排斥 大肠癌 冠心病 移植排斥 淋巴瘤 移植排斥 炎症性肠病类 风湿关节炎 乳腺癌 RSV感染 移植排斥 淋巴瘤
批准日期
1986 1995 1994 1997 1997 1998 1998 1999 1998 1998 1998 2000
Campath
CD52
淋巴瘤
2001
生物技术
生物技术制药
(3)单域抗体
即为VH，约为完整分子的1/12。它只由一个结构 域构成，故称单域抗体。单域抗体尽管亲和力有所 降低，但仍保持着原单抗的特异性。
VH
(4)最小识别单位
约为完整分子的1/80-1/70大小，一般由一个CDR 构成，它也保持着抗体的特异性。
CDR
4 双特异抗体和多价抗体
双链抗体 （Diabody）一词最早由Hollinger等于
人工制备抗体
小分子抗体的类型：
（1）Fcb片段， （2）单域抗体， （3）Fv片段， （4）单链抗体（ScFc）， （5）最小识别单位（MRU）， （6）双价小分子抗体 （diabody）， （7）双特异性小分子抗体， （8）微抗体（minibody）。
（二）噬菌体抗体
三、基因工程抗体
概念：又称重组抗体，利
用基因工程技术制备抗体 分子，这是分子水平的抗 体。
基因工程抗体的优势：
去除或减少无关结构，保留 或增加天然抗体特异性和生
物学活性。
基因工程抗体包括：
（一）改造鼠源性抗体
（二）噬菌体抗体 （三）胞内抗体
（一）改造鼠源性抗体
1.人-鼠嵌合抗体
2.改型抗体或人源化抗体 3.小分子抗体
2.改型抗体或人源化抗体
概念：指利用基因工程技术，将
鼠单抗V区中互补性决定区（CDR）
序列取代人源抗体CDR序列，重
构成既具有鼠源性单抗的特异性
又保持人抗体亲和力的CDR移植
抗体。
改型抗体或人源化抗体的特点：
保留亲本鼠单克隆抗体的亲 和力和特异性，又降低了其
异源性，有利应用于人体。
3.小分子抗体
二、单克隆抗体
概念：1975年，Kohler和 Milstein在自然杂交基础上 创建杂交瘤技术，其产生的 抗体只针对单一程示意图
单克隆抗体的特点：
•高特异性
•高均质性
单克隆抗体的应用：
1、在血清学技术方面, 2、在免疫学基础研究方面, 3、在抗原纯化方面, 4、在肿瘤治疗方面，如生物导 弹, 5、用于制备抗独特型抗体疫苗。
（3）细菌增殖快，培养成本低，适
合大规模生产，为临床上大量应用
(完整word版)抗体的研究进展
论文抗体的研究进展姓名:兰永波学号：201240700066专业12生物技术科目：免疫学抗体的研究进展摘要：抗体是生物及医学领域中用途最为广泛的蛋白质分子。
自抗体被发现以来, 人们有计划地对抗体基因序列进行改造，使抗体及其相关产品在多种疾病诊断和治疗中发挥着重要的作用。
抗体的研究进展经历了从多克隆抗体、单克隆抗体到基因工程抗体 3 个发展阶段.近年来，新型抗体的研究逐渐成为热点.关键词:抗体;基因工程；单克隆抗体Abstract： Antibodies are a class of widely used protein molecules in the biological and medical fields. People designedly rebuild the genetic sequence of antibody since antibody was discovered, which makes antibody and correlative products play an important role in many disease diagnosis and therapy。
This paper gives a brief account on the three stages for the rebuilding of antibody， namely, the stage of polyclonal antibodies，the stage of monoclonal antibody study and the stage of genetic engineering antibody study.In recent years，the novel antibodies gradually become a hot spot in research.Keywords： antibody； gene engineering； monoclonal antibody抗体在疾病的诊断、治疗和预防中发挥着重要的作用。
人用单克隆抗体质量控制技术指导原则(2003)
2003 年 03 月 20 日发布本要点合用于供治疗的体内诊断用的利用杂交瘤技术制备的单克隆抗体，合用于在人体内应用的利用重复 DNA 技术制备的基因工程抗体。
一、杂交瘤技术制备的单克隆抗体(一)杂交瘤细胞1．亲本细胞(1)骨髓瘤细胞SP2/0 或者其他适宜的骨髓瘤细胞系。
应为不合成或者不分泌免疫球蛋白链型，具有符合骨髓瘤细胞的染色体特征，并有明确的来源历史及符合要求的保存条件。
(2)免疫亲代细胞经抗原免疫的鼠脾 B 淋巴细胞或者外周血 B 淋巴细胞。
应有明确的免疫原来源、性质及动物种系，免疫原详细的制备过程。
适宜的免疫方案及免疫淋巴细胞制备的方法。
2．细胞融合与克隆化采用适宜的方法进行融合、筛选及克隆化。
3．杂交瘤细胞检定(1)抗体分泌稳定性连续克隆化后抗体阳性率达 100%，经体外连续传代 3 个月以上和反复冻存、复苏，细胞系能保持稳定分泌特异性抗体。
(2)细胞核学特征检查细胞分裂中期染色体，应符合杂交瘤细胞特征。
4．鼠源病毒检查按附录要求检测鼠源病毒。
5．支原体检查按现行《中国药典》生物制品无菌试验规程进行。
6．无菌试验按现行《中国药典》生物制品无菌试验规程进行。
(二)单克隆抗体的检定1．免疫球蛋白类及亚类用免疫双扩散法或者其他适宜的方法测定。
2．亲和力用可靠、准确的方法测定单克隆抗体 (以下简称为单抗) 的亲和常数或者相对亲和力。
普通情况下，对于免疫原为可溶性的单抗，测其亲和常数，对于免疫原为颗粒性抗原的单抗，测其相对亲和力。
3．特异性测定单抗对靶抗原的特异性；对多株单抗识别的抗原决定簇进行相关性分析。
4．交叉反应按附录要求。
免疫组织化学法测定单抗与人体组织交叉反应，用冰冻及石蜡包埋的各种正常脏器组织测定。
来源于肿瘤相关抗原的单抗应进行与各种肿瘤组织的交叉反应试验。
5．效价测定用适宜方法测定。
(三)其他原材料1．细胞培养用小牛血清支原体检测应为阴性。
经小量试验适于杂交瘤细胞生长。
2．培养液应有培养液来源，质量指标。
抗体工程药物的研究与应用
抗体工程药物的研究与应用随着生物技术的不断发展，抗体工程药物在医学领域的应用越来越广泛。
抗体工程药物是利用基因工程技术，通过改变抗体的结构和功能，使其具有更好的药理学特性和治疗效果。
本文将从抗体工程药物的研究和应用两个方面进行探讨。
一、抗体工程药物的研究1. 抗体工程药物的种类目前，抗体工程药物主要分为四类：完全人源化抗体、人-小鼠嵌合抗体、人源化小鼠抗体和人-兔嵌合抗体。
其中，完全人源化抗体是指完全由人类的基因构建的抗体，可以避免免疫反应和过敏反应；人-小鼠嵌合抗体是指将人类抗体的常染色体区与小鼠抗体的可变区融合，可以保留小鼠抗体的高亲和力和特异性；人源化小鼠抗体是指将小鼠抗体的框架区域替换为人类抗体的框架区域，可以减少免疫反应；人-兔嵌合抗体是指将人类抗体的常染色体区与兔抗体的可变区融合，可以保留兔抗体的高亲和力和特异性。
2. 抗体工程药物的制备制备抗体工程药物主要分为三个步骤：克隆、表达和纯化。
首先，利用基因工程技术，将需要制备的抗体的DNA序列插入到表达载体中，然后将表达载体转染到细胞中，使其表达抗体。
最后，通过离心、层析、电泳等技术，对表达的抗体进行纯化，得到纯净的抗体工程药物。
3. 抗体工程药物的质量控制抗体工程药物的质量控制主要包括三个方面：物理化学性质、生物活性和安全性。
物理化学性质包括药物的分子量、等电点、糖基化程度等；生物活性包括药物的亲和力、特异性、中和效力等；安全性包括药物的免疫原性、毒性、致突变性等。
通过对这三个方面的检测，可以保证抗体工程药物的质量和安全性。
二、抗体工程药物的应用1. 抗体工程药物在肿瘤治疗中的应用抗体工程药物在肿瘤治疗中的应用主要包括单克隆抗体、双特异性抗体和免疫检查点抑制剂。
单克隆抗体可以通过靶向癌细胞表面的特异性抗原，识别并杀灭癌细胞；双特异性抗体可以同时靶向两种不同的抗原，提高治疗效果；免疫检查点抑制剂可以通过抑制免疫检查点，激活免疫系统，增强免疫细胞对癌细胞的攻击力。
人教版(2019)高中生物选择性必修3第2章第2节动物细胞融合技术与单克隆抗体(第二课时)
选择培养 基培养
①B淋巴细胞培养几天后死亡 ②由于培养基中缺乏相应的营养物，骨髓瘤细胞死亡
用培养液稀释
杂交瘤细胞
第一次筛选： 用特定的选择培养基筛选 出多种杂交瘤细胞 第二次筛选： 筛选出能产生所需抗体的 杂交瘤细胞
多孔细胞培养板
阳性检测和 克隆化培养
注射到小鼠体内
体外培养
由单个杂交瘤细胞通过克 隆，所产生的化学性质单 一、特异性强的抗体
C.经过免疫的T淋巴细胞 D.没经过免疫的Ｂ淋巴细胞
2.动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较中，正确的是（ ）
A. 诱导融合的方法完全相同 B.所用的技术手段基本相同
C. 操作步骤基本相同
D. 都能形成杂种细胞
随堂演练
3. 单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合后，要用
特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是
一、单克隆抗体
➢ 抗体：能够与抗原发生特异性结合的免疫球蛋白
• 能产生抗体的细胞是浆细胞
➢ 单克隆
由一个细胞经过无性繁殖(多次有丝分裂)形成的一个细胞 群
➢ 单克隆抗体
由一个浆细胞经过无性繁殖形成的一个细胞群产生的化学 性质单一，特异性强的抗体
B淋巴细胞
受增 抗殖 原分 刺化 激
记 浆忆 细B 胞细
第二章 细胞工程
第二节细胞工程
二 动物细胞融合技术与单克ห้องสมุดไป่ตู้抗体
第二课时
单克隆抗体 单克隆抗体的应用
众志成城 抗疫情
1．为什么要号召新冠感染痊愈者捐献自己的血浆？ 这样的血浆对新冠感染患者有什么作用呢？
血浆中有新冠病毒的抗体, 可以用于 治疗新冠感染患者。
但一个捐献者的200-300毫升的血浆，如果合格，一般也只能治疗2-3个患者。