06核酸的提取及其组分的鉴定
核酸的提取与鉴定实验报告
核酸的提取与鉴定实验报告一、实验目的1、掌握从生物样本中提取核酸（DNA 或 RNA）的基本原理和方法。
2、学习使用各种试剂和仪器进行核酸提取的操作步骤。
3、了解核酸鉴定的常用方法及其原理。
4、培养实验操作技能和科学研究的严谨态度。
二、实验原理核酸包括脱氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA），是生物体遗传信息的携带者。
核酸提取的基本原理是利用细胞裂解液将细胞破碎，使核酸释放出来，然后通过一系列的物理和化学方法将核酸与其他细胞成分分离，最后得到纯度较高的核酸样品。
DNA 提取常用的方法有酚氯仿抽提法、盐析法等。
酚氯仿抽提法是利用酚和氯仿的混合液去除蛋白质，然后通过乙醇沉淀得到 DNA。
盐析法是利用高浓度的盐使蛋白质变性沉淀，从而分离出 DNA。
RNA 提取常用的方法有异硫氰酸胍法、Trizol 法等。
Trizol 法是基于异硫氰酸胍和酚的作用，能够有效地裂解细胞并抑制 RNA 酶的活性，从而提取出完整的 RNA。
核酸鉴定的方法主要有紫外分光光度法、琼脂糖凝胶电泳法等。
紫外分光光度法通过测定核酸在 260nm 和 280nm 处的吸光度值（A260 和 A280）来评估核酸的纯度和浓度。
A260/A280 的比值在 18 20 之间表示 DNA 纯度较高，在 19 21 之间表示 RNA 纯度较高。
琼脂糖凝胶电泳法则是根据核酸分子在电场中的迁移率不同来分离和鉴定核酸，DNA 分子在琼脂糖凝胶中迁移距离与分子量大小成反比，RNA 通常会呈现出 28S、18S 和 5S 三条带。
三、实验材料与仪器1、实验材料新鲜的动物组织（如肝脏、肌肉等）或培养的细胞。
大肠杆菌菌液。
2、实验试剂细胞裂解液（含蛋白酶 K）。
酚氯仿混合液（酚：氯仿＝ 1:1）。
无水乙醇、75%乙醇。
3M 醋酸钠（pH 52）。
Trizol 试剂。
异丙醇。
RNA 酶抑制剂。
琼脂糖。
50×TAE 电泳缓冲液。
核酸染料（如 EB 或 GelRed）。
核酸成分实验报告
一、实验目的1. 学习核酸的提取方法。
2. 鉴定核酸的组成成分，包括戊糖、磷酸和碱基。
3. 掌握比色法测定核酸含量的原理和方法。
二、实验原理核酸是生物体内的重要生物大分子，包括核糖核酸（RNA）和脱氧核糖核酸（DNA）。
核酸的组成成分主要包括戊糖、磷酸和碱基。
本实验通过提取动物组织中的核酸，鉴定其组成成分，并测定核酸含量。
1. 核酸提取：利用组织匀浆和酚-氯仿法提取动物组织中的核酸。
2. 组成成分鉴定：通过酸水解法使核酸水解，然后利用比色法分别测定戊糖、磷酸和碱基的含量。
3. 核酸含量测定：利用定磷法测定核酸中的磷含量，进而推算出核酸含量。
三、实验器材与试剂1. 实验器材：组织匀浆器、离心机、分光光度计、电炉、水浴锅、试管、吸管、刻度管、容量瓶等。
2. 实验试剂：动物组织匀浆剂、酚、氯仿、异丙醇、NaCl、NaOH、HCl、磷酸二氢钾、钼酸铵、硫酸等。
四、实验步骤1. 核酸提取：（1）取动物组织匀浆剂，加入动物组织匀浆，匀浆后加入酚-氯仿混合液（1:1），充分振荡，静置分层。
（2）将上层含核酸的酚相转移至新试管中，加入等体积的氯仿，充分振荡，静置分层。
（3）将上层含核酸的氯仿相转移至新试管中，加入等体积的异丙醇，充分振荡，静置沉淀。
（4）弃去上清液，将沉淀用少量70%乙醇洗涤，弃去洗涤液，真空干燥，得到核酸粗制品。
2. 组成成分鉴定：（1）戊糖鉴定：将核酸粗制品溶解于水中，加入浓HCl，沸水浴水解30分钟，加入苯酚-硫酸试剂，观察颜色变化。
（2）磷酸鉴定：将核酸粗制品溶解于水中，加入浓HCl，沸水浴水解30分钟，加入钼酸铵试剂，观察颜色变化。
（3）碱基鉴定：将核酸粗制品溶解于水中，加入浓HCl，沸水浴水解30分钟，加入硝酸钠试剂，观察颜色变化。
3. 核酸含量测定：（1）标准曲线绘制：配制一系列不同浓度的标准磷溶液，测定其在特定波长下的吸光度，绘制标准曲线。
（2）样品测定：将核酸粗制品溶解于水中，加入浓HCl，沸水浴水解30分钟，加入钼酸铵试剂，测定其在特定波长下的吸光度，从标准曲线上查得磷含量，进而推算出核酸含量。
四、核酸提取及鉴定
倾去上清液，即得到核酸钠的白色沉淀
3.核酸水解
含有核酸离心管
加入5%H2SO4溶液3ml
用玻棒搅匀，在沸水中加热8-10分钟
核酸水解液
4.RNA和DNA成分鉴定
1）磷酸的鉴定：
水解 液 5％硫 钼酸铵试 氨基萘酚 酸 剂 磺酸
试剂（滴）
观察变化
测定管 对照管
10 —
在沸水浴中加热至沸2分钟
取出流水冷却后离心（3000转/分，3分钟）
倾去上层酒精液，离心管倒置于滤纸上，倒干乙醇
沉淀物中再加入 10%NaCl溶液4ml搅匀
再置于沸水浴中加热5分钟，用玻棒不断搅拌
取出流水冷却后再离心（3000转 /分，3分钟）
将上清液倒入小烧杯内
取等量95%乙醇，逐滴加入小烧杯
白色沉淀物，静置2分钟，转入离心管
【实验原理】
一、动物细胞中核酸的存在形式 二、核酸分离 肝匀浆
三氯醋酸沉淀出核蛋白 95%乙醇加核蛋白中分离出核酸(钠盐形式)
乙醇沉淀核酸钠
三、核酸水解
核酸（DNA+RNA）
硫酸
碱基（嘌呤、嘧啶）+戊糖（核糖、脱氧核糖） +磷酸
【实验原理】
— 10
10 10
20 20
沸水浴加 热至变色
2.核糖的鉴定
试剂（滴） 水解液 5％硫酸 3、5— 观察变化 二羟甲苯
6
测定管
10
—
对照管
—
10
6
沸水浴加 热至变色
离心机使用注意事项：
1.记住离心管编号；
2.离心管必须先平衡后才对称放入离心
机； 3.避免液体洒在离心机上面或钻头中；
实验十六：动物组织中核酸的提取及其组成成分的鉴定 实验报告
实验十六动物组织中核酸的提取及其组成成分的鉴定【实验名称】：动物组织中核酸的提取及其组成成分的鉴定09救援一班第三大组李岚宇2009222336室温：20°（一）实验目的：1、学习离心技术，掌握离心机的使用方法。
2、了解本实验的设计思路。
（二）实验原理：核酸包括两个部分：核糖核酸（RNA）、脱氧核糖核酸（DNA），广泛存在于生物细胞中，本实验从动物肝组织分离提取RNA和DNA，用酸水解法使之水解产生其基本组成成分，戊糖、磷酸和碱基，然后分离鉴定。
动物组织细胞中的RNA和DNA大部分与蛋白质结合而形成核蛋白，核蛋白可被三氟醋酸沉淀，再用95％乙醇加热可以去除附着在沉淀上的脂类杂质，然后用10％Nacl溶液提取出核酸的钠盐，再加入乙醇使核酸钠沉淀出。
核酸钠微溶于冷水，不溶于乙醇，加热时核酸的钠盐形成清澈的溶液。
RNA和DNA均可以被硫酸水水解，生成磷酸、嘌呤与嘧啶碱基和戊糖。
①、磷酸与钼酸铵作用产生磷钼酸，后者在还原剂的氨基萘酚磺酸作用下形成兰色的钼兰。
②、嘌呤碱能与硝酸银作用产生灰褐色的絮状嘌呤银化合物。
③、核糖经浓硫酸或浓盐酸作用则生成糖醛，后者能和3、5二羟甲苯反应生成绿色复合物。
④、脱氧核糖在浓酸中生成ω—羟基γ—酮基戊醛，它和二苯胺作用生成兰色化合物。
（三）实验材料与仪器:1、材料：猪肝、2％三氯醋酸、95％乙醇、5％硫酸、浓氨水、钼酸铵、3、5-二羟甲苯、二苯胺、5％硝酸银、氨基萘酚磺酸、。
2、器材：离心管、离心机、玻璃棒、滤纸、小烧杯、水域加热炉、10ml试管、沸水浴锅。
（四）实验步骤1、制备匀液：称取新鲜猪肝置于研钵中加入细沙少许，充分研磨制备成匀液，加入等量的生理盐水。
2、分离抽提：①将肝匀浆倒入离心管内，立即加入2％三路醋酸4ml，用玻璃棒搅拌，然后静止3分钟，离心3500转每分钟，离心2分钟。
②、倾去上层酒精液，在沉淀中加入10％NaCl溶液4ml搅匀，再置于沸水中加热8分钟，并用玻璃棒不断搅拌，取出冷却后在离心（3500转每分钟，2分钟）。
核酸的分离纯化及鉴定技术生化分析描述
核酸的分离纯化及鉴定技术生化分析描述一、核酸的分离纯化技术1.超声破碎法超声破碎法是一种通过超声波的振动作用破碎细胞膜，释放细胞内的核酸分子的方法。
该方法操作简便，效果较好。
2.酚-氯仿提取法酚-氯仿提取法是一种经典的核酸提取方法，通过酚和氯仿相间重复萃取的方法，将细胞或组织中的核酸分子提取到有机相中，然后用酒精沉淀。
3.离心沉淀法离心沉淀法是利用不同物质在不同离心力下沉降速度的不同，将核酸从其他组分中分离出来的方法。
可通过高速离心使核酸沉淀到底部，将上清液中的其他杂质倒掉，最后用缓冲液重悬核酸。
4.配对离心法配对离心法是利用核酸的碱基配对性质，在特定的条件下使目标DNA 与特异性探针配对，然后通过离心将核酸-探针复合物从其他杂质中分离出来。
这种方法常用于核酸的富集和寡核苷酸修饰位点的分析。
二、核酸的鉴定技术1. 紫外-可见分光光度法（UV-Vis）紫外-可见分光光度法是通过核酸分子在紫外光或可见光波长范围内的吸收特性来确定其存在和浓度的方法。
根据核酸中含有的吸收波长为260 nm处的碱基特征吸光峰，可以判断核酸的纯度和浓度。
2.电泳分析法电泳分析法是通过核酸分子在电场中的迁移速率和特定条件下的尺寸分离效应来分析核酸的方法。
主要包括琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳两种方法。
核酸经电泳后可以观察到DNA或RNA在凝胶中的特征性带状图案，确定其分子大小、纯度和带电性。
3.PCR（聚合酶链式反应）PCR是一种常用的核酸鉴定技术，通过特定引物和聚合酶的作用，在体外进行核酸的扩增以达到检测目的。
PCR可用于快速检测目标DNA的存在与否，以及定性和定量分析。
4.基因测序技术基因测序技术是指利用测序反应将核酸序列信息转化为比特（通常指二进制），然后通过计算机软件分析的方法对核酸序列进行鉴定。
常用的基因测序技术有dideoxy测序和串联反应测序。
三、应用核酸的分离纯化及鉴定技术广泛应用于生物医学研究、遗传学、分子生物学、基因工程和疾病诊断等领域。
动物组织中核酸的提取及其组成成分的鉴定
加数滴使呈碱性
10
10
硝酸银
灰褐色沉淀
核糖鉴定
试剂(滴)
核酸水解液 5% H2SO4 3,5-二羟甲苯
管号
1#实验管
2#对照管
4
–
–
4
6
6
沸水加热5min,比较两管颜色.
核糖 浓酸 糖醛 + 3,5二羟甲苯
3H2O
绿色复合物
脱氧核糖鉴定
试剂(滴)
核酸水解液 5% H2SO4 二苯胺试剂
管号
1#实验管
RCF在离心管内不相同，靠转子外最大, 靠中心轴最小，有表可查。
离心机种类及用途
1、低速离心机 常规使用,台式,最大速度3 000~6 000r/min,
RCF可达6 000g。常用于收集细胞、细胞核或 叶绿体等较大的细胞器、抗原-抗体复合物等 粗颗粒沉淀。 2、高速离心机
较大立式，常有制冷系统。最高速率可达 25 000r/min、RCF达60 000g。用于分离微生 物细胞、线粒体、溶酶体等细胞器和蛋白质沉 淀物。
开 始 做 实 验 ！
亚细胞结构的分离
生物颗粒在离心场中所需离心加速度和时间
离心加速度 时间
沉降的组分
100g 4 000g 15 000g 30 000g 100 000g
5min 10min 20min 30min 3~10h
真核细胞 叶绿体 细胞碎片 细胞核 细菌、线粒体 溶酶体、细菌细胞碎片 核糖体
实验步骤
猪
3、超速离心机
一类速度非常高的离心机，最大转速 可超过30 000r/min，最大RCF可达600 000g ，用于沉淀核糖体、膜泡等小的细胞器和 生物大分子。具有精密的制冷、真空装置 4、微。量离心机
组织中核酸的提取与组分的鉴定
教案与讲稿一、教案2005级医学心理，2005级临床动物组织中核酸的课程名称授课专业和班级本科9班，2005级临床本科6提取与组分的鉴定班，2005级药学专科授课学授课内容纸层析鉴定转氨作用4学时时2006.11.27，6、7、8、9节，6、2006.11.30，7、8、9节，1、2、授课地点分析实验室日期节次2006.12.1，3、4节，1、2、3、2006.12.284节教学目的熟悉苯酚法提取动物组织中核酸的原理和操作方法；了解核酸的组成，掌握核酸组分的鉴定方法。
教学重点动物组织中核酸提取的原理和操作方法；核酸组分的鉴定教学难点核酸提取的操作；核酸组分的鉴定教具黑板、粉笔、实验材料、实验仪器等。
教学方法小班讲课动物组织中核酸提取的原理和操作方法10分钟教学过程核酸组分的鉴定10分钟学生实验操作130分钟实验结果观察及讨论分析10分钟（1）刘粤梅朱怀荣主编《生物化学实验教程》（人民卫生出版社）（2）张文峰黄林邦主编《分析与实验检测技术》（江西高校出版社）思考题课后总结影响本次实验的因素？参考书籍二、讲稿（一）实验原理：核酸由磷酸、戊糖、含氮碱基化合物组成，根据戊糖的不同可分为脱氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA）两大类。
由于它们在组织细胞中大部分与蛋白质结合成核蛋白，因此，提取核酸时必须使核酸与蛋白质分离开并去掉蛋白质。
核蛋白可用水从动物组织（实验中用肝）中提取，再用水饱和的酚去蛋白，释放出核酸，最后用乙醇沉淀出核酸。
核酸可被硫酸水解得到磷酸、戊糖、含氮碱基化合物，根据这三种物质的性质特点可用不同的方法加以鉴定：1．磷酸：可与钼酸试剂作用产生磷钼酸，后者在还原剂（如维生素C或氨基萘酚磺酸等）作用下可立即被还原成蓝色的钼蓝，其颜色的深浅与磷的含量成正比。
2．含氮碱基化合物：嘌呤碱可与硝酸银作用生成灰褐色的絮状嘌呤银。
3．戊糖：核糖：与浓酸（浓盐酸或浓硫酸）共热得到糠醛，后者与3，5-二羟甲苯缩合而成绿色化合物。
核酸的鉴定实验报告
一、实验目的1. 熟悉核酸提取、纯化及鉴定的基本原理和方法。
2. 掌握使用紫外分光光度计测定核酸浓度和纯度的技术。
3. 了解核酸的组成成分，包括DNA和RNA，并学会区分它们。
4. 鉴定核酸的完整性。
二、实验原理核酸是生物体内重要的生物大分子，包括DNA和RNA两种。
DNA主要存在于细胞核中，携带遗传信息；RNA则主要存在于细胞质中，参与蛋白质合成等生命活动。
1. 核酸提取：利用细胞破碎、盐析、有机溶剂抽提等方法，将核酸从细胞或其他生物材料中提取出来。
2. 核酸纯化：通过离心、凝胶电泳、柱层析等方法，去除提取过程中混入的杂质，得到纯净的核酸。
3. 核酸鉴定：利用紫外分光光度计测定核酸的浓度和纯度；通过琼脂糖凝胶电泳观察核酸的分子量大小和完整性；通过核酸序列分析确定核酸的种类和碱基序列。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：大肠杆菌细胞、质粒DNA、RNA提取试剂盒、琼脂糖、TAE缓冲液、DNA Marker、DNA电泳试剂盒等。
2. 实验仪器：紫外分光光度计、凝胶成像系统、PCR仪、电泳仪、离心机、冰箱等。
四、实验步骤1. 核酸提取：- 将大肠杆菌细胞用超声波破碎。
- 加入RNA提取试剂盒中的试剂，进行细胞裂解和核酸释放。
- 离心分离细胞碎片和核酸。
- 收集上清液，即为提取的核酸。
2. 核酸纯化：- 将提取的核酸用乙醇沉淀。
- 离心收集沉淀，用无菌水洗涤沉淀。
- 离心收集沉淀，即为纯化的核酸。
3. 核酸鉴定：- 浓度和纯度测定：- 将纯化的核酸用紫外分光光度计测定A260/A280值，计算核酸的浓度和纯度。
- 分子量大小和完整性鉴定：- 将纯化的核酸进行琼脂糖凝胶电泳。
- 用DNA Marker作为参照，观察核酸的分子量大小和完整性。
- 核酸种类鉴定：- 对提取的核酸进行PCR扩增，检测DNA和RNA的存在。
五、实验结果与分析1. 浓度和纯度测定：- 核酸A260/A280值为1.8，说明核酸纯度较高。
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