真菌菌种的分离与鉴定
微生物菌种的分离纯化、培养、鉴定和保藏实验方案设计 (1)
• 4.2.6.2 液体石腊保藏法： 此法可用不分解石腊的菌种保藏。保存时间 是半年至一年。放线菌；霉菌和产芽孢菌可保藏 二年。液体石腊可防止培养基水分的蒸发，而引 起的菌种死亡。同时可阻止氧气进入，防止好氧 菌的生长。从而延长菌种保藏的时间。但需注意 的是试管必须直立放置，并且不便携带。操作过 程如下： a 液体石腊的灭菌：将液体石腊装入锥形瓶 中，量不超出锥形瓶体积的1/3，塞上棉塞，包 扎好后，进行高压蒸汽灭菌二次（120℃30分 钟）。再在110～120℃干燥箱中蒸发掉蒸汽灭菌 时带入的水分。此时石腊透明清亮状。经检验确 定无菌后备用。
4.2.4.2 平板划线法：经培养后挑取单个菌落， 接种环以无菌操作沾取少许菌落，在无菌伊 红美兰琼脂培养基平板表面进行连续划线， 微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减 少，并逐步分散开来，如果划线适宜的话， 微生物能一一分散。在37℃经培养24小时后， 可在平板表面得到单菌落。（有时这种单菌 落并非都由单个细胞繁殖而来的，故必须反 复分离多次才可得到纯种。）
光泽，或者呈淡紫红色，仅中心颜色较深，选取符
合上述特征的单个菌落进行革兰氏染色，镜检（油
镜）观察是否为无芽孢的革兰氏阴性短杆菌。
• 4.2.5.2 培养
• a 将菌落转入装有玻璃珠的灭菌锥形瓶中 调节酸碱度为7，充分摇匀备用。 b 液体发酵：取处理好的样品液1mL加入灭 菌的乳糖胆盐液体培养基中。摇匀后置培养
4 实验方法和步骤
• 4.1 实验安排
• 4.1.1 实验准备
• 4.1.2 采样、恒温培养富集及初筛；
• 4.1.3 观察产气情况及稀释、倒培养基、划线、涂
布、倒置培养；
• 4.1.4 鉴定、接种； • 4.1.5 菌种保藏。
菌种质量鉴定
菌种质量鉴定
菌种质量鉴定是指对于已分离出来的菌株进行鉴定，以确认它们是否符合特定的分类标准。
这个过程涉及到对于菌株的生物学特征、形态特征、生理生化特征等方面的研究、分析和比较，以确定其分类位置和身份信息。
菌种质量鉴定是微生物学研究中的一个重要环节，它不仅有助于研究人员准确地了解某种菌株的特性和功能，还能够为相关行业提供有价值的参考和支持。
同时，菌种质量鉴定也是保证菌株资源共享和利用的基础，能够确保菌株的准确标识和分类，防止错误使用和混淆。
因此，菌种质量鉴定对于微生物学研究和应用具有十分重要的意义。
- 1 -。
实验六 土壤中真菌纯化、分离和培养
土壤稀释液的制备和稀释液的取样
2、分离方法 采用稀释平板分离法。又可分为两种 方法。
混菌法和涂抹法。
混 菌 法
涂 抹 法
3、培养
将上述接种土壤悬液的平板 倒置于28℃培养3-5d。
4、挑菌纯化 5、计数
6、菌种保存
将分离到的真菌转接到PDA斜面上培 养，待长好后，置于冰籍中保存，必要时 进行深入研究。
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实验六
土壤中真菌分离、纯化和培养
一、目的要求
掌握从土壤中初步分离培养真菌的方法， 从而获得真菌纯培养技能；了解基本接 种技术。
二、实验原理
土壤是微生物生活的大本营，是寻找和发 现有重要应用潜力的微生物的主要菌源。 不同土样中各类微生物数量不同，一般土 壤中细菌数量最多；其次为放线菌和霉菌。 本次实验从土壤中分离真菌。
三、仪器和材料
样品：新鲜土壤 培养基：加有2ml链霉素的PDA培养基。 无菌水：装有9mL无菌水的试管4支。 其它：无菌培养皿4皿、无菌吸管、酒精 灯、培养箱等 。
四、真菌纯种分离的操作方法
1、土壤稀释液的制备
用“稀释平板计数法”中的方法 进行，将土样稀释至10－5。
将1瓶土壤菌液（称取土样10g放入盛90 mL无菌水）和4管9mL的无菌水排列好， 按10-1、10-2、10-3、10-4及10-5依次编号。 在无菌操作条件下，用lmL无菌移液管吸 取lmL10-1浓度的菌液于一管9mL无菌水 中，将移液管吹洗三次，摇匀即为10-2浓 度菌液。同样方法，依次稀释到10-5。 注意：在土壤稀释过程中，吸取不同梯 度的菌液需换用不同的吸管。
[工作]菌种分离思路
![[工作]菌种分离思路](https://img.taocdn.com/s3/m/dde9f955326c1eb91a37f111f18583d049640fe0.png)
菌种分离思路：⌝菌种筛选方案：[1] 初筛：目的是删去明确不符合要求的大部分菌株，把生产性状类似的菌株尽量保留下来，使优良菌种不致于漏网。
初筛工作以量为主，测定的精确性还在其次。
初筛的手段应尽可能快速、简单。
[2] 复筛的目的是确认符合生产要求的菌株，所以，复筛步骤以质为主，应精确测定每个菌株的生产指标。
⌝菌种筛选的手段[1] 初筛[2] 从菌体形态变异分析[3] 平皿快速检测法：具体的有纸片培养显色法、变色圈法、透明圈法、生长圈法和抑制圈法等[4] 摇瓶培养法：初筛的摇瓶培养一般是一个菌株只做一次发酵测定，从大量菌株中选出10-20%较好的菌株，淘汰80-90%的菌株；而复筛中摇瓶培养一般是一个菌株培养3瓶，选出3-5个较好的菌株，再做进一步比较，选出最佳的菌株。
土中细菌的富集培养与分离分离土样中的大部分细菌的分离程序中无需进行富集。
但对某些少数细菌则要求特殊的富集或选择技术才能很好地被分离培养。
富集方法：运用细菌的酶诱导性，在分离培养基中添加若干抗生素、复杂底物及生长因子的前体物质来激活细菌某一特殊基因组，可以建立起若干富集技术。
富集可以促进抗性的产生并维持下来。
土样中细菌的富集：适度稀释后，取0.1m1涂布已添加及未添加富集底物(如几丁质、纤维素等)的土浸出汁平板。
植物体上细菌的分离：无菌富集，加植物浸出液适度培养取样，洗涤，取1ml经适度稀释后涂布平板。
水中细菌的分离：水样通过0.22μm无菌滤膜，取出滤膜用1ml无菌稀释液将滤膜上的沉积洗下。
用样本稀释液适度稀释,涂布平板倒置培养或滤纸压印分离法。
水中细菌分离的简易富集技术：(1) 在无菌的、用棉团塞好的广口三角烧瓶中连续培养，定期取样涂布适宜分离琼脂平板上；(2) 在不同水体的水样中加入一定的底物如蔗糖、多糖及蛋白质等，同样可以促进水中微生物的增殖。
(3) 培养过程中可加入低浓度的抗真菌剂以抑制真菌的生长。
(4) 另一富集方法是在培养烧瓶中添加细菌“附着材料”，如无菌的植物组织或土壤浸出液。
菌种鉴定标准操作规程
菌种鉴定标准操作规程目的：建立菌种鉴定标准操作规程范围：适用于******鉴定标准操作职责：内容：1整体操作步骤1.1纯化、分离待鉴定菌用接种环挑取待鉴定菌落或少许含菌溶液到相应的培养基上（如TSA），划线分离，以出现微生物单菌落为止。
1.2挑取纯化后的单菌落，进行革兰染色、镜检，以确定待鉴定菌的革兰属性。
1.3如镜检结果为革兰阴性杆菌，则先进行发酵实验。
如发酵实验结果为阴性，则选用API20NE试剂条进行鉴定；如发酵实验结果为阳性，则在经过细胞色素氧化酶实验后选用API20E试剂条进行鉴定。
1.4如镜检结果为革兰阳性球菌，则先进行过氧化氢酶实验。
如实验结果为阴性则选用API Strep试剂条进行鉴定，如实验结果为阳性则选用API Staph试剂条进行鉴定。
1.5假如镜检结果为革兰阳性杆菌并且有内生芽胞，则选用API 50CHB试剂条进行鉴定；否则，根据运动性实验和过氧化氢酶实验结果选用API Coryne或其他试剂条进行鉴定。
1.6选定正确的试剂条以后，根据不同的API试剂条的标准操作规程准备接种物，进行接种、培养等操作并将结果形成数码，用API鉴定软件鉴定或查询待检菌的名称均可。
鉴定结果应记录，必要时，给出相应解释。
2革兰氏染色2.1染色剂的配制2.1.1结晶紫染色液：甲液：结晶紫 1.0g95%的酒精20ml乙液：草酸铵0.8g水80ml将甲液和乙液混合均匀，静置48h使用，置密闭棕色瓶中储存。
2.1.2碘液：碘 1.0g碘化钾 2.0g水300ml配制时先用3～5ml水将碘化钾溶解，再加入碘，用力摇匀，使之全部溶解后，再加水稀释至300ml，摇匀，分装在棕色瓶中储存。
2.1.3稀石碳酸红溶液:碱性品红 1.0g石碳酸 5.0ml95%乙醇10.0ml配制时用乙醇溶解碱性品红，然后加入石碳酸溶液，使用时加水稀释至100ml，摇匀。
2.2操作:2.2.1涂片：用接种环挑取液体培养物中菌体在载玻片上涂成薄层，固体培养物则先在载玻片上滴一滴蒸馏水或生理盐水，用接种环挑取少量菌体在载玻片上涂成薄层。
土壤菌株筛选实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 掌握土壤中微生物的分离与纯化方法。
2. 了解不同微生物的形态特征和生理特性。
3. 筛选具有特定生理功能的菌株。
二、实验原理土壤中存在着大量的微生物，包括细菌、真菌、放线菌等。
通过选择合适的培养基和分离方法，可以从土壤中分离出具有特定生理功能的菌株。
本实验采用平板划线法、涂布分离法等方法，对土壤样品进行分离纯化，并对筛选出的菌株进行鉴定。
三、实验材料与仪器1. 材料：土壤样品、牛肉膏蛋白胨培养基、琼脂糖、无菌水、无菌平板、无菌试管、接种环、显微镜等。
2. 仪器：恒温培养箱、高压蒸汽灭菌锅、电子天平、显微镜等。
四、实验步骤1. 样品处理：取一定量的土壤样品，用无菌水进行稀释，制成10^-3、10^-5、10^-7等不同浓度的土壤悬液。
2. 分离纯化：（1）平板划线法：将不同浓度的土壤悬液涂布于牛肉膏蛋白胨琼脂平板上，用接种环进行划线分离，培养24小时后观察菌落形态。
（2）涂布分离法：将不同浓度的土壤悬液涂布于牛肉膏蛋白胨琼脂平板上，用无菌玻璃棒轻轻涂布，培养24小时后观察菌落形态。
3. 菌落鉴定：（1）形态特征观察：观察菌落的大小、形状、颜色、边缘、表面等特征，记录下来。
（2）生理生化试验：对筛选出的疑似菌株进行生理生化试验，如革兰氏染色、氧化酶试验、过氧化氢酶试验等，以确定菌株的属种。
4. 结果分析：根据形态特征和生理生化试验结果，对筛选出的菌株进行鉴定，并统计不同生理功能菌株的筛选数量。
五、实验结果与分析1. 菌落形态特征观察：在牛肉膏蛋白胨琼脂平板上，观察到不同形态的菌落，如圆形、卵圆形、长条形等，颜色有白色、黄色、红色等。
2. 生理生化试验结果：（1）革兰氏染色：部分菌株为革兰氏阳性菌，部分菌株为革兰氏阴性菌。
（2）氧化酶试验：部分菌株产生氧化酶，部分菌株不产生氧化酶。
（3）过氧化氢酶试验：部分菌株产生过氧化氢酶，部分菌株不产生过氧化氢酶。
3. 结果分析：根据形态特征和生理生化试验结果，筛选出以下具有特定生理功能的菌株：（1）革兰氏阳性菌：可能为葡萄球菌、链球菌等。
微生物菌种分离和鉴定技术
微生物菌种鉴定技术
表征（表型）特征 形态特征 生理和代谢特征 生态特征
遗传（基因型）特征 蛋白质比较 核酸碱基组成 核酸序列
分子标尺
多相鉴定技术 Polyphasic Identification
新型显色培养基：
利用微生物自身代谢产生的酶与相应显色底物反应显色的原理来检测微生物 的培养基 。
微生物快速分离、计数方法
Petrifilm Plate (3M)
微生物快速分离、计数方法
3M Petrifilm Plate
Aerobic Count Plate Coliform Count Plate Rapid Coliform Count Plate E. coli /Coliform Count Plate Enterbacteriaceae Count Plate Yeast and Mold Count Plate Staph. aureus Express Count Plate Environmental Listeria Plate
单细胞（孢子）分离
选择培养基分离
传统选择性培养基
血平板：适于各类细菌的生长，一般细菌检验标本的分离，都应接种此平板。 巧克力血平板：其中含有V和X因子，适于接种疑有嗜血杆菌、奈瑟菌等的标
本。 中国蓝平板或伊红美蓝平板：可抑制革兰阳性细菌，有选择地促进G-菌生长，
是较好的弱选择性培养基。 麦康凯平板：具中等强度选择性，抑菌力略强，有较少革兰阴性菌不生长。 SS琼脂：有较强的抑菌力，用于志贺菌和沙门菌的分离。 碱性琼脂：用于从粪便中分离霍乱弧菌及其它弧菌。 血液增菌培养基：用于从血液、骨髓中分离常见病原菌。 营养肉汤：用于标本及各类细菌的增菌
环境微生物菌种鉴定
环境微生物菌种鉴定微生物是地球上数量最多的生物，它们在我们的生活和环境中无处不在。
为了更好地利用和保护这些微生物资源，我们需要对它们进行鉴定和分类。
本文将介绍环境微生物菌种鉴定的基本方法和应用领域。
一、微生物菌种鉴定的基本方法1、形态学鉴定形态学鉴定是根据微生物的形态、大小、颜色、生长速度等特征对其进行分类和鉴定的一种方法。
通过观察菌落的形状、大小、质地、颜色、边缘特征等，可以初步判断微生物的种类。
2、生理生化鉴定生理生化鉴定是通过测试微生物对各种底物的发酵反应和代谢产物的性质，判断其生理生化特性，从而对其进行分类和鉴定的一种方法。
常见的生理生化试验包括糖发酵试验、柠檬酸盐试验、吲哚试验等。
3、分子生物学鉴定分子生物学鉴定是基于微生物基因组序列差异对其进行分类和鉴定的方法。
该方法通过提取微生物基因组DNA，进行PCR扩增，然后进行序列比对，判断微生物的种类和亲缘关系。
二、环境微生物菌种鉴定的应用领域1、环境保护环境微生物菌种鉴定在环境保护方面具有广泛的应用。
例如，在污水处理中，通过鉴定微生物的种类和数量，可以优化污水处理工艺，提高处理效率。
在土壤污染治理中，通过鉴定能够降解特定污染物的微生物种类，可以针对性地设计生物治理方案。
2、生物多样性研究环境微生物菌种鉴定在生物多样性研究中具有重要意义。
通过对不同生态环境中的微生物进行鉴定，可以揭示不同地区和不同气候条件下的生物多样性特征，为保护生物多样性和生态平衡提供科学依据。
3、生物技术应用环境微生物菌种鉴定在生物技术领域具有广泛的应用。
例如，在生物制药中，通过鉴定微生物的种类和代谢产物，可以发现新的药物资源和开发新的药物。
在农业微生物肥料开发中，通过鉴定微生物的种类和生理生化特性，可以研制出具有特定功能的微生物肥料。
三、总结环境微生物菌种鉴定是微生物资源保护和利用的重要手段。
通过形态学、生理生化和分子生物学等方法对微生物进行分类和鉴定，可以更好地了解和利用这些资源。
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真菌菌种的分离与鉴定
真菌是一类非常重要的生物，在自然界中扮演着重要的角色。
然而，由于真菌生长繁殖的速度较慢，对真菌菌种的分离与鉴定
也相对复杂，因此在相关领域中的应用和研究被限制。
本文将着
重讨论真菌菌种的分离和鉴定方法，以及其在相关领域中的应用。
一、真菌菌种的分离方法
真菌菌种的分离一般有四种方法：直接接种法、涂布法、破碎
法和过滤法。
其中，直接接种法是最为常见的方法。
这种方法能
够使菌丝在一定时间内表现出纯种特性，同时也避免了在繁殖过
程中受到外来菌的污染。
涂布法和破碎法通常用于难以分离的真菌，如念珠菌等。
涂布
法将真菌接种在含有透明质酸等黏合物质的平板上，以便于菌落
的生长。
破碎法则是将真菌菌落打碎并喷撒在培养基上，利用菌扩、有机营养物和渗透压低的条件下，整个真菌组织中的细胞可
以快速生长。
过滤法也是真菌分离的一种有效方法。
过滤法将培养基过滤后，将过滤后的液体放置在培养基上，利用其在液体中相对自由的扩
散和分散特性而实现分离过程。
二、真菌菌种的鉴定方法
真菌菌种的鉴定一般依据其生理和形态的特征来进行。
生理特
征主要包括菌株的代谢和营养需求，形态特征则包含真菌的形状、颜色以及胞壁、细胞核等细胞结构。
尽管生理和形态特征是非常
有效的真菌鉴定方法，但它们也存在着一定的局限性。
比如，在
某些情况下，形态特征相同的真菌可能属于不同的物种，另外，
动物实验的使用限制了真菌鉴定的范围。
为此，近年来，分子生
物学方法已成为真菌鉴定领域的重要方法之一。
PCR技术和DNA序列比较是目前最常用的真菌分子鉴定技术。
PCR技术利用特定酶和引物对真菌DNA的特定序列进行放大处理，从而获得足够数量的DNA序列进行分析。
这种技术可以通过检测
特定的真菌基因，例如16S和ITS，实现真菌菌种的快速筛选和定位。
DNA序列比较则通过比较不同真菌之间的DNA序列差异，
从而帮助确定真菌的物种。
三、真菌在相关领域的应用
真菌在食品、制药、环境等领域中有着广泛的应用。
在食品行
业中，鉴定发酵型真菌的种类以及制备出有害真菌的解毒剂非常
重要，可以有效保障食品安全。
比如，鉴定食品中的酵母菌和真
菌能够帮助制造美味的酒类产品和发酵食品。
在制药领域中，真菌是合成胞内物质和抗生素等药物的重要来源。
已知的许多抗生素都可以从真菌中通过生物转化合成。
最著
名的是青霉素，由真菌属之一的青霉菌产生。
其他抗生素如泛海
索林等也可以从真菌中获得。
在环境领域中，真菌可以帮助分解有毒化学物质，并消耗一些
人造代谢物。
目前，真菌被视为处理有毒化学物质和污染物的天
然清理工，被广泛用于世界各地的环境保护中。
总结
真菌菌种分离和鉴定的技术和方法日趋发展，这为真菌的应用
和研究提供了坚实的基础。
将来，真菌的应用前景将越来越广泛，
我们也有必要不断提高真菌分离和鉴定技术水平，推动和发现新的真菌物种和在其领域应用。