Multifors细菌型发酵系统操作规程
发酵车间操作规程

发酵车间操作规程一、引言发酵车间是生物制药过程中至关重要的环节之一,负责培养和发酵微生物,生产出高质量的生物制品。
为了确保发酵车间的安全、高效运行,制定本操作规程,旨在规范操作流程,保证产品质量和生产效率。
二、适合范围本操作规程适合于发酵车间的所有工作人员,包括操作员、技术人员和管理人员。
三、安全操作措施1. 操作人员必须穿戴适当的个人防护装备,包括实验服、手套、口罩和安全鞋。
2. 在操作前,必须对设备进行检查,确保设备正常运行,如发现异常情况应及时报告维修人员。
3. 禁止在发酵车间内吸烟、饮食和饮水。
4. 严禁携带易燃、易爆物品进入车间。
5. 操作人员应定期参加安全培训,了解安全操作规程,并及时更新个人防护装备。
四、操作步骤1. 准备工作a. 检查发酵罐、搅拌器、控制系统等设备是否正常运行。
b. 准备所需的培养基、微生物菌种和其他辅助材料。
c. 检查操作记录表和相关文档是否齐全。
2. 开始发酵a. 将预先准备好的培养基倒入发酵罐中,并加热至适宜温度。
b. 向培养基中接种微生物菌种,并根据菌种要求调整pH值。
c. 启动搅拌器,控制搅拌速度温和体通气速度。
d. 根据工艺要求,定期取样检测发酵液的生长情况和产物含量。
3. 发酵结束a. 根据发酵过程的持续时间,确定发酵结束的时机。
b. 关闭搅拌器温和体通气系统。
c. 将发酵液经过过滤、离心等步骤,得到目标产品。
d. 清洗发酵罐和相关设备,做好记录。
五、质量控制1. 对发酵液进行定期的物理化学指标检测,如pH值、溶氧量、产物含量等。
2. 进行微生物菌种的纯度和活性检测。
3. 对产出的目标产品进行质量检验,确保符合规定的标准。
六、记录与报告1. 操作人员必须按照规定的格式填写操作记录表,详细记录操作过程中的关键参数和观察结果。
2. 发现异常情况或者设备故障时,应及时向主管报告,并进行相应的处理。
3. 定期整理操作记录,形成操作报告,供技术人员和管理人员参考。
微生物发酵操作规程

微生物发酵操作规程一、实验设备和试剂准备1.高压灭菌锅、培养箱、离心机、培养基培养室等设备准备就绪。
2.需要的试剂:培养基、酸碱调节液、营养添加剂、抗泡剂等。
二、细菌接种制备1.从新鲜培养基中挑取一颗菌落,转移到含有适宜培养基的烧杯中。
2.经过短暂的助培养,取适量细胞悬液,加入100毫升含有适宜培养基的培养瓶中。
3.在培养箱内以适宜温度和湿度条件下培养,促进菌体生长。
三、发酵条件控制1.调节培养基的pH值,保持在适宜的范围内。
2.控制培养温度,根据菌株的要求进行调整。
3.控制培养瓶内的搅拌速度和气体流量,以促进氧气和营养物质的供应。
4.根据需要加入抗泡剂,以减少发酵液中的泡沫产生。
四、发酵液的取样分析1.每隔一段时间,取样一次,分析发酵液中细菌生长、代谢产物等指标。
2.制备适当稀释样品,用于测定细菌数量、酶活性等。
3.进行物质的检测,如氨基酸、糖类、酸碱度等。
五、产物提取和纯化1.使用合适的方法取得目标产物,如离心沉淀、超滤、渗析等。
2.对提取的产物进行纯化处理,如柱层析、薄层层析等。
六、发酵液的处理和消毒1.停止发酵后,对发酵液进行处理,如沉淀、浓缩、干燥等。
2.对设备和周边环境进行彻底消毒,以防止交叉污染。
七、记录和数据分析1.记录每次操作的日期、时间、温度、搅拌速度等关键参数。
2.记录细菌生长情况、培养基的消耗情况、产物产率等数据。
3.对数据进行分析,评估发酵过程中的效果,并根据需要进行进一步优化。
八、安全措施1.在操作中需穿戴实验服、手套和口罩,保持良好的个人卫生习惯。
2.注意保持操作区域的卫生,及时清理和消毒。
3.使用酒精灯、高压灭菌锅等设备时,注意安全操作,避免火灾和烫伤。
通过严格遵守微生物发酵操作规程,可以提高发酵过程的可重复性和稳定性,确保所得产物的质量和产出。
同时,规程中的安全措施也能有效保护操作人员的安全。
(发酵室)发酵系统操作规程和注意事项

GRJD-100D发酵系统详细操作规程第一步:准备工作1.取出pH、Do探头,装上堵头,打开夹套排污阀(PWFl、P ⅣF3)和排空阀 (PKF4、PKF8),将夹套内水排净,避免空消时夹套水因高温而膨胀产生高压,损坏罐体,同时也可以节省能源,缩短消毒时间;2.打开控制柜电源,将PLC置于暂停状态,并设定好各参数值;3.开启蒸汽发生器(详见蒸汽发生器操作流程),使蒸汽压力保持在0.3Mpa左右;开启空气压缩机,使压力保持在0.4—0.7Mpa之间;4.将需要补加的料放入补料瓶,装上硅胶管和呼吸器后放入灭菌锅中消毒并自然冷却待用;5.开pH、Do仪表电源,接上pH、Do探头及电缆,按照pH、Do说明书分别对pH、Do探头进行校正。
第二步:过滤器消毒1.由于空气减压阀不能消毒,因此消毒前应关闭通向空气减压阀的阀门(KQFl);2.打开蒸汽发生器出汽阀向外供汽,微开KQF5,使蒸汽通过蒸汽过滤器净化后对空气过滤器进行消毒。
消毒过程中,所有的排空阀都应微微开启,保持蒸汽在整个管路中处于流通状态,排除冷凝水,消除灭菌死角。
3.空气管路部分消毒20—30分钟后,关闭蒸汽阀、同时打开进气阀,用空气将过滤器和管路吹干,约20—30分钟后,关闭排空阀。
注意:过滤器消完毒后,应一直保持有压状态,切勿失压,否则过滤器需重新消毒。
第三步:种子罐罐体空消1.打开与罐体内筒体相连的蒸汽阀门,对罐体进行空消。
2.当罐温升至121℃左右后,调节蒸汽进汽阀和罐盖上的排空阀,使罐压保持在0.11Mpa左右、罐温保持在121℃左右。
3.保持罐温在121℃约30分钟后(保持时间和温度可以根据不同的培养基做些相应调整),关闭所有蒸汽阀进汽阀、排空阀,打开出料阀门,将罐内冷凝水排净后,打开罐顶排汽阀,将罐压将到0。
第四步:种子罐实消1.按照工艺要求,将充分溶解好的培养基从加料口放入罐内。
2.为了减少罐内的冷凝水,先让蒸汽从夹套对发酵液进行预热;开启电机使罐内温度混合均匀(此时PLC上的冷却“手/自动”应置于手动关位置)。
发酵罐Minifors操作规程

Minifors发酵系统操作规程一、灭菌前准备:1.溶氧电极极化:旋开溶解氧电极透析膜,检查内部的电解液是否充足,如不充足,加满电解液,即旋紧透析膜时电解液会溢出即可。
如透析膜表面有创伤,则须更换。
然后将电极连接电极线,电极下端置于水中,开启主机电源,保持过夜(至少6小时)。
2.校准PH电极:将PH电极线路连接好,开机,准备好蒸馏水洗瓶、PH标准液(以PH值为4和7为例)。
按功能键“F”进入PH功能,然后按菜单键“□”到显示Cal,按“+”键选择2,取下电极保护套,将PH电极用蒸馏水清洗,再用滤纸吸干后,置于PH7的标准液中(电极不可与容器接触,电极的透析膜(小白点)须浸没在液面以下),按启动/停止键“⊙”进入校准过程。
待PH示数稳定后按“+”/“-”键调节数值至标准液的PH 值,按启动/停止键“⊙”储存数值,此时左侧屏幕显示2,右侧显示REF,再将PH电极用蒸馏水清洗在用滤纸吸干后,置于PH4的标准液中,按启动/停止键“⊙”,待PH 示数稳定后按“+”/“-”键调节数值至标准液的PH值,按启动/停止键“⊙”储存数值。
此时仪器会显示End,PH校准完成。
3.加培养基:取出温度传感器,拔掉连接在罐盖上的进水进气快插接口和泵头,取下导热板,将马达传动把手上提,双手提起支架后外移,可取出罐体。
再将罐盖上的3个螺栓旋开,取下罐盖将培养基加入,再装回罐盖。
注意:加培养基时需多加少量的水,以平衡灭菌过程的水分散失。
建议在加培养基的同时加少量消泡剂,防止暴沸。
如不打开罐盖,也可以将漏斗置于任意一个开口处,将培养基由漏斗倒入。
4.调整消泡电极高度:松开消泡电极下方的小螺丝(一字螺丝),或是固定环,调节好消泡探头的高度,再将螺丝或固定环旋紧即可。
探头下方与液面一般保持3~5cm的距离。
注:该液面是指在开启搅拌和通气后的液面。
5.PH和溶解氧电极的安装:如果电极过长,则须安装电极适配器(可能有两种)。
将罐盖上相应接口的塞子旋掉。
发酵车间操作规程

发酵车间操作规程一、目的和适合范围本操作规程的目的是确保发酵车间的安全、高效运行,保证产品质量的稳定性和一致性。
适合于所有发酵车间的操作人员。
二、安全要求1. 操作人员必须穿戴符合要求的个人防护装备,包括工作帽、工作服、工作鞋等。
2. 在操作过程中,禁止吸烟、饮食,严禁携带易燃、易爆等危(wei)险物品进入车间。
3. 操作人员必须熟悉车间的安全设施和应急措施,并能熟练操作消防设备。
4. 发酵车间内应保持整洁,禁止乱堆乱放,确保通道畅通。
三、操作流程1. 开始操作前,操作人员应子细阅读工作指导书,并了解所需操作的工艺流程和操作要点。
2. 操作人员应按照操作指导书的要求,准备所需的原料和设备。
3. 操作人员需按照规定的配方,精确称量原料,并将其放入发酵罐中。
4. 在投料过程中,操作人员需注意安全,避免原料的溅出和浪费。
5. 操作人员需根据工艺要求,调整发酵罐的温度、湿度和通风等参数,并确保参数的稳定。
6. 在发酵过程中,操作人员需定期检查发酵罐内的发酵情况,记录温度、酸碱度、气体产生等数据。
7. 如发现异常情况,操作人员应即将采取措施进行调整,确保发酵过程的正常进行。
8. 发酵结束后,操作人员需按照工艺要求,进行发酵液的分离、过滤和杀菌等处理。
9. 操作结束后,操作人员需对设备进行清洁和消毒,确保下次操作的卫生安全。
四、质量控制1. 操作人员需定期进行发酵液的抽样,进行理化指标的检测,确保产品质量的稳定性。
2. 如发现产品质量异常,操作人员应即将报告质量管理部门,并协助进行原因分析和问题解决。
五、记录和报告1. 操作人员需按照规定,详细记录每次操作的日期、时间、温度、湿度、投料量等关键参数。
2. 操作人员需将记录整理成报告,及时提交给上级主管。
六、培训和考核1. 新进人员应接受发酵车间操作规程的培训,并通过考核后方可上岗。
2. 定期进行操作人员的技术培训和考核,确保其操作技能和质量意识的提升。
七、违章和处罚1. 任何违反操作规程的行为都将受到相应的处罚,包括口头警告、书面警告、记过、记大过等。
发酵车间操作规程

发酵车间操作规程一、操作规范1.所有进入发酵车间的人员都必须戴上适当的防护设备,包括工作帽、口罩、手套和工作服等。
2.在进入发酵车间之前,必须先进行洗手,确保双手清洁无菌。
3.在操作发酵设备之前,必须先检查设备的运行状态是否正常,如有异常情况应及时上报上级。
4.在操作过程中,严禁戏谑、闲聊、吃东西、抽烟等不相关行为,确保操作专注。
5.在进行发酵操作时,必须按照操作指导书的步骤进行,不得随意变动或省略任何步骤。
6.遇到突发情况或操作意外时,必须立即上报相关负责人,并进行应急处理措施。
7.在操作发酵设备后,必须做好清洁工作,将设备清洗干净,并对工作区域进行整理和清理。
二、发酵设备操作规范1.发酵罐操作(1)在操作发酵罐前,必须先检查罐体的密封性能,确保发酵过程中不会发生漏气现象。
(2)发酵罐应在设定的温度和湿度范围内进行操作,禁止随意改变温湿度设置。
(3)发酵罐装料时,必须按照标准操作程序进行,不能超过容量限制。
(4)发酵罐发酵过程中,操作人员必须时刻关注发酵情况,及时调整控制参数以保持理想的发酵状态。
(5)发酵罐操作结束后,必须进行彻底清洗和消毒,确保下一批次发酵操作的顺利进行。
2.发酵控制系统操作(1)在操作发酵控制系统前,必须先检查系统的运行状态和所有连接是否正常,确保每个参数的测量准确。
(2)发酵控制系统必须按照设定的操作程序进行操作,禁止随意调整参数或模式。
(3)操作人员必须时刻关注系统运行状态,如发现异常应及时上报。
(4)发酵控制系统操作结束后,要及时关闭系统电源,并进行巡检确认。
三、卫生规范1.操作人员必须定期参加卫生培训,了解卫生规范和操作要求。
2.在操作发酵设备时,必须保持工作区域的清洁整齐,不得有杂物堆放。
3.发酵设备操作结束后,必须进行彻底清洗和消毒,确保无菌环境。
4.发酵车间应定期进行卫生检查和清洁维护,在发现问题时立即进行处理。
四、安全防护1.发酵车间必须配备灭火器等消防设备,并定期进行检查和维护。
11发酵操作规程

11发酵操作规程发酵是一种常见的生物过程,广泛应用于食品、饮料、制药等多个领域。
为了确保发酵过程的顺利进行,提高产品质量和产量,制定一套科学合理的发酵操作规程至关重要。
一、发酵前的准备工作1、设备检查检查发酵罐及其附属设备,如搅拌器、温度传感器、压力传感器、pH 电极等,确保其正常运行和精度准确。
检查管道连接是否紧密,阀门是否灵活,有无泄漏现象。
2、培养基制备根据发酵菌种的需求,精确称取所需的各种营养成分。
按照一定的顺序和方法将营养成分溶解于适量的水中,搅拌均匀。
调节培养基的 pH 值至适宜范围,通常使用酸碱溶液进行调节。
3、灭菌处理将制备好的培养基转移至发酵罐中,进行高温高压灭菌。
灭菌条件根据培养基的成分和容量而定,一般为 121℃,15 30 分钟。
同时,对发酵过程中使用的工具、过滤器等进行灭菌处理。
4、菌种准备从保藏的菌种中活化所需的菌株,按照规定的培养条件进行培养。
确保菌种的纯度和活力,通过显微镜观察、平板划线等方法进行检测。
二、接种操作1、环境消毒在接种前,对接种室进行彻底的清洁和消毒,包括地面、墙壁、工作台等。
使用紫外线灯照射一定时间,以杀灭空气中的微生物。
2、人员消毒接种人员需穿戴无菌工作服、口罩、手套等。
用 75%的酒精对手部进行消毒。
3、接种在无菌条件下,将培养好的菌种接入发酵罐中。
操作要迅速、准确,避免菌种受到污染。
三、发酵过程控制1、温度控制根据菌种的特性和发酵阶段,设定合适的温度范围。
通过夹套或盘管中的循环水或蒸汽来调节发酵罐内的温度。
密切监测温度变化,及时调整控制参数。
2、 pH 控制发酵过程中,pH 值会发生变化,需要适时进行调节。
通常使用酸碱溶液进行微调,以维持 pH 值在适宜范围内。
3、溶氧控制对于好氧发酵,要保证充足的溶氧供应。
通过调节搅拌速度、通气量等参数来控制溶氧水平。
4、消泡处理发酵过程中可能会产生泡沫,影响发酵效果。
及时添加消泡剂,消除泡沫。
5、补料操作根据发酵过程中营养物质的消耗情况,适时进行补料。
发酵车间操作规程

发酵车间操作规程一、目的与适用范围本操作规程的目的是确保发酵车间的正常运行,保证产品质量和生产效率,并规范操作人员的行为,适用于发酵车间的所有操作人员。
二、操作人员的职责与权限1. 发酵车间操作人员应具备相关岗位的专业知识和技能,并按照规程要求进行操作。
2. 操作人员有权要求提供必要的生产资料和设备,并有权对生产过程中的异常情况进行处理。
3. 操作人员应积极参与岗位培训,提高自身的专业技能和知识水平。
三、安全操作规范1. 操作人员应穿戴符合要求的工作服和个人防护装备,严禁穿戴松散的衣物和佩戴长项链等物品。
2. 在操作过程中,应注意操作环境的清洁和整齐,避免杂物堆放和地面湿滑等情况。
3. 操作人员应熟悉发酵车间的安全设施和应急措施,并定期参加安全培训和演练。
四、设备操作规范1. 操作人员应熟悉发酵设备的结构和工作原理,并按照操作手册进行正确操作。
2. 在启动设备前,应检查设备的运行状态和工作环境,确保设备正常运行。
3. 操作人员应按照规定的操作流程进行操作,严禁擅自更改设备参数和操作程序。
4. 在设备运行过程中,应及时发现和处理设备故障,并及时上报维修部门。
五、生产操作规范1. 操作人员应按照生产计划和工艺要求准备原料和辅助材料。
2. 在投料过程中,应按照配方要求准确称量和投放原料,并及时记录相关数据。
3. 在发酵过程中,应控制好温度、湿度和通风等参数,确保发酵过程的稳定和高效。
4. 操作人员应定期对发酵过程进行抽样检测,并及时调整操作参数,以保证产品质量。
5. 在生产过程中,应注意操作环境的卫生和整洁,及时清理和处理生产废弃物。
六、质量控制规范1. 操作人员应熟悉产品质量标准和检测方法,并按照要求进行质量控制。
2. 在生产过程中,应严格执行质量检验和记录要求,确保产品符合质量标准。
3. 操作人员应及时上报质量异常情况,并配合质量部门进行调查和处理。
七、清洁与维护规范1. 操作人员应定期对发酵设备和操作区域进行清洁和消毒,保持良好的卫生条件。
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Multifors细菌型发酵系统操作规程一、灭菌前的准备工作:1 校准pH电极(每次灭菌前均须校准):将pH电极线路连接好,准备好蒸馏水洗瓶、pH标准液(pH值为4和7)。
在S-DDC显示屏的菜单项依次选择param->pH-> Calib进入。
将High Ref改为7,用蒸馏水清洗pH电极再用滤纸吸干后,将pH电极置于pH7的标准液中(电极不可与容器接触,电极的透析膜——顶端侧面的白点——须浸没在液面以下),旋转旋钮将光标移动到HiReading,待current value示数稳定后(括号内的数字波动速度慢且波动范围不超过5),按Enter键确认,pH为7的校准完成。
此时光标会自动跳转到Low Ref,再将Low Ref 改为4,用蒸馏水清洗pH电极再用滤纸吸干后,将pH电极置于pH4的标准液中,将光标移动到LoReading,待current value示数稳定后按Enter键确认,pH为4的校准完成。
此时光标会在Slope处闪烁,按Enter 键确认即完成pH校准,光标消失。
再按ESC键返回上一级菜单。
pH校准完成。
注意:如果出现校准失误,可随时在校准过程中,按ESC键推出,系统会还原上一次校准的数据。
校准pH电极时须将温度传感器同时放进标准液中进行温度补偿。
同时,pH校准也可采用X-DDC中All菜单中的校准选项,该校准选项可同时校准连接到一个X-DDC 显示屏上的所有主机的pH电极,操作方法与单个pH电极的校准方法相同。
如果配置中含有Redox氧化还原电位电极,则校准方法与pH相同。
2 检查溶解氧电极电解液(每次灭菌前均须检查):将溶解氧电极取下,旋开透析膜,检查内部的电解液是否充足,如不充足,加适量电解液,即旋紧透析膜时电解液会溢出即可。
如透析膜表面有创伤,则须更换透析膜。
3 蠕动泵的校准(需要精确记录累积流量时进行,不必每次发酵前都进行该操作):(1)在连接好管路(试剂硅胶管和黄色泵管)的试剂瓶内加入足量的水,将泵管将泵管按照所需校准的蠕动泵进样的方向(顺时针方向)固定好,一边旋转泵头,一边将管子放进泵头中。
用量程适当的量筒承接试剂管的出口。
(2)在X-DDC的菜单中选择Pump,再选择需要校准的泵,按“.”键进入该泵的校准菜单。
(3)speed表示泵的工作速度,以%为单位,设定值一般为发酵时常用的工作速度(4)duration表示校准累积时间,以秒为单位,一般设定为60~600秒。
注意:该时间是100%工作速度的累积时间,即,如果speed设定为50%,duration设定为60秒,则实际效果为:该泵以50%的工作速度累积工作120秒(60秒/50%=120秒)(5)以上两项设定好之后,将calibration start选项的off改为on,被校准的泵即开始工作。
(6)待被校准的泵停止工作后,读取量筒内的液体体积,输入到volume选项中,按Enter键确认至光标消失,X-DDC的校准操作完成。
(7)软件泵参数的修改:如果在发酵过程中,发现任意一个pump的value值与X-DDC的pump菜单中显示的值不同,可以更改IRIS软件中,对应pump的slope值(offset为0),slope=IRIS的value值/X-DDC的pump值。
操作方法:在IRIS菜单项依次点选Parameters—>Edit,在弹出的对话框中选择相应的pump参数,双击打开其设定对话框,然后将recalibration incoming value挑勾,最后修改slope参数即可。
注意:修改的参数会再下一次开启发酵程序时生效。
(8)注意:在更换泵管后,建议进行校准操作。
第一次校准的数据很可能不准确,一般采用第3~5次校准得到的数据。
也可以多次校准后取平均值。
4 加培养基:拔掉出气口冷却器和转子流量计出气的快插接口,取出温度传感器,将所有蠕动泵连同固定板一同取下,分别插入罐体支架的下方凹槽内,连同支架、试剂瓶、泵头一并取下罐体。
打开罐盖处的快开夹,取下罐盖。
加入配置好的培养基至需要的容积,一般是罐体总容积的1/2~2/3。
加入培养基后,将罐盖复原,重新固定。
注意:加培养基时需多加10%的水,以平衡灭菌过程的水分散失。
建议在加培养基的同时加适量消泡剂。
复原罐盖时,须确保搅拌桨下端在罐底三角架的中心,以确保搅拌桨可以正常转动。
5 pH和溶解氧电极的安装:安装电极时须安装电极适配器。
将罐盖上相应接口的塞子旋掉。
在电极上分别套上:固定金属环(直接拧紧)——高度调节杆——密封金属环——黑色密封圈(原来在罐盖的接口内的)。
持此电极,先将密封金属环在相应接口处拧紧,确认好电极浸入深度后,用配套的内六角将固定金属环固定于高度调节杆上(拧紧顶丝)。
6 调整消泡电极高度:用螺丝刀松开消泡电极下方的小螺丝(一字螺丝),调节好消泡探头的高度,再将螺丝旋紧即可。
探头下方与液面一般保持3~5cm的距离。
注:该液面是指在开启搅拌和通气后的液面。
7 安装试剂瓶:将酸、碱、消泡剂等试剂加入到各个试剂瓶中,再将管子接到罐盖的试剂进口,用扎带扎紧,然后把试剂瓶放到支架上。
注意:试剂管子中不能存有试剂。
由于挥发性酸、碱或热敏性物质,不可加入试剂瓶与罐体一同灭菌,须单独处理,在罐体灭菌后以无菌操作加入试剂瓶。
8 接种口的安装:取下罐盖上的一个塞子和密封圈,放入硅胶隔膜,旋紧固定用适配器,再旋上塞子(塞子不必旋得很紧)。
9 采样瓶的安装:将采样瓶的管子和采样管连接好,连接处用扎带扎紧,采样瓶挂于支架上。
10封口和夹紧:用铝箔封好将所有气体进口,包括:试剂瓶的滤膜,采样瓶滤膜,进气口快插口;pH电极接口可以用原装螺帽拧紧,溶氧电极接口可用铝箔包裹。
将所有没入液面以下的管子引出的软管用止水夹夹紧,包括:通气管子,采样管子,试剂瓶管子。
注:出气口冷却器的滤膜不可密封。
二、灭菌和灭菌后安装:1 罐体灭菌:将组装好的罐体连同支架和试剂瓶等一起放入灭菌锅灭菌。
2 接种接头灭菌:接种接头须和试剂瓶、泵管连接后,铝箔或封口膜包裹后灭菌,用于接种。
如采用针筒接种的方式或自备接种套件,则无需灭菌接种接头。
3 灭菌后安装:(1)灭菌后,待罐体温度降至低于80℃,将罐体和支架放回主机原位上。
(2)将所有的铝箔取掉,将pH电极的红色螺帽取掉,将除采样管外的夹子松开。
(3)连接所有传感器:将温度传感器插入至套筒底部,将pH传感器连接线拧紧,将PO2传感器对应接口形状插入并旋转至红色突起可见,将消泡黑色探头插入罐盖的小孔,红色探头插入消泡探头或液位探头的小孔或顶端。
(4)将蠕动泵连同固定板放回主机下方的相应位置。
(5)将各进气口和进出水口的快插接头插好。
(6)将各个试剂瓶中的试剂,泵至发酵罐罐盖进口。
操作方法:在X-DDC显示屏上,选择All菜单中的prime pumps选项,在duration中输入运行时间(以s为单位),然后将off选项改为on,所有同类型的泵即开始同时工作,泵入液体。
(7)开启出气口冷却器水阀(无需出气冷却则不开该阀),开启空气的转子流量计到1VVM。
三、启动发酵:1 开机:打开发酵罐主电源和空气压缩机电源,打开进水总开关,打开其它气体供气(供气压力推荐为2bar=0.2MPa,即减压阀左侧的压力表显示0.2Mpa,也可以按照实验供气需要降低压力)。
2 开启各参数控制功能:进入X-DDC显示屏菜单start,将光标移至每个需要控制的参数前,按+/-键将off改为数字。
3 启动发酵程序:(1)开启电脑,打开Iris软件,依次点击File->New,选择Labfors 0 后“下一步”,然后在第一个选项中输入此次发酵编号(该编号可以是任意字母或数字),如“E.coli 001”,在第二个选项中选择“inoculation”。
注意:如果需要重复上一次发酵的初始设定进行发酵,可直接在recipe information选项中点选browse,导入之前完成过的发酵文档。
(2)再点选“下一步”后,选择需要监控的发酵参数,将其移到右边的方框内。
并对每个需要控制的参数,输入设定值。
输入设定值的方法:单击相应的发酵参数,点选Edit打开其设定对话框,在对话框中将Set point 改为发酵设定值。
注意:输入设定值后须确认:Temp,Stirrer,pH,PO2,Feed_pump,Gas_mix的设定对话框中的setpoint remote选项须挑勾,其它参数均不挑勾;Feed_pump初始设定为0;同时所有设定值与其报警范围须保持由大到小的关系,即Max. value>=Upper critical>=Upper alarm>=Set point>=Lower alarm>= Lower critical >=Min. value。
(3)再点选“下一步”。
如需使用Batch file功能,则点选batch file后面的browse导入基本格式文档。
1)Batch file功能是用于记录:除在线监测参数之外的实验信息。
常见的如:操作者姓名,项目名称等项目相关信息;或细胞的种龄,诱导物的名称,接种时刻等实验信息;以及用户需要记录的其它任意信息。
所记录的全部信息可以作为数据报表的标题。
2)建立基本格式文档的方法:在未开启IRIS软件前,在电脑的任意位置建立一个记事本文档。
在文档中写入:用户所需记录内容的基本格式。
然后将文件的文件名改为“.bch”,此文档即为基本格式文档。
如需使用编程功能,则点选Control后面的import导入已经编辑好的程序文件。
1)Control功能是用于编辑各种操作程序,从而达到让用户可以根据发酵过程中任何可检测条件的变化,自动进行计算、控制等功能。
即:将用户需要定时或根据某些条件的改变而进行的手动更改设定参数的应用,完全自动化地实现。
2)程序文件的编辑方法:在未开启IRIS软件前,在电脑的任意位置建立一个记事本文档。
在文档中写入编辑的程序后保存,然后将文件的文件名改为“.seq”,该文件即为程序文件。
例:定时补料+溶解氧自动调节程序:#0IF(Elapsed>=time(03:15)){feed_pump.sp=100}IF(Elapsed>=time(05:10)){feed_pump.sp=0}IF (gas_mix.sp>50){gas_mix.sp=50}IF (gas_mix.sp<0){gas_mix.sp=0}IF(pO2.v<40){gas_mix.sp=gas_mix.sp+5;seq=1}IF(pO2.v>60){gas_mix.sp=gas_mix.sp-5;seq=1}#1IF(seq_time>120){seq=0}注意:以上程序的意义为:1 第1~3行为定时补料,表示:接种3小时15分后,将补料泵的设定改为100,5小时10分后,将补料泵的设定改为0。