硫酸软骨素酶ABC_chABC_对大鼠坐骨神经损伤后神经再生功能的实验研究
bFGF在硫酸软骨素酶ABC联合BMSCs修复大鼠坐骨神经损伤中的表达的开题报告
bFGF在硫酸软骨素酶ABC联合BMSCs修复大鼠坐骨神经损伤中的表达的开题报告研究背景：坐骨神经是下肢中最大的神经，起源于腰椎和骶骨，向下穿过臀部，分布在大腿后部和小腿的外侧。
坐骨神经损伤是一种常见的神经损伤，可能导致下肢运动和感觉障碍等严重后果。
因此，探索有效的坐骨神经损伤修复方法具有重要的临床意义。
硫酸软骨素酶ABC（chondroitinase ABC，ChABC）是一种拆除软骨素链的酶，可降解那些常常存在于坐骨神经损伤周围的阻碍神经再生的分子。
而人类骨髓间充质干细胞（bone marrow-derived mesenchymal stem cells，BMSCs）作为一种有良好多能性和免疫调控效应的细胞，已被广泛应用于神经损伤的临床治疗。
不过，单独应用硫酸软骨素酶ABC或BMSCs对坐骨神经损伤的修复效果有限，因此需要探索二者联合应用的治疗效果。
bFGF是成纤维细胞生长因子家族的一员，它作为一种神经营养因子，能促进神经元的生存和轴突生长，增强神经再生能力。
因此，本研究的目的是探索在硫酸软骨素酶ABC联合BMSCs修复大鼠坐骨神经损伤中bFGF的作用及其表达。
研究方法：本研究将采用自制坐骨神经缺损模型大鼠，将其随机分为四组，即对照组、硫酸软骨素酶ABC组、BMSCs组和硫酸软骨素酶ABC联合BMSCs组。
在治疗前后分别采集坐骨神经组织，通过免疫荧光、Western Blot和PCR等方法进行bFGF的检测。
研究预期：通过本研究，预期可以探究在硫酸软骨素酶ABC联合BMSCs修复大鼠坐骨神经损伤中bFGF的作用及其表达，进一步探讨该方法在临床应用中的可能性，并为神经损伤的治疗提供新的思路。
BDNF联合chABC鞘内注射对大鼠脊髓损伤修复的影响
BDNF联合chABC鞘内注射对大鼠脊髓损伤修复的影响周路球;娄明武;欧阳锡华;黄忠群;刘政委;陈国昌【摘要】Objective To investigate the effects of motor sensory function and the neural stem cells,neurons,astrocytes and oligodendrocytes in the spinal cord tissue after spinal cord injury in rats by intrathecal injection of brain derived neurotrophic factor (BDNF)combined with chondroitin sulfate (chABC).Methods SD rats were divided into sham operation control group (A group),injury control group (B group),chABC treatment group (C group),BDNF treatment group (D group),combined treatment group (group E).Hindlimb motor function score (CBS) was used to assess hindlimb motor function after 1 weeks,2weeks,4 weeks and 2 months postoperatively.Immunohistochemical method was used to observe the effect of neural stem cells in spinal cord tissue of rats in each group.The changes of neurons,astrocytes and oligodendrocytes in rats were observed by fluorescence immunohistochemistry.Results The neurological function of rats in each group before operation was normal.After 1-2 weeks,the scores of B,C,D,E and CBS in each group decreased,but there was no significant difference between the groups (P ＞ 0.05).After4 weeks-2 months,CBS score of C,D,E group was decreased gradually,lower than the B group,and the difference was statistically significant(P ＜ 0.05).Compared with group A,the number of BrdU positive cells in B group decreased at different time points,and the difference was statistically significant (P ＜0.05).The number of BrdU positive cells in spinal cord tissue of rats ingroup C,D and E after 1 weeks of spinal cord injury was not significantly different from that of group B (P ＞ 0.05).The number of BrdU positive cells in C,D and E groups was higher than that in group B at 2-4 weeks after spinal cord injury,and the difference was statistically significant (P ＜0.05).Compared with the blank control group A,the number of Nestin positive cells in the B group at different time points after spinal cord injury was decreased,the difference was statistically significant (P ＜ 0.05).The number of Nestin positive cells in spinal cord tissue of C,D and E groups was higher than that of group B at 2,4 and 2 weeks after spinal cord injury,with statistical difference (P ＜ 0.05).Conclusion BDNF and chABC after intrathecal injection has a certain role in motor and sensory function recovery after spinal cord injury in rats,and may promote the proliferation of neural stem cells and neuronal differentiation,but the effect is not significant after the combination.At 1 weeks after spinal cord injury,the proportion of astrocytes decreased gradually and the proportion of neurons increased gradually in A group.The proportion of neuronal cells in B group increased slowly,and the proportion of astrocytes decreased slowly.In the C,D and E groups,the proportion of neurons in C,D and E increased gradually and the astrocytes decreased gradually after 4 weeks-2 months after spinal cord injury,and the difference was statistically significant compared with the B group (P ＜ 0.05).%目的探究脑源性神经营养因子(BDNF)联合软骨素酶(chABC)鞘内注射对大鼠脊髓损伤后运动感觉功能的影响以及脊髓组织中神经干细胞、神经元、星形胶质细胞、少突胶质细胞的影响.方法将SD大鼠分为假手术对照组(A组),损伤对照组(B组),chABC治疗组(C组),BDNF治疗组(D组),联合治疗组(E组),采用后肢运动功能评分法(CBS)对大鼠术后1周、2周、4周和2个月后肢运动功能进行评定,苏木精-伊红(HE)染色法观察不同时间点大鼠脊髓组织变化,免疫组化法观察各组大鼠脊髓组织神经干细胞的影响,荧光免疫组化法观察各组大鼠神经元、星形胶质细胞、少突胶质细胞的变化.结果术前各组大鼠神经功能均正常,术后1～2周,B、C、D、E各组CBS评分降低,但各组间对比差异无统计学意义(P＞0.05);术后4周～2个月,C、D、E组CBS评分逐渐降低,低于B组,差异有统计学意义(P＜0.05).与A组相比,B组不同时间点BrdU阳性细胞数目降低,差异有统计学意义(P＜0.05).脊髓损伤后1周,C、D、E组大鼠脊髓组织BrdU阳性细胞数目与B组比较,差异无统计学意义(P＞0.05);脊髓损伤后第2～4周,C、D、E组BrdU阳性细胞数高于B组,差异有统计学意义(P＜0.05).与空白对照A组比较,B组脊髓损伤后不同时间点Nestin阳性细胞数目均减少,差异有统计学意义(P＜0.05).脊髓损伤后2周、4周、2个月,C、D、E组脊髓组织Nestin阳性细胞数高于B组,差异有统计学意义(P＜0.05).脊髓损伤后1周,A组星形胶质细胞比例逐渐降低,神经元细胞比例逐渐升高.B组细胞3种细胞比例均较低,随着时间延长,神经元细胞比例缓慢升高,星形胶质细胞比例缓慢下降.C、D、E 组脊髓受损后脊髓受损后4周～2个月,C、D、E组神经元比例逐渐升高,星形胶质细胞逐渐下降,与B组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 BDNF、chABC鞘内注射后对大鼠脊髓损伤后运动、感觉功能恢复具有一定的促进作用,可能与促进神经干细胞增殖以及神经元细胞的分化有关,但两者联合后效果并不显著.【期刊名称】《医学研究杂志》【年(卷),期】2018(047)003【总页数】9页(P122-129,137)【关键词】脊髓损伤;神经干细胞;脑源性神经营养因子;软骨素酶【作者】周路球;娄明武;欧阳锡华;黄忠群;刘政委;陈国昌【作者单位】510006 广州中医药大学博士后工作站;518116 深圳市龙岗中心医院神经外科影像科;510006 广州中医药大学博士后工作站;518116 深圳市龙岗中心医院神经外科影像科;518116 深圳市龙岗中心医院神经外科影像科;518116 深圳市龙岗中心医院神经外科影像科;518116 深圳市龙岗中心医院神经外科影像科;518116 深圳市龙岗中心医院神经外科影像科【正文语种】中文【中图分类】R322.81脊髓损伤后通常会导致严重神经功能损伤，还会出现脊髓受压、血管内出现血栓、继而引发下肢运动障碍，恢复较困难[1]。
硫酸软骨素的药理作用及应用研究进展_肖玉良
－1 以 及 3 年 后 的 180. 9 mL · 次 ， 膀胱内灌注
HA / CS 可以对 BPS / IC 的 难 愈 性 症 状 产 生 长 达 3 年 的 持
［14］
。 随机 、 双 盲、 安 慰 剂 对 照 的 膀 胱 内 灌 注 HA /
CS 治疗女性尿路感染 的 临 床 研 究 发 现， 与安慰剂对照组 相比经 HA / CS 治疗后患者的尿路感染复发率 下 降 77 % ， 尿路感染复发 时 间 明 显 延 长［治 疗 组： （ 185. 2 ± 78. 7 ） d ， ， 对照组： （ 52. 7 ± 33. 4 ） d ］ 生活质量和泌尿系统功能明 显改善， 且无严重不良反应事件发生 2 2. 1 CS 在免疫调节方面的研究应用 增强免疫功能 2 是调节机体免疫应答过程中 活化淋巴细胞产生的 IL可以促进淋巴细胞的增殖， 与 γ干扰素（ IFN重要的调节者， γ） 协同诱导细胞分化成产生免疫球蛋白的细胞， 促使 T 细胞 产生淋巴因子， 诱导细胞毒性 T 细胞产生。TNFα 可以有选 择性地杀伤某些肿瘤细胞或抑制肿瘤细胞增殖而不损伤正 6 对肿瘤有双重作用， 常组织； IL可以促进 B 细胞分泌 IgM 和 IgG， 它还 是 杂 交 瘤 细 胞 和 骨 髓 细 胞 生 长 因 子 。 研 究 发 现
［67 ］ ［5 ］
。 HA 和 CS 对 膜 层 蛋 白 聚 糖 损 伤 的 早 期 修 复 可 以
目前蛋白聚糖层的修复已经成 避免膀胱炎的 慢 性 演 变， 为慢性膀胱 炎 以 及 膀 胱 疼 痛 综 合 征 / 间 质 性 膀 胱 炎 等 膀 胱疾病的新疗法
［12］
。
。研 究 发
膀胱内灌注 HA / CS 治 疗 难 愈 性 膀 胱 疼 痛 综 合 征 / 间 质性膀 胱 炎 （ BPS / IC ） 的 耐 受 性 与 疗 效 评 价 试 验 研 究 表 明， 经 HA / CS 治 疗 后 尿 急 、 尿 频、 尿 痛、 骨盆疼痛频率等 O' LearySant 问 卷 表 中 间 质 性 膀 胱 炎 问 题 症状明显改善， 指数以及症状指数明显改善 疗后的 15. 5 次 · d
硫酸软骨素酶ABC（ch
硫酸软骨素酶ABC（ch中国实用神经疾病杂志2011年2月第14卷第3期ChineseJournalofPracticalNervousDiseasesFeb201l,V o1.14No.3[5][63lateschemokine(interleukin一8andmonocytechemoattractantprotein1)secretioninhumanpancreaticperiacinarmyofibro—blastsEJ].ScandJGastroenterol,2002,37:239—245.LeGrandA,FermorB,FinkC,etfl1.Interleukin一1,tumornecrosisfactoralpha,andinterleukin17synergisticaIlyupreg—ulatenitricoxideandprostaglandinE2productioninexplants ofhumanosteoarthritickneemenisci[J].ArthritisRheum,2001,44(9):2078—2083.RouvierE,LucianiMF,MatteiMG,etaI.CTIA-8,cloned[7]fromanactivatedTcell.bearingAU—richmessengerRNAin—stabilitysequenees.andhomologoustoaherpesvirussaimirigeneEJ].JImmunol,1993,150(12):54455456.KostulasN,PelidouSH,KiviskkP,eta1.IncreasedIL-1beta,IL-8,andIL一17mRNAexpressioninbloodmononucle—arcellsobservedinaprospectiveisehemicstrokestudy[J].Stroke,1999,30(10):2174—2179.(收稿201O-11-22)硫酸软骨素酶ABC(chABC)对大鼠坐骨神经损伤后神经再生功能的实验研究王红辉陈清汉杨延良郑州大学第二附属医院骨科郑州450014【摘要】目的观察硫酸软骨素酶ABC(chABC)对坐骨神经再生功能的影响.方法将72只SD大白鼠双侧坐骨神经切断造成0.8cm缺损,用甲壳素导管桥接神经缺损后随机分为3组,每组24只.A 组(实验组):管内注入聚乳酸一聚乙醇酸一chABc缓释微球(chABC—PLGA);B组(赋形剂组):管内注入聚乳酸一聚乙醇酸微球;C组(空白对照组):管内注入等渗盐水.术后4周,8周取材作神经电生理,神经组织学观察.结果术后4周,8周组织学观察见有再生神经通过再生室,其间有新生血管;神经电生理检查A组再生神经传导速度优于B,C组,差异有统计学意义(P<o.05),B,C组再生神经传导速度差别元统计学意义,组间比较(尸>0.0167)组问多重比较行Bonferroni法检验,取校正口一0.0167).S100免疫组织化学及Ioyez氏神经染色法显示:A组神经纤维数多于B,C组,差异有统计学意义(P<0.05),B,C组再生神经纤维数差别无统计学意义,组问比较(P>0.0l67).结论硫酸软骨素酶ABC(chABC)具有促进周围神经再生的作用.【关键词】神经再生;周围神经损伤;硫酸软骨素酶ABC(chABC)【中图分类号】R一332【文献标识码】A【文章编号】1673—5110(2011)030021—03 ExperimentofchondroitinaseABConsciaticnerveregenerationafterneverinjuryinratsWa ngHonghui,ChenQinghan,gangY anliang.DepartmentofOrthopaedics,theSecondAffiliatedHospital ofZhengzhouUniversity,Zhengzhou450014,China[Abstract]ObjectiveToobservetheeffectofehondroitinaseABC(chABC)onsciaticnervere generation.MethodsSev-enty-twoSDratswererandomlydividedinto3groups,24ratsineachgroup.Thesciaticnerves onbilateralofallratswereex—posedanda0.8cm—longsegmentwereremovedandbridgedwithchitinchamber.chABCgroupA,excipientsgroupB,isotonicsalinegroupC.Fourandeightweeksafteroperation,thenerveelectr0physi0logicalandnerve histologyexaminationwereob—served.ResultsFourandeightweeksaftertheoperation,histologicalobservationindicatedth attheregeneratednervesinall ofgroupspassedthroughthenerveregenerationchamberandtherewereregeneratedbloodve sselsinit.Theeiectrophysi0logi—calexaminationofregeneratednerveshowedthatvelocityingroupAwashigherthangroupB andC,thedifferencewasstaffs—ticallysignificant(P<O.05).TherewasnosignificantdifferencebetweengroupBandC(P >0.0167,multiplecomparisonwithBonferroniadjustedalphalevelof0.0167).S100immunohistochemistryandLoyez'sne uralstainingshowedthatthenum—berofnervefibersingroupAwasmorethangroupBandC,thedifferencewasstatisticallysigni ficant(P<0.05).Therewas nosignificantdifferencebetweengroupBandC(P>0.0167).ConclusionChondroitinase ABC(chABC)hastheeffectof promotingperipheralnerveregenerationandfunctionalrecovery.[Keywords]Neverregeneration;Peripheralnerveinjury;ChondroitinaseABC(ehABC) 周围神经损伤在临床上非常多见,手术修复离断缺损的神经,往往很难达到理想的效果.近年来对硫酸软骨素酶ABC神经再生的促进作用已受到国内外学者的广泛关注,并*通讯作者:陈清汉,主任医师,硕士生导师证明CSPGs在体内是重要的抑制神经轴突再生的因子之一[,对其活性进行抑制调控将有助于治疗人类周围神经损伤.本实验首次设计在甲壳素套管中加入硫酸软骨素酶ABC,观察其促神经再生的效果.22中国实用神经疾病杂志2011年2月第14卷第3期ChineseJournalofPractica1Nerv0usDiseasesFeb2011,V o1.14No.31材料与方法1.1材料制作可吸收甲壳素神经导管,赋形剂PLGA,chABC—PLGA微球.1.2动物分组及模型建立将72只大鼠随机分为3组.每组24只.以10水合氯醛溶液按3o～35mL/kg腹腔内麻醉.充分游离并切断坐骨神经.10—0无创缝合线导人缝合法缝合两神经断端外膜于甲壳素管内各1.5～2mm,并留有6～7mm间隙,形成神经再生室.A组再生室内放人chABC—PLGA微球2O"l,B组再生室内放人PLGA微球2Ol.c组再生室内放入等渗盐水20l.实验后逐层缝合,局部应用青霉素,待麻醉清醒后分笼饲养.1.3检测方法术后应用ASB240U生物信号采集系统测量再生神经传导速度,S-100免疫组织化学及Loyez氏神经染色法组织学检测阳性再生神经数目.Image-ProPlus6.0图像分析系统作图像分析.1.4统计学处理实验数据用标准差表示,应用SPSS16.0统计软件进行分析.P<0.05视为有统计学意义.总体均数有差异时采用Bonferroni检验进行多重比较取校正a—o.o167.2结果2.1大体观察A,B组中各有1只大鼠分别在术后5d和9d时死亡,C组大鼠全部存活至术后8周.各组切口无感染.A,B组中2只出现足溃疡足踝部红肿,术后8周溃疡已有愈合.各组大鼠坐骨神经支配区域肌肉有不同程度萎缩.术后4周,8周,再生室内均有再生组织连接神经缺损.神经表面有大量纤维组织并可见明显细小血管通过.2.2再生神经电生理检查术后各组均可检测到神经动作电位,术后4周,8周时分组效应有统计学意义(P<0.0167).表明再生神经传导速度随着干预方法不同而有差异.Bonferroni法多重比较的结果显示:A组的效果优于空白组与赋形剂组(P<O.05),B组与C组比较效果差别无统计学意义(P一0.037,P>0.0167).见表1.2.3组织学检查特殊染色可见轴突呈褐深色.4周时,各组阳性纤维排列稀疏,粗细不均,分布不均匀,数目较少.8周时,各组阳性纤维均较4周时增多,A组阳性纤维增多最明显,有髓神经髓鞘较厚,形态较规则.分组效应有统计学意义(P<O.05),Bonferroni法比较显示:A组优于B组与C 组(P<O.0167),B组多于C组,但差异无统计学意义(P>0.0167).s一100免疫组织化学染色:雪旺式细胞呈蓝色,深染,大小,分布不均匀.4周时,各组阳性数目较少.8周时,各组阳性数均较4周时增多,有髓神经鞘呈车轮状.分组效应有统计学意义(P<0.05),Bonferroni法多重比较显示:A 组优于B,C组(P<O.0167),B组与C组比较差别无统计学意义(P>0.0167).见表1.表1术后不同分组及时间段检测结果(±s)3讨论周围神经缺损的修复重建是周围神经损伤中的一大难题,使用在生物材料中混合促神经生长的各种因子是方法之一[2].雪旺细胞是周围神经系统特有的胶质细胞,亦称神经膜细胞或鞘细胞,它对神经轴突具有支持,保护和营养,并维持轴突的良好微环境.周围神经损伤后增殖的雪旺细胞分泌多种神经营养因子,胞外基质,其中既有促进轴突生长的分子,例如层粘蛋白,纤连蛋白等,也有抑制轴突生长的分子,如硫酸软骨素蛋白聚糖(CSPGs).CSPGs由多种核心蛋白和与核心蛋白相连的葡糖胺聚糖(GAG)侧链组成,当其结构完整时,才能抑制神经生长,因此分解其GAG侧链或溶解其核心蛋白都会消除这种抑制作用.周围神经系统中含有丰富的CSPGs,其抑制神经再生作用大部分是通过由硫化糖形成的GAG链这一共同途径完成的,而chABC是针对GAG的特异性糖苷酶,可以分解CSPGs上的GAG侧链,从而降解CSPGs[3].周围神经损伤后胞外基质的重塑,即增加促轴突生长的分子,去除抑制分子,对于神经再生是十分重要的.利用chABC降解CSPGs来促进神经再生,改善功能恢复已经在众多中枢神经损伤的研究中得到证实],但有关联合可吸收神经再生室促进周围神经再生作用鲜有报道.本实验用甲壳素导管做再生室,8周后基本完全自行吸收,对后期神经生长无阻碍作用且对机体无异物反应,是周围神经再生室的一种理想生物材料.采用PLGA共聚物(50:50),分子质量2万的载体材料制备的chABC微球3周内的累积释药分数为85.14[5],可长期局部释放药物,达到了预期目标.术后8周时,chABC治疗组,再生神经传导速度,再生神经纤维数目多于赋形剂组和等渗盐水组以计,且差异有统计学意义,说明应用chABC可以有效地促进周神经的再生和功能恢复.实验中观察到,再生神经首先出现在材料中央,而不是在材料外周,我们认为可能材料在降解时,中间游离的chABC多,更有效的降解CSPGs侧链更有助于雪旺细胞及再生神经轴突生长及髓鞘化.有研究认为大部分再生神经纤维是在支架材料外周,甚至外膜下,而中间较少认为材料的营养应靠物质渗透获得,所以外围营养应更丰富,有利于物质交换[6].我们的实验却出现相反结果,原因有待进一步研究.周围神经再生需要良好的微环境,也需与其他调节因子协调作用,chABC与其他因子在这方面对调节神经再生的关系还有待进一步深入研究.中国实用神经疾病杂志2011年2月第14卷第3期ChineseJournalofPracticalNervousDiseasesFeb2011,V o1.14No.3?23?参考文献[1][2][3]ZuoJ,FergusonTA.Neuronalmatrixmetall0pr0teinase一2de—gradesandinactivatesaneurite-inhibitingchondroitinsulfateproteoglycan口].JNeurosci,1998,18(14):5203—5211.杨渐,俞昌喜.周围神经损伤的药物治疗进展EJ].中国实用神经疾病杂志,2010,13(11):91—92.CarulliD,LaabsT,GellerHM.Chondroitinsulfateproteo—glycansinneuraldevelopmentandregenerationEJ].CurtOpinNeurobiol,2005,15(1):116—12O.[4]孙天胜,胥少汀.脊髓损伤修复的现状与进展EJ].国外医学?骨科学分册,2003,24(2):67—71.[53张德盛,宋月明.硫酸软骨素酶ABC-聚乳酸～聚乙醇酸共聚物缓释微球的制备及其体外性质EJ].中国组织工程研究与临床康复杂志,200812(32):6247—625l_[6]MaquetV,MartinD.Peripheralnerveregenerationusing bioresorbablemacroporouspolylactidescaffolds[J3.JBiomedMaterRas,2000,52(4):639—651.(收稿2010—10—23)RAGE基因多态性与高血压左室肥厚,血清esRAGE水平的相关性研究孙广利李莉(通讯作者)崔天祥郑州大学第二附属医院心内科郑州450014【摘要】目的探讨晚期糖基化终末产物受体(RAGE)基因Gly82Ser多态性与EH —LVH患者及其血清内源性分泌型RAGE(esRAGE)水平的相关性.方法应用聚合酶链反应一限制性片段多态性(PcR_RLFP)的方法,检测94例EH患者(其中38例伴LVH)及5o例对照组RAGE基因Gly82Ser多态性,同时采用ELISA法测定血清esRAGE水平.结果与正常对照组相比,EH组基因型频率和等位基因频率差异无统计学意义(P>o.05);EH—LVH组RAGE基因Gly82Ser位点的GS基因型频率和82Ser等位基因频率明显增高,差异有统计学意义(P<0.05);EH—LVH和EH组Gly82SerSS基因型血清es—RAGE水平与对照组相比差异显着(P<O.05).结论RAGE基因Gly82Ser多态性与EH的发生发展无关;EH-LVH患者RAGE基因Gly82SerGS基因型和82Ser等位基因增多,提示82Ser等位基因可能是EH—LVH发病的易感基因;RAGE基因Gly82Ser多态性与血清esRAGE水平显着相关.【关键词】高血压;esRAGE;RAGE;左心室肥厚;基因多态性【中图分类号】R544.1【文献标识码】A【文章编号】1673—5110(20l1)03—0023—03 AstudyontheassociationofRAGEgenepolymorphisminpatientswithessentialhypertensio nandleftven—tricularhypertrophyandserumlevelsofesRAGESunGuangli,LiLi,CuiTianxiang.Depart mentofCardiovascu—larMedicine,theSecondAffiliatedHospitalofZhengzhouUniversity,Zhengzhou450014, China[Abstract]ObjectiveToexploretherelationshipsbetweenRAGEgenepolymorphisminpati entswithessentialhyperten—sionandleftventricularhypertrophyandserumlevelsofesRAGE.MethodsThepolymorphi smsofRAGEgenewereanalyzed byPCR—restrictionfragmentlengthpolymorphism(PCR—RFLP)methodsin94patientswithessentia1hypertensionand50healthycontrols,andtheserumlevelofesRAGEwasdeterminedbyenzymelinkedimmunos orbentassay(ELISA).Results NosignificantdifferencewasfoundinallelesandgenotypefrequenciesofRAGEgeneGly82 Serpolymorphismbetweenessentialhypertensionwithleftventricutarhypertrophyandcontrolgroup(P>0.05).Thefrequenci esofRAGEgeneGly82SerGShet—erozygousgenotypeandSallelefrequencyweresignificantlyhigherinpatientswithessential hypertensionandleftventricularhypertrophythanthoseincontrolgroup(P<0.05).TheserumlevelsofesRAGEwerelower inGly82SerSSgenotypeof RAGEgeneinpatientswithessentialhypertensionandleftventricularhypertrophythanthos eincontrolgroup(P<0.05).ConclusionRAGEgeneGly82SerpolymorphismisnotassociatedwithEHandEH—LVHpatients,Gly82SerGSheterozygousgenotypeand82SerallelemaybeassociatedwithEH—LVHpatients.Asignificantrelationshiphasbeenfoundbetweenthepol—ymorphismoftheRAGEgeneandtheserumlevelsofesRAGE.[Keywords]Essentialhypertension;esRAGE;RAGE;Leftventricularhypertrophy;Genep olymorphism近年来,随着对RAGE研究的深入,研究表明AGEsRAGE系统参与了心血管疾病发生发展的过程Ⅲ.本文旨在探讨RAGE基因Gly82Ser多态性与EH及EH—IVH患者和血清esRAGE水平的关系.l资料与方法1.1研究对象人选2010—02～2010—10在我院高血压门诊。
硫酸软骨素药理作用研究进展
硫酸软骨素药理作用研究进展【摘要】在近期学者研究的基础上,本文对硫酸软骨素在神经系统作用、抗炎镇痛作用、增强免疫作用、对心血管系统作用、对肿瘤细胞影响和抗氧化作用等方面的药理作用进行综述,供科学研究参考。
【关键词】硫酸软骨素药理作用研究进展硫酸软骨素(chondroitin sulfate, CS)是动物体内分布最广泛的一种细胞外基质(extra cell ularmatrix,ECM)糖胺多糖,按其硫酸化部位的不同,分别称为硫酸软骨素A和硫酸软骨素C,由于含有硫酸基团,整个CS分子呈现很强的负电性,易与蛋白质共价结合组成蛋白聚糖,同时也是其发挥生物学作用的重要基础。
硫酸软骨素作为结缔组织的重要组成部分,具有多种药理作用与生理功能,可用作药物和保健食品,主要用于骨关节炎(OA)和冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病)。
本文对其药理作用近期的研究进展作一综述。
1 硫酸软骨素对神经系统作用CS通过其蛋白聚糖形式参与神经调节作用。
许多研究表明,脊髓损伤后局部的微环境存在一些抑制再生的因素,其中硫酸软骨素蛋白多糖(chondroitin sulfate proteoglycans,CSPGs) 是一大类阻碍轴突再生的物质,内源性CSPGs对神经发育及神经损伤后修复起抑制作用。
赵伟等研究发现大鼠脊髓半横断损伤后脊髓内硫酸软骨素蛋白多糖Aggrecan表达较对照组明显增加,而通过电针治疗,使脊髓损伤邻近组织内 CSPGs 表达明显受到抑制,从而减弱其对轴突再生的抑制作用,促进脊髓损伤修复。
同理,一些硫酸软骨素酶如ChABC能分解CSPGs,从而达到促进脊髓损伤修复。
另外,CS能通过降低慢性酒精中毒模型大鼠脑组织中单胺类神经递质的含量直接减轻脑损伤。
2 抗炎镇痛作用口服CS可以减轻炎症区域的肿胀度,减轻关节炎对软骨的损害,与非甾体类抗炎药对比,非甾体类抗炎药缓解症状较迅速,而治疗效果虽稍低,但作用温和、副反应小。
PNNS在脊髓损伤修复治疗中的研究进展
PNNS 在脊髓损伤修复治疗中的研究进展脊髓损伤（Spinal Cord Injury，SCI）是世界上最严重的神经系统疾病之一，有高致残率，大部分的SCI案例来源于道路交通事故、坠落等创伤，SCI给患者及社会带来了沉重的经济负担。
由于具有较高的致残率，探索SCI后的修复一直是神经科学领域的研究人员的重要关注点。
早在19世纪，神经周围网络(perineuronal nets,PNNs)就被观察到，随着研究的深入，普遍认为PNNs是围绕在中枢神经系统（central nervous system，CNS）中特定神经元的特殊细胞外基质（extracellular matrix,ECM），与神经元的可塑性有关[1]。
本文就PNNs在SCI修复治疗中的研究现状及进展做个简要的阐述。
1 脊髓损伤（SCI）SCI主要包含原发性损伤及继发性损伤两种。
原发性损伤主要是由于机械性创伤，导致脊柱压缩和位移、椎骨碎片、椎间盘等引起神经细胞或神经纤维的直接破坏。
继发性损伤，主要由于损伤后电解质改变、血管调节障碍、水肿、过氧化脂质表达及细胞凋亡增加等导致神经组织的永久性损伤。
SCI后，由于创伤产生的神经胶质瘢痕，一方面限制炎症、保护幸存神经组织，另一方面也限制了轴突的再生。
有研究表明，在SCI修复的部位，硫酸软骨素蛋白聚糖（CSPG）是最丰富的细胞外基质分子，并且与瘢痕形成有关[2]。
2 神经周围网络(PNNs)PNNs主要由透明质酸、CSPG、连接蛋白和生腱蛋白-R 组成，由卡米洛·高尔基于1898年发现至今。
相关研究表明，通过硫酸软骨素酶ABC(ChABC)去除PNNs中的CSPG，可以使神经可塑性可以在成年期重新打开[3]。
ChABC是一种细菌裂解酶，可降解CSPG、硫酸皮肤素和透明质酸糖胺聚糖(GAG)。
由于ChABC的半衰期很短，热稳定性也不是很好，这意味着它必须反复给药的特异性的降解PNNs[4]，从而限制了进行长期研究的能力。
雷帕霉素对大鼠坐骨神经再生作用的实验研究
雷帕霉素对大鼠坐骨神经再生作用的实验研究王涛;刘强;孙吉平;孙光伟【期刊名称】《中国现代医生》【年(卷),期】2010(048)036【摘要】目的探讨雷帕霉素(rapamycin,RAPA)的不同给药时间对大鼠坐骨神经损伤后神经再生和功能恢复的影响.方法健康Wistar大鼠共24只,随机分为4组,制备大鼠右侧坐骨神经挤压伤模型.A组(早期对照组)注射生理盐水,B组(早期用药组)损伤后当即注射雷帕霉素[1mg/(ks·d)],连续应用7d,C组(晚期对照组)注射生理盐水,D组(晚期用药组)损伤后24h注射雷帕霉素[1mg/(kg·d)],连续应用7d,每组各6只.于术后6周进行坐骨神经功能检测(sFI),神经电生理检测及组织形态学观察.结果坐骨神经功能检测(SFI),B组明显优于A组、c组、D组(F=6.51,P＜0.01).复合肌肉动作电位(CMAP)的潜伏期(LTP),B组明显慢于A组、C组、D组(F=12.56,P＜0.01);坐骨神经传导速度(F=20.30,P＜0.01)和复合肌肉动作电位波幅(F=8.07,P＜0.01)B组明显优于A组、C组、D组.结论①全身应用雷帕霉素具有神经保护作用,可以加速神经的修复和功能恢复.②早期应用雷帕霉素促进神经再生和功能恢复的效果优于晚期.【总页数】3页(P6-7,16)【作者】王涛;刘强;孙吉平;孙光伟【作者单位】山西医科大学第一医院骨科,山西,太原,030001;山西医科大学第一医院骨科,山西,太原,030001;山西医科大学第一医院骨科,山西,太原,030001;山西医科大学第一医院骨科,山西,太原,030001【正文语种】中文【中图分类】R651.3【相关文献】1.一氧化氮合酶抑制剂促进大鼠坐骨神经再生的电生理实验研究 [J], 刘浩宇;魏壮;许则民;刘飙;尹维田2.FK506对大鼠坐骨神经再生作用的实验研究 [J], 张卫国;傅重洋3.硫酸软骨素酶ABC(chABC)对大鼠坐骨神经损伤后神经再生功能的实验研究 [J], 王红辉;陈清汉;杨延良4.银杏酮酯促进大鼠坐骨神经再生的实验研究 [J], 林浩东;王欢;陈德松;李继峰;顾玉东5.鹿茸多肽促进大鼠坐骨神经再生的实验研究 [J], 李立军;路来金;陈雷;丰波;王雪莹因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
BMSCs联合硫酸软骨素酶ABC移植修复大鼠脊髓损伤的研究
BMSCs联合硫酸软骨素酶ABC移植修复大鼠脊髓损伤的研究目的：探究BMSCs聯合硫酸软骨素酶ABC（ChABC）移植修复大鼠脊髓损伤的研究。
方法：选取新生SD大鼠股骨、胫骨骨髓分离培养鉴定出MSCs，对贴壁培养的BMSCs进行神经诱导培养。
取成年雄性SD大鼠32只，体重200～260 g，利用大鼠T10脊髓半横断模型进行半横断，脊髓损伤模型制备完成后，随机分为对照组（A组）、BMSCs组（B组）、硫酸软骨霉素ABC注射组（C组）和硫酸软骨霉素ABC联合BMSCs移植组（D组），每组8只。
伤后1～2周采用BBB评分法评价大鼠后肢运动功能，伤后2周取材行HE染色计算损伤区面积，采用免疫荧光染色法观察BMSCs分化为功能性神经细胞的情况。
结果：统计分析1～2周后四组大鼠的BBB评分情况，D组大鼠明显高于其余三组，且差异均有统计学意义（P＜0.05），但A组、B组、C组比较差异均无统计学意义（P>0.05）；对比2周后四组大鼠的损伤区面积，D组大鼠损伤区面积明显小于A组，且差异均有统计学意义（P＜0.05），A组、B组、C组比较差异均无统计学意义（P>0.05）；通过荧光染色后对CSPG区域荧光强度的观察，四组大鼠比较差异均有统计学意义（P＜0.05），GFAP/GAP方面D组明显大于A、B、C三组，四组比较差异均有统计学意义（P＜0.05）。
结论：采用BMSCs联合硫酸软骨霉素ABC可促进神经纤维再生，对大鼠脊髓损伤修复有一定促进作用。
脊髓損伤的修复一直是临床的一道难题，脊髓损伤形成的机械性障碍以及其内部化学成分所导致的化学屏障共同阻碍了中枢神经轴突的生长[1-2]。
BMSCs 取材简便、排异反应不明显，具有多项分化的潜能，是脊髓损伤细胞治疗较为理想的种子细胞[3]。
硫酸软骨素酶ABC可特异性降解CSPG，且不破坏其他组织结构，可对BMSCs细胞的分化提供一定的保障[4]。
故本实验采用BMSCs联合硫酸软骨霉素移植修复脊髓损伤，观察其对半横断脊髓损伤的修复作用，现报道如下。
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lates chemok ine (in terleukin 8and monocytechemo attractant p rotein 1)secretion in h uman pan creatic periacinar myofib ro blasts [J] S cand J Gastroenterol,2002,37:239 245 [5] L eGran d A,FermorB,Fin k C,et al Interleukin 1,tum orn ecr os is factor alpha,andinterleukin 17synergistically up reg ulate nitric oxide and prostagland in E2production in explants of human osteoarthritic k nee men isci [J ] Arth ritis Rh eum ,2001,44(9):2078 2083[6] Rouvier E,Lu ciani M F,M attei M G,et al CT LA 8,clonedfrom an activated T cell,bearing AU rich m ess enger RNA in s tability sequen ces ,and homologous to a h erpesvirus s aimiri g ene [J] J Immun ol,1993,150(12):5445 5456 [7] Kos tu las N,Pelid ou SH ,Kivis kk P,et al Incr eased IL1b eta,IL 8,and IL 17mRNA expression in b lood mononu cle ar cells ob ser ved in a prospective ischem ic stroke s tudy [J] S troke,1999,30(10):2174 2179(收稿2010 11 22)*通讯作者:陈清汉,主任医师,硕士生导师硫酸软骨素酶ABC(chABC)对大鼠坐骨神经损伤后神经再生功能的实验研究王红辉 陈清汉*杨延良郑州大学第二附属医院骨科 郑州 450014摘要 目的 观察硫酸软骨素酶A BC(chA BC)对坐骨神经再生功能的影响。
方法 将72只SD 大白鼠双侧坐骨神经切断造成0 8cm 缺损,用甲壳素导管桥接神经缺损后随机分为3组,每组24只。
A 组(实验组):管内注入聚乳酸 聚乙醇酸 chA BC 缓释微球(chABC PL GA );B 组(赋形剂组):管内注入聚乳酸 聚乙醇酸微球;C 组(空白对照组):管内注入等渗盐水。
术后4周、8周取材作神经电生理、神经组织学观察。
结果 术后4周、8周组织学观察见有再生神经通过再生室,其间有新生血管;神经电生理检查A 组再生神经传导速度优于B 、C 组,差异有统计学意义(P <0 05),B 、C 组再生神经传导速度差别无统计学意义,组间比较(P >0 0167)组间多重比较行Bonferr oni 法检验,取校正 =0 0167)。
S 100免疫组织化学及Lo yez 氏神经染色法显示:A 组神经纤维数多于B 、C 组,差异有统计学意义(P <0 05),B 、C 组再生神经纤维数差别无统计学意义,组间比较(P >0 0167)。
结论 硫酸软骨素酶ABC(chABC)具有促进周围神经再生的作用。
关键词 神经再生;周围神经损伤;硫酸软骨素酶A BC(chA BC)中图分类号 R 332 文献标识码 A 文章编号 1673 5110(2011)03 0021 03Experiment of chondroitinase ABC on sciatic nerve regeneration after never injury in rats W ang H onghui,Chen Q inghan,Yang Yanliang D ep artment of Or thop aedics ,the S econd A f f iliated H os p ital of Zhengz hou Univers ity ,Zhengz hou 450014,ChinaAbstract Objective T o o bser ve the effect o f chondro itinase A BC (chA BC)on sciatic ner ve reg enerat ion Methods Sev enty t wo SD rats wer e r andomly divided into 3g ro ups,24r ats in each g roup T he sciatic nerves on bilateral o f a ll r ats w ere ex posed and a 0 8cm long segment wer e remo ved and br idged w ith chit in chamber chA BC gr oup A ,excipients g ro up B,isot onic saline gr oup C Four and eig ht w eeks after operation,the nerve electr ophysio lo gical and nerve histo log y ex aminatio n w ere ob serv ed Results Four and eig ht w eeks after the operatio n,histolog ical o bser vatio n indicated that the reg enerat ed nerv es in all of g roups passed t hr ough the nerv e r egeneration chamber and ther e w ere reg ener ated blo od v essels in it T he electr ophy siolog i cal examination o f regenerated ner ve show ed that velocity in g ro up A w as hig her than gr oup B and C,the difference w as statis t ically sig nificant (P <0 05) T her e w as no sig nificant difference between gr oup B and C (P >0 0167,multiple compar ison with Bonferr oni adjusted alpha lev el of 0 0167) S 100immuno histochem istry and L oyez's neur al st aining show ed that the num ber of nerve fiber s in g ro up A w as mo re than g roup B and C,t he difference w as statist ically significant (P <0 05) T her e w as no significant difference betw een g ro up B and C (P >0 0167) Conclusion Chondr oit inase A BC (chA BC)has the effect o f pr omot ing peripheral ner ve r eg eneratio n and functional recov eryKey words N ever regeneration;P eripheral ner ve injur y;Chondroitinase ABC (chA BC) 周围神经损伤在临床上非常多见,手术修复离断缺损的神经,往往很难达到理想的效果。
近年来对硫酸软骨素酶ABC 神经再生的促进作用已受到国内外学者的广泛关注,并证明CSPGs 在体内是重要的抑制神经轴突再生的因子之一[1],对其活性进行抑制调控将有助于治疗人类周围神经损伤。
本实验首次设计在甲壳素套管中加入硫酸软骨素酶ABC,观察其促神经再生的效果。
1 材料与方法1 1 材料 制作可吸收甲壳素神经导管、赋形剂PL GA、chA BC P LG A微球。
1 2 动物分组及模型建立 将72只大鼠随机分为3组。
每组24只。
以10%水合氯醛溶液按30~35mL/kg腹腔内麻醉。
充分游离并切断坐骨神经。
10 0无创缝合线导人缝合法缝合两神经断端外膜于甲壳素管内各1 5~2mm,并留有6~7mm间隙,形成神经再生室。
A组再生室内放入chA BC P LG A微球20 l,B组再生室内放入PL G A微球20 l。
C组再生室内放入等渗盐水20 l。
实验后逐层缝合,局部应用青霉素,待麻醉清醒后分笼饲养。
1 3 检测方法 术后应用A SB240U生物信号采集系统测量再生神经传导速度,S 100免疫组织化学及L oyez氏神经染色法组织学检测阳性再生神经数目。
Imag e Pr o Plus6 0图像分析系统作图像分析。
1 4 统计学处理 实验数据用标准差表示,应用SPSS16 0统计软件进行分析。
P<0 05视为有统计学意义。
总体均数有差异时采用Bo nfer ro ni检验进行多重比较取校正 = 0 0167。
2 结果2 1 大体观察 A、B组中各有1只大鼠分别在术后5d和9d时死亡,C组大鼠全部存活至术后8周。
各组切口无感染。
A、B组中2只出现足溃疡足踝部红肿,术后8周溃疡已有愈合。
各组大鼠坐骨神经支配区域肌肉有不同程度萎缩。
术后4周、8周,再生室内均有再生组织连接神经缺损。
神经表面有大量纤维组织并可见明显细小血管通过。
2 2 再生神经电生理检查 术后各组均可检测到神经动作电位,术后4周,8周时分组效应有统计学意义(P< 0 0167)。
表明再生神经传导速度随着干预方法不同而有差异。
Bonfer roni法多重比较的结果显示:A组的效果优于空白组与赋形剂组(P<0 05),B组与C组比较效果差别无统计学意义(P=0 037,P>0 0167)。