whatman DE-52纤维素详细使用方法
DEAE--52纤维素的处理
DEAE--52纤维素的处理关于DEAE52纤维素的处理只有简单的几步，如下:1.先将干粉的纤维素浸泡在蒸馏水中，一段时间大约3小时左右，我偏爱这个时间，去除杂质，最好抽干一下；2.再用0.5mol/l的HCl溶液浸泡2小时，用去离子水洗净至PH中性，并抽干；3.将抽干的纤维素再浸泡在0.5mol/l的NaOH溶液中2小时，用去离子水洗至中性，抽干。
即可用了对于用过的纤维素，可以重复利用多次，但需要经过再生处理后才可以使用。
再生处理可先用高浓度NaCl (1－2 mol/L)过柱冲洗柱床，以除去DEAE－52阴离子交换纤维所吸附的成份。
然后，再用0.5 mol/L的HCl和NaOH处理，处理方法与预处理完全相同。
DEAE－纤维素的处理及装柱（1）处理本实验采用的是DEAE－纤维素DE 52 是弱酸型阴离子交换剂，具体处理方法为：先将DE52阴离子交换剂干粉浸泡于蒸馏水中，去除杂质；再在0.5N的HCL溶液中浸泡1－2h,再用无离子水或蒸馏水洗至pH值中性或PH4以上，并将其在抽滤漏斗中抽干；将抽干的离子交换剂浸泡在0.5N的NaOH溶液中1－2h，再用无离子水或蒸馏水将其洗至中性。
（2）装柱将层析柱清洗干净垂直固定到层析架上，加1/3体积的无离子水，打开下出液口，水流畅通，即刻将小烧杯中装有适宜浓度的柱材，轻轻倒入层析柱中，凝胶自然慢慢沉降再层析柱底部，凝胶沉积直到离层析柱上端1.5－2cm处，停止装柱。
层析柱上端进液口连接恒流泵，下出口连接蛋白质监测仪，待层析柱的平衡。
（3）平衡在柱层析上样前必须对层析柱进行平衡，所谓平衡就是将层析柱中的溶液用层析过程的缓冲液（洗脱液）置换出来，使层析柱中的缓冲系统与柱层析过程中的系统一致。
其方法是：利用层析柱上端的恒流泵将平衡缓冲液泵入到层析柱内，打开层析柱下端的出口，平衡液流速在0.5-1ml/min，当下出口流出液的PH值与平衡缓冲液的PH值一致时，层析柱达到了平衡。
whatman DE-52纤维素详细使用方法
whatman DE-52纤维素详细使用方法Whatman DE-52纤维素详细使用方法1.引言本文档旨在提供关于Whatman DE-52纤维素的详细使用方法。
DE-52纤维素是一种常用于分离和纯化过程的离子交换纤维素材料。
以下将详细介绍DE-52纤维素的特性、操作步骤以及实验参数的优化建议。
2.DE-52纤维素的特性DE-52纤维素具有以下特性：________●高度可交换的离子交换群：________DE-52纤维素具有一定数量的阴离子交换基团，可与带正电荷的离子相互作用。
●高度交换能力：________DE-52纤维素对多种离子具有可靠的交换性能，适用于多种离子分离和纯化的应用。
3.实验前准备在使用DE-52纤维素之前，需要进行以下实验前准备工作：________3.1 pH调节：________根据实验需要，调节溶液的pH值至所需范围。
3.2 预处理DE-52纤维素：________将DE-52纤维素浸泡在适当的缓冲液中，使其充分湿润。
4.DE-52纤维素的使用步骤详解以下是使用DE-52纤维素进行分离和纯化的详细步骤：________4.1 样品的初步处理●准备待处理的样品溶液，并根据需要进行预处理，如剔除杂质、浓缩等。
4.2 准备DE-52纤维素柱●将经过预处理的DE-52纤维素装填至柱子中。
●使用适当的流速，将缓冲液预冲柱子，以获得平衡的柱子。
4.3 样品的加载●将经过初步处理的样品加载至DE-52纤维素柱子。
●使用适当的流速，逐步洗脱样品。
4.4 洗脱和回收目标物●使用适当的洗脱缓冲液，洗脱并回收目标物。
5.实验参数优化建议为获得最佳效果，可以根据需要进行以下实验参数的优化：________5.1 pH值：________适当调节操作溶液的pH值可改善分离效果。
5.2 柱子尺寸：________选择合适的柱子尺寸以满足样品处理的要求。
5.3 流速：________通过调整流速可影响分离效率和纯化速度。
DEAE纤维素分离猪血清蛋白
摘 要：对ＤＥＡＥ纤维素５２（简称ＤＥ５２）分离猪血清蛋白进行了研究。结果表明：ｐＨ ７．４时，以Ｏ
～０．３ ｍｏｌ／Ｌ的ＮａＣｌ磷酸盐缓冲液梯度洗脱，ＤＥ５２可以将血清蛋白分为７个部分。在梯度洗脱
的基础上，分别以ＮａＣｌ浓度０、０．０５、０．０８、０．１、０．１２、０．１５、０．２ ｍｏｌ／Ｌ的磷酸盐缓冲液进行阶段
２）猪血清蛋白的阶段洗脱：取０．５ ｍＬ离心后 的血清上样，以ｐＨ ７．４并选取合适ＮａＣＩ浓度的 ０．０１ ｍｏｌ／Ｌ磷酸盐ＮａＣｌ缓冲液进行阶段洗脱，体 积流量１ ｍＬ／ｍｉｎ。 １．２．３ ＤＥ５２色谱柱的再生和平衡用１ ０００ ｍＬ ２０ ｍｏｌ／Ｌ的ＮａＣｌ溶液洗脱再生，用１ ０００ ｍＩ。ｐＨ ７．４的０．０１ ｍｏｌ／Ｌ磷酸盐缓冲液平衡，然后即可再 次上样。 １．２．４ 样品洗脱峰蛋白组成检测 用非变性 ＰＡＧＥ电泳检测，电泳条带扫描后用分析软件分 析［５］。 １．２．５ ＩｇＧ定性检测 用ＥＬＩＳＡ法测定样品蛋白 ＩｇＧ含量，鉴定样品蛋白是否是ＩｇＧ［６］。
ＨＤ－３型紫外检测仪，上海沪西仪器厂制造；ＤＢ－３ 型层析谱数据分析系统，南京新校园生物技术研究 所制造；ＨＬ－１型恒流泵，ＢＳＺ～１００型自动分步收集 器，上海沪西仪器厂制造；ＴＢ２０—１０００型梯度搅拌 器，上海新波无线电厂制造；ＭＫ３型酶标仪，上海雷 勃仪器厂制造；ＤＹＣＺ一２４Ｄ型电泳槽，北京市六一 仪器厂制造。猪血采自无锡市肉联厂，４℃８ ０００ ｒ／ｍｉｎ离心１０ ｍｉｎ，除去血球和纤维蛋白原，得到血 清。猪ＩｇＧ，白蛋白标样自Ｓｉｇｍａ公司购得。 １．２试验方法 １．２．１ ＤＥ５２色谱柱的制备
２结果与分析
２．１猪血清ＤＥ５２梯度洗脱
血清中蛋白质种类很多，组成复杂，为了研究
ＤＥ５２对血清蛋白的分离效果，在保持洗脱液ｐＨ
whatman DE-52纤维素详细使用方法
1． 按上项（1）那样轻轻搅拌离子交换剂到一定容积的缓冲液中。
2． 放置 10min，倾出或滤出上清液。 3． 重复处理直到滤液或上清液确实与缓冲液的 pH 和电导率一样为止。变换缓冲液后必须
核对 pH。当采用低浓度缓冲液时本方法会有所变化，且需要增加处理的时间。 4． 除去细颗粒和装柱的准备工作请按上述（4）（5）和（6）项进行。
2． 为了得到尽可能好的结果，对于干的离子交换纤维素（23 和 32）预处理的每一步必须 按下面即将介绍的流程进行操作。
3． DE51、QA52、SE52 和 SE53 含防腐剂。此类物质会在平衡和装柱时自动随之除去。如 果离子交换剂还进行平衡，则防腐剂可以用蒸馏水或者去离子水进行洗涤。
第一部分 干型离子交换纤维素
装柱
在装柱时必须避免离子交换剂和缓冲液的对流翻动。 为此必须使悬浮液倒入柱中瞬间使离子交换剂形成沉降柱床曾，操作进行得尽可能快，否则 悬液中的对流需很长时间才会停下来。 1． 离子交换用柱应该垂直置于无灰、无直射阳光和不发热等环境中。 2． 假如选液体积大于柱体积时，应该另外接一段延长管。 3． 轻轻搅动下将悬液倒入柱中。 4． 让洗脱液从柱中排出。 5． 全部悬液加完后装上或插入柱顶盖。 6． 缓冲液用泵或流动法通过柱子，流速控制至少 45ml/hr/cm2 柱子内截面积，直到柱床高
处理条件
型号 DE CM
一次处理 0.5NHCl 0.5Nห้องสมุดไป่ตู้aOH
中间 pH 4.0 8.0
二次处理 0.5NNaOH 0.5NHCl
注意：对预溶胀的微粒状产品（51，52 和 53 型）不需进行这一步，因此干型产品用在大规 模柱层析分离更好。
一般操作注意事项 z 离子交换剂可以在室温下储存 z 当不用时可以一直密封保存 z 可以用蒸馏水，更好的是使用去离子水 z 为了避免离子交换剂颗粒变细，不可以激烈窑洞或者搅动交换剂悬液 z 为了延长使用期，离子交换剂不可以采用浓酸、浓碱或强氧化剂处理。为了再生。
离子交换纤维素在实验室中的用法
交换剂悬浮液的准备
一般 QA52 型和 SE52 型全离子化交换剂在用低离子浓度缓冲液中平衡时间比 DE52 和 CM52 型更短。
而且所有介质当采用的缓冲液离子与离子交换剂的相一致时，所需的平衡液体积最小， 例如采用三（羟甲基）氨基甲烷盐酸缓冲液（Tris HCl Buffer）对 DE 或 QA 型离子交换剂 平衡所需时间和体积都要比用醋酸盐类缓冲盐少。
Whatman 离子交换纤维素在实验室中的用法
有关如何使得介质获得最佳结果
达到最佳分离结果
Whatman 公司已为蛋白质、酶和核酸片断等生物多聚物的有效分离特别开发了一系列 Whatman 离子交换纤维素。在使用时只有确切的按注意事项操作才能得到最佳分离效果。
介质种类 类型 干品
预溶胀
阴离子交换 DE23 DE32 DE51 DE52 DE53 QA52
灭菌和去热源，可以采用 0.5N-2.0NNaOH 处理 48 小时。 z 不添加防腐剂情况下，离子交换剂在缓冲液和多聚电解质溶液中不要超过一周。阳
离子交换剂（CM 和 SE 类）采用 0.1%（W/V）叠氮钠、0.1%（W/V）2,2’-二硫双 （氧化吡啶）或 0.02%（W/V）乙基汞硫化水杨酸钠。阴离子交换剂（DE 和 QA 类） 用 0.2%（W/V）烷基-二甲基-苄基氯化铵。
后停止真空。较合适的是在抽滤瓶中带磁力搅拌器搅拌下进行，抽滤瓶与吸气器相连。 4． 加碱性缓冲液使得所希望的 pH。对要求更高的分离，所用缓冲液必须用除 CO2 的水配
制以保证无 CO2。
采用含醇缓冲液
对 SE53 型介质需要含醇缓冲液，平衡时先用水缓冲液处理，然后再用含醇缓冲液系统 完成平衡。
纤维素溶解步骤
纤维素的溶解分两步进行：首先是溶剂分子在高速揽拌的机械力作用下快速
进入纤维素非晶区和晶区实现初步的滴胀效应。
随着溶剂分子进入纤维素分子链 空隙的量逐渐累积，纤维素分子链内和链间的氨键被打破断裂。
溶剂分子和纤维 素分子链上游离的居基结合形成新的氨键，直到实现新的稳定平衡体系。
纤维素 在溶剂中润胀程度逐渐扩大，达到无限溶胀时即出现纤维素溶解。
由于在溶解的 过程中没有发生化学反应也没有产生新的物质，且纤维素大分子链能在溶液中长 时间稳定存在，和小分子溶液一样也是热力学稳定体系。
故纤维素溶液可称么为 真溶液，而不是胶体溶液。
但是，由于纤维素是大分子聚合物，且其分子链又具 有一定的柔初性，使得纤维素的溶解过程较小分子化合物较为缓慢。
下面我们将 介绍几种纤维素常用的溶解方法。
DEAE52 说明书
DEAE-纤维素(52)使用说明书一简介DEAE-纤维素，它采用平均粒径为50µm的颗粒型亲水高分子聚合物，表面又用大分子糖链接枝，使它有更高的比表面积和更好的生物兼容性，它在高流水下保持更高载量，同时又具有更好的分辨率。
由于比表面积大，平衡和洗脱的时间也更短。
它经过接枝即使是纯化病毒，质粒等超大分子的物质，载量基本保持不变。
本产品物理和化学稳定性好，使用寿命长，操作方便。
三、应用的注意事项：1) 色谱柱装填1、所需要用到的材料的温度要与色谱操作的温度一样，液体最好做脱气处理。
填料可直接称量需要的量用缓冲液溶涨一小时装柱即可.2、在柱子下端加入20%乙醇，以除去柱子中的空气，关闭柱子出口，在柱内保留少量的20%乙醇。
20%乙醇容易产生气泡，可以在里面加1%吐温避免气泡产生。
也可以换成纯水装柱子，但是需要把填料中的20%乙醇也换成纯水，具体的方法取需要体积的填料在抽滤漏斗上进行，也可以小心倾去填料上的20%乙醇，再换成5倍体积的纯水，反复沉淀去上清，5次左右就可以用于装柱子。
3、此填料颗粒比较细，所以一定要注意柱子要选择合适的筛网，不能漏，也可以取点填料加到筛网上试试，如果没有问题再将填料连续倒入柱子时，要用玻璃棒的紧靠柱子内壁引流，以减少气泡的产生，让填料先自然沉降到填料体积不再变化，而填料和上面的液体很好分层，上层溶液完全澄清，就可以开泵用适当的流速压柱子，填料体积不再变化后，再把转换头紧顶在填料上就可以平衡柱子使用。
使用的流速要小于装柱子的流速。
4、在装柱子前，填料从冰箱中取出至少要室温放置2-3个小时，这样避免装柱子时由于温度变化而使柱子中产生气泡。
2) 蛋白的结合样品的盐浓度和pH要尽量和平衡柱子的缓冲液一致，盐浓度过高或者pH带低也许挂不上，所以要根据自己的样品做适当调整。
3) 蛋白的洗脱这个填料如果采用线性梯度洗脱，柱子的直径和高度比最好是大于10，数值越大越有利于分离，而且样品最好别上太多，可以按约10mg/ml上样，如果采用阶段洗脱的方法，装短粗柱子就可以，上样量也没有限制。
whatman DE-52纤维素详细使用方法
whatman DE-52纤维素详细使用方法Whatman DE-52纤维素使用方法1.简介Whatman DE-52纤维素是一种常用的离子交换纤维素，用于分离和净化蛋白质和其他生物大分子。
本文档将详细介绍其详细使用方法。
2.材料准备●Whatman DE-52纤维素●缓冲液：根据实验需要选择适当的缓冲液。
●清洁的实验室仪器和设备：如瓶子、离心机、pH计等。
●实验用具：如滤纸、滤芯、吸引器等。
3.DE-52纤维素的制备过程●首先，在一个干燥的容器中称取适量的DE-52纤维素。
●将DE-52纤维素与缓冲液混合，并用搅拌棒搅拌均匀。
●观察混合物的颜色和质地，确保DE-52纤维素完全悬浮在缓冲液中。
●将混合物从容器中过滤出来，以除去任何残留颗粒。
●检查过滤的液体，确保没有任何不溶性物质。
4.样品预处理●检查待处理样品的pH值，确保其适合使用DE-52纤维素进行离子交换。
●如果需要，可以调整样品的pH值，以最大限度地提高DE-52纤维素的效果。
5.离子交换过程●将DE-52纤维素的适量加入到预处理样品中，并充分混合。
●让样品与DE-52纤维素充分反应，并保持一定的时间来完成离子交换作用。
●过滤样品，以除去DE-52纤维素和已经发生离子交换的物质。
●收集过滤液，这样您就可以分析或进一步处理纯净的样品了。
6.清洗和保存DE-52纤维素●每次使用后，将DE-52纤维素用适当的溶剂进行清洗，以去除任何残留的样品或杂质。
●定期检查DE-52纤维素的质量，并根据需要进行更换。
●储存DE-52纤维素在干燥、阴凉的地方，远离阳光和高温环境。
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法律名词及注释：●无。
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连续地或分段地改变缓冲液的组分用于有效分离。缓冲液的组分变化可以是提高一种离 子浓度或改变适当的 pH，或者两者都改变。缓冲液本身是达到分离目的的主要因素，离子 交换剂的量需要按离子交换剂对目的化合物的交换容量而定。万一混合物含层析相近似的组 分时，为了获得好的分辨力需要稍增加些柱长度。
特殊技术
度恒定。 7． 停止缓冲液流进或流出柱子。 8． 取下延长管（若装着）并换上柱顶盖。
平衡
需要强调的是必须正确读取 pH 和电导率。 对真正的平衡而言平衡后的溶液应该与起始缓冲液一致，必须做到不仅连续两次平衡溶 液的读数相同，而且要去起始缓冲液相同。不正确的平衡是产生无重现性结果的原因。 起始缓冲液流过柱子直到流出液的电导率和 pH 精确地与起始缓冲液相同。此方法适用于开 始时用低浓度缓冲液的柱分离。
第二部分 预溶胀型离子交换纤维素和预处理后的干型离子交换纤维素
交换剂悬浮液的准备
一般 QA52 型和 SE52 型全离子化交换剂在用低离子浓度缓冲液中平衡时间比 DE52 和 CM52 型更短。
而且所有介质当采用的缓冲液离子与离子交换剂的相一致时，所需的平衡液体积最小， 例如采用三（羟甲基）氨基甲烷盐酸缓冲液（Tris HCl Buffer）对 DE 或 QA 型离子交换剂 平衡所需时间和体积都要比用醋酸盐类缓冲盐少。
1． 将一定量的已预处理并平衡过无细粒的离子交换剂加到原溶液中。 2． 按原溶液中所含成分的容量搅动一定时间进行吸附分离。 3． 用过滤法或者离心法将离子交换剂和缓冲液分开。 4． 用平衡时所用缓冲液洗涤离子交换剂。 5． 在搅动流化床下或离心下解吸，也可以将纤维素装柱后用上述洗脱技术进行解吸。
有关 Whatman 离子交换纤维素介质大规模分离的应用请与 Whatman 国际公司联系，公 司联络地址：Springfield Mill, Maidstone, Kent. ME 142LE, England.
同而定。柱床高度在这种方式操作中并不重要。 2． 目的物分子是结合状态的。层析时混合物是由相类似的成分组成的，为了获得最佳分离
应选用相对长的柱子。可取的是只用了柱总容量的很小一部分（如 5%）。 应避免离子交换剂平衡和柱中层析分离两者选用不同的缓冲液，除非系统已经明确显出 会得到错误的结果时才考虑。
灭菌和去热源，可以采用 0.5N-2.0NNaOH 处理 48 小时。 z 不添加防腐剂情况下，离子交换剂在缓冲液和多聚电解质溶液中不要超过一周。阳
离子交换剂（CM 和 SE 类）采用 0.1%（W/V）叠氮钠、0.1%（W/V）2,2’-二硫双 （氧化吡啶）或 0.02%（W/V）乙基汞硫化水杨酸钠。阴离子交换剂（DE 和 QA 类） 用 0.2%（W/V）烷基-二甲基-苄基氯化铵。
脱气（对阴离子交换剂）
对大多数灵敏的分离，为了获得重现性好的结果，DE 和 QA 纤维素交换剂需除去吸附 的二氧化碳。假如悬液预先按上述推荐的方法处理过后一般就不必进行这一步。 1． 将纤维素加到酸性缓冲液中。 2． 调整 pH 在 4.5。有时甚至要用更高浓度的酸溶液来调节 pH。 3． 在搅拌下抽真空（压力降至 10cmHg 以下）直到没有更多的气泡产生，在不产生沸腾之
的地方，沉降时间可按 t = nh 式计算。式中：t = 时间（min），h = 量筒中悬液总高度 （cm），n = 系数可取 1.3~2.4。 6． 注意“湿沉降体积”是离子交换剂在规定条件下沉降后所占的体积。除去上清液中所含 细粒后留在量筒中的最终体积是“湿沉降体积”加 20%。 7． 填装短柱或长柱时悬液可以选用上述密度，但是纤维状产品的长柱床的密度需用“湿沉 降体积”加 50%。
变换缓冲液可用的方法
1． 按上项（1）那样轻轻搅拌离子交换剂到一定容积的缓冲液中。
2． 放置 10min，倾出或滤出上清液。 3． 重复处理直到滤液或上清液确实与缓冲液的 pH 和电导率一样为止。变换缓冲液后必须
核对 pH。当采用低浓度缓冲液时本方法会有所变化，且需要增加处理的时间。 4． 除去细颗粒和装柱的准备工作请按上述（4）（5）和（6）项进行。
所有情况下实际采用的起始缓冲液浓度比需要的起始缓冲液浓度高，（典型的高 10 倍）， 这样有利于交换剂的预平衡。下面介绍的是更可取的平衡方法。
离子交换剂装柱后在进样品前必须用低离子浓度的缓冲液进行平衡，通常将 2-4 倍柱床 容积的低浓度缓冲液通过填充柱就可以完成平衡。
推荐的方法
1． 在使用之前用缓冲液（0.2-1.0M）轻轻摇动搅拌离子交换剂 2-3min。最初取干型纤维素 时每克干品约用 15-30mL 缓冲液，湿离子交换剂约用 6mL/g。
2． 为了得到尽可能好的结果，对于干的离子交换纤维素（23 和 32）预处理的51、QA52、SE52 和 SE53 含防腐剂。此类物质会在平衡和装柱时自动随之除去。如 果离子交换剂还进行平衡，则防腐剂可以用蒸馏水或者去离子水进行洗涤。
第一部分 干型离子交换纤维素
处理条件
型号 DE CM
一次处理 0.5NHCl 0.5NNaOH
中间 pH 4.0 8.0
二次处理 0.5NNaOH 0.5NHCl
注意：对预溶胀的微粒状产品（51，52 和 53 型）不需进行这一步，因此干型产品用在大规 模柱层析分离更好。
一般操作注意事项 z 离子交换剂可以在室温下储存 z 当不用时可以一直密封保存 z 可以用蒸馏水，更好的是使用去离子水 z 为了避免离子交换剂颗粒变细，不可以激烈窑洞或者搅动交换剂悬液 z 为了延长使用期，离子交换剂不可以采用浓酸、浓碱或强氧化剂处理。为了再生。
装柱
在装柱时必须避免离子交换剂和缓冲液的对流翻动。 为此必须使悬浮液倒入柱中瞬间使离子交换剂形成沉降柱床曾，操作进行得尽可能快，否则 悬液中的对流需很长时间才会停下来。 1． 离子交换用柱应该垂直置于无灰、无直射阳光和不发热等环境中。 2． 假如选液体积大于柱体积时，应该另外接一段延长管。 3． 轻轻搅动下将悬液倒入柱中。 4． 让洗脱液从柱中排出。 5． 全部悬液加完后装上或插入柱顶盖。 6． 缓冲液用泵或流动法通过柱子，流速控制至少 45ml/hr/cm2 柱子内截面积，直到柱床高
灭菌
所有 whatman 离子交换介质除 P11 型之外为了灭菌都可以高压灭菌。最好是离子交换 剂用 PH6.5~7.5 的非挥发性缓冲液配成的悬液中进行。
建议的灭菌条件是 10psi/15min；或者 15psi/10min；。另外除 P11 型之外所有的产品也可 以用化学灭菌法，将介质分散在 0.5MNaOH 中，然后用灭菌水洗涤。所有产品也可用含 20~25%体积百分比的乙醇水溶液处理。
后停止真空。较合适的是在抽滤瓶中带磁力搅拌器搅拌下进行，抽滤瓶与吸气器相连。 4． 加碱性缓冲液使得所希望的 pH。对要求更高的分离，所用缓冲液必须用除 CO2 的水配
制以保证无 CO2。
采用含醇缓冲液
对 SE53 型介质需要含醇缓冲液，平衡时先用水缓冲液处理，然后再用含醇缓冲液系统 完成平衡。
分批法离子交换
阳离子交换 CM23 CM32 CM52
SE52 SE53
物理形态 纤维状 微粒状
比 52 型结合力较弱的微粒状 微粒状
比 52 型结合力较弱的微粒状 全离子化微粒
比 52 型结合力强的全离子化微粒
交换剂的预处理
1． 预溶胀（51，52 和 53）型离子交换剂不用预先反复处理就可使用。但必须用缓冲盐充 分平衡。预溶胀的离子交换剂在每次预处理或再生后使用不要用任何方法使它变干。
样品准备和加样
样品溶于起始缓冲液中并调整溶液的 pH。细胞提取物和硫酸铵沉淀物要用层析柱起始 缓冲液透析。这一步不注意就有可能得到无法重现的结果。被分离物通常在低流速时加样。
洗脱
加样品后立刻开始洗脱或在规定时间内开始。 层析分离通常采用三种方法。有分步洗脱、连续梯度洗脱和分段梯度洗脱。
分步洗脱
离子交换剂平衡和样品混合物准备时所有缓冲液也可在洗脱时用，洗脱可以有两种方式 完成： 1． 目的物分子是游离状态的。所需离子交换剂量要根据混合物污染程度、结合力和成分不
Whatman 离子交换纤维素在实验室中的用法
有关如何使得介质获得最佳结果
达到最佳分离结果
Whatman 公司已为蛋白质、酶和核酸片断等生物多聚物的有效分离特别开发了一系列 Whatman 离子交换纤维素。在使用时只有确切的按注意事项操作才能得到最佳分离效果。
介质种类 类型 干品
预溶胀
阴离子交换 DE23 DE32 DE51 DE52 DE53 QA52
2． 在搅拌时缓冲液的酸或碱成分使缓冲液/离子交换剂悬液的 pH 调到所希望的值。 3． 让悬液沉降并倾出上清液中的细小颗粒。 4． 再次使用缓冲液使离子交换剂松散。干型离子交换剂悬液的总容积按 30mL/g 计，湿离
子交换剂约为 6mL/g。 5． 离子交换剂和缓冲液的悬液在合适的量筒中沉降，并置于无灰尘、无直射阳光和不发热
预处理
1． 称量好的的离子交换剂添加到 15 倍容积（W/V）酸或碱溶液中轻轻搅动，进行第一次 处理。
2． 微粒产品至少浸泡 30min，纤维状产品至少浸泡 60min。 3． 滤出上清液，用水洗至下列“中间 pH”。 4． 再用 15 倍容积的酸或碱溶液浸泡进行二次处理，放置 30min，滤出上清液。 5． 重复上述“4”二次处理，然后用水洗至洗液呈中性。