实验__蛋白质及氨基酸的呈色反应
蛋白质的性质实验报告
蛋白质的性质实验报告蛋白质的性质实验(一)蛋白质的性质实验（一）蛋白质及氨基酸的呈色反应一、目的1．了解构成蛋白质的基本结构单位及主要连接方式。
2．了解蛋白质和某些氨基酸的呈色反应原理。
3．学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法。
二、呈色反应（一）双缩脲反应1．原理尿素加热至180℃左右，生成双缩脲并放出一分子氨。
双缩脲在碱性环境中能与Cu2+结合生成紫红色化合物，此反应称为双缩脲反应。
蛋白质分子中有肽键，其结构与双缩脲相似，也能发生此反应。
可用于蛋白质的定性或定量测定。
双缩脲反应不仅为含有两个以上肽键的物质所有。
含有一个肽键和一个—CS—NH2，—CH2—NH2，—CRH—NH2，—CH2—NH2—CHNH2—CH2OH或—CHOHCH2NH2等基团的物质以及一切蛋白质或二肽以上的多肽都有双缩脲反应，但有双缩脲反应的物质不一定都是蛋白质或多肽。
2．试剂3．操作取少量尿素结晶，放在干燥试管中。
用微火加热使尿素熔化。
熔化的尿素开始硬化时，停止加热，尿素放出氨，形成双缩脲。
冷后，加10％氢氧化钠溶液约1mL，振荡混匀，再加1％硫酸铜溶液1滴，再振荡。
观察出现的粉红颜色。
要避免添加过量硫酸铜，否则，生成的蓝色氢氧化铜能掩盖粉红色。
向另一试管加卵清蛋白溶液约1mL和10％氢氧化钠溶液约2 mL，摇匀，再加1％硫酸铜溶液2滴，随加随摇。
观察紫玫瑰色的出现。
（二）茚三酮反应1．原理除脯氨酸、羟脯氨酸和茚三酮反应产生黄色物质外，所有α-氨基酸及一切蛋白质都能和茚三酮反应生成蓝紫色物质。
β-丙氨酸、氨和许多一级胺都呈正反应。
尿素、马尿酸、二酮吡嗪和肽键上的亚氨基不呈现此反应。
因此，虽然蛋白质和氨基酸均有茚三酮反应，但能与茚三酮呈阳性反应的不一定就是蛋白质或氨基酸。
在定性、定量测定中，应严防干扰物存在。
该反应十分灵敏，1∶1500000浓度的氨基酸水溶液即能给出反应，是一种常用的氨基酸定量测定方法。
茚三酮反应分为两步，第一步是氨基酸被氧化形成CO2、NH3和醛，水合茚三酮被还原成还原型茚三酮；第二步是所形成的还原型茚三酮同另一个水合茚三酮分子和氨缩合生成有色物质。
大学生物化学实验
生物化学实验安排实验一蛋白质及氨基酸的呈色反应一、实验目的1、了解构成蛋白质的基本结构单位及主要联接方式2、了解蛋白质和某些氨基酸的呈色反应原理3、学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法二、实验原理1. 双缩脲反应(biuret reaction)蛋白质和多肽分子中肽键在稀碱溶液中与硫酸铜共热，呈现紫色或红色，此反应称为双缩脲反应，双缩脲反应可用来检测蛋白质水解程度。
2. 茚三酮反应(ninhydrin reaction)蛋白质经水解后产生的氨基酸也可发生茚三酮反应。
3.苯环的黄色反应Tyr+ 浓硝酸黄色TrpPhe+少量浓硫酸+浓硝酸黄色4. 乙醛酸的反应：检测Trp或含Trp蛋白质的反应。
当Trp与乙醛酸和浓硫酸在试管中滴加时，产生分层现象，界面出现紫色环。
主要是由于蛋白质中的吲哚环作用。
5. 偶氮反应偶氮化合物都含有-N=N-这样结构，通常作为染料。
6. 醋酸铅反应()↓--→+--+Pb COO NH Pb COOH N H 2222Pr Pr三、实验步骤1. 双缩脲反应(biuret reaction)取1支试管，加乳蛋白溶液（蛋清：水= 1：9）约1ml 和10%NaOH 约2ml ，摇匀，再加1%CuSO4溶液2滴，随加随摇。
观察现象，记录。
2. 茚三酮反应(ninhydrin reaction)（1）取2支试管分别加入蛋白质溶液（蛋清：水= 1：9）和甘氨酸溶液1ml ，再各加0.5ml0.1%茚三酮，混匀，沸水浴中加热1-2分钟，观察颜色是否由粉红色变紫红色再变蓝色。
（2）在一块小滤纸上滴1滴0.5%的甘氨酸溶液，风干后再在原处滴1滴0.1%茚三酮乙醇溶液，在微火旁烘干显色，观察是否有紫红色斑点的出现。
3. 苯环的黄色反应向6个试管中按下表加试剂，观察现象并记录。
鸡蛋清溶液（蛋清：水= 1：9）4. 乙醛酸的反应：向3个试管中按下表加试剂，观察现象并记录。
蛋白质溶液（蛋清：水= 1：20）5. 偶氮反应向3个试管中按下表加试剂，观察现象并记录。
最新实验一 蛋白质及氨基酸的显色反应(验证)
操作步骤:
一、取一支试管加4滴0.5%苯酚溶液，再加浓 硝酸2滴，观察黄色出现，冷却后逐滴加入10% 氢氧化钠溶液，观察颜色转变为橙色。
紫红色铜双缩脲复合物分子结构为：
蛋白质和多肽都有双缩脲反应，但有双缩 脲反应的物质不一定都是蛋白质或多肽。此反 应所产生颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比， 而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关。
操作步骤
一、取少量尿素结晶，放入干燥试管中，用微火 加热使尿素熔化。熔化的尿素开始硬化时，停 止加热，尿素放出氨，形成双缩脲。冷却后， 加10%NaOH溶液约1mL，振荡混匀，再加入 1%CuSO４溶液1滴，振荡之。观察出现的粉红颜 色。避免添加过量硫酸铜，生成的蓝色氢氧化 铜能掩盖粉红色。
二、在一小片滤纸上滴上一滴0.5%的甘氨酸 溶液，风干后，再在原处滴0.1%的茚三酮 乙醇溶液一滴，在微火旁烘干显色，观察 紫红色斑点的出现。
Ⅲ、黄色反应 (Xanthoproteic reaction)
原理
凡是含有苯环的化合物都能与浓硝酸作用 产生黄色的硝基苯衍生物。该化合物在碱性 溶液中进一步转化成深橙色的硝醌酸钠。
管号
１
0
0.3％ 蛋白质 20％ α －萘 NaClO 现象
精氨 溶液 NaOH 酚
记录
酸
0
5
5
3
6
２
0
5
0
5
3
6
３
5
0
0
5
3
6
Ⅴ、乙醛酸反应 (AdamkiewicaHopkins-Cole reaction)
实验二蛋白质及氨基酸的显色反应
偶氮反应
试剂 （滴） 管号 0.3％ 组氨酸 （滴） 鸡蛋清 （滴） 偶氮试 剂 20％ NaOH溶 液 现象记 录
1
4
8
2
2
4
8
2
反应名称
反应基团
反应产物及现 象
操作步骤
向试管中加数滴蛋白质溶液，再加冰醋酸
(常含有少量乙醛酸或醛类)约1mL并混匀倾 斜试管，谨慎地沿着管壁加浓硫酸(AR)约 1mL，使其重迭，且勿摇匀。静置后，观察 在两液界面上出现的红紫色环，于水浴中
乙醛酸反应
试剂 （滴） 管号 白明胶 0.3％ 色氨酸 （滴） 蛋白质 溶液 （滴） 冰醋酸 （ml） 浓硫酸 （ml） 现象记 录
该反应灵敏度达 1：250 000。因此常用于定量 测定精氨酸的含量和定性鉴定含有精氨酸的蛋白质。
操作步骤
取2支试管，分别加入1mL 0.3%精氨酸 溶液和蛋白溶液，各加20%氢氧化钠溶液5 滴，1%α-萘酚酒精溶液2滴，次氯酸钠溶 液6滴，摇匀，放置片刻，观察出现的颜色。
坂口 5 5 3 6 H2O 0.3％ 精氨 酸 蛋白质 20％ NaOH 溶液 α －萘 NaClO 现象 酚 记录
结构与双缩脲类似，也能发生此反应，生成蓝紫
色或紫红色的配合物。该反应常用于蛋白质的定 性或定量测定。此反应所产生颜色的深浅与蛋白 质的浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成
紫红色铜双缩脲复合物分子结构为：
一、取少量尿素结晶，放入干燥试管中，用微火加 热使尿素熔化。熔化的尿素开始硬化时，停止加 热，尿素放出氨，形成双缩脲。冷却后，加 10%NaOH溶液约1mL，振荡混匀，再加入 1%CuSO４ 溶液1滴，振荡之。观察出现的粉红颜 色。（避免添加过量硫酸铜，生成的蓝色氢氧化 铜能掩盖粉红色 二、取另一支试管，加 1mL蛋白质溶液和10%氢氧 化钠溶液2mL，摇匀，再加1%硫酸铜溶液两滴， 随加随摇，观察紫玫瑰色的出现。
蛋白质和氨基酸的呈色反应
氨基酸的氧化反应
氧化生成酮或醛
某些氨基酸在氧化条件下可生成 酮或醛，如赖氨酸氧化生成2-氨 基己二酮。
氧化脱羧
某些氨基酸在强氧化剂作用下发 生脱羧反应，生成相应的醛或酮 。
氨基酸的脱羧反应
组氨ห้องสมุดไป่ตู้脱羧
组氨酸在酸性条件下可发生脱羧 反应，生成组胺和二氧化碳。
鸟氨酸脱羧
鸟氨酸在特定条件下可发生脱羧 反应，生成腐胺和二氧化碳。
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纳米技术
纳米技术可以用于制备更灵敏的呈色反应探针和检测器，提高检测的 灵敏度和特异性。
新材料的开发
高分子材料
开发新型的高分子材料，用于制备更稳定、灵敏 的呈色反应试剂和探针。
纳米材料
利用纳米材料，如碳纳米管、量子点等，制备具 有优异性能的呈色反应试剂和探针。
复合材料
开发具有优异光学性能和稳定性的复合材料，用 于呈色反应的检测和诊断。
3
遗传性疾病的研究
呈色反应可以用于研究遗传性疾病的基因突变， 有助于了解疾病的发病机制和遗传规律。
05 蛋白质和氨基酸呈色反应 的未来发展
新技术的应用
生物信息学
利用生物信息学技术，对蛋白质和氨基酸的呈色反应进行深入分析 和预测，提高研究效率和准确性。
人工智能
利用人工智能技术，对呈色反应数据进行自动化处理和模式识别， 实现快速、准确的检测和诊断。
蛋白质和氨基酸的呈 色反应
目录
CONTENTS
• 蛋白质和氨基酸的呈色反应概述 • 蛋白质的呈色反应 • 氨基酸的呈色反应 • 蛋白质和氨基酸呈色反应的应用 • 蛋白质和氨基酸呈色反应的未来发展
01 蛋白质和氨基酸的呈色反 应概述
生物化学实验一蛋白质和氨基酸的呈色反应
实验一蛋白质和氨基酸的呈色反应一、目的要求验证蛋白质特性；学习和掌握蛋白质呈色反应的原理和方法；学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法。
二、实验原理蛋白质中的某些化学键或氨基酸残基中的某些化学基团可以与某些特殊试剂形成特定的有色物质。
这些反应称为蛋白质的呈色反应。
各种蛋白质的氨基酸残基不完全相同。
因此，呈色反应产物的颜色也不完全一样。
呈色反应不是蛋白质所特有，一些非蛋白物质也能呈现类似的呈色反应。
因此，不能仅以呈色反应结果来判别被测物质是否为蛋白质。
三、呈色反应双缩脲反应1.原理两分子尿素经加热至180°C后可以缩合成一分子双缩脲，并放出一分子氨。
双缩脲在碱性溶液中与铜离子结合生成紫红色络合物，此反应称为双缩脲反应。
多肽及所有蛋白质均具有肽键，与双缩脲分子中亚酰胺键结构相同，也能发生此反应，因此，蛋白质在碱性溶液中与铜离子也能呈现出类似于双缩脲的颜色反应。
2.器材与试剂1)器材试管、药匙、电炉、试管夹、滴管。
2)试剂〈1〉蛋白质溶液(10%卵清蛋白溶液)：吸取鸡蛋清溶液10ml，加蒸馏水稀释，定容至100ml。
〈2〉10%氢氧化钠溶液。
〈3〉1%硫酸铜(CuSO4)溶液。
〈4〉0.1%甘氨酸(Gly)溶液：称0.1g甘氨酸溶于蒸馏水中，稀释至100ml。
〈5〉结晶尿素。
3.实验步骤双缩脲反应实验(1)制备双缩脲：取结晶尿素少许(约火柴头大小)，放入干燥的小试管中。
微火加热至尿素熔解至硬化，刚硬化时立即停止加热，尿素放出氨，此时双缩脲即已形成。
冷却后作为双缩脲样品(1号管)。
(2)另取3支试管，与1号管一起按表加样，混匀，观察各管颜色变化，记录结果并解释现象。
茚三酮反应1.原理蛋白质或氨基酸在弱碱性条件下，其上的氨基与茚三酮共热可产生蓝紫色缩合物。
此反应为一切蛋白质和α-氨基酸所共有，具有亚氨基的脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应产生特征性的黄色化合物，含有氨基的其他化合物也能呈此反应。
2.器材与试剂1)器材滤纸、试管、试管夹、药匙、电炉、滴管、吸管、水浴锅。
生物化学--蛋白质的性质实验
生物化学实验讲义实验一蛋白质的性质实验——蛋白质及氨基酸的呈色反应及蛋白质的沉淀反应实验目的1．了解构成蛋白质的基本结构单位及主要连接方式。
2．了解蛋白质和某些氨基酸的呈色反应原理。
3．学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法。
4．加深对蛋白质溶液的胶体性质的认识，了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义。
，一、茚三酮反应1.实验原理除脯氨酸、羟脯氨酸和茚三酮反应产生黄色物质外，所有α—氨基酸及一切蛋白质都能和茚三酮反应生成蓝紫色物质。
β-丙氨酸、氨和许多一级胺都呈阳性反应。
尿素、马尿酸、二酮吡唪和肽键上的亚氨基不呈现此反应。
因此，虽然蛋白质和氨基酸均有茚三酮反应，但能与茚三酮呈阳性反应的不一定就是蛋白质或氨基酸。
在定性、定量测定中，应严防干扰物存在。
该反应十分灵敏，1∶1 500 000浓度的氨基酸水溶液即能给出反应，是一种常用的氨基酸定量测定方法。
茚三酮反应分为两步，第一步是氨基酸被氧化形成CO2、NH3和醛，水合茚三酮被还原成还原型茚三酮；第二步是所形成的还原型茚三酮同另一个水合茚三酮分子和氨缩合生成有色物质。
此反应的适宜pH为5~7，同一浓度的蛋白质或氨基酸在不同pH条件下的颜色深浅不同，酸度过大时甚至不显色。
2.材料、仪器与试剂蛋白质溶液；新鲜鸡蛋清溶液（蛋清∶水=1∶9）；0.5%甘氨酸溶液；0.1%茚三酮水溶液；0.1%茚三酮-乙醇溶液3.实验操作①取2支试管分别加入鸡蛋清溶液和0.5%甘氨酸溶液1ml，再各加0.5ml0.1%茚三酮水溶液，混匀，在沸水浴中加热1~2分钟，观察颜色由粉色变紫红色再变蓝。
②在一小块滤纸上滴一滴0.5%甘氨酸溶液，风干后，再在原处滴一滴0.1%茚三酮乙醇溶液，在微火旁烘干显色，观察紫红色斑点的出现。
二、黄色反应1.实验原理含有苯环结构的氨基酸，如酪氨酸和色氨酸，遇硝酸后，可被硝化成黄色物质，该化合物在碱性溶液中进一步形成橙黄色的硝醌酸钠。
多数蛋白质分子含有带苯环的氨基酸，所以有黄色反应，苯丙氨酸不易硝化，需加入少量浓硫酸才有黄色反应。
蛋白质的性质实验一-蛋白质及氨基酸的呈色反应
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掌握蛋白质及氨基酸的溶解性、酸碱 性质、电泳行为等基本理化性质。
了解不同理化性质对蛋白质及氨基酸 功能的影响。
掌握实验操作流程和注意事项
熟悉实验操作步骤，包括试剂准备、 实验操作、结果观察等。
了解实验中需要注意的安全事项和操 作规范，确保实验的准确性和安全性 。
02
实验原理
蛋白质及氨基酸的呈色反应原理
酚酞试剂
与碱性氨基酸（如赖氨酸、精 氨酸）反应，呈现红色。
溴酚蓝试剂
与酸性氨基酸（如谷氨酸、天 冬氨酸）反应，呈现黄色。
茚三酮试剂
与氨基酸反应，呈现蓝紫色。
甲基红试剂
与蛋白质反应，呈现粉红色。
呈色反应在生物科学研究中的应用
蛋白质和氨基酸的定性分析
通过呈色反应可以确定样品中是否存 在目标蛋白质或氨基酸，并对其含量 进行粗略估计。
对未来学习和实践的计划和安排
计划
在未来的学习和实践中，我将继续加强 实验技能训练，提高自己的动手能力和 解决问题的能力。同时，我会积极关注 学科前沿动态，了解最新研究成果和技 术进展。
VS
安排
为了更好地实现个人发展目标，我会制定 合理的学习计划和时间安排，确保高效地 完成学习任务和实验项目。同时，我也会 积极参加学术交流和实践活动，拓展自己 的视野和知识面。
实验结束后，清洗实验器具，确保其清洁 度。
将实验数据整理成表格或图表形式，以便 于分析和比较。
结果分析
报告撰写
根据实验数据和观察结果，分析蛋白质和 氨基酸的性质和特点，得出结论。
根据实验过程和结果，撰写详细的实验报 告，包括实验目的、实验原理、操作步骤 、结果分析和结论等部分。
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黄色反应： （三）黄色反应：
苯酚溶液， 一、取一支试管加 4滴0.5%苯酚溶液，再加浓 滴 苯酚溶液 硝酸2滴 观察黄色出现，冷却后逐滴加入10%氢 硝酸 滴，观察黄色出现，冷却后逐滴加入 氢 氧化钠溶液，观察颜色转变为橙色。 氧化钠溶液，观察颜色转变为橙色。
滴及浓硝酸2滴 二、取一支试管加蛋白质溶液 4滴及浓硝酸 滴，由于强酸的作 滴及浓硝酸 开始蛋白质形成白色沉淀，小火加热，则沉淀变为黄色， 用，开始蛋白质形成白色沉淀，小火加热，则沉淀变为黄色， 冷却之，逐滴加入10%氢氧化钠溶液，颜色由黄色转变成深 氢氧化钠溶液， 冷却之，逐滴加入 氢氧化钠溶液 橙黄色。 橙黄色。 剪少许指甲或头发放入试管中，加入数滴浓硝酸， 三、剪少许指甲或头发放入试管中，加入数滴浓硝酸，观察颜 色变化。 色变化。
HO
NO + H2O 2
OH HO NO + Na 2 OH O N OH
(四)坂口反应 (Sakaguchi reaction)
在次溴酸钠或次氯酸钠存在的条件下， 在次溴酸钠或次氯酸钠存在的条件下，许多含有胍基的化合物 (如 如 胍乙酸、甲胍、胍基丁胺等 能与 萘酚发生反应生成红色物质。 能与α-萘酚发生反应生成红色物质 胍乙酸、甲胍、胍基丁胺等)能与 萘酚发生反应生成红色物质。在20种 种 氨基酸中唯有精氨酸含有胍基，所以只有它呈正反应。 氨基酸中唯有精氨酸含有胍基，所以只有它呈正反应。 生成的氨被次溴酸钠氧化生成氮。该反应中过量的次溴酸钠是不利的， 生成的氨被次溴酸钠氧化生成氮。该反应中过量的次溴酸钠是不利的， 因其能进一步缓慢氧化，使产物破裂分解，引起颜色消失。但加入适量 因其能进一步缓慢氧化，使产物破裂分解，引起颜色消失。 尿素可破坏过量的次溴酸钠。酪氨酸、 尿素可破坏过量的次溴酸钠。酪氨酸、色氨酸和组氨酸也能降低产生颜 色的强度。甚至会阻止颜色的生成。 色的强度。甚至会阻止颜色的生成。 该反应灵敏度达 1：250 000。因此常用于定量测定精氨酸的含量和定性 ： 。 鉴定含有精氨酸的蛋白质。 鉴定含有精氨酸的蛋白质。 。
㈤乙醛酸反应
向试管中加数滴蛋白质溶液，再加冰醋酸 (常 含有少量乙醛酸或醛类)约1mL并混匀倾斜试 管，谨慎地沿着管壁加浓硫酸(AR)约1mL， 使其重迭，且勿使二者混合。静置后，观察 在两液界面上出现的红紫色环，于水浴中微 热，可加快色环形成。 用20%的白明胶作乙醛酸反应。观察结果。
思考题：
实验材料
试剂 （一）试剂
1、 卵清蛋白溶液 2、10% 氢氧化钠溶液 、 、 3、1% 硫酸铜溶液 4、尿素 、 、 5、0.5%甘氨酸溶液 6、 0.1%茚三酮水溶液 、 、 7、0.1%茚三酮乙醇溶液 茚三酮乙醇溶液 、 8、0.5%苯酚溶液 苯酚溶液 9、浓硝酸 、 、 10、0.3%色氨酸溶液 、 12、考马斯亮蓝染液 、 11、0.3%酪氨酸溶液 、 13、大豆提取液 、
(四)坂口反应 支试管， 取 2支试管，分别加入 支试管 分别加入1mL 0.3%精氨酸溶液和蛋 精氨酸溶液和蛋 白溶液，各加20%氢氧化钠溶液 滴，1%α-萘酚 氢氧化钠溶液5滴 白溶液，各加 氢氧化钠溶液 萘酚 酒精溶液2滴 次溴酸钠溶液 滴 摇匀， 酒精溶液 滴，次溴酸钠溶液6滴，摇匀，放置片 观察出现的颜色。 刻，观察出现的颜色。
OH + OH R
H C NH 2 COOH
H + OH RC H O + NH 3 + CO 2
蓝紫色复合物
黄色反应(Xanthoproteic reaction) （三）黄色反应
该化合物在碱性溶液中进一步转化成深橙色的硝醌酸钠 .
含
凡是含有苯环的化合物都能与浓硝酸作用产生黄色的硝基苯衍生物。 凡是含有苯环的化合物都能与浓硝酸作用产生黄色的硝基苯衍生物。
器材 （二）器材
1、试管及试管架 、 4、量筒 、量筒 2、水浴锅 3、酒精灯（或电热套） 、水浴锅 、酒精灯（或电热套） 5、滤纸片 6、滴管 、滴管 、
实验操作
双缩脲反应： （一）双缩脲反应：
取少量尿素结晶，放入干燥试管中，用微火加热使尿素熔化。 一、取少量尿素结晶，放入干燥试管中，用微火加热使尿素熔化。熔化的 尿素开始硬化时，停止加热，尿素放出氨，形成双缩脲。冷却后， 尿素开始硬化时，停止加热，尿素放出氨，形成双缩脲。冷却后，加 10%NaOH溶液约 10%NaOH溶液约1mL，振荡混匀，再加入1%CuSO ４ 溶液1滴，振荡之。 溶液约1mL，振荡混匀，再加入1%CuSO 溶液1滴 振荡之。 观察出现的粉红颜色。避免添加过量硫酸铜， 观察出现的粉红颜色。避免添加过量硫酸铜，生成的蓝色氢氧化铜能掩盖 粉红色。 粉红色。 取另一支试管， 卵清蛋白溶液和10%氢氧化钠溶液 氢氧化钠溶液2mL，摇匀， 二、取另一支试管，加 1mL卵清蛋白溶液和 卵清蛋白溶液和 氢氧化钠溶液 ，摇匀， 再加1%硫酸铜溶液两滴，随加随摇，观察紫玫瑰色的出现。 再加 硫酸铜溶液两滴，随加随摇，观察紫玫瑰色的出现。 硫酸铜溶液两滴
在蛋白质分子中酪氨酸和色氨酸残基易发生上述反应， 在蛋白质分子中酪氨酸和色氨酸残基易发生上述反应，而苯丙氨酸不易硝 需加少量浓硫酸催化才能呈明显的正反应。皮肤、指甲、 化，需加少量浓硫酸催化才能呈明显的正反应。皮肤、指甲、头发等遇 浓硝酸变黄即为这一反应的结果。 浓硝酸变黄即为这一反应的结果。
OH + HNO 3
1.如果蛋白质水解作用一直进行到双缩脲反 如果蛋白质水解作用一直进行到双缩脲反 应呈阴性结果， 应呈阴性结果，此时可对水解程度作出什么 结论? 结论 2.能否用茚三酮反应可靠地鉴定蛋白质的存 能否用茚三酮反应可靠地鉴定蛋白质的存 在? 3.白明胶对乙醛酸反应呈阴性，为什么? 白明胶对乙醛酸反应呈阴性，为什么 白明胶对乙醛酸反应呈阴性
茚三酮反应： （二）茚三酮反应：
支试管分别加入蛋白质溶液和0.5%甘氨酸溶液 甘氨酸溶液1mL，再加 一、取 2支试管分别加入蛋白质溶液和 支试管分别加入蛋白质溶液和 甘氨酸溶液 ，再加0.5mL 0.1%茚三酮水溶液混匀，在沸水浴中加热 ～2min，观察颜色由粉色变 茚三酮水溶液混匀，在沸水浴中加热1～ 茚三酮水溶液混匀 ， 成紫红色再变蓝。 成紫红色再变蓝。 二 、 在一小片滤纸上滴上一滴 0.5%的甘氨酸溶液， 风干后，再在原处滴 的甘氨酸溶液， 风干后， 的甘氨酸溶液 0.1%的茚三酮乙醇溶液一滴，在微火旁烘干显色，观察紫红色斑点的出 的茚三酮乙醇溶液一滴，在微火旁烘干显色， 的茚三酮乙醇溶液一滴 现 。
实验五
蛋白质及氨基酸的呈色反应
一
实验目的
1、了解构成蛋白质的基本结构单位和主要连接方式。 、了解构成蛋白质的基本结构单位和主要连接方式。 2、了解蛋白质和某些氨基酸的呈色反应原理。 、了解蛋白质和某些氨基酸的呈色反应原理。 3、学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法。 、学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法。
㈤乙醛酸反应 (Adamkiewica-HopkinsCole reaction)
在浓硫酸存在下，色氨酸与乙醛酸反应生 成紫色物质，反应机理尚不清楚，可能是一 分子乙醛酸与两分子色氨酸脱水缩合形成与 靛蓝相似的物质。 色氨酸在浓硫酸中与一些醛类反应也形成 有色物质。很多人用含有少量醛杂质的冰醋 酸或芳香醛等进行此反应。硝酸根、亚硝酸 根、氯酸根及过多的氯离子均能妨碍此反应， 有微量硫酸铜或 Fe ３＋ 离子存在时，可以 加强色氨酸的阳性反应。
茚三酮反应(Ninhydrin reaction) (二) 茚三酮反应
除脯氨酸、羟脯氨酸和茚三酮反应生成黄色物质外，所有的 除脯氨酸、羟脯氨酸和茚三酮反应生成黄色物质外，所有的α氨基酸 及一切蛋白质都能和茚三酮反应生成蓝紫色物质。该反应分两步进行， 及一切蛋白质都能和茚三酮反应生成蓝紫色物质。该反应分两步进行，首 先是氨基酸被氧化， 和醛 先是氨基酸被氧化，产生 CO ２ 、NH 3 和醛，而水合茚三酮被还原成还原 型茚三酮； 型茚三酮；第二步是所生成之还原型茚三酮与另一个水合茚三酮分子和氨 缩合生成有色物质。此反应的适宜pH为5～7，同一浓度的蛋白质或氨基酸 缩合生成有色物质。此反应的适宜 为 ～ ， 在不同pH条件下的颜色深浅不同，酸度过大时甚至不显色。 在不同 条件下的颜色深浅不同，酸度过大时甚至不显色。该反应十分灵 条件下的颜色深浅不同 浓度的氨基酸水溶液即能显示反应， 敏，1：1 500 000浓度的氨基酸水溶液即能显示反应，因此是一种常用的氨 ： 浓度的氨基酸水溶液即能显示反应 基酸定量方法。但也有些物质对茚三酮也呈类似的阳性反应， 丙氨酸、 基酸定量方法。但也有些物质对茚三酮也呈类似的阳性反应，如β-丙氨酸、 丙氨酸 氨和许多一级胺化合物等。所以定性或定量测定中，应严防干扰物存在。 氨和许多一级胺化合物等。所以定性或定量测定中，应严防干扰物存在。
茚三酮反应分为两步， 茚三酮反应分为两步，第一步是氨基酸被氧化形 和醛， 成CO2、NH3和醛，水合茚三酮被还原成还原型茚 三酮；第二步是所形成的还原性茚三酮同另一个水 三酮； 合茚三酮分子和氨缩合生成有色物质。 合茚三酮分子和氨缩合生成有色物质。
O C C C O O C C C O
O C C C O O C C C O N C C O NH 2 O C + 2 H 2O OH H + C O O C C O + 2NH 3
实验原理
(一) 双缩脲反应(Biurea reaction)
所谓双缩脲反应是指在碱性条件下，双缩脲与二价铜离子作用， 所谓双缩脲反应是指在碱性条件下，双缩脲与二价铜离子作用，生成紫红色配合 物的反应。 180℃左右时 两分子尿素缩合脱去一分子氨，生成双缩脲。 左右时， 物的反应。当加热至 180℃左右时，两分子尿素缩合脱去一分子氨，生成双缩脲。在 肽和蛋白质分子中具有肽键，其结构与双缩脲类似，也能发生此反应， 肽和蛋白质分子中具有肽键，其结构与双缩脲类似，也能发生此反应，生成蓝紫色或 紫红色的配合物。该反应常用于蛋白质的定性或定量测定。应当指出， 紫红色的配合物。该反应常用于蛋白质的定性或定量测定。应当指出，该反应的干扰 因素较多，一些含有一个肽键和一个-CONH 因素较多，一些含有一个肽键和一个-CONH２、-CS-NH ２ 、-CH 2 -NH ２ 等基团 CS的物质也有双缩脲反应。并且NH 对此反应具有严重的干扰，因为NH 的物质也有双缩脲反应。并且NH ３ 对此反应具有严重的干扰，因为NH ３ 与铜离子 可生成深蓝色的铜氨配合物。因此我们可以说蛋白质和多肽都有双缩脲反应， 可生成深蓝色的铜氨配合物。因此我们可以说蛋白质和多肽都有双缩脲反应，但有双 缩脲反应的物质不一定都是蛋白质或多肽。 缩脲反应的物质不一定都是蛋白质或多肽。此反应所产生颜色的深浅与蛋白质的浓度 成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关。 成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关。