实验一母种培养基的配制与菌种分离与培养
实验一 母种培养基的配制与菌种分离与培养实验
1、本次实验的目的和要求
学会母种培养基的配制方法，掌握母种转管继代培养技术，了解食用菌母种制作
的工艺流程和制作母种的基本技能。
2、实验内容或原理
（1）母种培养基配制。
工艺流程：培养基配方 培养基的配制 分装试管理 灭菌 摆斜面
（2）菌种分离与培养（本实验以组织分离为例）
工艺流程：种菇的选择与消毒 组织块的切取 接种 菌丝培养
3、需用的仪器或试剂等
仪器：接种箱或超净工作台、高压灭菌锅、电炉、天平、试管、试管架、解
剖刀、漏斗、漏斗架、橡皮管、玻璃管、止水、牛角勺、棉花、纱布、酒精
灯。
试剂：75%酒精、高锰酸钾、福尔马林、马铃薯、葡萄糖、琼脂等。
4、实验步骤
（1）母种培养基配制
a、培养基配方 以PDA培养基为例，马铃薯（去皮）200g、葡萄糖20g、琼脂
20g、水1000ml。为经强化营养或准备保藏菌种，可添加KH2PO43g、MgSO4.7H2O1.5g、
VB110mg。
b、培养基配制 首先将马铃薯去皮、洗净、挖去芽眼、切成薄片，称取200 g，
放入铝锅中用1000ml清水加热煮沸，维持20min左右，煮至软而不烂为止。用
双层湿沙布过滤，然后取滤液并补足蒸发损失的水分。再加入琼脂继续加热泪，
待琼脂溶化后，添加葡萄糖及其它成分，搅拌均匀后准备装管。
C、分装试管 培养基配制后应趁热分装，量为试管的1/5。装管时勿使管内外
壁沾上溶液，以免浸湿棉塞，污染杂菌。装管后塞上棉塞。棉塞的大小、松紧度
应适宜，以用手提棉塞、试管不脱落为准。然后每5-10支度试管扎成一捆，棉
塞上方用牛皮纸包好，避免灭菌时被水蒸汽浸湿。
D、灭菌 灭菌前将水加至锅内水位标记高度。将试管放入锅内，盖上锅盖，对
角旋紧锅上螺旋，并闭排气阀，开始加热,当锅内蒸汽大量排出时再继续排汽3-5
min,关闭放气阀.当压力表指针指到0.15 Kg/cm2时(灭菌所需压强)开始计时,继
续维持该压强30min。灭菌结束持压力表指针自然回到”0”位时打开放汽阀,排
出锅内剩余蒸汽后,打开锅盖.注意切忌在压力表未到”0”位时就放汽,以免试管
内的培养基向上冲浸湿棉塞,造成以后菌种的污染.
（本次采用全自动高压灭菌锅：121℃，20min）
E、摆斜面 当培养基的温度降到60℃时，将试管斜面放在木棒上，使呈斜面，
斜面的长度以占试管长度的1/2为宜。冷却后即成斜面培养基。
(2)菌种的分离与培养（本实验以组织分离为例）
种菇的选择与消毒 选择出菇早，菇形正，菇盖肥厚，具有该品种特征，无
病虫害、无杂菌污染，子实体八九分成熟的作为种菇。种菇选定后，用75%酒精
进行表面消毒。
组织块的切取 将斜面培养基放进接种室、接种箱或超净工作台内，用紫外
灯（或化学药品）进行消毒0.5h以上,关闭紫外灯后20min后,再开始进入接种
室内进行接种。接种是一项技术性很强的工作，需要在无菌的环境中以无菌操作
方法进行接种，才能减少污染。无菌操作是接种过程中最基本的操作方法，要求
操作熟练，动作迅速。用无菌刀在菇柄或菇盖中部纵切一刀，然后用手将菇体掰
成两面，在菌柄 和菌盖交界处用刀切取0.3-0.5cm2的小方块组织,将其移接到试
管内培养基的中央，将其移接到试管内培养基的中央。
菌丝培养 接种后置于25℃恒温箱中培养,2-3天后可见组织块周围发生白色
绒毛状菌丝,此时每天要检查杂菌污染情况.培养7-10天后,菌丝即可长满斜面.
观察记载
详细观察比较母种菌丝生长发育动态，计算出平均每天菌丝生长速度。
菌落的直径（mm）-菌种块直径(mm)
试管内菌丝生长的速度=
菌落生长的时间（d）
观察母种菌丝的表面形态特征。
通过镜检，观察菌丝细胞核的变化规律及锁状联合的形成。
作业
总结制作培养母种、原种及栽培种过程中应掌握哪些基本技能。
如何获得优良的菌种？
5．教学方式
以分组的形式进行实验、讨论
6．考核要求
掌握母种培养基的配制比例与高压灭菌方法，要求组织分离成功率在50%以
上。根据提交的实验报告、实验过程与结果，评分方式为优、良、中、及格、不
及格。
7．实验的报告要求
要求有观察记载数据，完成实验报告与作业。
实验分组：全班分三大组，每大组分2小组。
实验准备：第二组写板书1人，准备材料2人。
实验任务：每小组按配方称料、配料，每人制作母钟两管。
材料准备：购新鲜马铃薯4斤。
准备用具：1人，试管2只/人，棉塞2个/人。
接种用具灭菌：接种盘4个、解剖刀4把、镊子4把。
消毒剂：配75%酒1000ml
实验一大肠杆菌的培养和分离
答：皿盖与皿底之间的培养基易滋生杂菌，因 此不宜用此皿继续培养。
连续划线法
2.为什么要研究微生物？
90%以上对人类有利的，少数能引起传染病。 1.利用微生物生产食品、药品，如酒类、抗生素等； 2.微生物治理环境污染； 3.利用微生物生产新能源。 4.用于基因工程
一、实验目的（教学要求）
1.进行大肠杆菌的扩增，利用液体培养基进行细菌 培养的操作； 2.进行大肠杆菌的分离，用固体培养基进行细菌的 划线培养。 3.说明大肠杆菌培养的条件和实验原理。
稀释→涂布→培养
玻璃 三角 刮刀
划线分离法：简单。涂布分离法：单菌落更易 分开，但操作复杂些。
4.扩大培养过程和分离过程
（1）制备５０ml的LB（液体和固体）培养基
①配制：： 蛋白胨：０.５g 酵母提取物：０.２５g 氯化钠：０.５g 溶于热水并加水至５０ml，并调pH（７.６）
固体培养基： 上述物质中再加１g琼脂。
答：利用标记基因所对应的性状（如抗青霉素） 保留转基因大肠杆菌，杀死普通大肠杆菌。
６.本实验的目的是什么？
答：尝试培养微生物的基本技术；学习培养、 分离提纯大肠杆菌的方法。
７.本实验的实验原理是什么？
答：微生物能够利用培养基中的各种营养物质 进行生长和繁殖。划线或涂布可以使单个细菌 繁殖成单个菌落，从而分离。
②灭菌: 将50ml培养基用玻棒转移至三角锥瓶中，
塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭
菌锅，在压力为1kg/cm2、温度为121℃，灭菌
15min。 ③倒平板:
待培养基冷却到６0 ℃左右时，在酒精灯附 近倒平板。（倒平板操作见课本）(试管斜面的 制作方法类似)
实验室平菇栽培法实验报告
实验报告实验名称实验室平菇栽培法班组姓名学号日期成绩教师签名一、实验目的1.掌握平菇基本栽培方法及其原理。
2.掌握平菇栽培中器械和培养基的灭菌方法及原理，如高压蒸汽灭菌法、干热灭菌、灼烧灭菌和紫外灯灭菌法等。
3.了解食用菌母种扩大繁殖生产的基本原理,掌握斜面母种的接种和培养方法。
4.掌握平菇栽培中原种、栽培种培养基的制备方法。
5.培养学生自行设计出菇的方案。
二、基本原理1.平菇是木质腐生菌，生长发育所需各种营养物质均从木屑、棉籽壳、稻草等培养料中获得。
平菇生长周期短，从播种到第一批采收一般为30天到40天，栽培方法简便，成功率高。
本实验在实验室条件下，用袋装方法出菇。
2.食用菌生产中，培养基、器皿及接种工具的消毒灭菌，是防止杂菌污染，提高食用菌产量的关键措施，灭菌和消毒法主要有物理方法（高温灭菌和紫外线灭菌）、化学灭菌法。
干热灭菌是在保持恒温的电烘箱中进行的,适用于各种耐热的玻璃器皿、棉塞、滤纸、以及不能与蒸汽充分接触的液体的灭菌.一般在160摄氏度持续1.5—2小时,就可达到灭菌的目的.灼烧灭菌可直接在酒精灯外火焰灼烧灭菌,酒精灯所用的酒精浓度要在百分之95以上.紫外灯灭菌是接种室(箱)最常用的方法之一,每次在使用前开灯20—30分钟.紫外线可导致细胞内核酸和酶发生变化而使细胞死亡,还可使空气中氧气产生臭氧,臭氧也具有杀菌作用.因其透射力差只适用于空气及物体表面的灭菌,有效距离为1.5—2米,以1.2米内为最好.3.食用菌母种培养基和分离菌种时用斜面培养基，适用于一般食用菌的母种分离与培养用的培养基是马铃薯葡萄糖琼脂培养基（即PDA培养基），配成后用加压蒸汽灭菌法对培养基进行灭菌。
4.食用菌菌种生产一般按母种——原种——栽培种进行。
母种数量少，要进行试管移接扩大培养才能进行生产。
5.原种由母种繁殖而成，由原种扩大培养成栽培种。
原种和栽培种生产一般包括配料——装瓶（袋）——灭菌——接种——培养等流程。
食用菌原种筛选与扩繁实验原理
食用菌原种筛选与扩繁实验原理食用菌原种筛选与扩繁实验原理「篇一」食用菌制种与栽培教案实验一食用菌形态结构的观察一、实验目的认识和掌握常见的栽培的食用菌形态特征二、实验原理常见的栽培的食用菌主要是担子亚门层菌纲和腹纲的一些种类，它们由双核菌丝分化形成子实体，子实体是有性孢子着生的器官，其孢子外生在担子上，并聚集成一层子实层，但它们的子实体形状因种类不同而有很大差别，是认识食用菌类别的主要标志。
三、实验器材1、新鲜的食用菌，浸、干制标本。
2、解剖刀。
四、实验方法识别香菇、双孢蘑菇、平菇、猴头、口蘑、木耳、竹荪、草菇、银耳、金针菇等形态特征。
取平菇、香菇，首先观察其子实体的组成部分及其形态特征。
再用解剖刀纵切子实体观察其菇盖组成。
菌肉的颜色、质地、菌褶形状和着生情况(离生、延生、直生、弯生)。
再观察其菌柄的组成，菌柄的质地，中空或中实。
五、作业绘制香菇子实体形态及纵剖面简图，并注明各部位名称。
实验二食用菌母种培养基的制备与灭菌一、实验目的1、掌握食用菌母种培养基的配制方法。
2、熟练掌握高压蒸汽灭菌锅的使用方法。
二、基本原理培养基是按照食用菌生长发育所需要的各种营养物质，用人工方法配制而成的营养基质。
其中含有碳源、氮源、矿质元素、生长因子和水分等物质。
由于食用菌在生长发育过程中，还必须在适宜的酸碱条件下，才能表现最大的生活力。
因此，对不同种类食用菌还须将培养基调节到一定的PH值范围。
食用菌的培养基可分为母种培养基、原种培养基和栽培种培养基。
对于母种培养基一般多采用固体培养基，因此需在培养基中加入一定量的凝固剂。
三、实验器材马铃薯(去皮)200g，琼脂16-18g，葡萄糖20g，大试管、棉塞、灭菌锅、漏斗、铁架台、胶管。
四、实验步骤1、选好马铃薯洗净去皮(挖去芽眼)，切成薄片，取200g放在铝锅中，加水1000mL，煮沸20分钟，双层纱布过滤，取滤液并补足水至1000mL，加琼脂，小火加热，玻璃棒搅拌至琼脂全部溶解，再加入葡萄糖使其溶化。
微生物菌种选育实验指导
《微生物菌种选育实验》是一门涉及食品理化分析、微生物学实验且由学生自行设计实验方案的综合性、设计性实验课程，集中三周时间开课。
一、实验目的通过本环节训练，加深对发酵工程上游技术中菌种筛选的认识；学会常规选种方法；掌握微生物诱变育种的方法；掌握常规工业微生物菌种保藏法；树立科学认真仔细的态度，培养科研协作精神。
二、实验内容实验一工业微生物菌种分离根据一定的生产目的如产酶、产酸、产酯等，建立不同的筛选模型，并从特定的样品如曲药、酸乳、土壤中筛选出高产适宜的菌株。
1、分离培养基的配制2、无菌器材的准备3、菌悬液的制备4、接种5、培养6、初步鉴定(1) 菌落形态(2) 个体形态7、斜面接种培养实验二工业微生物菌种复筛通过摇瓶培养对实验一所得的菌株的生产性能进行精确的定量测定。
1、发酵培养基的配制；2、目的菌株的摇瓶培养；3、发酵液的生理活性测定。
实验三微生物的诱变育种用紫外线对实验一所得的高产菌株进行诱变，并测定诱变后的菌株的生产能力。
1、单细胞(或单孢子) 悬液的制备；2、致死曲线的测定；3、诱变处理；4、初筛；5、复筛；6、菌种保藏。
三、实验要求1．学生自行设计具体实验方案，在教师指导下由学生自主完成实验。
2．实验结束后，要求学生完成一篇微型小论文。
论文的撰写应本着实事求是的原则，对所做实验过程和数据进行认真、严格的记录和处理，并进行独立分析，不得抄袭他人的数据。
四、考核办法1、考核内容：实验方案、实验态度、操作技能、实验报告等。
2、考核办法：按照实验方案、实验态度、操作技能、实验报告等内容综合考核学生，得到学生该门实验课程的成绩。
成绩考核采用优秀、良好、中等、及格、不及格五级记分制。
3、考核标准：以实际操作技能和分析解决问题的技能为主，实验考核内容各单项所占分数比例为实验方案20%、实验态度10%、操作技能40%、实验报告30%。
微生物菌种选育概述微生物的菌种对进行微生物工作来讲是非常重要的。
没有“种”无法进行微生物的科学研究；没有良种，不能进行发酵工业的生产。
实验一大肠杆菌的培养与分离(最新)
恒温培养箱
实验设备和用品： 1、灭菌锅或高压锅 2、250ml的三角瓶、封口膜和橡皮圈P22 P26 3、直径90mm的培养皿 4、接种环和玻璃三角刮刀 5、恒温培养箱 6、摇床
摇床
实验设备和用品： 1、灭菌锅或高压锅 2、250ml的三角瓶、封口膜和橡皮圈 3、直径90mm的培养皿 4、接种环和玻璃三角刮刀 5、恒温培养箱 6、摇床 7、酒精灯和超净台
1-1什么是生物技术
• 生物技术=生物工程
应用自然科学及工程学原理，以微生 物体、动物体、植物体或其组成部分作为 生物反应器将物料进行加工，以提供产品 来为社会服务的技术。
1-2 传统生物技术
• 传统生物技术指主要通过微生物 的发酵来生产商品.如:酱、醋、 酒、面包、奶酪、酸奶等
1-3 现代生物技术
②保护细胞免受外力的损伤； ③阻拦大分子物质进人细胞； ④使细胞具有致病性及对 噬菌体的敏感性。
伤 寒 杆 菌 细 胞 壁 中 含 毒 素
有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠 体，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环 境有很强的抵抗力。例如，有的细菌的芽孢，煮沸3小时以后才 死亡。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水 分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌.
特点：结构简单，形体微小，通常要用光学显微镜或 电子显微镜才能看到，有的甚至没有细胞结构。 用途：90%以上的微生物是对人类有利的。如抗生素 多数来源放线菌和霉菌；酒由酵母菌发酵产生，腐乳 由红曲霉和毛霉发酵制成；微生物也能消除环境污染， 在新能源领域将发挥巨大作用。
1）放线菌
1、结构： 单细胞原核 分支状的菌丝（基内菌丝、气生菌丝）
分离后,一个菌体 便会形成一个菌 落,这是消除污染 杂菌的通用方法, 也是用于筛选高 表达量菌株的最 简便方法之一
食品微生物实验ppt课件.ppt
紫外线灭菌法： 一般30W灯管，9m3空间，距地面2m每次打开紫外线 照射0.5h，就使室内空气灭菌。若照射紫外线时先喷 洒石炭酸等化学消毒剂，可增强灭菌效果。紫外线虽 有较强的杀菌力，但穿透力弱，即使一薄层玻璃或水 层就能将大部分紫外线滤除，因此只适用于空气及表 面杀菌。
化学药剂消毒灭菌： 微生物实验室中常用的化学杀菌剂有升汞、甲醛、高 锰酸钾、酒精、碘酒、龙胆紫、石炭酸、漂白粉、新 洁尔灭、煤酚皂溶液，它们有的是杀菌剂，有的是抑 菌剂。
实验器材
1. 药品和试剂 牛肉膏、蛋白胨、NaCl、 10％ NaOH 溶液、10％盐酸溶液。
2. 器材 天平、药匙、瓷缸、玻璃棒、电炉、 PH试 纸、试管、三角瓶、分装漏斗、牛皮纸、棉 花、线绳、干燥箱、高压锅。
实验步骤
• 培养基的配制 • 分离培养微生物常用器皿的准备 • 培养基和玻璃器材的灭菌
在平板的表面（根霉点一点，曲霉、酵母可 点3-4点）。 2) 平板接斜面：一般是将经平板分散培养得到 的单菌落接种到斜面，以便作鉴定或扩大培 养、保存之用。
实验方法
平板划线
三点接种
实验方法
挑孢子： 将灭过菌的接种针在菌种管斜面上端冷却并湿润后，再
用针尖挑少量孢子。当移出接种针前，须将针柄在管口轻轻 碰几下，以抖落未粘牢的孢子。然后移出接种针，塞上棉塞， 将菌种管插回试管。 点接：
实验方法
培养基的制备过程 配方及配量---称取药品----加热溶解----调 节pH ----过滤----分装----加棉塞----包扎---
-灭菌----搁斜面----贮存
1. 称量 按照培养基配方与配量分别称取各药品。
取少量的水于烧杯中，将各培养基成分（琼脂 除外）逐一加入水中待溶。
酵母菌的培养与分离
微生物学大实验实验指导编者：生物技术教研室2007.3目录实验一酵母菌的培养与分离‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥2 实验二酵母菌的鉴定‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥7 实验三酵母菌耐受能力的测定‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥19 实验四酵母菌发酵工艺条件的优化‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥22 实验五耐高温酵母菌株的诱变选育‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥24 实验六酿酒酵母细胞固定化与酒精发酵‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥27耐高温酒精酵母菌的选育及发酵条件的研究实验一酵母菌的培养与分离一、实验目的学习培养和分离酵母菌的技术和方法二、基本原理大多数酵母菌为腐生;其生活最适pH为4.5－6;常见于含糖分较高的环境中;例如果园土、菜地土及果皮等植物表面..酵母菌生长迅速;易于分离培养;在液体培养基中;酵母菌比霉菌生长得快..利用酵母菌喜欢酸性环境的特点;常用酸性液体培养基获得酵母菌的培养液这样做的好处是酸性培养条件则可抑制细菌的生长;然后在固体培养基上用划线法分离之.. 三、实验主要内容和要求一本次实验的方案由同学们自己制定;实验包括：1．马铃薯葡萄糖培养基; 乳酸马铃薯葡萄糖培养液的配制..2.菌株的筛选;根据一定的生产目的并从特定的样品筛选出高产酒精的适宜的酵母菌株..3.酵母菌的分离;要求接种一次; 28-30℃;培养24小时;转接一次;28-30℃;培养24小时;并用镜检的方法独立判定所分离菌株是否为酵母菌..4.用划线分离法对酵母菌进行纯化;要求每组挑取单个菌落;连续划线分离4代;镜下为单一纯菌株;每组扩繁10支斜面菌种;备用..四、实验的准备1、甘蔗、成熟葡萄或苹果等果皮、0.1%美蓝染液、1ml的无菌吸管、无菌培养皿等..2、马铃薯葡萄糖琼脂培养基：原料：马铃薯200克、葡萄糖20克、琼脂15-20克、蒸馏水1000ml..配制方法：1先将马铃薯去皮;切片;称200克并加蒸馏水1000ml;煮沸半小时;用纱布过滤;补足蒸馏水量至1000ml ;制成20%的马铃薯汁..2在20%的马铃薯汁中加入琼脂;煮沸溶化;补足水分并在115℃条件下高压灭菌20分种..3加入葡萄糖;制成培养酵母菌的马铃薯葡萄糖琼脂培养基..3、乳酸马铃薯葡萄糖培养液：配方同上;但不加琼脂而加乳酸;按每1000ml培养液中含5ml乳酸的量加入;并分装试管..五、实验设计l、接种：取一小块果皮;不需冲洗;直接接入乳酸马铃薯葡萄糖培养液管中;置28-30℃;培养24小时;可见培养液变混浊..2、培养;用无菌吸管取上述培养后培养液0.lml;注入另一管乳酸马铃薯葡萄糖培养液中;置28一30℃再培养24小时或稍长过长则霉菌长出..3、观察：用无菌操作法取少许菌液置于载玻片中央的0.l%美蓝染色液中;混匀后加盖玻片制成水浸片;先用低倍镜后换高倍镜观察酵母菌的形态和出芽生殖情况..活酵母菌可使美蓝还原;从而使菌体不着色;用此方法可判断酵母菌的死活..4、分离：马铃薯葡萄糖琼脂培养基溶化后制成平板..用划线法分离酵母菌培养液;从而得到单个菌落..挑取单个菌落反复再次划线分离纯化;最终可获得纯培养..六、实验注意事项1.配制培养基时;应注意琼脂的加量;不同规格及批次的琼脂的加量应由实验确定;不能照搬书上的加量..2.对培养基加热时应注意琼脂的糊底与暴沸..3.灭菌锅操作时;首先应注意水一定要加足够;排气要彻底;其次灭菌期间不要离开人;灭菌结束后;关闭电源;拔掉插头;最后放气一定要缓慢;均匀;气放彻底才能开锅;取锅内物品;应小心;防止烫伤..4.接种前应注意无菌工作台的消毒与杀菌;接种时应注意手与接种工具的消毒..七、实验结果的观察及记录1.24小时;观察试管内培养液的情况并作记录;每组转接2支试管..2.48小时;观察试管内培养液的情况;镜检培养液内菌的数量;粗略判断是否为酵母菌并作记录;每人蘸取培养液进行划线分离;并作记录..3.72小时后;观察培养皿内菌的生长的情况;挑取单个菌落进一步划线分离;直到为纯菌落..4.每组转接10支斜面试管;备用..八、实验的延伸自然条件下酿造苹果酒;葡萄酒、猕猴桃酒..七实验报告要求1.实验完毕后;每位同学都应独立作出实验报告;实验报告应类似于小型论文格式..2.实验报告内容包括：1立题意义..2实验设计..3实验步骤详细记录..4对实验结果的分析讨论和总结..5实验延伸..6实验心得体会..附1：果酒的酿制方法—、目的要求了解果酒酿制原理;学习苹果酒酿制技术..二、基本原理果酒是一类营养丰富、含酒精度低的上乘饮料..它是用含一定糖分和水分的果实压汁;经微生物发酵而成..其生化作用;除酒精发酵的主产物外;还有甘油、醋酸、琥珀酸、杂醇油等的形成；同时;陈酿期中;各种酸类与醇类的酯化反应;赋予果酒特殊的香味；果酒中的单宁、色素、果屑微粒及蛋白质包括酵母尸体等的氧化和下沉;使酒液澄清、风味增浓..各种果酒以原料而称名..除坚果外;所有栽培果;野生果均可做酿果酒的原料..本实验以苹果酒为例;学习其酿制方法..三、实验材料1、菌种在7°Be’麦芽汁琼脂斜面培养基上的葡萄酒酵母s.cerevisae ellipsoieleus..2、器材苹果汁培养基;7°Be’麦芽汁培养基;10ml／管、100ml／三角瓶等装量;白糖;食用酒精;亚硫酸;果胶酶;发酵缸;破碎机;果汁分离器等..a.苹果汁培养基粗滤新鲜果汁蔗糖调至13°Be;酸度0.5%以下1000mlK2HPO4 0.1g MgSO4·7H2O 0.1g配好后;加热煮沸3～5分钟;静置10小时以上;过滤、分装;0.7Kg／cm2灭菌20分钟..四、实验步骤一酒母培养1、菌种活化一级种取装有10ml苹果汁或7°Be’麦芽汁培养基1支;按无菌操作法接种葡萄酒酵母菌一环;混匀后置28～30℃下培养2～5天用苹果汁活化菌种时需培养5天以上;镜检酵母繁殖良好;无杂菌即可..2、母发酵剂制备二级种在装有100ml苹果汁培养基的三角瓶中;接1～2ml经活化的葡萄酒酵母菌液;于28℃下培养2～3天;当培养液表面有气泡产生;嗅之有酒香味、取样镜检无杂菌时使用..3、生产发酵剂的制备三级种方法与母发酵剂相同;只是采取更大的容器..一般采用500～1000ml的三角瓶或卡氏罐;盛装占容积1／2～3／5的果汁培养液;灭菌冷却后;按10％接种量接人母发酵剂;在25～28℃下培养24～48小时;待发酵正常;镜检无杂菌方可使用..4、如果使用活性干酵母;添加量为20g/L发酵醪;复水用水量是干酵母重量的5～10倍..复水用水的温度应保持在40℃左右38～43℃;将酵母静置5～10min后搅拌;酵母在水中的时间不能超过30min..然后使酵母溶液缓慢冷却到与将被接种发酵醪的温差小于10℃;然后直接加入发酵醪..二果酒生产工艺流程如下：果胶酶↓苹果→分选除杂下清洗→破碎→压榨→粗果汁→果楂、苹果酸、丹宁↑活化酵母→母发酵剂→生产发酵剂↓蔗糖→发酵→皮渣分离→后发酵→原酒→→换捅除渣→贮存陈酿→配制→贮存→澄清过滤→装瓶→巴氏灭菌→封口→成品..2～3次操作要点：1、分选取成熟苹果;除去腐烂、干疤和伤果..2、清洗清水充分洗涤;除去果皮上的污物、杂质及药剂;以保证原料干净卫生..3、破碎为易于压榨;提高出汁率;需进行破碎..用破碎机破碎至果块粒度0．5cm3左右;并除去果籽..4、压榨分离破碎后立即进行压榨分离..分离出的果汁中不得夹带果肉;同时需添加适量苹果酸调整含量要求果汁总酸含量为5g／L;并加入0.1～0.15g／L的果胶酶;促进果胶分解;使果汁澄清并提高酒的风味..由于苹果汁易被自身含有的多酚氧化酶氧化;故需加SO2还原剂抑制酶活性;同时SO2也具有杀菌、防腐和澄清果汁作用..SO2来源;除工厂应用液态SO2外;实验室常加入亚硫酸钠Na2SO3和偏重亚硫酸钾K2S2O5;其用量为果汁量的0.02％即可..5、前发酵取澄清果汁放入经干热灭菌的发酵缸中;装量占缸容积的4／5;按3～5％的接种量接入酵母生产发酵剂进行发酵;保持品温在18～22℃之间;最高勿超过25℃;发酵应在7～12天内结束..一般苹果汁糖分约为11％;经发酵后;酒精含量约达6％以上;前发酵结束后;原酒酒度应大于8％V;残糖＜20g／L;总酸苹果酸＞5g／L..6、后发酵前发酵结束后;迅速将酒液与皮渣分离;酒汁转入经干热灭菌的发酵缸中;进行后发酵;使残糖继续分解..期间;控制品温在18～22℃之间;不要超过25℃;时间1个月;即得原酒..要求残糖含量小于2g／L以下;挥发酸以醋酸计小于0.6g／L;总酸以苹果酸计大于5g／L..7、换桶除渣为使已澄清的原酒与其酒脚沉淀物及时分离;以免酒脚产生异味而影响酒质;故需进行换桶缸..换桶次数新酒每年换三次..8、贮存陈酿应满桶贮存..陈酿即酒的老熟;经长期密闭贮存;可使酒质澄清、风味醇厚..贮存室温8～16℃;存期半年以上..9、配制原酒贮存半年后可开始配制..配制时;按工艺规定将不同原酒按一定配比相混;然后添加适量的糖、酒精、继续贮存半年以上..10、澄清过滤可采用冷冻法使其澄清;即于-4℃左右存放7天;然后冷过滤..澄清后的酒置-5～-7℃下冷冻3天不发生混浊沉淀;或暴露空气中氧化4天不变混浊即为合格..11、装瓶灭菌装瓶后需进行巴氏灭菌;即在63℃下处理15分钟;冷却后封口保存..五、实验报告1、简述苹果酒的酿制法..2、二氧化硫在果酒酿制中的作用是什么六、思考题1、酵母菌酿酒的原理是什么2、果酒酿制中为何要加入果胶酶实验二酵母菌的鉴定酒精生产中所用酵母菌在微生物学中的分类依据是什么微生物学的类别分门、纲、目、科、属、种;生产酒精用酵母菌属于微生物中的真菌门、子囊菌纲、原子囊菌亚纲、内孢霉目、内孢霉科、啤酒酵母属、卡尔斯伯酵母属等..酵母菌的分类依据是根据它的形态特征、生理生化反应特征来确定的..在分类前将菌体细胞进行分离纯化;得到由单细胞长成的菌落;然后再进行形态特征和生理生化鉴定..一形态特征的鉴定把酵母菌接种到麦芽汁固体培养基上;让它长成菌落;观察其菌落的形态、颜色、质地、边缘、表面等特征..把它再接种到液体麦芽汁培养基中;观察是否能产生醭、试管或培养仪器表面壁上能否形成菌环;培养液中是否产生沉淀、混浊程度等..另外;还要取样在显微镜下观察其单细胞的形态、大小、能否形成孢子、孢子的大小以及繁殖方式等.. 二生理生化特征的鉴定酵母菌的生理生化特征主要表现为发酵葡萄糖、果糖、蔗糖、麦芽糖等糖类的能力..同时;还需测定利用其它碳水化合物、同化酒精、耐酒精;利用硝酸盐还是硫酸盐;发酵产酸、产醋、耐温、耐酸、抗重金属离子、抗杂菌性等的能力..最后;根据以上得出的形态特征和生理生化特征;查阅有关资料;把具有相同特征的一类酵母菌;就可以归属于某一属..怎样鉴定酵母菌在液体培养基中的培养特征将酵母菌种接种于米曲汁或麦芽汁液体培养基中;放于恒温培养箱内以28—30℃保温培养18—24、24—48、48—72小时;取出观察各个时期液体培养基表面有无白色浮膜物-醭的存在;各个不同时期培养基中有无沉淀或沉淀的多少、有无混浊和混浊程度、试管或其它培养器壁上有无菌环形成;最后取出各个不同时期的样液;注入酵母细胞计数器--血球计中;放置显微镜下观察单个细胞的形态变化情况、液泡的大小、细胞数增加的多少以及培养基中pH值的变化情况等;并测定其酒精和二氧化碳的生产量..然后根据不同的反应情况;作好详细的原始记录;便于以后培养菌种时比较和参考..酵母菌生理生化试验一、酵母菌糖发酵试验一实验目的了解鉴别酵母菌的实验方法..二实验原理酵母菌在厌氧条件下能分解糖类;产生各种有机酸、气体和其它产物..酵母菌种类不同对各种糖类的发酵能力各异..因此;这是鉴别酵母菌种类的一项重要依据..酸的产生可根据培养基中溴甲酚紫pH6.8-5.2由紫变黄或溴麝香草酚蓝pH7.6-6.0由蓝变黄指标剂颜色的改变来确定..产气可由发酵管气泡的产生予以证实..三材料糖发酵基础液;1.6%溴甲酚紫或0.2%溴麝香草酚蓝溶液;葡萄糖、乳糖、半乳糖和麦芽糖;啤酒酵母斜面菌种..四实验内容1、糖发酵基础液配制好后;按培养液容量的1%加入糖;分装于杜氏发酵管中培养液的高度约为4-5厘米;再在试管内加入倒置的小玻管约0.4×2.0－2.5厘米一支..每种糖设三个重复管;<121℃>高压灭菌15分钟..2、将酵母分别接入上述各发酵管中;置<30℃>下培养48-72小时;另以不接种者作对照3、如产酸则培养液pH值下降而变黄色；如产气;则必先产酸;并在杜氏小管顶端出现气泡..4、结果记录..以“”表示产酸;“<0”>表示产气;“＋”表示产酸产气;“－”表示无变化;“碱”表示产碱..二、酵母菌碳源同化试验一实验目的了解酵母菌对各种碳源的利用情况..二实验原理碳是酵母菌细胞的重要组成成分;约占酵母菌体重量的50%;为酵母菌生命活动提供所需的能量和组成其结构的物质..酵母菌对各种碳源的利用;因种类不同而异..这是酵母菌分类鉴定的一个重要依据..三材料无碳基础培养基;啤酒酵母斜面菌种;0.5%的葡萄糖、蔗糖、乳糖、半乳糖、麦芽糖溶液.. 四实验内容1、液体试管法1每管加无碳基础培养基5毫升;加被测试的某种碳源;并以葡萄糖作为对照..2接入啤酒酵母;<28℃>下培养1-2周;观察结果..2、生长图谱法1无碳培养基内加入2%的水洗琼脂;融化后冷却至45<-50℃>;到至平板..2接种新鲜培养的啤酒酵母于1毫升无菌生理盐水内;搅匀后倒入上述未凝平板内;摇匀待凝..3皿底用特种蜡笔写上被测试各种碳源的标记..4用不锈钢匙;按标记加入相应的米粒大小的碳源;并以葡萄糖作对照..5<28℃>下培养24-48小时后观察结果..3、结果观察1液体试管中是否形成醭;环岛等..2生长图谱中测量菌落大小;说明对碳源的利用情况..三、酵母菌氮源同化试验一实验目的了解酵母菌对各种氮源的利用情况..二实验原理酵母菌蛋白酶不分泌于菌体外;故酵母菌对复杂的蛋白质不能利用;酵母菌对一些较简单的含氮化合物的利用程度也不一致..三材料无氮基础培养基;啤酒酵母斜面菌;0.5%的蛋白胨、硫酸铵、硝酸铵和尿素溶液..四实验内容1、液体试管法方法同二;以被测试的氮源代替碳源;不加任何氮源作空白对照..2、生长图谱法方法同二;以被测试的氮源代替碳源;不加任何氮化物作空白对照..3、结果观察1液体试管中溶液pH值的变化..2生长图谱中测量形成菌落的大小;说明对各种氮源的利用情况..四、酵母菌生长曲线的测定试验一实验目的掌握单细胞微生物群体生长曲线的几种测定方法..二实验原理酵母菌属于单细胞真核型微生物;把一定数量的酵母菌接种于的液体培养基中;在适宜的温度下培养时;它的生长过程具有一定的规律性..在其生长过程中;定时取样测定酵母菌细胞数量;然后以酵母菌细胞数的对数作纵坐标;生长时间作横坐标;绘制所得的曲. . .线叫生长曲线..此生长曲线大致可划分为四个阶段：调整期、对数生长期、稳定期和衰退期..三材料酵母菌增殖培养基;苹果酒酵母斜面菌种..四实验内容1、将培养24小时左右的酵母斜面菌种;用无菌水洗下菌苔;以3000转/分的速率离心;得菌体..将酵母菌体沉淀物再用无菌水洗2-3次后;制备酵母菌悬液细胞数量约106左右/毫升;测数备用..2、取上述菌悬液1毫升于盛有清亮的酵母增殖培养液的试管中;<25℃>下培养;以此为起始时间;记录起始溶液的细胞数..并在培养1;2;4;6;8;9;10;11;12;14;16;20;22;24小时时分别取样检测酵母菌细胞数量..3、酵母菌细胞数量的检测方法①：活菌计数法..此法是将以上定时取出的被检样品作一系列稀释后;取一定量体积在0.1-1毫升之间的稀释液涂布于盛有固体培养基的培养皿内;在<25℃>下培养24小时左右;计算培养皿内菌落数就可测出溶液中活菌数量..方法②：血球计数板计数法..此法是先将以上定时取出的被检样品作一系列稀释后;使菌落数约为105-106个/毫升;取一滴稀释液滴于血球计数板内;在显微镜下直接计算细胞总数..4、绘制生长曲线以酵母菌细胞数的对数作为纵坐标;以培养时间作为横坐标;画出酵母菌的生长曲线..并分析酵母菌群体的生长规律..五、实验结果的观察及记录见表1－2六、思考题1. 为什么碘液反映无色糖化即可结束2. 煮沸强度对麦芽汁质量有什么影响. . ...........附1麦芽汁培养基的制备：麦芽汁制备俗称糖化..所谓糖化是指将麦芽和辅料中高分子贮藏物质如蛋白质、淀粉、半纤维素等机器分解中间产物通过麦芽中各种水解酶类或外加酶制剂作用降解为低分子物质并溶于水的过程..溶解于水的各种干物质称为浸出物;糖化后未经过滤的料液称为糖化醪;过滤后的清夜称为麦芽汁;麦芽汁中浸出物含量和原料干物质之比质量分数称为无水浸出率..方法一1取50g麦芽;在EBC标准磨上粉碎；2将已经粉碎好的麦芽粉放入已称重的糖化杯中;加200mL46℃水;不断搅拌并在46℃水浴中保温30min；3使醪液以1℃/ min速率升温到70℃..此时杯内加入100mL70℃水;保持恒温..45min后用玻璃棒取麦芽汁1滴;置于白滴板上;再加碘液1滴;混合后观察碘液颜色变化..直到碘液呈纯黄色不再变色;停止保温;糖化结束..5在10~15min内急剧冷却到室温；6冲洗搅玻璃棒拌器;擦干糖化杯外壁;加水使其内容物准确称量为450g；7用玻璃棒搅拌糖化杯;并注于漏斗中进行过滤;即获得麦芽汁..方法二称取市售麦芽粉或大麦经浸泡、发芽、干燥、粉碎的麦芽粉;按每Kg麦芽粉加入60—65℃温热水3.5—4kg..于55—60℃保温糖化3-4小时;用碘液检查;然后4层纱布过滤;过滤液中加鸡蛋白加水20 mL;调匀之生出丰富的泡沫为止;然后倒在糖化液中搅拌煮沸后用4层纱布过滤;即得到澄清、透明的麦芽汁;灭菌后方可备用..附2 酵母菌鉴定常用培养基1.酵母菌生孢培养基1麦氏琼脂葡萄糖 1gKCL 1.8g酵母浸膏 2.5g醋酸钠 8.2g琼脂 12g蒸馏水 1000ml115℃灭菌20min2胡萝卜培养基将葫萝卜切成的6~7cm的长条;下后上薄;装入培养管中;加水1ml;杀菌;即成..3Gorodkowa氏培养基消化蛋白 1g葡萄糖 0.1g氯化钠 0.5g琼脂 1.2g水 100ml2.12.5％豆芽汁培养基黄豆芽125g加1L;煮沸半小时;过滤后补足水至1L..115℃灭菌30min3.0.6％酵母浸汁加60g干酵母粉于1L水中;必要时加入一些蛋清以澄清滤液;121℃灭菌15min;趁热用双层滤纸过滤；115℃灭菌15min..4.同化碳源基础培养基NH42SO40.5%;KH2PO40.1％;MgSO4-7H2O0.05%;酵母膏0.02％;水洗琼脂2％..115℃灭菌15min同化碳源液体培养基NH42SO40.5%;KH2PO4;MgSO4-7H2O0.05%;CaCl2-2H2O0.01%.NaCl0.01%;酵母膏0.02％;糖或其它碳源0.5％..用蒸馏水配;培养基过滤后分装小试管;每管3 ml; 115℃灭菌20min..5. 同化氮源基础培养基葡萄糖2％;KH2PO40.1％;MgSO4-7H2O0.05%;酵母膏0.02％;水洗琼脂2％..用蒸馏水配;培养基过滤后分装大试管;每管20 ml; 115℃灭菌15min..附3酵母各属检索表一 1.生子囊孢子简称孢子;营养细胞芽殖二..2. 生子囊孢子;营养细胞裂殖或兼有芽殖三..3.不生子囊孢子;但生掷孢子营养细胞芽殖四4.不生子囊孢子及掷孢子五二营养细胞芽殖;生子囊孢子1.除芽生细胞外;有真菌丝……………………………………1拟内孢霉属Endomycopsis..2.无真菌丝1营养细胞多边芽殖A2营养细胞两极芽殖BA1.孢子圆卵形;光面;无凸线Ⅰ2. 孢子半圆形;光面;无凸线Ⅱ3. 孢子痣面Ⅲ4. 孢子有凸线Ⅳ5. 孢子长条形Ⅴ6.生袋状子囊;孢子多到16个;圆形………………………2油脂酵母属LipomycesⅠ1. 孢子1～4个;圆;卵形;光面;无凸线；营养细胞多边芽殖;圆形;卵形;长形..……………………………………………………………3酵母菌属Saccharomycesa孢子生成时;子囊有二营养细胞结合而成..………结合酵母亚属Zygosaccharomycesb孢子生成时;子囊生试探接合枝;但无二细胞结合现象…孢子圆酵母亚属Torulaspora c孢子生成时;子囊直接有营养细胞变成;无试探枝及结合现象……………酵母菌亚属Saccharomyces2.孢子1～4个;光面;无凸线；圆卵形;但营养细胞两极芽殖;为柠檬形………………………………………………4类酵母属SaccharomycodesⅡ孢子为半圆形或肾形1. 孢子为半圆形;多角形;或兼有圆形的…………………………5毕氏酵母属Pichiaa孢子生成时;子囊有二营养细胞结合而成..………接合毕氏酵母亚属Zygopichiab孢子生成时;子囊有营养细胞直接变成………………………毕氏酵母亚属Pichia2. 孢子为肾形………………………………………………………a孢子生成时;子囊有二营养细胞结合而成..……接合肾孢酵母亚属Zygofabosporab孢子生成时;子囊有营养细胞直接变成………………肾孢酵母亚属FabosporaⅢ孢子痣面1. 孢子痣面;无凸线；营养细胞多边芽殖……7德巴利酵母属Debaryomyces2. 孢子痣面;无凸线;子囊由接合子的芽子而成;营养细胞两极芽殖……8纳酵母属Nadsonia3.孢子痣面;圆或卵形;中腰有凸线；营养细胞多边芽殖;…………9施氏酵母属SchwanniomycesⅣ孢子有凸线1. .孢子痣面;圆或卵形;中腰有凸线…………………………………………施氏酵母属2. .孢子光面;圆或卵形;中腰有凸线;使整个形体如土星状………10魏氏酵母属Williopsisa孢子生成时;子囊有二营养细胞结合而成………………接合魏氏酵母亚属Zygowilliopsisb孢子生成时;子囊直接由营养细胞变成…………………魏氏酵母亚属Williopsis3. 孢子光面;凸线生在一边;使孢子形如草帽;营养细胞多边芽殖……11汉氏酵母属Hansenulaa孢子生成时;子囊有二营养细胞结合而成……接合汉氏酵母亚属Zygohansenulab孢子生成时;子囊直接由营养细胞直接生成………汉氏酵母亚属Hansenula4. 孢子光面;凸线生于一边;使孢子形如草帽;营养细胞两极芽殖;…………………………………………………………………12孢子柠檬形酵母属HanseniasporaⅤ孢子长条;梭形或鞭形..1. 一个子囊中只有一个孢子…………………………13单孢酵母属Monosporellu2. 孢子2～8个;长条带鞭毛;如鞭子……………………14鞭子酵母属Nematospora3.孢子无鞭毛………………………………………………15蝇肠酵母属Coccidiasous B营养细胞;两极芽殖;柠檬形..1. 孢子生成时;营养细胞直接变成子囊…………………4类酵母属Saccharomycodes2. 孢子上有凸线;使之成草帽形………………12孢子柠檬形酵母属Hanseniaspora3. 孢子痣面;子囊由接合子的芽子而成…………………………8纳酵母属Nadsonia三营养细胞裂殖;或兼及芽殖;生子囊孢子..1.由真菌丝Ⅱ2.假菌丝发达Ⅱ无真菌丝ⅠⅠ只有裂生子;无真菌丝..1. 孢子圆形卵形…………………………………16裂殖酵母属Schizosaccharamyces2. 孢子肾形…………………………………………………………17北港酵母属Ⅱ有真菌丝1. 有真菌丝;只裂殖生裂生子……………………………………18内孢霉endomyces2.有真菌丝;芽殖兼及裂殖………………………………1拟内孢霉属Endomycopsis.. 四生掷孢子1. 掷孢子肾形;不对称;菌落红色或红………………19掷孢酵母属Sporobolomyces2. 掷孢子圆形或卵圆形;菌落无色或浅黄色…………………20布尔酵母属Bullera.. 五不生子囊孢子或掷孢子1. 芽殖细胞及假菌丝外生真菌丝且分裂生裂生子……21芽裂酵母属Trichosporon2. 芽殖细胞;假菌丝及真菌丝可能有;但无裂生子Ⅰ..Ⅰ1. 普通假菌丝甚发达;真菌丝可能有………………………22假丝酵母属Candida2. 无真菌丝;假菌丝原始型或无Ⅱ..Ⅱ1. 生类胡萝卜素………………………………23红酵母属Rhodotorrula2. 无类胡萝卜素Ⅲ..Ⅲ1. 两极芽殖;普通细胞常为柠檬形…………………24无孢柠檬形酵母属Kloeckera2. 三角芽殖;营养细胞常为三角形………………………25三角酵母属Trigonopsis3.营养细胞瓶形;芽殖;子母细胞基部甚宽;生横膜……26瓶形酵母属Pityrosporum4. 营养细胞一端为尖穹窿状;含糖培养基中生大量的酸…………27瓶形酵母属Brettanomyces5. 营养细胞圆形或卵圆形Ⅳ..Ⅳ1. 生荚膜及淀粉样物质;不发酵………………………28隐球酵母属Cryptococcus..2. 无淀粉样………………………………………………29圆酵母属Torulopsis..酵母菌亚属各种检索表Ⅰ1. 只发酵葡萄糖包括果糖及甘露糖及半乳糖：a细胞圆形;子囊孢子一个;…………………………………单孢子酵母S.unisporus b细胞圆形;子囊孢子2或多个………………………………大连酵母 S.dairensc细胞卵形………………………………………………球形酵母S.globosus..Ⅱ1. 只发酵葡萄糖、半乳糖及蔗糖………………………………S.ribis2. 发酵糖类不同Ⅲ..Ⅲ1. 只发酵葡萄糖、半乳糖、蔗糖及棉子糖：。
微生物实验中的接种分离和培养操作步骤
微生物实验中的接种、分离和培养操作步骤微生物实验中的接种、分离和培养操作步骤一、目的要求1、掌握各种分离、接种方法。
2、掌握无菌操作基本环节。
二、实验说明微生物在自然界中呈混杂状态存在，要获得所需菌种，必需从中把它们分离出来。
在保存菌种时不慎受到到污染也需予以分纯。
微生物分离和纯化的方法很多，但基本原理却是相似的，即将待分离的样品进行一定的稀释，并使微生物的细胞（或孢子）尽量以分散状态存在，然后使其长成一个个纯种单菌落。
然而上述工作又离不开接种，即将一种微生物移到另一灭过菌的培养基上的过程。
三、实验材料1、恒温培养箱。
2、接种环、玻璃棒、吸管、酒精灯。
3、培养基（上次实验配制的）。
4、大肠杆菌、枯草杆菌、金黄色葡萄球菌、酵母菌。
四、方法步骤（一）接种的操作1、斜面接种（接金黄葡萄球菌）（1）操作前，先用75%酒精擦手，待酒精挥发后点燃酒精灯。
（2）将菌种管和斜面握在左手大姆指和其它四指之间，使斜面和有菌种的一面向上，并处于水平位置。
（3）先将菌种和斜面的棉塞旋转一下，以便接种时便于拔出。
（4）左手拿接种环（如握钢笔一样），以火焰上先将环端烧红灭菌，然后将有可能伸入试管其余部位也过火灭菌。
（5）用右手的无名指、小指和手掌将菌种管和待接斜面试管的棉花塞或试管帽同时拔出，然后让试管口缓缓过火灭菌（切勿烧过烫）。
（6）将灼烧过的接种环伸入菌种管内，接种环在试管内壁或未长菌苔的培养基上接触一下，让其充分冷却，然后轻轻刮取少许菌苔，再从菌种管内抽出接种环。
（7）迅速将沾有菌种的接种环伸入另一支待接斜面试管。
从斜面底部向上作“Z”形来回密集划线。
有时也可用接种针仅在培养基的中央拉一条线来作斜面接种，以便观察菌种的生长特点。
（7）迅速将沾有菌种的接种环伸入另一支待接斜面试管。
从斜面底部向上作“Z”形来回密集划线。
有时也可用接种针仅在培养基的中央拉一条线来作斜面接种，以便观察菌种的生长特点。
（8）接种完毕后抽出接种环灼烧管口，塞上棉塞。
《微生物实验》课件
实验三 微生物的纯种分离法 思考题 在你所实验的三种培养基平板上长出的菌落属于哪个类群？简述它们的菌落形态特征。 稀释分离时，为什么要将融化的琼脂培养基冷却到45～50℃左右才能倾入装有菌液的培养皿内？ 划线分离时，为什么每次都要将接种环上多余的菌体烧掉？划线为何不能重叠？ 培养时为什么要将培养皿倒置培养？
实验二 环境中微生物的监测与菌落识别 实验器材
实验室环境微生物、大肠杆菌、酿酒酵母、放线菌及霉菌。
菌种：
马铃薯固体培养基、牛肉膏蛋白胨固体培养基、高氏一号固体培养基
培养基：
无菌培养皿、无菌棉签、火柴、超净工作台及恒温培养箱。
其他：
斜面接种
实验二 环境中微生物的监测与菌落识别 实验方法
实验二 环境中微生物的监测与菌落识别 实验方法 液体接种 斜面 液体培养基 接种环 将接种环送入液体培养基中时使环在液体与管壁接触的地方轻轻磨擦，使菌体分散，然后塞上棉塞，再轻轻摇动均匀，即可培养。如果菌种是培养在液体培养基中时，一般用移液管或滴管接种。
中心实验室提供
微生物学实验教学课件
汇报人姓名
目 录
实验一 培养基的配置、分装和灭菌 实验二 环境中微生物的检测和菌落识别 实验三 微生物的纯种分离 实验四 细菌染色法和光学显微镜的使用 实验五 微生物的间接计数法——水中细菌总数的测定 实验六 放线菌和真菌的培养和形态观察 实验七 微生物显微镜直接计数法 实验八 细菌芽孢染色法 实验九 微生物生长量的测定和生长曲线的绘制 实验十 物理、化学因素对微生物生长的影响 实验十一 细菌鉴定中的生理生化反应 实验十二 食用菌菌种的分离和制种技术 实验十三 环境中细菌分离鉴定综合实验
实验一 培养基的配ຫໍສະໝຸດ 、分装与灭菌 实验方法实验一 培养基的配置、分装与灭菌 实验方法
实验1,大肠杆菌的培养和分离
实验1,大肠杆菌的培养和分离篇一：实验1 大肠杆菌的培养和分离实验教学提纲实验1 大肠杆菌的培养和分离教学提纲实验目的1. 进行大肠杆菌的扩增，利用液体培养基进行细菌培养的操作。
2. 进行大肠杆菌的分离，用固体培养基进行细菌的划线培养。
3. 说明大肠杆菌的培养条件和操作要求的原理。
实验材料1. 配制LB液体培养基，蛋白胨0.5g，酵母提取液0.25g，氯化钠0.5g，加水50mL溶解。
2. 配制LB固体培养基，蛋白胨0.5g，酵母提取液0.25g，氯化钠0.5g，琼脂1g，加水50mL溶解（配制LB固体培养基是用来倒平板和倒试管斜面）。
实验步骤1. 培养基灭菌。
在两个150mL的三角瓶中分别装入50mL LB液体培养基和50mL LB 固体培养基（刚配好，尚未凝固），加上封口膜(一种塑料薄膜，中间有小孔的滤膜。
既可以通气，又不使细菌进入。
)。
将培养皿用牛皮纸包好，放入高压灭菌锅中，1kg压力灭菌15min（有压力时开始计时）。
同时将需要灭菌使用的培养皿、试管、三角瓶等和所用器械（接种环、镊子等）等一块灭菌。
2. 倒平板，倒斜面。
灭菌后。
待高压锅压力与大气压相同时，打开锅盖，将有培养基的三角瓶、试管、培养皿等放在灭菌后的超净工作台上。
超净工作台操作：打超净工作台的紫外灯（注意：打开紫外灯后人必须离开），持续30min，关闭紫外灯，打开过滤风和白炽灯。
将有培养基的三角瓶和培养皿放在灭菌后的超净工作台上后，点燃酒精灯，用镊子夹出酒精棉球擦拭桌面，并用酒精棉球擦手。
待固体培养基冷却到60℃时（手放上还有些热的时候），在酒精灯火焰旁，以右手无名指及小指夹持含有固体培养基的三角瓶的封口膜，右手其他三个手指拿着三角瓶；左手拿着培养皿，并打开上盖的一边，将三角瓶的培养基约10～20mL倒入1 个培养皿中。
倒入后立即置于水平位置上，轻轻摇晃，使培养基铺满培养皿底，待凝，使之形成平面。
倒斜面（试管内空白斜面），用玻璃漏斗倒入试管内，每试管2mL。