土壤试剂盒操作手册和常见问题
土壤中性蛋白酶活性检测试剂盒说明书 可见分光光度法
土壤中性蛋白酶活性检测试剂盒说明书可见分光光度法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。
货号：BC0270规格：50T/24S产品内容：试剂一：液体20mL×1瓶，4℃保存；试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入10mL试剂一，沸水浴搅拌溶解后待用；试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入10mL蒸馏水充分溶解待用；试剂四：液体40mL×1瓶，4℃保存；试剂五：液体10mL×1瓶，4℃保存；标准品：液体2mL×1支，0.2μmol/mL酪氨酸溶液，4℃保存。
产品说明：土壤蛋白酶参与土壤中存在的氨基酸、蛋白质以及其他含蛋白质氮的有机化合物的转化，其水解产物是高等植物的氮源之一。
土壤中性蛋白酶在中性环境下催化蛋白质水解，与土壤有机质含量、氮素及其他土壤性质有关。
中性条件下，土壤中性蛋白酶可将酪蛋白水解产生酪氨酸；在碱性条件下，酪氨酸还原磷钼酸化合物生成钨蓝，在680nm有特征吸收峰。
实验中所需仪器及设备：可见分光光度计、水浴锅、可调式移液枪、1mL比色皿、蒸馏水、50目筛（或更小）。
样品处理：新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干，过30~50目筛。
操作步驟：1、分光光度计预热30min以上，调节波长至680nm，蒸馏水调零。
2、样本测定：第1页，共2页试剂名称测定管对照管标准管空白管风干土样（g）0.10.1--试剂一（μL）100100--试剂二（μL）200----混匀后，37℃反应24h，期间振荡5-6次，使土样与反应液充分接触。
试剂三（μL）200200--试剂二（μL）-200--混匀，10000rpm室温离心10min，取上清液--上清液（μL）220220--标准液（μL）--220-蒸馏水（μL）---220试剂四（μL）650650650650试剂五（μL）130130130130混匀，40℃水浴10min，10000rpm室温离心10min，取上清液于680nm下读取各管吸光值A，分别记为A测定管、A对照管、A标准管、A空白管，计算ΔA测定=A测定管-A对照管，ΔA标准=A标准管-A空白管。
土壤纤维素酶活性测定试剂盒说明书(分光光度法)使用说明
土壤纤维素酶活性测定试剂盒说明书(分光光度法)货号:BC0150规格:50管/24样产品说明：S-CL主要来源于土壤微生物，S-CL催化农作物秸秆产生的葡萄糖是主要的碳源营养物质。
本产品采用3.5－二硝基水杨酸法测定S-CL催化纤维素降解产生的还原糖的含量。
试剂组成：试剂一：甲苯10mL×1瓶，4℃保存；（自备）试剂二：液体15mL×1瓶，4℃保存；试剂三：液体50mL×1瓶，4℃保存；试剂四：液体15mL×1瓶，4℃保存；标准品：粉剂×1支，4℃保存，含10mg无水葡萄糖（干燥失重<0.2%），临用前加入1ml 蒸馏水溶解，配制成10mg/ml葡萄糖溶液备用，4℃可保存1周，或者用饱和苯甲酸溶液溶解，可保存更长时间。
标准品准备：将标准品用蒸馏水稀释至1、0.8、0.6、0.4、0.2、0.1mg/ml。
加样表和测定步骤：对照管测定管标准管风干土样（g）0.250.25-试剂一(μL)125125-煮沸15min（盖紧）振荡混匀，室温放置15min-试剂二（μL）250250-试剂三（μL）10001000-蒸馏水（μL）250250-振荡混匀，40℃水浴糖化1h后，煮沸15min（盖紧，防止水分散失）,得糖化液糖化液(μL)505050试剂四(μL)150150150混匀，沸水浴中煮沸显色15min（盖紧，防止水分散失），冷却蒸馏水（μL）105010501050混匀，540nm处蒸馏水调零，测定吸光值A，样品管计算ΔA=A测定管-A对照管标准曲线的建立：540nm处蒸馏水调零，读标准管吸光值A。
以浓度（y）为纵坐标，吸光度A（x）为横坐标建立标准曲线。
活力计算：根据标准曲线，将ΔA带入公式中（x）计算样品浓度y（mg/mL）。
单位的定义：每天每g土样中产生1mg葡萄糖定义为一个酶活力单位。
S-CL活力（U/g）＝y×V反总÷W÷T=156×yT：反应时间，1h=1/24d；V反总：反应体系总体积：1.625mL；W：样本质量，0.25g。
土壤过氧化氢酶测定试剂盒使用说明
土壤过氧化氢酶测定试剂盒使用说明分光光度法50管/24样货号:BC0100产品简介：S-CAT 是土壤微生物代谢的重要酶类，在H 2O 2清除系统中具有重要作用。
H 2O 2在240nm 下有特征吸收峰，通过测定与土壤反应后溶液在此波长下吸光度的变化，即可反应S-CAT 活性的高低。
试验中所需的仪器和试剂：紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
产品内容：试剂一：液体×5瓶，4℃保存；临用前每瓶加入9.9mL 蒸馏水充分溶解后待用。
试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入2mL 蒸馏水充分溶解待用，用不完的试剂4℃保存。
试剂三：液体×1瓶，4℃保存。
操作步骤：试剂名称测定管无基质管无土管风干土样（g ）0.10.1试剂一（μL ）10001000双蒸水（μL ）1000振荡培养20min试剂二（μL ）252525混匀8000g ，常温离心5min ，取全部上清试剂三（μL ）120120120混匀，用蒸馏水调零，240nm 处记录各管A 值。
注意：每个测定管要设一个无基质管，无土管只要做一管。
S-CAT 活力的计算：单位的定义：每天每g 风干土样催化1μmol H 2O 2降解定义为一个酶活力单位。
计算公式：S-CAT（U/g）＝[(A 无土管-A 测定管+A 无基质管)×V 反总÷（ε×d）×106]÷W÷T=18.9×（A 无土管-A 测定管+A 无基质管）V 反总：反应体系总体积，1.145×10-3L；ε：过氧化氢摩尔消光系数，4.36×104L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；T：反应时间，20min=1/72d；W：样本质量，0.1g。
土壤总磷、有机磷、无机磷含量测定试剂盒使用说明
土壤总磷/有机磷/无机磷含量测定试剂盒使用说明分光光度法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号:BC2890规格:50管/48样试剂组成和配制：试剂一：液体×1瓶，4℃保存。
临用前用蒸馏水稀释10倍后再用。
试剂二：液体×1瓶，4℃保存。
试剂三：粉剂×1瓶，4℃避光保存。
临用前配制，加入20mL蒸馏水，充分溶解后加入10mL试剂二，混匀。
标准品：液体×1支，40μg/ml无机磷标准品，4℃保存。
产品说明：土壤总磷包括有机磷和无机磷，其中无机磷能够直接被植物利用。
土壤有机磷经过矿化分解而转化为无机磷。
同时测定土壤总磷、有机磷和无机磷，可以全面反映土壤磷营养状况。
利用钼蓝法定磷。
取一份土样，通过浸提法测定土壤无机磷含量；另外取一份土样，经高温灼烧后，土壤有机磷转化为无机磷，测得土壤总磷含量；总磷含量减去无机磷含量，即可计算出有机磷含量。
自备仪器和用品：可见分光光度计、台式离心机、可调式水浴锅，分析天平、可调式移液器、550℃高温电炉，1mL玻璃比色皿、蒸馏水、100目筛子（可更小）。
操作步骤：一、土壤不同形态磷提取：1.无机磷：称取通过100目筛子的风干土样0.1g，转移到10mL离心管，加入10mL试剂一，震荡混匀，然后置于45℃水浴1h，8000g，25℃离心10min，取上清液一，用于无机磷含量测定。
2.总磷提取：取通过100目筛子的风干土样，550℃灼烧1h，冷却后称取约0.1g，转移到10mL离心管，加入10mL试剂一，震荡混匀，然后置于45℃水浴1h，8000g，25℃，离心10min，取上清液二，用于总磷含量测定。
二、测定步骤：1.分光光度计预热30min，调节波长到660nm，蒸馏水调零。
2.打开水浴锅，调节温度到40℃。
3.空白管：取EP管，依次加入500μL蒸馏水，500μL试剂三，混匀后置于40℃水浴保温10min，室温冷却10min后于660nm测定吸光度，记为A空白管。
土壤β- 葡萄糖苷酶活性检测试剂盒(微量法)使用说明
土壤β-葡萄糖苷酶活性检测试剂盒（微量法）使用说明货号：BC0165规格：100T/48S产品内容：试剂一：甲苯5mL×1瓶，4℃保存；（自备）试剂二：粉剂×1瓶，-20℃保存；临用前每瓶加入13mL蒸馏水，充分溶解备用，用不完的试剂仍-20℃保存；试剂三：液体30mL×1瓶，4℃保存；试剂四：液体20mL×1瓶，4℃保存；标准品：液体×1支， 1.5ml EP管含1ml，5mmol/L的对硝基苯酚溶液。
标准样品的准备：取100μL标准液，加入到400μL试剂三中，得到1mmol/L标准液，十倍稀释到100mol/l，倍比稀释：50、25、12.5、6.25mol/L，稀释液用试剂三。
100、50、25、12.5、6.25mol/L做标准液。
产品说明：S-β-GC能够催化水解芳基或烃基与糖基原子团之间的糖苷键生成葡萄糖，是纤维素分解酶系中重要组成成分之一，在土壤微生物的糖类代谢方面具有重要生理功能。
S-β-GC能够催化对-硝基苯-β-D吡喃葡萄糖苷生成对-硝基苯酚，产物略显黄色，在400nm有特征光吸收。
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、冰、甲苯（不允许快递）和蒸馏水。
操作步骤：1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至400nm，蒸馏水调零。
2、加样表试剂名称测定管对照管标准管空白管风干土样（g）0.020.02--试剂一（μL）1010--振荡混匀，使土样全部湿润，室温放置15min试剂二（μLL）130---试剂三（μLL）160160--混匀，37℃水浴1h后，立即沸水浴煮沸5min（盖紧，防止水分散失），流水冷却试剂二（μL）-130--充分混匀，10000g常温离心10min，取上清液上清液（μL）7070-标准液（μL）--70蒸馏水（μL）---70试剂四（μL）130130130130充分混匀，室温静置2min后，测定吸光值A，计算ΔA=A测定管-A对照管。
土壤DNA提取试剂盒说明书
土壤基因组DNA提取及PCR报告一、步骤试剂盒22℃--25℃储存使用前：用无水乙醇稀释SPW Wash Buffer 1、0.5g【500ml】玻璃珠加入15ml离心管中（15ml离心管可以更好的涡旋、悬浮），加0.5g【0.4—0.5g】土样，加1ml Buffer SLX Mlus 【裂解菌体】，最高速度涡旋3-5 min；2、加100ul Buffer DS，涡旋混匀；3、70℃水浴10 min,并短暂涡旋；（对于难提取样品可以在90℃水浴）4、3000rpm 室温【25℃】离心3min，转移800ul上清液于一新的2ml离心管中，加入270ul Buffer SP2，涡旋混匀；5、冰浴5 min，4℃，13000xg 离心5 min；6、小心转移上清液于一新的2ml离心管，加0.7体积【约600—900ul】的异丙醇，反复颠倒离心管20-30次以混合，（若样品DNA含量低，可以放置于-20℃1h ）;7、13000xg 4℃离心10min，获得沉淀DNA；8、小心去除上清液，将离心管在吸水纸上倒置1min；9、加200ul Elution Buffer,涡旋10s，溶解DNA，【预热EB，保存60℃，15min水浴】；10、加100ul HTR Reagent，涡旋10s混匀；（HTR Reagent使用前要摇匀，吸取时将枪头剪大一点儿）；11、室温静置2min后13000xg 室温离心2min；12、取上清液于新2ml离心管中（若上清液有黑色则重复步骤10-12）；13、加上清液的等体积【300—350ul】XP2 Buffer并涡旋混匀；14、将HiBind DNA柱置于2ml 收集管中，将上一步样品转移到柱中，10000xg 室温离心1min，弃流液，保留收集管；15、将柱移入上一步中的收集管，加入300ul XP2 Buffer，10000xg 离心1min，弃流液、收集管；16、将柱移入新2ml离心管中，加入700ul SPW Wash Buffer（用无水乙醇稀释过的）洗涤，10000xg 离心1min，弃流液保留收集管；17、重复16步；18、弃流液，将柱插入空收集管中，13000xg 室温离心2min，空甩干燥柱子；（是为了除去乙醇，乙醇对后续操作有影响）19、将柱移入干净1.5ml 离心管，将50ul Elution Buffer 直接加入HiBind matrix 中心，65℃水浴10-15min，室温放置3—5min；20、13000xg 离心1min 以洗脱DNA21、加入30-100ul Elution Buffer，重复19-20步22、检测二、结果1、OD值Nanodrop 2000 analysis2、电泳：土样量6ul；1%琼脂糖凝胶分析3、PCR:20ul体系：PCR Mix：10ul 引物：0.3+0.3ul 模板：1ul 加水补齐预变性：94℃10 min变性：94℃20s退火：52℃20s延伸：72℃20s终延伸：72℃5minPCR电泳：上样量：8ul；1%琼脂糖凝胶分析。
土壤汞(S-Hg)浓度检测试剂盒说明书 可见分光光度法
土壤汞（S-Hg）浓度检测试剂盒说明书可见分光光度法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号：BC2870规格：50T/48S产品内容：试剂一：粉剂×1瓶，4℃保存，用前加入2mL水溶解。
试剂二：液体25mL×1瓶，4℃保存。
试剂三：液体15mL×1瓶，4℃保存。
试剂四：粉剂×1瓶，4℃保存。
临用前加入5mL蒸馏水备用。
试剂五：粉剂×1瓶，4℃避光保存。
加三氯甲烷（自备）50mL充分溶解。
试剂六：液体30mL×1瓶，4℃保存。
标准品：液体1mL×1支，4000nmol/mL Hg2+，4℃保存。
临用前用水稀释400倍即10nmol/mL标准溶液。
产品说明：土壤汞污染能够通过食物链传递和富集，对植物、动物和人类健康产生威胁。
矿山开发、工业加工、农业生产和生活垃圾常常造成土壤汞污染，因此评价和防止土壤重金属污染常常需要测定土壤汞含量。
土壤经消化后，汞以Hg2+离子形式存在；Hg2+能与双硫腙生成橙色络合物，溶于三氯甲烷后，在490nm 测定吸光度，即可计算S-Hg含量。
试验中所需的仪器和试剂：可见分光光度计、1mL比色皿、恒温水浴锅、可调式移液枪、50目筛（可更小）、浓硫酸、浓硝酸、三氯甲烷、蒸馏水。
操作步骤：一、样品前处理：新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干，过30~50目筛。
二、测定操作表：1.分光光度计预热30min以上，调节波长至490nm，氯仿调零。
2.操作表：在2mLEP管中分别加入试剂名称测定管标准管空白管土样（g）0.1-标准溶液（μL）-1000蒸馏水（μL）1000-1000浓硫酸（μL）404040浓硝酸（μL）101010试剂一（μL）323232试剂二（μL）4006060封口膜封口，充分混匀，震荡2min。
95℃水浴中消化2小时，冷却至大约40℃。
试剂三（μL）200200200震荡至EP管内溶液澄清透明，开盖放置10min，期间摇荡数次，使其中气体溢出。
碧欧科土壤基因组 DNA 提取试剂盒-说明书
BioFast Soil Genomic DNA Extraction Kit BioFast土壤基因组DNA提取试剂盒TECHNICAL SUPPORT:For technical support, please dial phone number ：0086-571-87774567-5215 or 5211, or fax to0086-571-87774553************************.cn.Website: 试剂盒组成储存条件所有试剂可稳定保存18个月。
介绍本产品提供了一套从土壤样本中提取基因组DNA的简单、快速、经济的方法。
该方法以选择性的Biospin膜系统为基础，可以在半小时内完成基因组DNA这样的高分子量DNA的提取纯化。
该方法步骤简单，不需要液氮研磨，完全避免与酚、氯仿等接触，可一次同时提取多个样本。
提取纯化后的基因组DNA，可以直接用于PCR/Real-Time PCR,等下游应用实验。
原理首先取土壤样品到研磨管，在SP buffer和Lysis S Buffer作用下，通过剧烈振荡，基因组DNA被释放出来。
通过离心，去除大部分杂质。
加入独特的DA buffer，可以有效沉淀腐殖酸、蛋白质、多糖等杂质。
然后，由于加入的Binding缓冲液中适当的盐分及pH值的作用下，DNA被特异性吸附于Biospin膜上。
通过洗涤，可将蛋白质等残留的杂质去除。
最后使用Elution Buffer将DNA从膜上洗脱下来，从而获得基因组DNA。
需要的配套设备和材料* 无菌2.0ml离心管 * 各种规格移液器和无菌移液器吸头* 离心机(最大转速>14,000g) * 无水乙醇重要提示1.请在第一次使用前，向wash Buffer 中加入45ml 乙醇 (无水) 并混合均匀。
2.如果Lysis S Buffer 中出现浑浊，请于37-55°C环境中适当温育，待浑浊物质消失后再使用。
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FastDNA Spin Kit for Soil实验步骤1.Add up to 500 mg of soil sample to a Lysing Matrix E tube.在裂解介质管E中最多加入500mg土壤样品。
注意：推荐最多加入500mg土壤样品，含水量比较多的土壤或者碎屑多的土壤可适量减少样品量。
2.Add 978 μL Solution Phosphate Buffer to sample in Lysing Matrix E tube.在裂解介质管E中加入978μl Sodium Phosphate Buffer3.Add 122 μL MT Buffer.What’s happening: Begin to solubilize membrane proteins with detergents as well asextra-cellular proteins and contaminations in soil.加入122μl MT Buffer发生的反应：用洗涤剂溶解细胞膜蛋白以及细胞外蛋白和土壤中的污染物。
注意：为了得到更好的样品处理效果，加入土壤样品及两个缓冲液后，在裂解介质管中仍能保留有250-500μl空间。
4.Homogenize in the FastPrep Instrument for 40 seconds at a speed setting of 6.0What’s happening: mechanical disruption of cell walls of soil organisms and releasing nucleic acids into the protective buffer.将样品置于FastPrep®仪器上匀浆40s，速度为6.0m/s发生的反应：机械破碎土壤微生物的细胞壁，将核酸释放入保护缓冲液中。
5.Centrifuge at 14,000×g for 5-10 minutes to pellet debris.14,000 x g离心5-10min至沉渣注意：如果把离心时间延长到15min，可以更好地使样品量较大的，或者细胞壁结构较复杂的细胞碎片沉降到管底。
6.Transfer supernatant to a clean 2.0 ml microcentrifuge tube. Add 250μL PPS (Protein PrecipitationSolution) and mix by inverting the tube 10 times.What's happening: Separate the solubilized nucleic acids from the cellular debris andlysing matrix. Flocculation of protein-containing micelles 将上清液转移至一个干净的2.0ml离心管中。
加入250μL的PPS溶液（蛋白质沉淀溶液），用手颠倒10次，使之充分混合。
发生的反应：将溶解的核酸与细胞沉渣以及裂解介质分离。
产生絮状蛋白。
7.Centrifuge at 14,000 x g for 5 minutes to pellet precipitate. Transfer supernatant to a clean 15mltube.What's happening: Removal of flocculated proteins.14,000 x g离心5min至沉淀。
将上清液转移至一个干净的15ml管中发生的反应：去除絮状蛋白。
注意：此步也可使用2.0ml离心管，但使用大管可以更好的混匀以及DNA的结合。
8.Resuspend Binding Matrix suspension and add l.0 ml to supernatant in 15ml tube.重悬Binding Matrix溶液，将1.0 ml重悬液加入该15ml管中。
9.Place on rotator or invert by hand for 2 minutes to allow binding of DNA. Place tube in a rack for3 minutes to allow settling of silica matrix.What’s happening: Nucleic acid bind to the silica matrix in the presence of chaotropic salts.用摇床或手动颠倒混匀2min，使DNA更好的与binding matrix结合。
之后将管子置于管架上，静置3分钟，使binding matrix自然沉降。
发生的反应：在离液盐存在的情况下，核酸与binding matrix结合。
10.Remove and discard 500 μL of supernatant being careful to avoid settled Binding Matrix.小心地去除500μl上清液，避免吸到沉淀下来的binding matrix。
11.Gently resuspend Binding Matrix in the remaining amount of supernatant. Transfer approximately600 μL of the mixture to a Spin TM Filter and centrifuge at 14,000 x g for 1 minute. Empty the catch tube and add the remaining mixture to the Spin Filter and centrifuge as before. Empty the catch tube again.用剩余的上清液轻轻的重悬binding matrix，转移大约600μl的重悬液至SPIN™ Filter中，14,000 x g离心1min，弃去收集管中的废液。
将15ml管中剩余的重悬液转移到SPIN™ Filter中，再次离心弃去废液。
12.Add 500μL prepared SEWS-M and gently resuspend the pellet using the force of the liquid fromthe pipet tip.What 's happening: Continuing to solubilize proteins.加入500μl预先准备好的SEWS-M溶液，用枪头轻轻吹打，小心地重悬沉淀。
发生的反应：继续溶解蛋白。
注意：使用前确保SEWS-M溶液中已加入乙醇。
在SEWS-M溶液中加入100ml 100%的乙醇，混匀。
在瓶子上做好标记，密闭储存于室温。
13.Centrifuge at 14,000 x g for l minute. Empty the catch tube and replace.What's happening: Desalting with Ethanol and additional detergents remove impurities bycentrifuging through the Spin filter bucket while the purified DNA is still boundto the silica.14,000 x g离心1min，弃去废液。
发生的反应：通过离心过滤，用脱盐的乙醇和去垢剂去除杂质，而DNA仍然与binding matrix 结合。
14.Without any addition of liquid, centrifuge a second time at 14,000 x g for 2 minutes to "dry" thematrix of residual wash solution. Discard the catch tube and replace with a new, clean catch tube.不加任何溶液，将SPIN™ Filter 14,000 x g离心2min，去除残留的SEWS-M溶液。
弃去收集管，更换一个新的、干净的离心管。
15.Air dry the Spin TM Filter for 5 minutes at room temperature.What's happening: Removal of residual ethanol.将SPIN™ Filter置于室温，晾干5min。
发生的反应：去除残留的乙醇。
16.Gently resuspend Binding Matrix (above the Spin fitter) in 50-100uL of DES (DNase/Pyrogen-Free Water).What's happening: Purified nucleic acids elutes from silica with collapse of cation bridge because low salt elution solution rehydrates both the silica and the DNA.在SPIN™ Filte r中加入50-100μl的DES溶液（或者无菌/无DNA酶的水），轻轻的重悬binding matrix。
发生的反应：低盐洗脱液使binding matrix和DNA再水合化，导致盐桥断裂，从而使纯化的核酸从binding matrix中洗脱下来。
注意：a：为了避免过度稀释纯化出的DNA，请尽量减少DES溶液的量b：55˚C水浴孵育5min能提高纯化产物的得率17.Centrifuge at 14,000 x g for l minute to bring eluted DNA into the clean catch tube. Discard theSpin filter, DNA is now ready for PCR and other downstream applications. Store at -20℃for extended periods or 4aC until use.What's happening: Final purified DNA passes through filter bucket and is collected in a cleanmicrofuge tube.14,000 x g离心1min，使洗脱的DNA转移至收集管中。