细菌药敏试验及其耐药表型检测
细菌药物敏感试验实验报告
细菌药物敏感试验实验报告药物敏感性试验的基本原则1药敏试验检测获得性耐药，不必测试天然耐药：天然耐药是细菌菌种固有的特征，耐药基因一般位于染色体，可以长期稳定遗传，表现为对某类或某种药物的天然耐药。
天然耐药信息一般由基础医学和临床文献提供。
部分天然耐药，体外试验条件下可能无法检测出来，因而导致假敏感，如果报告将成为极重要错误，严重误导临床。
常见菌种对各类药物的天然耐药见文献。
实验室全体人员应熟知这些信息，可将其发给临床学习和参考。
2药敏试验测试的前提条件：实验室应具备相应检测的人员能力、客观条件、结果解释依据。
标本处理、菌株分离鉴定、药敏试验操作等环节规范、标准、结果可信；具备对结果的解释能力，能够提供临床会诊服务。
临床常规工作，分离株(可能)有临床意义而非定植或污染时，才可进行药敏试验。
错误示例：来自痰标本的溶血葡萄球菌，未作标本质量评估和半定量培养，进行药敏试验；来自粪便标本肠球菌属进行药敏试验等。
3测试结果应准确：实验室应遵照CLSI文件或相关规范建立本医院药敏试验的质量管理体系。
质控菌株、频率、质控范围符合相关要求；定期参加实验室室间比对项目。
建议保留菌株，以便复核。
具体的专业要求1标本类型临床微生物学的一大特点是标本种类繁多，而不同药物在这些部位的分布不同。
标本的规范采集、质量保证、立即运送和有效保藏有赖于临床、实验室以及相关各方的密切合作。
在规范临床送检的前提下，实验室进行药敏试验和报告药敏结果时，应首先考虑标本的特殊性。
实际工作中需重点考虑的标本如下。
1．脑脊髓液：正常和疾病状态不能穿透血脑屏障的药物，常规不应报告。
报告审核时，对于分离自脑脊髓液的菌，下列药物不能报告：仅有口服剂型的抗菌药物、一、二代头孢菌素(除外静脉用头孢呋辛)、头霉素类、克林霉素、大环内酯类、四环素类和喹诺酮类。
2．尿液：有些药物如呋喃妥因，仅限于测试和报告尿分离株，其他标本的分离株，不应报告此药；尿道标本常规不应报告氯霉素。
细菌耐药性检测
第七章-细菌耐药性检测一教学大纲要求1.临床常用抗菌药物2.抗菌药物敏感试验3.细菌的耐药性和产生机制4.细菌的耐药性检查5.厌氧菌、真菌及分支杆菌体外药敏试验二教材内容精要㈠、抗菌药物1. 青霉素类青霉素类抗生素是具有内酰胺环的一类抗生素。
作用机制为抑制细菌细胞壁的合成。
种类包括青霉素G、青霉素V、苯唑西林、氯唑西林、双氯西林、氟氯西林、氨苄西林、阿莫西林、羧苄西林、替卡西林、阿洛西林、美洛西林、哌拉西林、美西林等。
2. 头孢菌素类第一代头孢菌素类对革兰阳性细菌（包括青霉素敏感或耐受的葡萄球菌）的抗菌活性较第二、三代强。
常用品种包括头孢唑啉、头孢拉定、头孢氨苄、头孢羟氨苄、头孢硫咪等。
第二代头孢菌素对革兰阳性细菌的活性与第一代相似或略差，对多数革兰阴性细菌的抗菌活性较强，但对铜绿假单胞菌无抗菌活性。
对β-内酰胺酶较稳定，主要包括头孢克洛、头孢夫辛、头孢夫辛酯、头孢孟多等。
第三代头孢菌素对革兰阳性菌的抗菌活性不如第一、二代，对革兰阴性细菌有较强的抗菌活性。
对第一、二代头孢菌素耐药菌也较敏感。
但是其抗革兰阳性细菌的活性仍然较弱。
对β-内酰胺酶有较强的稳定，组织穿透力较弱，半衰期较长。
主要包括头孢噻肟、头孢曲松、头孢他啶、头孢哌酮、头孢妥伦匹酯、头孢唑肟、头孢地嗪、头孢他美酯、头孢美唑、头孢泊肟酯、头孢克肟等。
第四代头孢菌素与第三代相比，抗菌谱更广泛。
对革兰阳性球菌的抗菌活性增强，对β-内酰胺酶更稳定。
因此，对革兰阴性细菌的抗菌活性仍然较强。
主要包括头孢吡肟、头孢匹罗等。
3. 碳青霉烯类碳青霉烯类为一组新型β-内酰胺类抗生素，超广谱高效能抗菌作用，对革兰阴性细菌、阴性细菌、需氧菌、厌氧菌均有很强的抗菌活性，对β-内酰胺酶稳定。
有亚胺培南、美罗培南、帕尼培南等。
4.头霉素类cephamycins包括头孢西丁、头孢美唑、头孢替坦、头孢米诺等。
抗菌谱广，对革兰阴性菌、阳性菌、厌氧菌及需氧菌均有较强的活性，对质粒或染色体介导的β-内酰胺酶具有高度稳定性。
药敏试验耐药实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的本实验旨在通过体外药敏试验，测定特定细菌对多种抗生素的敏感性，评估细菌的耐药性，为临床合理使用抗生素提供科学依据。
二、实验材料1. 实验菌株：金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、大肠杆菌（Escherichia coli）、肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumoniae）等。
2. 抗生素：青霉素、头孢噻肟、氨苄西林、红霉素、氯霉素、四环素、万古霉素、利奈唑胺等。
3. 培养基：M-H琼脂培养基、营养肉汤等。
4. 仪器：恒温培养箱、移液器、微量滴定板、光学显微镜等。
三、实验方法1. 菌株培养：将实验菌株接种于M-H琼脂培养基，37℃培养18-24小时，获得纯菌落。
2. 药敏试验：将纯菌落接种于营养肉汤，37℃培养至对数生长期。
按照CLSI标准，使用微量滴定板进行抗生素稀释法药敏试验。
3. 结果观察与记录：观察细菌在不同抗生素浓度下的生长情况，记录抑菌圈直径，并计算最小抑菌浓度（MIC）。
4. 耐药性分析：根据CLSI标准，判断细菌对每种抗生素的敏感性，分析耐药性。
四、实验结果1. 金黄色葡萄球菌对青霉素、头孢噻肟、氨苄西林、红霉素、氯霉素、四环素、万古霉素、利奈唑胺的敏感性如下：- 青霉素：耐药- 头孢噻肟：耐药- 氨苄西林：耐药- 红霉素：耐药- 氯霉素：耐药- 四环素：耐药- 万古霉素：敏感- 利奈唑胺：敏感2. 大肠杆菌对青霉素、头孢噻肟、氨苄西林、红霉素、氯霉素、四环素、万古霉素、利奈唑胺的敏感性如下：- 青霉素：耐药- 头孢噻肟：耐药- 氨苄西林：耐药- 红霉素：耐药- 氯霉素：敏感- 四环素：耐药- 万古霉素：敏感- 利奈唑胺：敏感3. 肺炎克雷伯菌对青霉素、头孢噻肟、氨苄西林、红霉素、氯霉素、四环素、万古霉素、利奈唑胺的敏感性如下：- 青霉素：耐药- 头孢噻肟：耐药- 氨苄西林：耐药- 红霉素：耐药- 氯霉素：耐药- 四环素：耐药- 万古霉素：耐药- 利奈唑胺：耐药五、结论1. 金黄色葡萄球菌对青霉素、头孢噻肟、氨苄西林、红霉素、氯霉素、四环素等抗生素耐药，仅对万古霉素、利奈唑胺敏感。
细菌耐药性检测方法
细菌耐药性检测方法1、细菌耐药表型检测：判断细菌对抗菌药物的耐药性可根据NCCLS标准，通过测量纸片扩散法、肉汤稀释法和E试验的抑菌圈直径、MIC值和IC值获得。
也可通过以下方法进行检测：（1）耐药筛选试验：以单一药物的单一浓度检测细菌的耐药性被称为耐药筛选试验，临床上常用于筛选耐甲氧西林葡萄球菌、万古霉素中介的葡萄球菌、耐万古霉素肠球菌及氨基糖苷类高水平耐药的肠球菌等。
（2）折点敏感试验：仅用特定的抗菌药物浓度（敏感、中介或耐药折点MIC），而不使用测定MIC时所用的系列对倍稀释抗生素浓度测试细菌对抗菌药物的敏感性，称为折点敏感试验。
（3）双纸片协同试验：双纸片协同试验是主要用于筛选产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）革兰阴性杆菌的纸片琼脂扩散试验。
若指示药敏纸片在朝向阿莫西林/克拉维酸方向有抑菌圈扩大现象（协同），说明测试菌产生超广谱β-内酰胺酶（4）药敏试验的仪器化和自动化：全自动细菌鉴定及药敏分析仪如：Vitek-2、BD-Pheonix、Microscan等运用折点敏感试验的原理可半定量测定抗菌药物的MIC值。
2．β-内酰胺酶检测：主要有碘淀粉测定法（iodometric test）和头孢硝噻吩纸片法（nitrocefin test）。
临床常用头孢硝噻吩纸片法，β-内酰胺酶试验可快速检测流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌、卡他莫拉菌和肠球菌对青霉素的耐药性。
如β-内酰胺酶阳性，表示上述细菌对青霉素、氨苄西林、阿莫西林耐药；表示葡萄球菌和肠球菌对青霉素（包括氨基、羧基和脲基青霉素）耐药。
3．耐药基因检测：临床可检测的耐药基因主要有：葡萄球菌与甲氧西林耐药有关的MecA 基因,大肠埃希菌与β-内酰胺类耐药有关的blaTEM、blaSHV、blaOXA基因，肠球菌与万古霉素耐药有关的vanA、vanB、vanC、vanD基因。
检测抗菌药物耐药基因的方法主要有：PCR扩增、PCR-RFLP分析、PCR-SSCP 分析、PCR-线性探针分析、生物芯片技术、自动DNA 测序4．特殊耐药菌检测（1）耐甲氧西林葡萄球菌检测：对 1цg苯唑西林纸片的抑菌圈直径≤10㎜，或其MIC≥4цg/ml的金黄色葡萄球菌和对1цg苯唑西林纸片的抑菌圈直径≤17㎜，或MIC≥0.5цg/ml 的凝固酶阴性葡萄球菌被称为耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）。
药敏结果解读及细菌耐药类型
线
性
模
飞行管
式
m m
m
ma
a m
m
a m
ma
a
a am m
m
m
m
9~18.150k~V20 kV
e+
激光
e+
e+
样品靶
10~20 kV
4.1.2 药敏报告
11
01 为什么要监测细菌耐药类型？
多重耐药感染已成为目前医疗过程的棘手问题，为了加强 对耐药的监控和预警，合理使用抗生素。
02
为什么有时药敏报告与临床不符合？
不产β内酰胺酶肠球菌 氨苄西林、阿莫西林、哌拉西林及其与酶抑制剂复合药 物敏感和耐药
3.阴性结果解读：
培养阴性真是无致病菌么？
无致病菌
1.非感染性疾病 2.感染已经治愈
有致病菌而未检出
1.抗菌药物
2.标本留取采集问题
3.特殊病原菌 4.检验技术人员水平
4.2重点监测的耐药类型
优先1---危急
碳青霉类耐药鲍曼不动杆菌 碳青霉烯类耐药铜绿假单胞菌 碳青霉烯类耐药、三代头孢菌素耐药的肠杆菌科
优先2级---高度
万古霉素耐药屎肠球菌 甲氧西林耐药、万古霉素中介与耐药的金黄色葡萄球菌 克拉霉素耐药幽门螺杆菌 氟喹诺酮类耐药弯曲菌 氟喹诺酮类耐药沙门菌 三代头孢、氟喹诺酮类耐药的淋病奈瑟菌
17
4.2.4重点监测的耐药类型——耐高水平氨基糖苷类
使用纸片法进行高浓度链霉素测试，对于 抑菌圈直径在7-9mm属于中介，需要使用 肉汤稀释法或琼稀释法进行复核
由于肠球菌对氨基苷类、头孢菌素类、林可酰类和磺胺类药物天然耐药、肠球菌感染时建议 使用氨基糖苷类与青霉素类药物联合使用，具有协同作用，但当肠球菌对庆大霉或链霉素高水平 耐药时，提示该两类药不具有协同作用，联合用药可能无药，其机制肠球菌可能是产生了氨基糖 苷类药物的钝化酶，如乙酰基转移酶、腺苷转移酶、磷酸转移酶。
细菌药敏试验
如β溶血菌对万古霉素。
分离自正常寄生部位的条件致病菌和非致病菌，不能说明其与污染关系，不需要进行药敏试验。 体外药敏试验的选药原则
5.自标本中分离出多种细菌，不能确定为致病菌的 最低抑菌浓度（MIC)：指抗菌药物能够抑制微生物生长所需要的最低浓度。
2.从同一患者体中同部位连续分离到相同的菌株， 为检测它们是否已经发展为耐药，应重新进行 药敏试验。尤其是在第四代头孢菌素治疗肠杆 菌属、枸橼酸杆菌属和沙雷氏菌属，所有抗菌 药物治疗铜绿假单胞属，喹诺酮类治疗葡萄球 菌属3-4天后，起初对某种抗菌药物敏感的菌株 易发展位耐药。
3.进行细菌耐药性调查和抗菌药物疗效时 需要进行药敏试验。
示在药物生理部位具有临床效力（如 尿液中的喹诺酮类和β-内酰胺类）。 另外中介还能作为缓冲区，以防止微 小的，未受控制的技术因素导致较大 的错误结果，特别是针对那些药物毒 性范围靠近疗效范围的药物。
药敏试验的一般原则
1.药敏试验只在被认为是引起感染的细菌纯培养 物上进行，当从合格的临床标本中分离出任何 感染的可疑病原菌，又不能从该菌的种属特征 可靠地推测其对抗菌药物的敏感性时，则需要 进行药敏试验。
3.所选药物具有代表性：实验室不 需要也不可能对每种抗菌药物均进 行测试。原则上在各类抗菌药物中 选择一种代表性药物作测试，可反 映一类药物的抗菌特性。如大环内 脂类选红霉素，喹诺酮类选环丙沙 星或氧氟沙星，头孢菌素选1、2、 3代头孢菌素的代表药物，同时还 应考虑价格因素。
试验结果的评价与报告
细菌药敏试验
优选细菌药敏试验
一、药敏试验概念
1.抗菌药物敏感试验：简称药敏实验，是指在体 外测定抗菌药物抑制或杀灭微生物的能力。 2.最低抑菌浓度（MIC)：指抗菌药物能够抑制 微生物生长所需要的最低浓度。用Mg/ml表示。 3：药敏试验的结果解释标准（即折点）：可分 为 临床和实验室标准化委员会（CLSI）折点与 食品与药品管理局（FDA）折点，我们目前采用 的是CLSI折点。
细菌耐药表型检测方法剖析
金属β-内酰胺酶的表型检测方法
2.亚胺培南+EDTA法(IMP+EDTA) （1）将待测菌株按常规药敏纸片K-B法操作均匀涂布于M-H 平板上。 （2）在M-H平板上贴一片亚胺培南(10ug/片) 纸片，在距亚 胺培南纸片中心1.5cm处贴无菌空白纸片一片，将0.5M EDTA 10ul 均匀浸注于空白纸片上，35℃孵育18-24h。 （3）结果观察：若两片纸片抑菌圈有协同作用，则为阳性， 即产金属β-内酰胺酶。
五、肠杆菌科碳青霉烯霉筛选和确证 （2009年CLSI:M100-S19.APPB.124）
1.如果菌株对碳青霉烯类药物表现为“I”或“R”没必 要再去检验该酶，（医生通常不会选用“I”或“R” 的药物），但主要以感染控制为目的检验该酶。 2.什么是碳青霉烯酶？ 一类能水解或灭活碳青霉烯类抗生素的酶，如： KPC（肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶）. • 碳青霉烯类抗生素 －Doripenem（目前无CLSI折点） －厄他培南 －亚胺培南 －美洛培南
（3）双纸片协同确认试验： 头孢他啶（ 30μg/ 片）与头孢他啶（ 30μg ） / 克位维 酸（10μg） 头孢噻肟（ 30μg/ 片）与头孢噻肟（ 30μg ） / 克拉维 酸（10μg）两纸片抑菌圈相比≥5mm即为ESBLS。 （ 4） E-test法（浓度梯度法）：由瑞典 AB Biodisk 公司研究生产，广洲贝肯公司经销。试条中的三代 头孢菌素或氨曲南的 MIC≥2μg/ml 即可疑为 ESBLS 。
附：鉴定卡他球菌方法
1.40%KNO3浸湿滤纸条，贴于羊(马)血平板上，周 围点种待测菌，如果菌落周围出现大的绿色环 ， 即为阳性。 2.丁酸酯酶检测法：购买丁酸酯酶检测纸片(梅里埃 公司生产)，涂细菌于纸片上，如几分钟内出现绿 色为阳性。
细菌药敏试验报告
细菌药敏试验报告试验目的：本次试验旨在了解不同细菌对不同抗生素的敏感性情况，为制定治疗方案提供参考。
试验原理：通过对不同品种的细菌进行耐药性测试，可以确定其对各类抗生素的敏感性情况。
常用的药敏试验方法包括扩散法、碟扩散法、荧光染色法等。
本次试验采用了碟扩散法，将抗生素置于小型圆形纸片上，贴于培养基表面，观察形成的菌落周围的抑制圆来判断细菌对该抗生素的敏感性情况。
试验过程：1.准备工作：制备不同浓度的抗生素和培养基。
2.取样：将不同类型的细菌分别提取复制，并用增殖培养基培养。
3.打药敏试验：将抗生素置于小型圆形纸片上，贴于培养基表面。
4.观察结果：观察形成的菌落周围的抑制圆来判断该细菌对该抗生素的敏感性。
试验结果：根据本次试验结果，不同类型的细菌对不同抗生素的敏感性情况如下：菌种青霉素红霉素头孢菌素氯霉素大环内酯金黄色葡萄球菌敏感中度敏感抗性抗性中度敏感肺炎链球菌敏感中度敏感中度敏感抗性中度敏感大肠杆菌中度敏感抗性抗性敏感中度敏感沙门氏菌中度敏感抗性抗性敏感中度敏感结论：根据上述结果，我们可以得出以下结论：1.在治疗金黄色葡萄球菌时，不推荐使用头孢菌素或氯霉素，应优先考虑青霉素或红霉素。
2.肺炎链球菌对头孢菌素和氯霉素的反应不如青霉素，建议优先使用青霉素。
3.大肠杆菌和沙门氏菌对许多常见抗生素耐药，建议在治疗时注意综合考虑，选择适当的治疗方案。
提示：为保证试验结果准确可靠，建议在试验过程中注意以下事项：1.使用无菌器皿和工具，以免污染培养基和细菌样本。
2.制备完善、严格控制抗生素的浓度，避免因药效差致使结果不准确。
3.在选择抗生素和制定治疗方案时，应根据不同的病原菌和临床情况综合考虑。
不常见药敏结果阅读(完整版)
与庆大霉素相比，阿米卡星对肠杆菌科细菌的抗菌活性要好 一些。 某些肠杆菌科细菌能产生氨基糖苷类乙酰转移酶AAC(6’)-I， 而这种耐药机制就会导致出现庆大霉素“敏感”、阿米卡星“耐 药”结果。 AAC(6’)-I 在沙雷菌属细菌中比较常见
但在其他的肠杆菌科细菌中则比较罕见。
如在除沙雷菌属以外的其他肠杆菌科细菌中出现庆大霉素 “敏感”、阿米卡星“耐药”结果，必须对细菌进行重新鉴定。
细菌根据不同环境选择生存状态
毒力基因 或 耐药基因
细菌在获得耐药基因的同时，丢失毒力基因的 DNA片段
第5问：阿米卡星对大肠埃希菌的抑菌现象
J. Exp. Med., Jul 1948; 88: 99 - 131
药物：青霉素G 细菌：B群β溶血性链球菌
The Journal of Infectious Diseases 2005; 191:2118–20
产ESBL菌株的检测
含酶抑制剂复合制剂与相应单药抑菌圈直径相差≥5mm， 即判断该菌为产ESBLs菌株
头孢他啶：0.5µg/mL
= 2.63
头孢他啶/克拉维酸：0.19µg/mL
第17问：该菌一定为产ESBL菌株？
头孢他啶：＞32µg/mL
= ＞168
头孢他啶/克拉维酸：0.19µg/mL
MIC比值 假阳性结果
性导致了这些肺克对氨苄西林等抗生素重获敏感。
第8问：金黄色葡萄球菌D-试验
D试验临床意义
葡萄球菌中的erm基因编码一种改变了的核糖体结构(23S rRNA 的 甲基化)可导致对大环内酯类（如红霉素）和林可霉素类（如克林
霉素）耐药。 erm 基因需诱导才能使克林霉素耐药性表达，红霉素具诱导作用。 若出现红霉素耐药，克林霉素敏感，而D试验阳性。如果不进行D-
细菌对抗菌药物的敏感试验
PPT文档演模板
细菌对抗菌药物的敏感试验
PPT文档演模板
细菌对抗菌药物的敏感试验
l 2、抑制蛋白质的转录或合成
l 由于真核生物和原核生物核糖体的差异， 真核生物的核糖体主要是80 S，由60 S和 40 S两个亚基组成，而原核生物的核糖体 是70 S，主要由30 S和50 S两个亚基组成。
PPT文档演模板
细菌对抗菌药物的敏感试验
l 2 、靶位的改变
l 由于抗菌药作用的靶位(如核糖体和核蛋 白)发生突变或被细菌产生的某种酶修饰 而使抗菌药物无法发挥作用，以及抗菌药 的作用靶位(如青霉素结合蛋白和DNA回 旋酶)结构发生改变而使之与抗生素的亲 和力下降，这种耐药机制在细菌耐药中普 遍存在。
PPT文档演模板
细菌对抗菌药物的敏感试验
l 结果观察：含最小药物量仍呈明显不混 浊的一管所含的药物浓度即为该抗菌药 物 对 试 验 菌 株 的 最 小 抑 菌 浓 度 （ MIC ） 。
PPT文档演模板
细菌对抗菌药物的敏感试验
2、血药浓度（血清中抗菌药 物的浓度）
l 在使用各类抗菌药物时，常常会遇到 的一个重要问题，就是血药浓度。例如： 口服抗菌药物总是经肠道逐渐吸收入血 的。因此，血液中的药物浓度是从无到 有随时间的延长逐渐增高的。即使静脉 注射抗菌药物，因存在着首过效应（第 一关卡效应）和肾脏的排泄作用，血药 浓度也是随着注射的次数而逐渐增高的。
PPT文档演模板
细菌对抗菌药物的敏感试验
l 三、细菌耐药性产生的机理
l 细菌的耐药性机理主要有生化机理和基因 机理两个方面：
l (一）、生化机理：
l 1、细菌产生破坏药物结构的酶