第五章 还原糖分的测定
食品中还原糖的测定
葡萄糖 单糖 果糖 半乳糖 碳水化合物 双糖 蔗糖 乳糖 麦芽糖 淀粉 多糖 纤维素 无效碳水化合物 果胶 有效碳水化合物
测定方法
相对密度法
物理法
折光法 旋光法
单糖和低聚糖
还原糖法（直接滴定法、高锰酸钾法） 还原糖法（直接滴定法、高锰酸钾法）
化学法
碘量法 水杨酸法
水解为单糖， 淀粉：水解为单糖，再用单糖测定方法测定
序号
考核项目
评分要求
评分标准 操作规范，正确 5 分
扣分
得分
吸 量 管 使 用 20 分
操作熟练 5 分 吸取准确 5 分 转移溶液方法正确 5 分 滴定管清洗 5 分 滴 定 管 排 气 10 分 滴定管调零 5 分
葡 萄 糖 液 1 的标定
滴 定 操 作 滴 定 操 作 正 确 10 分 50 分 滴定速度控制 5 分 滴 定 终 点 判 断 正 确 10 分 滴定管读数正确 5 分 记录未漏项 5 分 数 据 分 析 20 分 记录数据准确 5 分 计算准确 5 分 记录无涂改 5 分
多
糖 果胶和纤维素： 果胶和纤维素：多采用重量法
二、 还原糖的测定
根据糖分的还原性的测定方法叫还原糖法。 根据糖分的还原性的测定方法叫还原糖法。 还原糖法 直接滴定法（ 法 ㈠直接滴定法（GB法） （1） 原理：将一定量的碱性酒石酸铜甲、乙液等 ） 原理：将一定量的碱性酒石酸铜甲、 量混合，立即生成天蓝色的氢氧化铜沉淀； 量混合，立即生成天蓝色的氢氧化铜沉淀； 这种沉淀很快与酒石酸钾反应， 这种沉淀很快与酒石酸钾反应，生成深蓝色的 可溶性酒石酸钾钠铜络合物。 酒石酸钾钠铜络合物 可溶性酒石酸钾钠铜络合物。 在加热条件下， 次甲基蓝作为指示剂 作为指示剂， 在加热条件下，以次甲基蓝作为指示剂，用样 液滴定，样液中的还原糖与酒石酸钾钠铜反应， 液滴定，样液中的还原糖与酒石酸钾钠铜反应，生 红色的氧化亚铜沉淀 沉淀； 成红色的氧化亚铜沉淀； 这种沉淀与亚铁氰化钾络合成可溶的无色络合 二价铜全部被还原后， 物；二价铜全部被还原后，稍过量的还原糖把次甲 基蓝还原，溶液兰色褪去，即为滴定终点； 基蓝还原，溶液兰色褪去，即为滴定终点； 根据样液消耗量可计算出还原糖含量。 根据样液消耗量可计算出还原糖含量。
还原糖的测定——
CH2 1. (CHOH)4 + I2+ 2NaOH
CH2OH (CHOH) 4 + 2NaOI + H2O
CHO
COOH
2.
I2 + 2NaOH
NaIO + NaI + H2O 2NaCl + H2O + I2Байду номын сангаас
NaIO + NaI + 2HCl
3.
I2 + 2Na2S2O3
2NaI + Na2S4O2
试验试剂
0.1mol/L I2 标准溶液 0.1mol/L NaOH 标准溶液 0.1mol/L Na2S2O3标准溶液 0.5mol/L HCl溶液 0.5% 淀粉指示剂
试验步骤
1. 取5 ml鲜牛奶于碘量瓶中，准确加入0.1 mol/L I2 溶液 5 ml，在不断摇动中加入3.75 ml 0.1 mol/L NaOH，放在暗处反应15 min； 2. 然后加0.8ml0.1mol/l 的HCl ，使用 Na2S2O3标准溶液滴定到由棕色到淡黄色， 加淀粉指示剂0.5ml继续滴加至白色或无色。 3. 用蒸馏水做空白对照。按同样步骤进行
计算
(V1-V2)*N*0.5*0.09
G%= m *100%
讨论
注意溶液定量移取 注意滴定过程中防止滴过
还原糖的测定——
碘量法
试验原理
凡是含有游离醛基和半缩醛羟基 的糖在碱性溶液及碘的作用下，被 氧化为相应的一元酸。 由于加入的碘是已知的，没有 参加反应的碘与NaoH生成次碘酸 钠，在加入HCl之后，次碘酸钠与 一定的碘化钠反应析出碘，因此 Na2S2O3标准溶液定量，就可以计 算出糖在氧化时所消耗的碘量。
还原性糖的测定
还原性糖测定的意义
还原性糖是生物体内重要的能源物质，其含量 的测定对于了解生物体的能量代谢和生长状况 具有重要意义。
在食品工业中，还原性糖的含量直接影响食品 的质量和口感，对其测定有助于控制食品的品 质和安全。
在医学领域，还原性糖的测定对于糖尿病等疾 病的诊断和治疗具有指导意义。通过对血糖的 监测，可以及时发现和治疗糖尿病。
高锰酸钾滴定法
原理
高锰酸钾滴定法利用高锰酸钾溶液与还原性糖发生氧化还原反应，通过消耗高锰酸钾溶液 的量来计算还原性糖的含量。
步骤
将一定量的被测样品加入适量的硫酸溶液中，加入适量的高锰酸钾溶液，加热至沸腾，用 标准硫酸溶液滴定至紫色消失，记录消耗的标准硫酸溶液的体积。
注意事项
高锰酸钾滴定法适用于具有还原性的糖类，如葡萄糖、果糖等。在测定过程中，要严格控 制加热时间和温度，避免因加热时间过长或温度过高导致糖分解。同时，高锰酸钾溶液具 有强氧化性，应避免与皮肤接触。
行分析和评价。
06 结论与展望
结论总结
01
还原性糖的测定方法
本实验采用了高效液相色谱法、分光光度法和毛细管电泳 法等多种方法，对还原性糖进行了测定。这些方法具有较 高的准确度和精密度，能够满足实验要求。
02 03
还原性糖的测定结果
实验结果表明，不同来源的样品中还原性糖的含量存在差 异，其中茶叶中还原性糖的含量较高，而蜂蜜中还原性糖 的含量较低。此外，实验还发现还原性糖的含量与样品的 品质和来源有一定的关系。
03 实验材料与设备
实验材料
01
02
葡萄糖溶液
作为标准品，用于标定反应的原性糖的物质。
03
苯酚溶液
用于显色反应。
04
硫酸溶液
二硝基水杨酸法测定还原糖
还原糖含量测定（3,5-二硝基水杨酸比色法）一、实验原理还原糖的测定是各种糖类化合物定量测定的基本方法。
在碱性条件下，还原糖与3,5-二硝基水杨酸（DNS)共热后3,5-二硝基水杨酸(DNS)被还原为3-氨基-5-硝基水杨酸(棕红色物质)，还原糖则被氧化成糖酸及其他产物。
在一定范围内，还原糖的浓度与3-氨基-5-硝基水杨酸(棕红色物质)颜色深浅的程度呈正比，利用可见分光光度计，在540nm波长下测定棕红色物质的吸光值，查对标准曲线可求出样品中还原糖的含量。
二、实验试剂3, 5-二硝基水杨酸试剂( DNS)：将6.3g DNS和262mL 2mol/L的NaOH溶液加到500mL含有182g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g重蒸酚和5g亚硫酸氢钠，搅拌溶解，冷却后定容至1000ml。
溶液为黄色，贮于棕色瓶中。
1mg/mL 葡萄糖标准溶液：准确称取80℃烘至恒重的分析纯无水葡萄糖1g，置于烧杯中，加少量水溶解后再加5mL浓盐酸(防止微生物生长)，以蒸馏水定容至1000ml,混匀，4℃冰箱中保存备用。
碘-碘化钾溶液：称取5g碘和10g碘化钾，溶于100mL蒸馏水中。
酚酞指示剂：称取1g酚酞，溶于250mL70%乙醇中。
6mol/L HCI溶液：取250mL浓HCI,用蒸馏水稀释到500mL。
6mol/L NaOH溶液：称取240g NaOH, 溶于1000mL蒸馏水中。
三、实验方法1．制作葡萄糖标准曲线取6支试管编号，按照表3-1分别加入浓度为1mg/mL的葡萄糖标准液、蒸馏水和3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂。
将各管混匀，用0号管调零点，在540nm波长处测1-5管吸光度。
以葡萄糖毫克数为横坐标，A540为纵坐标，绘制标准曲线。
2．样品中还原糖的测定（食用面粉为例）准确称取2.00g食用面粉，放入100mL烧杯中，先用少量蒸馏水调成糊状，然后加入50-60mL蒸馏水，搅匀，置于50℃恒温水浴中保温20min，使还原糖浸出。
还原糖测定实验报告
一、实验目的1. 理解还原糖的化学性质及其在生物体内的作用。
2. 掌握使用3,5-二硝基水杨酸法测定还原糖含量的原理和方法。
3. 通过实验，学会正确使用实验仪器和试剂，提高实验操作技能。
二、实验原理还原糖是一类具有还原性的糖类，在生物体内具有重要的生理功能。
3,5-二硝基水杨酸法是测定还原糖含量的常用方法，其原理是：还原糖在酸性条件下与3,5-二硝基水杨酸反应，生成红色复合物，通过比色法测定还原糖含量。
三、实验材料与试剂1. 实验材料：葡萄糖标准溶液、蔗糖溶液、淀粉溶液、苹果汁、梨汁等。
2. 试剂：3,5-二硝基水杨酸、硫酸铜、氢氧化钠、盐酸、蒸馏水等。
四、实验仪器1. 分析天平2. 恒温水浴锅3. 离心机4. 分光光度计5. 移液管6. 试管五、实验步骤1. 标准曲线的制作：（1）分别配制0、0.5、1.0、1.5、2.0 mg/mL的葡萄糖标准溶液。
（2）取5支试管，分别加入不同浓度的葡萄糖标准溶液各1 mL。
（3）向每支试管中加入3,5-二硝基水杨酸溶液2 mL，混匀。
（4）将试管放入恒温水浴锅中加热5分钟。
（5）取出试管，用蒸馏水定容至10 mL。
（6）用分光光度计在波长540 nm处测定吸光度。
（7）以葡萄糖浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 样品测定：（1）分别取葡萄糖标准溶液、蔗糖溶液、淀粉溶液、苹果汁、梨汁各1 mL于试管中。
（2）向每支试管中加入3,5-二硝基水杨酸溶液2 mL，混匀。
（3）将试管放入恒温水浴锅中加热5分钟。
（4）取出试管，用蒸馏水定容至10 mL。
（5）用分光光度计在波长540 nm处测定吸光度。
（6）根据标准曲线，计算样品中还原糖含量。
六、实验结果与分析1. 标准曲线的制作：标准曲线如图所示，线性回归方程为y = 0.0034x + 0.0128，相关系数R² = 0.9989。
2. 样品测定：葡萄糖标准溶液、蔗糖溶液、淀粉溶液、苹果汁、梨汁中还原糖含量分别为2.34 mg/mL、0.86 mg/mL、0.23 mg/mL、1.12 mg/mL、0.89 mg/mL。
测定还原糖实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 掌握还原糖的测定原理和方法。
2. 学习使用比色法测定还原糖含量。
3. 培养实验操作技能和数据处理能力。
二、实验原理还原糖是指具有还原性的单糖和双糖，在碱性条件下，还原糖可以还原斐林试剂中的铜离子，使其变为氧化亚铜，产生砖红色沉淀。
根据产生的沉淀量，可以计算出样品中还原糖的含量。
三、实验材料1. 试剂：斐林试剂、NaOH溶液、CuSO4溶液、蒸馏水、葡萄糖标准溶液、待测样品。
2. 仪器：电子天平、移液器、容量瓶、试管、试管架、酒精灯、石棉网、水浴锅、分光光度计。
四、实验步骤1. 准备斐林试剂：取斐林试剂甲液和乙液按1:1比例混合，现用现配。
2. 配制葡萄糖标准溶液：准确称取一定量的葡萄糖，用蒸馏水溶解并定容至100mL，配制成一定浓度的葡萄糖标准溶液。
3. 样品处理：准确称取待测样品，用蒸馏水溶解并定容至100mL，得到待测样品溶液。
4. 标准曲线绘制：取若干支试管，分别加入不同体积的葡萄糖标准溶液，再依次加入斐林试剂甲液和乙液，混匀后置于水浴锅中加热，观察颜色变化。
以葡萄糖浓度为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制标准曲线。
5. 样品测定：取若干支试管，分别加入不同体积的待测样品溶液，再依次加入斐林试剂甲液和乙液，混匀后置于水浴锅中加热，观察颜色变化。
用分光光度计测定光吸收值，根据标准曲线计算样品中还原糖含量。
五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：根据实验数据，绘制葡萄糖标准曲线，得到线性回归方程为：y = 0.0428x + 0.0011，相关系数R² = 0.9976。
2. 样品测定：根据实验数据，计算待测样品中还原糖含量，结果如下：样品编号 | 样品溶液体积（mL） | 光吸收值 | 还原糖含量（mg/mL）-------- | ----------------- | -------- | -----------------1 | 1.0 | 0.732 | 0.04282 | 1.5 | 0.958 | 0.05773 | 2.0 | 1.194 | 0.07154 | 2.5 | 1.431 | 0.08545 | 3.0 | 1.668 | 0.0992六、实验讨论1. 实验过程中，注意控制加热时间和温度，避免产生过多的氧化亚铜沉淀，影响实验结果。
还原糖和总糖含量的测定
实验一还原糖和总糖含量的测定原理3，5-二硝基水杨酸溶液与还原糖溶液共热后被还原成棕红色的氨基化合物，在一定范实验围内还原糖的量和棕红色物质颜色深浅的程度成一定比例关系，可用比色测定。
操作简便，快速，杂质干扰较少。
实验方法一葡萄糖标准曲线的制定葡萄糖标准曲线的制定：准确称取100mg分析纯的无水葡萄糖（预先在105℃干燥至恒重），用少量蒸馏水溶解后，定量转移至100mL容量瓶中，再定容至刻度，摇匀。
浓度为1mg/Ml。
取9支25mm×250mm的试管，分别按下表加入试剂：（ml）项目0 1 2 3 4 5 6 7 8G标液0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6 G的量0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6 H2O 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8 0.6 0.4 3，5-二硝基水杨酸加入21.5mL蒸馏水,摇匀。
于520nm波长处测A值。
以葡萄糖mg数为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制标准曲线。
二样品中总糖和还原糖含量的测定以测定山芋中总糖和还原糖含量为例。
1．样品中还原糖的提取：准确称取2g山芋粉，放在100mL烧杯中，先以少量水调成糊状，然后加工50-60mL蒸馏水，于50o C恒温水浴中保温20分钟，过滤，将滤液收集在100mL 容量瓶中，再定容至100mL。
2．样品中总糖的水解及提取：准确称取1g山芋粉，放在锥形瓶中，加入10mL6mol/L 盐酸，15mL水，在沸水浴中加热半小时，取出一、二滴置于白瓷板上，加1滴碘-碘化钾溶液检查水解是否完全。
如已水解完全，则不呈蓝色。
冷却后加1滴酚酞指示剂，以10%氢氧化钠溶液中和至溶液呈微红色，过滤并定容到100mL。
再精确吸取上述溶液10mL于100mL 容量瓶中，定容到刻度，混匀备用。
3．样品中糖含量的测定：取7支队5mm×250mm试管分别按下表加入试剂：加完试剂后，其余操作均与制作标准曲线时相同。
还原糖的测定
还原糖的测定情境四农产品中碳⽔化合物含量的测定根据所给出的产品选择、设计合适的检测⽅法，并进⾏正确的检测操作；测定结果的精密度应达到相关标准规定要求。
⼯作任务⼀明确检测任务，获取检测⽅法信息项⽬1 熟悉硬糖中还原糖含量测定的意义通过⽹络搜集、相关参考书的查阅等⼿段，了解我国各种糖类产品中还原糖含量的基本情况；硬糖产品中还原糖测定的意义；曾经发⽣过的与该检测项⽬相关的案例。
依据上述内容撰写⼀份报告。
请特别关注对最新情况的收集。
（2000字）项⽬2 熟悉蜂蜜中还原糖含量测定的意义通过⽹络搜集、相关参考书的查阅等⼿段，了解我国蜂蜜产品中还原糖含量的基本情况；我国蜂蜜造假的原因和基本⼿段；对蜂蜜产品中还原糖含量测定的意义；曾经发⽣过的与该检测项⽬相关的案例等。
撰写⼀份报告，请特别关注对最新情况的收集。
（2000字）1.1测定酸类物质含量的重要意义：碳⽔化合物在⾷品中的应⽤：碳⽔化合物作为能量的主要来源，以及影响⾷品的物理性质和⼈类⽣理代谢的物质，在⾷品中占有很重要的地位。
碳⽔化合物提供的热量占⼈类饮⾷摄⼊量的70%以上。
碳⽔化合物赋予⾷品许多特性，包括容积﹑形状﹑粘度﹑乳化稳定性和起泡性、持⽔能⼒﹑冻-熔稳定性﹑褐变、风味﹑⾹味和所需的质构（从松脆到滑爽、柔软）。
碳⽔化合物还可使⼈具有饱腹感。
碳⽔化合物除了⽜奶中的乳糖外⼏乎都来⾃植物。
在单糖中，D－葡萄糖和D－果糖相对较多。
实际上，只有它们和其他单糖是属于能被⼈体⼩肠直接吸收的碳⽔化合物。
聚合度较⾼的糖类（低聚糖和多聚糖）必须⾸先被消化，如：在吸收和利⽤前先⽔解成单糖。
⼈们能直接消化的只有蔗糖﹑乳糖﹑低聚麦芽糖和淀粉等，都是由⼩肠中的酶所消化。
⾃然界中⾄少有90%的碳⽔化合物是以多聚糖形式存在。
可以说，淀粉类多聚糖是唯⼀能被⼈体消化作为热源利⽤的多聚糖，别的多聚糖不能被消化。
膳⾷纤维，能调节肠道功能，减少⾼⾎糖，还可以降低⾎液中的胆固醇含量。
不可消化低聚糖也因为其⽣物功能正越来越⼴泛地应⽤于功能⾷品和疗效⾷品中。
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第五章 还原糖分的测定 还原糖通常是指具有还原性的糖类。在糖类中，凡具有醛基或酮基的单糖(如茄萄精、果树等)和具有潜醛基的双糖(如麦芽糖、乳精等)都有还原性。蔗糖是由1分子葡萄糖和1分子果糖去水缩合而成的双糖。因不含潜醛基，故没有还原性。但蔗糖在酸或酶的作用下，可水解生成1分子葡萄糖和1分子果糖(此种混合物称为转化糖)。其它的双糖、三糖乃至如糊稻、淀粉等多焙类，都可通过水解而生成相应的单糖。因此测定样品水解液的还原糖含量就可求得样品中相应糖类的含量。因此，还原糖的测定是一般糖类定量的基础。 在制糖工业中，从原料、中间制品到成品，或多或少都含有还原糖．其中，主要是含葡萄糖和果糖。这些物料的还原糖含量及其变化情况是值得重视的。因为，它在一定程度上可以反映原料和产品的质量以及制糖生产过程是否正常．例如：测定甘蔗的还原糖分可了解甘蔗的成熟度；分析保藏甜菜的还原糖分可了解甜菜是否变质；在生产过程中，糖汁在酸性情况下加热，蔗糖会发生水解而使还原糖增加；在强碱性情况下，还原糖容易分解，共分解产物使糖汁颜色加深，影响产品质量。白砂糖中还原糖含量高时，会降低其贮存性．因此，还原糖分的测定是制糖工业分析的一个重要项目。 还原糖分是指物料中含还原糖的重量百分数。在糖厂的物料中，除还原搪外，还含有其他具有还原性的物质。一般分析方法未能把还原糖与其他还原性物质加以区分，故测得的结果是物料中还原性物质的重量百分数，而以相当量的转化糖来表示． 测定还原糖的方法甚多。其中最常用的方法是以铜盐碱性溶液与还原糖的作用为基础的。如兰—艾农法、典夫奈尔法、克奈特—阿连法等。也有基于还原糖能还原某些显色剂，通过比色测定还原糖含量的。例如埃默利希法。此外，还有用色谱法、酶法定量还原糖的。 第一节 兰—艾农(Lane—EyMon)法 (一)基本原理 此法基于贸林试剂与还原糖的氧化还原反应。贸林试剂是一种铜盐的碱性溶液，由硫酸铜、酒石酸钾钠和氢氧化钠组成。 在测定中，所起的反应如下：
或 兰—艾农法是—种容量分析法。它是在煮沸的情况下，用
含还原糖的样液滴定一定量的费林试剂。因定量的费林试剂中Cu2+量为一定，只能与相当量的还原糖起作用。为了判别终点，加入四甲基蓝作指示剂。四甲基蓝本身也是一种氧化剂，但其氧化能力较Cu2+弱，所以还原糖先把Cu2+全部还原以后，过剩的才与四甲基蓝作用，使之由蓝色变为无色。此即为滴定的终点. 四甲基蓝的变色反应如下： 上述反应是可逆的，当无色的四甲基蓝与空气中的氧结合时，又变为蓝色。所以滴定时不要离开热源，使溶液保持沸腾， 让上升的蒸汽阻止空气侵入溶液中。 由于此法是用四甲基蓝作为指示剂，所以，兰—艾农法又称为四甲基亚法。 从前面所列的反应式可知，还原糖与费林试剂作用的结果是生成氧化亚铜的红色沉淀。 1分子葡萄糖可以将6个二价铜离子还原为一价铜离子。但实验结果证明： 1分子葡萄糖只能将5个多二价铜离子还原，而且随条件而改变。正是由于多方面因素的影响，因此，不能根据上述反应式直接计算出还原糖员，而是用实验方法制出还原地检索表。在测定物料还原糖时，应严格遵照制表时所规定的条件(例如铜此碱性溶液的成分、用量、还原糖的种类以及加热温度和时间等)，并根据指定的还原糖分检索表进行汁算。 (二)试 剂 (1)费林试剂 费林甲掖：称取69．278克结晶硫酸铜(CuSO4，溶解后，移入1000毫升容员瓶中，加水至标线，用水摇匀，过滤即可 费林乙液：称取346克酒石酸钾钠(NaKC4H4O6·4H2O)溶于约500毫升水小；另称取氢氧化钠l00克镕于约200毫升水中。 将二者混合，移入l000毫升容员瓶中，加水至标线。放置两日，如液面降低，须再加水至标线，然后揭匀，过滤即成。 在本法中，费林试液的含铜量是定量还原糖的关键。在配制时CuSO4·5H2O的量要称桩确。甲液和乙液要分别配配置，事先不能将其混合贮存。原因是：在碱性溶液中，硫酸铜会变成氢氧化铜，氢氧化铜在碱性溶液中，又会慢慢地被酒石酸钾钠还原，而析出氧化亚铜。费林试液乙液中的氢氧化钠是使溶液呈碱性的，因为二价铜离子作为氧化剂是要在碱性情况下进行的，其反应速率是随碱性增强硕加快。所以，加入的氢氧化钠以不含碳酸盐为宜。酒石酸钾钠的作用是使铜离子形成稳定的可溶性的酒石酸钾钠铜络合物，以利于反应顺利进行。如果没有酒石酸钾钠试剂。也可用甘油代替，但测定的结果会偏高些。 由于费林试剂中的铜量是定量还原糖的关键，而铜量与费林试剂的浓度及用量有关，故目前统一规定l0毫升费林试剂(其中5毫升甲液和5毫升乙液)用0.200％转化糖液滴定，若耗用转化糖液为25．64毫升(实验数据)时，该费林试剂的浓度为1个“当量”。如果试剂很纯，又严格按照规定配制，则配成的费林试剂浓度恰为一个“当量”。但往往不是这样理想，故配成的费林试剂应进行标定，以确定其‘当量”或浓度校正系数。 费林试剂是用0.200％的标准转化糖溶液进行标定的，而配制标准转化糖溶液须用纯蔗糖(关于纯蔗犊制备请参阅《甘蔗制犊化学管理统一分析方法》或本章第五节有关部分)。 标准转化糖液配制：称取所制备的纯蔗糖9．5000克，用100毫升蒸馏水溶解后，移入1000毫升容量瓶中，摇匀，加入5毫升浓盐酸，混匀，在室温(20一25℃)静置一星期使其转化完全。然后，在不断摇荡下，加入lN氢氧化钠溶液以调节其pH至约3.0(所加入的碱量可先用下法确定：另取浓盐酸5毫升注入l00毫升水内，以甲基橙为指示剂，用1N氢氧化钠溶液筋定至由红色恰好变为格红色为止，所耗用的量即为要加入的碱量)。取2克苯甲酸先用少量乙醇溶解后，再用热水溶解，作为防腐剂加进已调节好pH的糖液中，用蒸馏水将糖液稀释至l000毫升。此液每l00毫升含转化糖1克，即1％(体积重量百分浓度)。 费林试剂的标定：用吸量管分别吸取费林甲液和乙液各5毫升，注入250毫升锥形瓶混匀。从滴定管加入24毫升上述已中和的0.200％转化糖液。将烧瓶置于电炉或酒精灯上加热使溶液沸腾，准确煮沸2分钟，加入四甲基蓝指示剂3滴。在糖液保持沸腾的情况下小心从滴定管续加转化糖液，至四甲基蓝的蓝色刚刚消失为止即为终点。如果费林试剂浓度准确，则滴定用去的0.200％转化糖液的为25．64毫升，即费林试剂的浓度洽为1 当量。否则，应按下列公式计算其浓度校正系数。
式中 V——滴定时实际耗用o．200％标准转化糖液(毫升) 为了计算方便，当费林试剂的当量不等于l时，可采用下面的方法调整其浓度：例如，浦定耗用o．200％转化糖液25．20毫升．其浓度校正系数； 说明试剂浓度不足，需加入硫酸饲，其量按下式计算： 1升费林试剂中有硫酸铜X＝68．09(克)。因此，应在1升费林试剂中再加入硫酸铜69．278—68．09＝1．188克。浓度不足一般是因为硫酸铜不纯或其所含结晶水比分子式为多。 又如，滴定耗用o．200％转化糖液25．80毫升，其浓度校正系数为：
说明试剂过浓，需加入蒸馏水，加水虽可按下式计算， 1000：25．64＝X：25．80 X＝l006．2(毫升) 应在l”升试别中加水N06．2一1000＝6．2(毫升)。 (2)54。Bx中性醋酸铅溶液 称取500克中性醋酸铅，置于looo毫升水中，充分搅拌使其洽解，静量，帧取上层清液，过滤．在滤波中逐墒加入醋酸，使对石蕊试纸呈中性或微酸性。最后用不含二氧化碳的水稀秆至54。ux(比重1．25)． (3)除铅剂(见第一章)． (4)1％四中基蓝洽液。 (三)测定方法 1．糖汁、树浆或糖蜜中还原糖分的测定以混合汁为例，其他样品测定方法相同，仅在样品的稀释上稍有不同。 样品处理：用移液管吸取经细密铜网过滤的混合汁50毫升，移入250毫升容量瓶中。加入适量(约1毫升)54。Bx中性酷酸铅溶液，充分摇匀。加入约3毫升除铅剂，掘勾。加水至标线，充分摇匀。过滤，弃去最初滤波约15毫升。此滤液便是配制糖液，每100毫升含有样品20毫升。将此糖浓装入50毫升浦定管内，供测定用。 预检：用吸量管分别吸取费林HH液和乙液各5毫升，注入250毫升银瓶中。从淌定管加入配制糖液15毫升．将锥瓶放在石棉铁丝网上，用电炉或酒精灯加热使溶液沸腾，并准确控制煮沸2分钟，加入四中基监指示剂3滴。在树液保持沸腾情况下．从滴定管小心地淌加配制糖液至四甲基此的蓝色刚刚消失为止，即为终点。此项滴加工作，不可超过1分钟，使整个煮沸时问在3分钟之内。记下用去配制糖液毫升数(包括顶先放入的15毫升配制糖液)． 复核：同样用吸虽管分别吸取费林甲液和乙液各5毫升，注入250毫升锥瓶中，从淌定管加入配制糖掖，其量比预检时所耗用的配制糖液少约l毫升(例如，预检时用去配制糖液24毫升，此时，则加入22—23毫升)，将锥瓶登于电炉或酒精灯上加热，使溶液沸腾，共沸腾时间亦应准确控制为2分钟，加入四甲基蓝指示剂3滴，继续从而定管中加入糖液，至四甲基蓝的蓝色刚刚消失为止。此项续加工作，亦不得超过1分钟。记录耗用配制糖液 毫升数。 计算：计算的一般步骤 (1)算出100毫升配制糖掖含样品毫升数(V9)； (2)算出100毫升配制糖液含蔗糖量(克)＝V。x d(20℃) ×S％ 式中 d(20℃)——样品的视密度(20℃) 5——样品的蔗糖分 (3)根据100毫刀配制糖液含蔗糖量(克)和滴定耗用配 制糖液量(毫升)查附表9得还原糖因数F。 还原糖因数F是10毫升费林试剂所相当的转化糖毫克数。例如，滴定10毫升级林试剂用去0.2％(即100毫升中含200毫克)的转化糖液25．64毫升，则还原糖因数
F值随被测溶液还原糖浓度和蔗糖含量不同而略有变化。通过实验测出了在不同的蔗糖浓度(每100毫升配制糖液含蔗糖。一25克)下滴定消耗配制糖液15—50毫升所相当的还原糖因数，制成了还原糖因数表。已知l00毫升配制糖液含蔗糖量和滴定消耗配制糖液毫升数(V)，就可从还原数因数表中查出F值。 (4)算l00毫升配制糖液含还原糖量I(毫克)
5)计算样品还原糖分(R．S．％) 例：混合汁观测锤度为15.0·Dx，蔗糖分为13．49．吸取50毫升稀释至250毫升。若费林试剂浓度校正系数付为0．975，滴定耗