叶绿体色素提取的方法
提取叶绿素的实验报告
提取叶绿素的实验报告探究叶绿素在光合作用中的重要性和功能。
实验材料：1. 叶绿体提取液：通过离心植物组织获得的液体。
2. 植物叶片：新鲜且健康的绿色植物叶片。
3. 75% 乙醇：用于提取叶绿素的有机溶剂。
4. 富含二氧化碳的水：提供光合作用所需的二氧化碳。
5. 无色试剂：用于检测叶绿素的存在。
实验步骤：1. 准备：将乙醇和富含二氧化碳的水分别倒入两个玻璃瓶中，并为每个瓶子准备一片植物叶片。
2. 反应前处理：将一片植物叶片放入乙醇玻璃瓶中，摇晃约1分钟，待叶绿素溶解入乙醇，使叶绿素变成绿色提取液。
3. 提取叶绿素：将叶绿体提取液缓慢倒入富含二氧化碳的水中，同时观察溶液颜色变化。
4. 观察结果：根据溶液颜色变化，可以得出叶绿素在光合作用中的功能。
实验结果：通过实验观察，溶液从橙黄色逐渐变成绿色，说明叶绿体提取液中的叶绿素受到光的作用后发生了变化。
这表明叶绿素在光合作用中起到了重要的作用。
实验讨论：叶绿素是一种存在于植物和某些浮游生物中的绿色色素，它是光合作用中的关键物质。
通过吸收光能，叶绿素能够将阳光转化为植物可用的化学能。
在光合作用中，叶绿素通过光合色素复合体吸收光能，并将其转化为电子能和激发态能。
这些能量在光合色素复合体中传递，最终用于合成葡萄糖等有机物质并释放出氧气。
实验中，通过将叶绿体提取液与富含二氧化碳的水混合，我们可以观察到溶液颜色的变化。
这一变化表明叶绿素受到光的激发后发生了变化。
光能激发了叶绿素分子中的电子，使其从基态跃迁到激发态。
随后，叶绿素分子中的电子通过光合色素复合体传递，最终用于光合作用的化学反应。
叶绿素的存在使植物能够进行光合作用，从而合成有机物质并释放出氧气。
光合作用是地球上生物圈中最重要的能量转换过程之一，它不仅为植物提供了能量，也为其他生物提供了能量来源。
叶绿素的作用不仅体现在能量转换上，还参与了光合作用的调节和保护等多个方面。
综上所述，叶绿素在光合作用中起到了重要的作用。
叶绿素的提取原理
叶绿素的提取原理
叶绿素的提取原理主要是利用其具有特定的色素特性和生化特性，通过化学分离和纯化工艺获得纯度较高的叶绿素提取物。
叶绿素是一种绿色的天然色素，主要存在于植物和一些浮游生物等生物体中的叶绿体中。
叶绿素的化学结构由一个具有四个咔啉环的大环和一个具有镁离子（Mg2+）的中心离子组成。
叶绿素具有显著的吸收光谱，能够吸收红、橙、蓝紫光，并反射或透射绿光，因此呈现出绿色。
叶绿体中的叶绿素通过一系列的物理和化学处理步骤进行提取。
首先，需要将叶绿体从植物细胞中分离出来，其中一个常用的方法是通过离心法，将植物组织打碎并经离心分离得到叶绿体沉淀。
其次，溶解离心沉淀物的细胞膜，以释放叶绿体中的叶绿素。
通常使用有机溶剂（如醇类、醚类等）进行溶解，使叶绿素溶于有机相。
然后，通过萃取操作，将有机相中的叶绿素分离出来。
常用的萃取方法有：溶剂萃取、液液分配、石油醚浸提等。
叶绿素萃取后，还需要经过一系列的纯化工艺来去除其他杂质，以获得纯度较高的叶绿素提取物。
这些纯化工艺包括：沉淀、过滤、层析、结晶等。
沉淀是通过改变溶液中的离子浓度或
pH值，使叶绿素形成沉淀，然后通过离心或过滤分离出来。
层析是利用不同成分在固定相和流动相之间的分配系数差异，通过层析柱分离目标化合物。
结晶则是通过溶剂挥发或加热冷却等方法，使叶绿素在溶液中结晶析出。
最终，经过提取和纯化得到的叶绿素提取物可以在食品、医药和化妆品等领域中应用。
叶绿素的提取ppt
四种色素的化学性质
• 均为亲脂性>亲水性： 均不溶于水，而溶于有机溶剂，故可用乙醇、丙
酮等有机溶剂提取。 • 极性大小：
叶绿素b>叶绿素a>叶黄素>胡萝卜素 根据相似相溶原理，在有机溶液中的溶解度：
叶绿素b<叶绿素a <叶黄素<胡萝卜素
三、叶绿素的光学性质
叶绿素与类胡萝卜素都具有光学活性，表现出一定 的吸收光谱，可用分光光度计精确测定。
学习永远 不晚。 JinTai College
感谢您的阅读！ 为 了 便于学习和使用， 本文档下载后内容可 随意修改调整及打印。
实验关键
1.选材时应注意选择鲜嫩、色浓绿、无浆汁的 叶片。如菠菜叶、棉花叶、洋槐叶等。
2.画滤液细线时应以细、齐、直为标准，重复 画线时必须等上次画线干燥后再进行，重复 2-3次。
3.层析时不要让滤液细线触及层析液。
1.因丙酮和层析液都是易挥发且有一定毒性的 有机溶剂，所以研磨要快，收集的滤液要用 棉塞塞住，层析时要加盖，尽量减少有机溶 剂的挥发。
➢实验报告
（西安交通大学实验报告纸） （写清姓名、班级、实验名称、日期等） 一、实验目的 二、实验原理 三、实验记录 1.讲义中的表格（改动见下页） 2.画图 四、讨论及思考题 1.谈谈你在实验过程中的成功经验，或失败的教训 2.思考题
叶绿体中色素的提取和分离
➢ 思考题
1.研磨时要使叶绿素能够提取出来，要破坏多少 层膜？ 2.滤纸剪角的目的是什么？ 3.到了秋天叶色变黄、变红掌握纸层析法分离叶绿体色素的原理和 步骤；
• 掌握叶绿体色素的部分理化性质。
二、实验原理
• 1.叶绿体中的色素能溶解在丙酮（有机 溶剂:酒精、汽油、苯、石油醚等）中， 所以用丙酮可提取叶绿体中色素。
实验四叶绿体色素的提取、分离及叶绿素a、b含量的测定
实验四：叶绿体色素的提取、分离及叶绿素a、b含量的测定实验目的1、了解叶绿素分离与提取的原理和方法2、了解它们的光学特性和理化性质3、了解叶绿素a、b含量测定的方法。
实验原理1.脂溶性叶绿体色素提取：可用乙醇、丙酮等有机溶剂提取。
2.分离：（1）叶绿体色素的分离＜纸层析法＞因吸附剂对不同物质的吸附力不同，当用适当的溶剂推动时，混合物中各种成分在两相（固定相和流动相）间具有不同的分配系数，所以移动速度不同，经过一定时间后，可将各种色素分开。
纸层析是以滤纸纤维为固定相，而以有机溶剂作为流动相。
由于样品中各物质有不同的分配系数，移动速度因此而不同，从而达到分离的目的。
（2）叶绿素与类胡萝卜素的分离<皂化反应>叶绿素是一种二羧酸——叶绿酸与甲醇和叶绿醇形成的复杂酯，故可与碱起皂化反应而生成醇与叶绿酸的盐，产生的盐能溶于水中，可用此法将叶绿素与类胡萝卜素分开。
3.叶绿素a、b含量的测定：根据朗伯—比尔定律，某有色溶液的吸光度A与其溶液浓度c和液层厚度L成正比，即：A=φCL(φ为吸光系数) 因此，根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长下测定其吸光度，用公式即可计算出提取液中各色素含量。
测定663nm 和645nm两个特定波长下的吸光度A，并根据叶绿素a、b在对应波长下的吸光系数即可求出叶绿素a、b含量。
其校正过的公式为：Ca＝12.7A663－2.69A645 Ca:叶绿素a浓度,mg/LCb＝22.9A645－4.68A663 Cb:叶绿素b浓度,mg/LCT＝Ca + Cb CT:叶绿素总浓度,mg/L实验器材：1、仪器：剪刀、漏斗、烧杯、分光光度计、分液漏斗、铁架台、移液管、吸耳球、试管、毛细管、平底大试管、天平、研钵、滤纸2、试剂：石英砂、碳酸钙、丙酮、乙醚、四氯化碳、无水硫酸钠、30%KOH-甲醇溶液3、材料：菠菜实验步骤：1、叶绿素的提取称取去中脉叶片2g左右，剪碎放入研钵中加丙酮5ml，少许碳酸钙和石英砂，研磨成浆，再加入丙酮10ml，用漏斗过滤即为色素提取液，暗处备用。
实验三十四植物叶绿体色素的提取、分离、表征及含量测定
实验三十四植物叶绿体色素的提取、分离、表征及含量测定摘自王尊本主编,综合化学实验(第二版),第226-244页,北京:科学出版社,2007年9月。
实验三十四植物叶绿体色素的提取、分离、表征及含量测定[1-27]一、叶绿体色素的提取(一) 实验目的1)掌握有机溶剂提取叶绿体色素等天然化合物的原理和实验方法。
2)了解皂化-萃取提取胡萝卜素的原理。
3)了解1,4-二氧六环沉淀法提取叶绿素的原理。
(二) 实验原理植物光合作用是自然界最重要的现象,它是人类所利用能量的主要来源。
在把光能转化为化学能的光合作用过程中,叶绿体色素起着重要的作用。
高等植物体内的叶绿体色素有叶绿素和类胡萝卜素两类,主要包括叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素四种。
它们所呈现的颜色和在叶绿体中含量大约比例见表34.1。
表34.1 高等植物体内叶绿体色素的种类、颜色及含量项目叶绿素类胡萝卜素叶绿素a 叶绿素b 胡萝卜素叶黄素颜色蓝绿色黄绿色橙黄色黄色在叶绿体内各色素含量比例 3 1 2 13 1 叶绿素chlorophylls是叶绿酸的酯,它在植物进行光合作用中吸收可见光,并将光能转变为化学能。
叶绿素是植物进行光合作用所必需的催化剂。
在绿色植物中叶绿素主要以叶绿素a(C55H72O5N4Mg)和叶绿素b(C55H70O6N4Mg)两种结构相似的形式存在,其差别仅是叶绿素a中一个甲基被叶绿素b中的甲酰基所取代。
叶绿素的基本结构见图34.1。
在叶绿素分子结构中含有四个吡咯环,它们由四个甲烯基联结成卟啉环,在卟啉环中央有一个镁原子,它以两个共价键和两个配位键与4个吡咯环的氮原子结合成内配盐,形成镁卟啉。
在叶绿素分子中还有两个羧基,其中一个与甲醇酯化成COOCH3,另一个与叶绿醇酯化成COOC20H39长链。
类胡萝卜素carotenoids是一类不饱和的四萜类碳氢化合物(例如胡萝卜素,carotenes,或它们的氧化衍生物(例如叶黄素类,xanthophylls。
叶绿体色素的提取、分离及含量测定
叶绿体色素的提取、分离及含量测定实验目的叶绿素是植物吸收太阳光能进行光合作用的重要物质，主要有叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素组成。
叶绿素a与叶绿素b是高等植物叶绿体色素的重要组分，约占到叶绿体色素总量的75%左右。
叶绿素在光合作用中起到吸收光能、传递光能的作用(少量的叶绿素a还具有光能转换的作用)，因此叶绿素的含量与植物的光合速率密切相关，在一定范围内，光合速率随叶绿素含量的增加而升高。
另外，叶绿素的含量是植物生长状态的一个反映，一些环境因素如干旱、盐渍、低温、大气污染、元素缺乏都可以影响叶绿素的含量与组成，并因之影响植物的光合速率。
因此叶绿素含量a与叶绿素b含量的测定对植物的光合生理与逆境生理具有重要意义。
实验原理从植物叶片中提取和分离叶绿体色素是对其认识和了解的前提。
利用叶绿体色素能溶于有机溶剂的特性，可用95%乙醇提取。
分离色素的方法有多种，如纸层析、柱层析等。
纸层析是其中最简单的一种。
当溶剂不断地从层析滤纸上流过时，由于混合色素中各种成分在两相(即流动相和固定相)间具有不同的分配系数，它们的移动速度不同，使样品中的各种成分得到分离。
强光可以破坏离体的叶绿素，因为植物体内本来有还原酶，可以破坏光产生的强氧化物质。
而离体的叶绿素提取液中不含有还原酶，光产生的强氧化物质会破坏叶绿素。
叶绿素提取液中同时含有叶绿素a和叶绿素b，二者的吸收光谱虽有不同，但又存在着明显的重叠，在不分离叶绿素a和叶绿素b的情况下同时测定叶绿素a和叶绿素b的浓度，可分别测定在663nm和645nm（分别是叶绿素a和叶绿素b在红光区的吸收峰）的光吸收，然后根据Lambert-Beer定律，计算出提取液中叶绿素a和叶绿素b的浓度。
A663=82.04Ca+9.27Cb（1）A645=16.75Ca+45.60Cb（2）公式中Ca为叶绿素a的浓度，Cb为叶绿素b浓度（单位为g/L），82.04和9.27分别是叶绿素a和叶绿素b在663nm下的比吸收系数（浓度为1g/L，光路宽度为1cm时的吸光度值）；16.75和45.60分别是叶绿素a和叶绿素b在645nm下的比吸收系数。
分离叶绿体色素的方法
分离叶绿体色素的方法
膜壁分离法：这是一种很常用的叶绿体色素分离技术，它利用叶绿体
的膜极性来分离叶绿体色素。
具体方法是，叶片切碎，加入一定浓度的溶
剂（如氯仿或甲醇）和一定浓度的盐（如KCl），搅拌均匀后，将它们放
置在离心机上，中速离心，使植物细胞膜破裂，叶绿体色素从细胞质膜中
隔离出来，集中在离心液中，然后将叶绿体色素从液体相中分离出来。
蒸馏抽提法：这是一种非常简单的叶绿体色素分离技术，主要是将叶
片切碎，加入水搅拌，然后将叶绿体色素含量较高的混合液置于蒸锅中蒸馏，待温度达到100℃时将热气象从上面抽出，使溶质在蒸馏面份中扩散
出去，水份升华蒸发，叶绿体色素保留在固体物质中，再将固体物质抽出，即可分离出叶绿体色素。
层析法：也是常用的叶绿体色素分离技术，它的原理是将叶片切碎，
加入溶剂（如乙醇）搅拌，再加入盐（如KCl），搅拌至叶绿体色素溶解，然后将溶液送入混合技术分离的层析器中分离，因叶绿体色素与溶剂的溶
解度和盐的溶解度不同，在不同浓度溶剂和盐有不同的介质环境，叶绿体
色素会根据环境介质游离在介质界面，最后经过。
叶绿素的提取、分离和测定
Ca=12.7OD663-2.69OD645 Cb=22.9OD645-4.68OD663 Ct=Ca+Cb=20.2D645+8.02D663
解方程式得
(二）步骤
称取0.5g叶片，剪碎后置于玻璃匀浆器中加纯丙酮5mL，研成匀浆，用80%丙酮10mL洗匀浆器，用80%丙酮定容到25mL，避光静置5min。用移液管吸取上面的绿色清液1mL置于一大试管中，加入丙酮4ml稀释，摇动试管，作测定用。
测量光密度值 取上述提取液以80%丙酮作为空白对照，于663及645nm下读取光密度值
计算结果代入公式求出各来自绿素的含量（单位mg/L）最后计算时需考虑稀释因子
叶绿素a含量（mg/g鲜重）=CA*5 *25*2/1000 =0.25CA
叶绿素b的含量（mg/g鲜重）=0.25CB
研钵、吸管、小烧杯、试管、培养皿等
01
95%酒精、石油醚
02
碳酸钙
03
（二）仪器和药品
（三）步骤
用天平称取15g鲜叶，剪碎放入研钵中，加少量的CaCO3粉末及95%酒精5-10mL研成糊状，再加95%酒精20mL，充分混匀以提取叶片匀浆中的色素，5-10分钟后，过滤入三角烧瓶中加塞待用。
取一张色层分析纸或定性滤纸代用，剪成圆形，直径应略大于培养皿的直径；将圆形滤纸平放在培养皿上，用滴管吸取叶绿素提取液，滴在滤纸的中心位置，稍干后，再重复操作几次；然后取另一滴管吸取石油醚，慢慢地推动叶绿素提取液，不久即可看到分离的各种色素的同心圆环,由内到外依次为：叶绿素a为蓝绿色、叶绿素b为黄绿色、叶黄素呈鲜黄色、胡萝卜素为橙黄色。
叶绿素a、b在长波方面的最大吸收峰分别为为663nm和645nm。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
叶绿体色素提取的方法
叶绿体色素提取属于植物生理学研究课题中的重要内容，主要用于研
究植物光合作用机制和生理活动等。
叶绿体色素提取的方法有：
1. 普通法：普通法，也称为离心法，是从叶绿体提取色素的常的方法，主要包括叶绿体分离、碱提取和色素沉淀等步骤。
2. 高效液相色谱法（HPLC）：高效液相色谱法能够高效提取出叶绿体
色素，且对不同类型的叶绿素色素都具有很好的效果。
3. 原子吸收法：此方法利用叶绿体色素在原子吸收分析中的特殊的亮
度特性，可以同时测量特定波长的吸收谱，从中可以提取出大量不同
类型的叶绿体色素。
4. 光子聚焦荧光技术：光子聚焦荧光技术的原理是采用具有抑制作用
的特定波长发射出自身特定荧光，从而进行叶绿体色素的提取。
5. 光波谱法：光波谱法是利用光信号的强度大小，通过特定波长的发
送和接收来测定叶绿体色素浓度大小及组成成分，从而获得精确的叶
绿体色素提取结果。
通过以上五种方法可以进行叶绿体色素的提取。
但是在实际的应用中，
根据检测工具的不同，也要注意一些特殊的技术要求，例如提取样品的选择、采集参数的调节等，以保证实验的准确性和可靠性。