超快速液相色谱-串联质谱法测定粮食及食用油中的黄曲霉毒素
超高效液相色谱-串联质谱法同时检测地龙药材中4种黄曲霉毒素含量及阳性结果确证
分析测试经验介绍 (104 ~ 109)超高效液相色谱-串联质谱法同时检测地龙药材中4种黄曲霉毒素含量及阳性结果确证郭 晶1，张 进1，李文君1，李正刚2（1. 通化市食品药品检验所，吉林 通化 134000；2. 四平市食品药品检验所，吉林 四平 136000）摘要：建立超高效液相色谱-串联质谱法同时测定地龙药材中黄曲霉毒素B 1、B 2、G 1、G 2的含量，并对阳性结果进行确证. 样品经70%甲醇提取、免疫亲和柱净化、超高效液相色谱柱分离、三重四极杆质谱检测，并采用离子峰度比进行阳性结果确证. 结果表明，4种黄曲霉毒素的线性关系良好（r >0.999 5），回收率在91.2%~95.6%范围内.黄曲霉毒素B 1、B 2、G 1、G 2的检出限分别为0.10、0.038、0.11、0.038 µg/kg. 方法专属性好，灵敏度高，准确性好，可以进行最终阳性检出的判定. 15批地龙药材中6批黄曲霉毒素确证阳性检出, 证明地龙药材较易被黄曲霉毒素污染.关键词：地龙；超高效液相色谱-串联质谱；黄曲霉毒素；阳性结果确证中图分类号：O657. 63 文献标志码：B 文章编号：1006-3757（2024）02-0104-06DOI ：10.16495/j.1006-3757.2024.02.005Simultaneous Determination of Four Aflatoxins in Pheretima by Ultra Performance Liquid Chromatography Tandem Mass Spectrometry andConfirmation of Positive ResultsGUO Jing 1， ZHANG Jin 1， LI Wenjun 1， LI Zhenggang2（1. Tonghua Institute for Food and Drug Control , Tonghua 134000, Jilin China ；2. Siping Institute for Food andDrug Control , Siping 136000, Jilin China ）Abstract ：A method for simultaneous determination of aflatoxins B 1, B 2, G 1, and G 2 in pheretima was been established by ultra performance liquid chromatography tandem mass spectrometry (UPLC-MS/MS), and the positive results was confirmed. The samples were extracted by 70% methanol, purified by a immunoaffinity columns, separated by UPLC-MS/MS, detected by triple quadrupole mass spectrometry, and confirmed by ion peak ratio. The results showed that the linear relationship of the four aflatoxins were good (r >0.999 5), and the recoveries ranged from 91.2% to 95.6%. The limits of detection for aflatoxin B 1, B 2, G 1, and G 2 were 0.10, 0.038, 0.11, 0.038 µg/kg, respectively. The method has a good specificity, high sensitivity, good accuracy, and can be used to determine the final positive detection. Aflatoxin were positively detected in 6 out of 15 batches of pheretima , which proved that the Pheretima were more susceptible to contamination by aflatoxins.Key words ：Pheretima ；UPLC-MS/MS ；aflatoxin ；confirmation of positive results收稿日期：2024−01−10； 修订日期：2024−03−05.基金项目：吉林省中药材标准及中药饮片炮制规范（项目编号：JLPZGF-2020-052）作者简介：郭晶（1979−），女，副主任药师，研究方向为药品质量标准通信作者：李正刚（1982−），男，硕士，医药工程师，研究方向为中药质量标准，E-mail ：*****************.第 30 卷第 2 期分析测试技术与仪器Volume 30 Number 22024年3月ANALYSIS AND TESTING TECHNOLOGY AND INSTRUMENTS Mar. 2024黄曲霉毒素（aflatoxins, AF）是一种毒性极强的剧毒物质，被各个国家的癌症研究机构列为Ⅰ类致癌物. 黄曲霉毒素主要是由黄曲霉、寄生曲霉产生的次生代谢产物，是一组化学结构类似的化合物[1-2]，主要包括AFB1、AFB2、AFG1、AFG2，多存在于土壤、动植物、各种坚果中[3]，在湿热环境下出现黄曲霉毒素污染的概率最高. 黄曲霉毒素的危害性在于对人及动物肝脏组织的慢性毒性作用，长期积累可导致肝癌甚至死亡[4-5]. 各国药典均对黄曲霉毒素在中药材或中草药中的限量作了规定，如《欧洲药典》规定AFB1、AFB2、AFG1、AFG2总量在中草药中的限量不得高于4 µg/kg，《美国药典》规定AFB1、AFB2、AFG1、AFG2总量在中草药中的限量不得高于20µg/kg，《中华人民共和国药典》规定其总量在中药材中的限量不得高于10 µg/kg[6].地龙药材标准收载在《中华人民共和国药典》2020版一部[7]. 采收时需要及时剖开腹部，除去内脏和泥沙. 由于地龙生长在土壤环境中，故其被AF污染的风险较大. 目前AF测定的方法主要有液相色谱-柱后碘衍生化法或光化学衍生化法-荧光检测器以及酶联免疫法，但以上方法均存在假阳性的误判可能性，当超出标准限值时均需要采用质谱检测器进行阳性确证[8]. 本研究采用超高效液相色谱-串联质谱法（UPLC-MS/MS）同时测定不同产地多批次地龙药材中AFB1、AFB2、AFG1、AFG2的含量，并对阳性结果进行确证，从而准确的判定检出情况，为地龙药材中AF污染情况提供参考.1 试验部分1.1 仪器和试剂BT125D型电子天平（北京赛多利斯仪器天平有限公司），TDL-5-A型离心机（上海安亭科学仪器厂），AB SCIEX QTRAP® 5500型超高效液相色谱-三重四极杆质谱（美国AB SCIEX公司）. 超高压液相色谱柱（岛津科技有限公司），免疫亲和柱（青岛普瑞邦生物工程有限公司，规格：3 mL，批号：2J1J24-4）.AF混合对照品溶液：AFB1、AFB2、AFG1、AFG2标示质量浓度分别为1.04、0.38、1.08、0.38µg/mL，批号：610001-202006，来源于中国食品药品检定研究院. 氯化钠和醋酸铵（国药集团化学试剂有限公司，分析纯），甲醇和乙腈（Flsher Scientific，色谱纯），纯化水为自制.本次收集到不同产地和批次的地龙药材共15批，基本信息如表1所列.表 1 地龙药材样品基本信息Table 1 Basic informations of Pheretima samples药材编号样品名称产地DL1广地龙海南文昌DL2广地龙广东肇庆DL3广地龙广东韶关DL4广地龙广东韶关DL5广地龙广西玉林DL6广地龙广西北海DL7沪地龙湖北襄阳DL8沪地龙河南濮阳DL9沪地龙河南安阳DL10沪地龙浙江嘉兴DL11沪地龙河南焦作DL12沪地龙浙江金华DL13沪地龙江西赣州DL14沪地龙江西九江DL15沪地龙江西宜春1.2 仪器工作条件1.2.1 色谱条件色谱柱：Shim-pack XR-ODS，3.0 mm×75 mm （1.8 µm）；以10 mmol/L醋酸铵溶液为流动相A，甲醇为流动相B；柱温：25 ℃；流速：0.3 mL/min. 按表2中的程序进行梯度洗脱.表 2 梯度洗脱程序Table 2 Gradient elution procedure时间/min流动相A/%流动相B/%0~4.565~1535~854.5~615~085~1006~6.50~65100~356.5~1065351.2.2 质谱条件离子源：电喷雾离子源（ESI源）；监测模式：正离子扫描下的多反应监测模式（MRM）；喷雾压强：0.21 MPa；干燥气流速：8 L/min；干燥气温度：550 ℃；毛细管电压：5 500 V；三重四极杆离子对及相关电压参数设定如表3所列.第 2 期郭晶，等：超高效液相色谱-串联质谱法同时检测地龙药材中4种黄曲霉毒素含量及阳性结果确证1051.3 标准曲线绘制分别精密量取AF混合对照品溶液100、50、25µL于10 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得标准曲线溶液1、2、3. 分别精密量取1 mL标准曲线溶液2、0.1 mL标准曲线溶液1于10 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得标准曲线溶液4、5. 精密量取1 mL标准曲线溶液4于10 mL 容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得标准曲线溶液6.1.4 供试品溶液制备取供试品粉末约15 g（过四号筛网），精密称定，置于均质瓶中，加入氯化钠3 g、70%甲醇溶液75 mL，12 000 r/min高速搅拌2 min，4 500 r/min离心5 min，取上清液15.0 mL，置于50 mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，4 500 r/min离心10 min，取续滤液20.0 mL. 通过免疫亲合柱，流速3 mL/min，用20 mL水洗脱，洗脱液弃去，使空气进入免疫亲合柱，将水挤出，再用适量甲醇洗脱，收集洗脱液，置于2 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.22 µm）滤过，取续滤液，即得.2 结果与讨论2.1 免疫亲和柱技术和质谱测定法的优势免疫亲和柱技术是利用抗原、抗体之间高度特异性结合对目标物进行净化富集的一种实验技术，预置在柱体内的特异性抗体选择性结合样本中的待测物，杂质不被结合流出柱外，柱上结合的目标物再被洗脱液洗脱，从而实现目标物的高效净化和浓缩[9].质谱法是使待测化合物产生气态离子，再按质荷比（m/z）将离子分离、检测的分析方法，检测限可达10−15~10−12 mol数量级. 相比较液相色谱法，测试样品需要的量较少，其检测灵敏度也大幅度提高，且其较好的专属性可以作为液相色谱检出情况的进一步确证，大大降低误判阳性检出的情况[10-13]. 2.2 线性范围和检出限分别精密吸取1.3项下系列混合对照品溶液5µL，注入液相色谱仪，测定峰面积，以进样质量浓度（ng/mL）为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线.结果如表4所列，4种黄曲霉毒素的线性关系良好（r>0.999 5）.取不含AF的样品15 g，加入0.15 mL标准曲线溶液1，余下操作同1.4项下供试品溶液制备，1.2项下仪器工作条件测定，以信噪比（S/N）为3作为4种黄曲霉毒素的检出限（limit of detection，LOD），结果如表4所列，AFB1、AFB2、AFG1、AFG2的LOD分别为0.10、0.038、0.11、0.038 µg/kg，表明方法灵敏度较高.表 4 回归方程、线性范围和检出限Table 4 Regression equations, linear ranges and limits of detection组分名称回归方程r线性范围/（ng/mL）LOD/（µg/kg）S/N AFB1y=33 600x –1 3600.999 90.104～10.4000.10 4.5AFB2y=30 900x – 4 8800.999 80.038～3.8000.038 3.1AFG1y=26 150x – 6 3400.999 80.108～10.8000.11 4.2AFG2y=21 200x + 2 9200.999 80.038～3.8000.038 3.32.3 精密度考察取5 µL 1.3项下标准曲线溶液1，在1.2项下仪器条件及测定方法下分别连续进样6次，测定各组分的色谱峰面积. 测试结果：AFB1、AFB2、AFG1、表 3 质谱条件Table 3 Conditions of mass spectrometer序号组分名称母离子/（m/z）子离子/（m/z）碎裂电压/V碰撞能量/eV1AFB1313.1285.1*16034241.0207512AFB2315.1287.1*18937259.1200393AFG1329.1243.1*16338311.1180314AFG2331.1313.1*18535245.118842注：*定量离子对106分析测试技术与仪器第 30 卷AFG2色谱峰面积相对标准偏差（RSD)分别为1.3%、2.2%、1.8%和2.2%，表明仪器的精密度良好.2.4 稳定性试验取1.3项下标准曲线溶液1，分别于0、4、８、16、18、24 h 按1.2项下仪器条件进样5 µL，记录所测各组分峰面积. 测试结果：AFB1、AFB2、AFG1、AFG2色谱峰面积RSD分别为2.6%、2.2%、2.5%和2.3%，结果表明在24 h内测定结果稳定.2.5 重复性和回收率试验由于15批次地龙药材中仅部分检出AFB1、AFB2，故在加标回收试验中进行方法的重复性考察.称取不含AF的地龙药材（编号：DL1）粉末约15 g，各6份，分别精密加入AF混合对照品溶液75 µL，其余操作同2.1.2项下供试品溶液制备，按2.2项下条件分别测定各组分的色谱峰面积，结果如表5所列. 由表5可见，AFB1、AFB2、AFG1、AFG2的平均回收率分别为95.6%、93.4%、93.2%、91.2%，加标测定值的RSD分别为1.9%、2.0%、1.7%和2.6%，表明该方法的回收率满足要求，方法的重复性良好.2.6 样品测定取15批次地龙药材，按照1.4项下方法制备供试品溶液，1.2项下仪器条件进行测定，结果如表6所列，结果表明在6批地龙样品中检测出AFB1和AFB2，质谱总离子流图如图1所示.表 6 样品测定结果Table 6 Determination results of samples/(µg/kg)样品编号AFB1质量分数AFB2质量分数AFG1质量分数AFG2质量分数总质量分数DL1/////DL2/////DL3/////DL4 6.80.53//7.33 DL5/////DL6/////DL77.80.35//8.15 DL8 6.50.31// 6.81 DL9 4.30.24// 4.54 DL10/////DL11/////DL12/////DL13 3.10.43// 3.53 DL14 2.50.31// 2.81 DL15/////注：“/”：未检出2.7 阳性结果确证中药组成成分相较于西药组成成分复杂多样，三重四极杆质谱是以母离子及子离子组成的离子对进行检测，由于样品基质成分的复杂性，单个离子对出现干扰的情况在试验过程中偶有发生. 然而一个化合物在质谱检测器的离子源中被固定碰撞电压击碎产生的多个碎片离子之间具有相对固定的比例，故采用离子对峰面积的比值进行比较更具有专属性，UPLC-MS/MS法通常采用离子峰度比对结果进一步确证阳性检出，即：如果样品检出色谱峰的保留时间与对照品一致，并且在扣除背景后的表 5 方法的重复性和回收率试验结果Table 5 Experimental results of repeatability andrecovery of method添加质量分数加入质量/ng实测质量/ng回收率/%平均回收率/%RSD/%AFB1 (5 µg/kg)78.0074.2195.1495.6 1.9 78.0073.1193.7378.0075.5396.8378.0076.5298.1078.0072.9993.5878.0075.2396.45AFB2 (2 µg/kg)28.5026.1291.6593.4 2.0 28.5025.2390.7728.5026.7893.9628.5027.0194.7728.5027.3295.8628.5026.5593.16AFG1 (5 µg/kg)81.0077.4495.6093.2 1.7 81.0075.2692.9181.0075.3693.0481.0074.8292.3781.0076.3594.2681.0073.7891.09AFG2 (2 µg/kg)28.5025.1591.0591.2 2.6 28.5026.2292.0028.5025.4789.3728.5025.1188.1128.5027.0194.7728.5026.2892.21第 2 期郭晶，等：超高效液相色谱-串联质谱法同时检测地龙药材中4种黄曲霉毒素含量及阳性结果确证107质谱图中，所选择的监测离子对均出现，而且所选择的监测离子对峰面积比与对照品的监测离子对峰面积比一致，则可判定样品中存在该真菌毒素.经计算本试验检出的6批阳性样品的离子峰度比AFB 1分别为75.3%、75.2%、75.1%、75.3%、75.2%、75.1%，相对平均偏差均小于0.2%. AFB 2分别为85.0%、85.1%、85.1%、85.2%、85.3%、85.0%，相对平均偏差均小于0.2%. 均在允许偏差±20%内，确证样品阳性检出.3 结论由多批次样品检验情况可以初步得出，地龙药材中黄曲霉毒素的污染主要为黄曲霉毒素B 1和B 2.地龙药材在产地初加工过程中需去除泥沙，而泥沙为黄曲霉毒素污染的重要来源，如果泥沙去除不净、保存不当、遇湿热环境，则黄曲霉毒素含量容易超标[14-17]. 因此地龙药材的黄曲霉毒素监测检验非常必要[18-21]. 试验结果表明，UPLC-MS/MS 法操作简便、专属性好、灵敏度高、重复性好，能够对地龙药材的阳性结果作出准确判定，故将在中药材的黄曲霉毒素污染检测中发挥重要作用.参考文献：刘丽娜, 李海亮, 李耀磊, 等. 中药真菌毒素质量控制概况、限量标准制定及有关问题的思考[J ]. 中草药，2023，54（19）：6197-6207. [LIU Lina, LI Hailiang, LI Yaolei, et al. Overview on quality control of mycotox-ins in traditional Chinese medicine, limit requirements and discussion on related issues [J ]. Chinese Tradition-al and Herbal Drugs ，2023，54 （19）：6197-6207.]［ 1 ］沈立, 汤燕, 陈铁柱, 等. 固相萃取液质联用测定川产道地药材黄精、麦冬中10种真菌毒素[J ]. 药物分析杂志，2023，43（8）：1369-1380. [SHEN Li, TANG［ 2 ］Yan, CHEN Tiezhu, et al. Determination of 10 my-cotoxins in Polygonati Rhizoma and Ophiopogonis Radix as a genuine regional drug of Sichuan by solid-phase extraction coupled with LC-MS/MS [J ]. 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液相色谱-质谱-质谱联用仪测定花生油中黄曲霉毒素B1
液相色谱-质谱-质谱联用仪测定花生油中黄曲霉毒素B1周 琴，刘新月*，李绍仙，张晓花，谭文涵（普洱市质量技术监督综合检测中心，云南普洱 665000）摘 要：目的：采用液相色谱-质谱-质谱联用仪建立花生油中黄曲霉毒素B1的检测方法。
方法：样品提取经免疫亲和柱净化，以甲酸水和乙腈为流动相，采用phenomenx Kinetex 2.6 μm Biphenyl 100A色谱柱（100 mm×3.0 mm）梯度洗脱分离，多重反应监测模式对花生油中黄曲霉毒素B1进行定性分析，同位素内标法定量。
结果：黄曲霉毒素B1在1～20 ng·mL-1线性内呈良好线性关系（R2为0.999 3），在2.0 μg·kg-1、5.0 μg·kg-1、10.0 μg·kg-1的加标水平下，回收率在94.1%～107.4%，相对标准偏差（n=6）为5.6%～9.3%，采用该方法测定花生油中黄曲霉毒素B1质控样，检测结果在质控样范围内。
结论：该检测方法简便快捷、无需衍生、特异性强，灵敏度高且线性关系良好，准确度和精密度均满足定量分析的要求，适用于花生油中黄曲霉毒素B1的定量分析。
关键词：液相色谱-质谱-质谱联用仪（LC-MS/MS）；黄曲霉毒素B1；花生油Determination of Aflatoxin B1 in Peanut Oil by LC-MS-MS ZHOU Qin, LIU Xinyue*, LI Shaoxian, ZHANG Xiaohua, TAN Wenhan(Pu’er Comprehensive Technical Testing Center, Pu’er 665000, China)Abstract: Objective: To establish a method for the determination of aflatoxin B1 in peanut oil by LC-MS/MS. Method: The sample was extracted and purified by an immunoaffinity column. Formic acid water and acetonitrile were used as mobile phases, and the gradient elution separation was carried out on the phenomenx Kinetex 2.6 μm Biphenyl 100A chromatographic column (100 mm×3.0 mm).The qualitative analysis of aflatoxin B1 in peanut oil was carried out by multiple reaction monitoring mode, and the quantity was determined by isotope internal standard. Result: Aflatoxin B1 showed a good linear relationship in the linear range of 1～20 ng·mL-1 (R2=0.999 3）, at the spiked levels of 2.0 μg·kg-1, 5.0 μg·kg-1 and 10.0 μg·kg-1, the average recovery rate was 94.1%～107.4%, and the relative standard deviation (n=6) was 5.6%～9.3% . The method was used to determine aflatoxin B1 quality control samples in peanut oil, and the detection results were within the range of quality control samples. Conclusion: This detection method is simple, fast, does not require derivatization, has strong specificity, and has high sensitivity and good linear relationship. The accuracy and precision meet the requirements of quantitative analysis, and is suitable for the quantitative analysis of aflatoxin B1 in peanut oil.Keywords: liquid chromatography tandem mass spectrometry (LC-MS/MS); aflatoxin B1; peanut oil花生油含有丰富的不饱和脂肪酸，其中油酸能降低低密度脂蛋白胆固醇水平，而不会破坏高密度脂蛋白，有助于维持血脂平衡，预防心血管疾病[1]。
液相色谱-串联质谱技术在食品安全检测中的应用
液相色谱 -串联质谱技术在食品安全检测中的应用摘要：近年来，食品添加剂超标、农药兽药残留、滥用生长调节剂、生物毒素污染等食品安全事件时有发生，食品安全问题已成为大众关注的社会热点问题，如何预防食品安全事件的发生是食品安全监管部门值得思考的问题。
而运用食品安全检测技术，可以预防发生食品安全事故，确保人们的饮食安全。
目前来看，常用的食品安全检测技术包括：离子色谱法、气相色谱法、免疫化学分析方法、酶联免疫吸附分析法、薄层层析法、高效液相色谱法、免疫亲和柱-荧光光度法、原子吸收分光光度法、电感耦合等离子体法、电感耦合等离子体质谱法、气相色谱-串联质谱法、液相色谱-串联质谱法等。
其中，液相色谱-串联质谱法具有灵敏度高、测定结果准确、重复性好等优点，被广泛应用于食品安全检测。
关键词：液相色谱-串联质谱技术；食品安全检测；应用1液相色谱-质谱的技术优势质谱技能起源于19世纪英国学者汤普森规划的用于检测分子量差异的质谱仪。
高分辨率质谱仪的遍及直接推动了高效液相色谱-质谱仪的商业化。
但是，液相色谱-串联质谱仪的设备相对复杂，价格昂贵，在必定程度上限制了其运用。
明显，高效液相色谱-质谱法（HPLC-MS）不只可以利用合作物良好的分离能力，而且可以经过高分辨率液相色谱法组成准确的化合物质量和数量，大大缩短了剖析时刻。
它具有显著的长处，可以同时测定多种化合物，提高剖析成果的灵敏度和准确度，已广泛运用于食物和药物检测范畴。
高效液相色谱-串联质谱技能的科学、正确运用，使检测人员可以在短时刻内全面检测食物中的有害物质，并测定各种有害物质的含量。
这不只有利于规范食物的生产、加工和流通，也有利于保证人们的食物安全。
2液相色谱-串联质谱技能的运用2.1食物中食物添加剂的检测甜味剂是食物添加剂的一种，因价格低廉、甜度较高，被广泛运用于食物中，用于添加食物的甜度、改进口感。
现在，检测食物添加剂的食物安全检测技能有：气相色谱法、液相色谱法、液相色谱-串联质谱法等。
高效液相色谱法测定粮油食品中黄曲霉毒素含量
高效液相色谱法测定粮油食品中黄曲霉毒素含量作者：彭立来源：《食品安全导刊》2021年第11期摘要：目的：选择高效液相色谱法对粮油制品中黄曲霉毒素B1展开快速测定。
方法：提取、净化并浓缩样品中黄曲霉毒素B1后，确定流动相为乙酸铵溶液（5 mmol/L）、乙腈-甲醇溶液（50︰50），以梯度洗脱程序为依据，采取液相色谱法展开测定，定量使用外标法。
结果：在浓度范围为0.2～20 ng/mL时，黄曲霉毒素B1线性回归方程为Y=68 577.3X-20 845，R>0.998，线性关系良好;方法检出限为0.07 μg/kg、定量限为0.2 μg/kg;加标回收率超过85.0%，RSD不超过5.5%。
结论：本实验方法结果准确可靠、重复性好，可用于快速检测粮油制品中黄曲霉毒素B1。
关键词：高效液相色谱法;粮油食品;黄曲霉毒素;含量测定Determination of Aflatoxin in Cereals， Oils and Foods by HPLCPENG Li（Yichun Grain and Oil Quality Supervision and Inspection Station， Yichun 336000）Abstract： objective： to develop an HPLC method for the rapid determination of aflatoxin B1 in grain and oil products. Methods： after extraction， purification and concentration of aflatoxin B1 in the sample， the mobile phase was determined as ammonium acetate solution （5 mmol/L） and acetonitrile methanol solution （50：50）. Based on the gradient elution procedure， the determination was carried out by liquid chromatography， and the external standard method was used quantitatively. Results： In the concentration range of 0.2～20 ng/mL， the linear regression equation of aflatoxin B1 was， and the linear relationship was good; The detection limit was 0.07μg/kg，limit of quantitation 0.2 μg/k g;The recovery rate of standard addition is more than 85.0%，and the RSD is not more than 5.5%.Conclusion： the results of this method are accurate， reliable and reproducible.It can be used for the rapid determination of aflatoxin B1 in grain and oil products.Keywords： high performance liquid chromatography; grain， oil and food; aflatoxin; content determination黄曲霉与寄生曲霉等菌株在特定温湿度条件下会产生黄曲霉毒素，属于一类二级代谢产物，此类毒素对人体有强烈致癌危害。
高效液相色谱法检测食品中黄曲霉毒素研究进展
黄 曲霉 毒素具有极强 毒性和致癌性 ， 世界 上大多 数国家和地 区都规定 其在 食 品中限量要求 ， 要求对 并 黄曲霉毒素进行 有效监管。高效液相色谱法是一种检 测痕量物质 常用方 法， 检测黄 曲霉毒素一般 步骤是采
用 适合溶剂提取 目标物 ， 净化浓缩 ， ，柱 分离后检测 Ｃ８
于 ９ ％ 回收率 ； ８ 该净化法用 于花生、 巴西坚果 、 玉米 、
器检测 。根 据检测器不 同， 可分 为荧光检测 法和质谱
检 测法两类。
１ 取 和 净 化 提
样 品提取 溶剂选 择 取决 于黄 曲霉 毒素 自身物 化 性质 ， 一般 所用 提取 溶剂 为 甲醇、 乙腈 水 溶液 。尽 管 早期 方法 经常使 用氯 仿 ， 考虑 到氯 仿对 环境影 响 ， 但
现 已基本 上被替代 。一些新 的提取 技术， 如超 临界流
体萃取
、Hale Waihona Puke 加压流体 萃取（ 加速流体萃取 ） ｂ 被用于
中图分 类号 ： Ｓ ０ ． Ｔ ２７４
文献 标 识码 ： Ａ
文章 编号 ： ０８ ９ ７ （ ０ ２ Ｏ — ００ — ０ １０ — ５ ８ ２ １ ） ３ ０ １ ４
采用硅胶柱 （ ０ ／ Ｌ） ３ ３ｍ 建立简单 、 ｍｇ 可靠方 法分析检 测来 自不 同植物 油 中黄曲霉 毒素 ， 结果 表明 ， 胶柱 硅
ｐｅ ｔ ｍ ａｎｃ ｉ ｒ ｏｒ ｅ ｌｑｕｉ ｃ ｏｍ ａｔ ｒ ｄ ｎｒ ｏｇ ａｐＩＹ Ｉ
ＢＩ ｉｆ ｎ ， Ｒｕ － ｅ ｇ ＨＥ ｕ ｐ ｎ Ｘｉ － ｉ ｇ
（ ｏｅｅ ｈ ｍｉ ｌ ｎ ｉｅｒ ｇ Ｑｉｇ ａ Ｕ ｉｅｓｙｏ Ｓ ｉ ｃ ａ ｄＴ ｃ ｎ ｌ ｙ Ｓ ａ ｄ ｎ Ｑ ｎ ｄ ｏ ６０ ２ Ｃ ｉａ） Ｃ ｌ ｇ Ｃ ｅ ｃ Ｅ ｇ ｅｉ ， ｎ ｄ ｏ ｎｖｒｉ ｆ ｃ ｎｅ ｎ ｅｈ ｏ ｇ ，ｈ ｎ ｏ ｇ ｉｇ ａ ２ ６ ４ ， ｈｎ ｌ ａ ｎ ｎ ｔ ｅ ｏ
免疫亲和萃取-超高效液相色谱-串联质谱法分离测定中成药及中药材中的5种黄曲霉毒素
５种 黄 曲霉 毒 素 标 准 品 Ｇ１ Ｇ Ｂ 、 ２、 Ｍ１ 、 ２、 １ Ｂ 和
（ 纯度 均 ≥９ ． ％， 国 Ｓ ｐ ｌｏ公 司 ） 色谱 纯 的 甲 ９０ 美 ｕ ｅｃ ； 醇、 乙酸 铵 （ 国 Ｆｓ ｅ 公 司 ） 甲酸 （ 国 Ｔ ｄａ公 美 ｉ ｒ ｈ 、 美 ｅｉ
司） 槽 纹 滤纸 和玻璃 纤维 滤纸 （ 国 Ｖｃ ｍ 公 司） ； 美 ｉａ ；
ＭＳ 技 术 ， ） 大大提 高 了分析速 度 以及检 测 的灵 敏 度 、
利用 注射器 吸取 ｌ ０ｍＬ制 备好 的滤液 ， 滤 液 将
通过 Ａ ｌＴ ｓ— ｆ ｅｅＰ免 疫亲 和柱 至排空 ， ａ 随后 依 次用 ３ ０ ｍＬ０ １ Ｔ ｎ２ ． ％ ｗｉ一０清 洗 液 、０ ｍＬ纯 水 淋 洗 ； 后 ｌ 最
可 以特 异性 地将 目标 物 保 留在 亲 和柱 上 ， 现 对 复 实 杂 基 质 的 净 化 ， 而 提 高 净 化 效 率 和 检 测 灵 敏 从 度 …， 目前 检测食 品 中黄 曲霉毒 素 时应 用 较 为广 是 泛 的净化手 段 。而近 年来 发展起 来 的超高 效液 相色 谱一 电喷雾 串联 四极 杆 质 谱 （ ＨＰ Ｃ Ｅ ＩＱ Ｑ ＭＳ Ｕ Ｌ — Ｓ／ ｑ — ／
类 真 菌 毒 素 ’ 。药 用 植 物 在 生 长 和 储 存 过 程 中 ， 环境 条件 适 宜便 会 滋 生 霉 菌从 而 产 生 黄 曲霉 若
毒 素 。 。为确 保 临 床 用 药 或 日常保 健 用 药 的安 全
性 ， 国《 我 药用 植物 及制 剂进 出 口绿色 行 业 标 准》 要 求 药用植 物 中黄 曲霉毒 素 的含量 在 ５ ｔ ／ ｇ以下 。 ｇｋ ｘ 目前报 道 的黄 曲霉 毒素 分离 检测 方法 主要包 括 薄层色 谱法 （ Ｌ 、 Ｔ Ｃ） 高效液 相色 谱法 （ Ｐ Ｃ） Ｈ Ｌ ’
高效液相色谱法检测农产品中黄曲霉毒素B1的含量
分析检测高效液相色谱法检测农产品中黄曲霉毒素B1的含量韩 宇（四川省甘孜藏族自治州食品药品检验所，四川康定 626000）摘 要：目的：建立高效液相色谱法联合免疫磁固相萃取法测定农产品食品中黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1，AFB1）含量的分析方法。
方法：采用70%乙腈溶液提取花生、玉米、大豆、小麦、豌豆和绿豆样品中的AFB1，然后利用免疫磁珠净化、萃取和富集提取液中的AFB1，采用高效液相色谱法进行定量分析。
结果：方法的检出限为0.03～0.92 μg·kg-1，回收率为79.52%～97.53%。
利用该方法对市场上购买的20份花生、玉米、大豆、小麦、豌豆、绿豆样品中的AFB1进行检测，除了玉米和绿豆中未检测出AFB1外，其余实验样品中均检测出一定含量的AFB1。
结论：该方法简便、快速、准确，适用于复杂样品中黄曲霉毒素B1的测定。
关键词：高效液相色谱法；免疫磁固相萃取；黄曲霉毒素B1Determination of Aspergillus Flavus B1 in Agricultural Products by High-Performance Liquid ChromatographyHAN Yu(Ganzi Tibetan Autonomous Prefecture Institute for Food and Drug Control, Kangding 626000, China)Abstract: Objective: To establish a method for the determination of Aflatoxin B1 (AFB1) in agricultural products by high performance liquid chromatography combined with immunomagnetic solid phase extraction. Method: AFB1 was extracted from samples of peanuts, corn, soybeans, wheat, peas, and mung beans using a 70% acetonitrile solution, and then AFB1 was purified, extracted and enriched by immunomagnetic beads, and quantitative analysis was performed by HPLC. Result: The limits of detection were 0.03～0.92 μg·kg-1, and the recoveries were 79.52%～97.53%. AFB1 in 20 samples of peanut, corn, soybean, wheat, pea and mung bean purchased from the market was detected by this method. AFB1 content was detected in all the other samples except corn and mung bean. Conclusion: The method is simple, rapid, accurate and suitable for the determination of aflatoxin B1 in complex samples.Keywords: high-performance liquid chromatography; immunomagnetic solid-phase extraction; aspergillus flavus B1黄曲霉毒素是一种由黄曲霉菌产生的有毒代谢产物，在自然界中分布广泛，在粮食和饲料等农产品中广泛存在。
超高效液相色谱-串联质谱法测定发酵调昧品中黄曲霉毒素B1,B2,G1,G2方法的研究
ｓ ｅ ｐ ａ ｒ ａ ｔ ｄ ｅ ｏ ｎ ａ Ａｃ ｑ ｕ ｉ ｔ ｙ ＵＰ Ｌ Ｃ＠Ｂ Ｅ Ｈ ｃｌ ８ ｃ ｈ ｒ ｏ ｍａ ｔ ｏ ｇ ｒ ａ ｐ ｈ ｉ ｃ ｃ ｏ ｌ ｕ ｍｎ （ ｗａ ｔ ｅ ｒ ｓ ，２ ． １ ｍｍ Ｘ ５ ０ ｍｍ，１ ． ７ ｍ ） ｕ ｓ ｉ ｎ ｇ
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